选择性COX-2抑制剂NS-398对人胃腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究环氧化酶2(COX-2)抑制剂NS-398对胃癌培养细胞系BGC-823增殖及凋亡的影响.方法 应用MTT法检测NS-398对胃癌细胞BGC-823细胞增殖的影响;应用流式细胞术、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测NS-398对胃癌细胞BGC-823细胞凋亡的影响.结果 NS-398随剂量的增加及作用时间延长对胃癌细胞呈抑制作用;体外NS-398能减少BGC-823细胞株COX-2的表达,对BGC-823有细胞毒作用,可增加细胞凋亡率.结论 NS-398可抑制胃癌BGC-823细胞的增殖,促进胃癌BGC-823细胞的凋亡.其可能机制是与抑制COX-2表达有关.     

NS-398对舌鳞癌基质金属蛋白酶2蛋白表达的影响

目的探讨环氧化酶2(COX-2)抑制剂NS-398对舌鳞癌基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白表达的影响。方法将舌鳞癌细胞株Tca8113分为对照组(A组)和NS-398 20、40、80μmol/L加药组(分别为B1、B2、B3组);荧光免疫组化和Western blot法检测各组MMP-2蛋白表达情况。结果 B1、B2、B3组MMP-2蛋白表达呈递减趋势,且均较A组明显降低(免疫组化法:366073.100±116272.561、241739.000±12320.270、120672.100±5976.391vs.591518.000±17356.450;Western blot法:0.620±0.084、0.425±0.058、0.172±0.025vs.0.950±0.124)(P<0.05)。结论 NS-398在Tca8113细胞中能抑制MMP-2蛋白表达,并且MMP-2蛋白表达随着药物浓度的增加而减少。     

NS-398诱导肝癌细胞凋亡的实验研究

目的 :研究选择性环氧化酶 2 (COX 2 )抑制剂NS 398对人肝癌细胞HepG2 凋亡的影响 ,及其相关蛋白Bcl 2在细胞凋亡中的作用。方法 :通过体外细胞培养 ,应用荧光显微镜、透射电镜、流式细胞仪观察NS 398对HepG2 的凋亡诱导作用 ,应用免疫细胞化学法观察Bcl 2在人肝癌细胞HepG2 凋亡中的表达。结果 :NS 398处理HepG2 细胞后 ,电镜下可见到细胞核固缩、染色质凝集成新月型紧靠核膜周边 ,核碎裂、染色质片断化等典型的细胞凋亡形态变化。荧光显微镜及流式细胞检测则未见凋亡征象。免疫细胞化学分析显示 ,NS 398处理后的HepG2 细胞 ,其Bcl 2表达较对照组明显下降。结论 :COX 2选择性抑制剂NS 398对人肝癌HepG2 细胞有显著的凋亡诱导作用 ;抗凋亡基因Bcl 2在NS 398诱导的HepG2 细胞凋亡中有重要的调控作用。     

选择性COX-2抑制剂NS-398的制备

目的制备选择性COX-2抑制剂NS-398。方法以2-氟硝基苯为起始原料,经4步反应化合成化合物NS-398。结果与结论用该方法可以在温和条件下合成出该药,最终产品纯度大于99%。     

选择性COX-2抑制剂NS-398诱导白血病细胞凋亡的作用机制

目的探讨选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS-398诱导白血病细胞系K562细胞凋亡的分子机制。方法采用流式细胞术检测细胞凋亡;采用蛋白印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白Bcl-2、半胱氨酸酶-3(Caspase-3)的表达;并应用流式细胞术检测Caspase-3的活性。结果①NS-398作用K562细胞24h后,对照组未出现凋亡峰,各药物处理组(100~400μmol·L-1)均出现明显的凋亡峰,其凋亡率分别为(10.51±1.04)%、(27.79±2.40)%、(45.72±3.32)%和(60.22±2.03)%(P<0.01)。②不同浓度NS-398处理后,K562细胞中Bcl-2蛋白表达下降,而Caspase-3蛋白表达增加,与对照组相比差异具有显著性(P<0.05)。③NS-398能以剂量依赖方式促进Caspase-3活性的增加,表达活化Caspase-3的细胞百分率分别为(2.67±0.22)%、(9.53±0.15)%、(21.28±0.43)%、(39.63±0.8)%和(63.40±0.69)%(P<0.01)。结论选择性COX-2抑制剂NS-398可能通过调节Bcl-2蛋白表达、活化Caspase-3,从而诱导白血病K562细胞凋亡。     

选择性环氧化酶2抑制剂NS-398对胃癌细胞AGS增殖的抑制作用

目的观察选择性环氧化酶2(COX-2)抑制剂NS-398对胃癌细胞AGS增殖的抑制作用,并探讨其相关机制。方法 NS-398 25,50和100μmol·L-1作用于AGS细胞0～48 h,用CCK-8法检测细胞存活率。NS-398 50μmol·L-1作用于AGS细胞48 h,用流式细胞仪检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR检测Notch信号通路相关基因的表达,Western印迹法检测Notch胞内结构域(NICD)及下游靶基因NF-κB和毛蛋白和断裂1增强子(Hes-1)蛋白表达。结果 NS-398 25,50和100μmol·L-1能抑制胃癌细胞AGS增殖,并呈时间(r时间=-1.00,P=0.003,50μmol·L-1)和浓度(r浓度=-0.999,P=0.027,48 h)依赖性。NS-39850μmol·L-1作用48 h,AGS细胞凋亡率为(20.1±3.5)%,比正常对照组(3.5±1.4)%明显增加(P<0.05);Notch信号通路受体Notch1和Notch2及Notch信号通路配体δ样1(DLL1)和锯齿状1(JAG1)mRNA表达无明显变化,Notch下游靶基因Hes-1和NF-κB mRNA表达较正常对照组明显减少(P<0.05);NICD,Hes-1和NF-κB蛋白表达明显减少(P<0.05)。结论选择性COX-2抑制剂NS-398可能通过抑制Notch信号途径抑制胃癌细胞AGS增殖。     

NS-398对高糖诱导的系膜细胞结缔组织生长因子表达的影响

［摘要］目的研究选择性环氧化酶 2抑制药NS 398对高糖诱导的系膜细胞刺激结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响。 方法20 μmol&#8226;L-1 NS 398加入30 mmol&#8226;L-1高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞中，分别培养0，12，24，48，72 h，应用逆转录聚合酶链反应的方法评价CTGF mRNA的表达改变，应用免疫细胞化学方法评价CTGF蛋白的表达水平。结果未加高糖刺激的肾小球系膜细胞CTGF mRNA和蛋白表达水平较低，高糖刺激后肾小球系膜细胞CTGF mRNA和蛋白表达水平增加，6 h活性已渐增高，12 h达高峰，18 h开始下降，24 h降至较低水平。用NS 398干预30 min后再用30 mmol&#8226;L-1高糖刺激，未见 CTGF mRNA和蛋白表达水平增加（P＞0.05）。 结论高糖能上调肾小球系膜细胞CTGF mRNA和蛋白的表达，NS 398能抑制高糖诱导系膜细胞CTGF的表达。     

伊维菌素对人胃癌细胞BGC-823、MGC-803迁移和侵袭的影响及机制研究

目的:研究伊维菌素对人胃癌细胞BGC-823、MGC-803迁移和侵袭能力的影响及其作用机制。方法:0、2.5、5、10、20、40μmol/L伊维菌素分别作用于BGC-823、MGC-803细胞24 h后用MTT法检测细胞抑制率,再采用Transwell小室侵袭实验观察5μmol/L伊维菌素和含0.67‰二甲基亚砜的磷酸盐缓冲液(对照组)作用24 h对BGC-823、MGC-803细胞迁移和侵袭的影响,Western blot法分别检测5、10μmol/L伊维菌素和含0.67‰二甲基亚砜的磷酸盐缓冲液(对照组)作用于BGC-823、MGC-803细胞24 h后上皮-间质转化(EMT)标记物E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Snail和EMT转导通路转化生长因子β(TGF-β)/Smad中TGF-β1、TGF-βR、Smad2、Smad3蛋白的表达水平。结果:伊维菌素对BGC-823、MGC-803细胞生长均有抑制作用,其细胞抑制率与其浓度呈正相关。与对照组比较,5μmol/L伊维菌素作用后BGC-823、MGC-803细胞的迁移数和侵袭数均明显减少(P<0.01或P<0.001);5、10μmol/L伊维菌素作用后BGC-823、MGC-803细胞中E-cadherin蛋白表达明显增强(P<0.05或P<0.01或P<0.001),N-cadherin、Vimentin、Snail、TGF-βR、Smad2、Smad3蛋白表达均明显减弱(P<0.05或P<0.01或P<0.001),TGF-β1蛋白仅在10μmol/L伊维菌素作用后明显减弱(P<0.05)。结论:伊维菌素能显著抑制BGC-823、MGC-803细胞的迁移和侵袭,其可能与抑制TGF-β/Smad活性从而影响EMT过程有关。     

非甾体类抗炎药对胃癌细胞增殖抑制研究

目的观察NSAIDs对人胃癌细胞株SGC7901生长的抑制作用,并初步探讨其作用的机制。方法采用MTT法及流式细胞技术检测不同浓度阿司匹林和NS-398对胃癌细胞增殖及细胞周期的影响。结果MTT检测表明,阿司匹林和NS-398呈时间和浓度依赖性对SGC7901细胞活性产生抑制(P<0.05);阿匹匹林浓度为0.1mol/L时,24,48和72h抑制率分别为7.1%,10.4%和24.5%;浓度为1.0mmol/L时抑制率分别为7.9%,15.5%和50.5%;浓度为8.0mmol/L时抑制率分别为10.2%,23.6%和81.3%;NS-398浓度为10μmol/L时,NS-398作用24,48和72h,SGC7901细胞的抑制率分别为3.8%,12.0%和19.8%;浓度为50μmol/L时抑制率分别为5.1%,17.4%和35.8%;浓度为100μmol/L时抑制率分别为12.4%,28.1%和51.1%;阿司匹林和NS-398呈剂量依赖性影响细胞周期,显著增加G0/G1期细胞比例。结论阿司匹林和NS-398在一定浓度内呈时间和剂量依赖性抑制SGC7901细胞的增殖,其作用机制可能与改变细胞周期的分布有关。     

异甘草素对胃癌 SGC7901 细胞侵袭能力的影响

目的 探讨异甘草素 （isoliquiritigenin） 对人胃癌 SGC7901 细胞侵袭能力的影响及其可能的分子机制。方法 取对数生长期人胃癌 SGC7901 细胞, 分为对照组（正常细胞培养液）, 异甘草素实验组(异甘草素溶于细胞培养液, 浓度分别为 10、 25、 50、 100 μmol/L), 每组 4 个复孔。培养 24、 48、 72 h 后采用 MTT 法检测异甘草素对细胞生长的抑制情况, 摸索后续实验药物浓度和作用时间; 采用 Transwell 小室侵袭实验检测各组细胞的侵袭能力; Western blotting 法检测基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、 蛋白激酶 B（Akt）和磷酸化 Akt（P-Akt）的表达。结果 10 μmol/L 异甘草素不能抑制胃癌细胞株 SGC7901 的生长, 而 25、 50、 100 μmol/L 异甘草素可明显抑制其生长, 且呈时间和浓度依赖性,24、 48、 72 h 半数抑制浓度（IC50）分别为 52.48、 44.49、 32.50 μmol/L, 故选定后续实验药物浓度为 25、 50、 100 μmol/L,作用时间为 24 h。与对照组穿膜细胞数（个： 209.75±9.29）相比, 25 μmol/L 组（138.50±10.15）、 50 μmol/L 组（89.50±16.56）、 100 μmol/L 组（45.00±8.08）逐渐降低（F=267.948, P < 0.05）。各组间 Akt 蛋白水平差异无统计学意义（F=1.492）; 随异甘草素浓度的增加, P-Akt、 MMP-9 蛋白水平逐渐降低（F 分别为 359.219、 431.324, 均 P < 0.05）。结论 异甘草素能够抑制 SGC7901 细胞侵袭能力, 其机制可能与下调 PI3K/Akt信号转导通路蛋白及其下游的 MMP-9蛋白表达有关。     

血管生成素1基因转染对胃癌细胞侵袭能力的影响

目的 探讨人血管生成素1(Ang-1)对人胃癌细胞BGC-823基质会属蛋白酶2(MMP-2)表达情况的影响.方法 利用腺病毒作为载体将已构建成功的含Ang-1基因的重组腺病毒(Ad-Ang-1)瞬时转染人胃癌细胞BGC-823为实验组,转染编码绿色荧光蛋白的复制缺陷型腺病毒重组体(Ad-GFP)为阴性对照组,未转染的正常细胞为对照组.应用RT-PCR和Western blot印迹检测三组细胞中MMP-2在mRNA和蛋白表达的情况.结果 MMP-2在实验组中表达明显高于阴性对照组和空白对照组(P<0.05).结论 Ang-1能显著提高人胃癌细胞BGC-823的MMP-2的表达,提示Ang-1可能具有促进肿瘤细胞侵袭的作用.     

人参皂苷Rg1对人胃癌BGC-823的抑制作用研究

目的:研究人参皂苷Rg1对体外培养的人胃癌细胞株BGC-823活性、增殖、凋亡蛋白Bax-2c、aspase-3及形态学影响,并探讨其可能机制。方法:取对数生长的细胞,加入不同浓度人参皂苷Rg1加以干预,生长曲线法、MTT法、蛋白质含量分别观察人参皂苷Rg1对BGC-823细胞活性、增殖的影响,荧光定量PCR法测定凋亡蛋白Bax-2c、aspase-3 mRNA含量变化,形态学方法观察人参皂苷Rg1促BGC-823细胞凋亡作用。结果:人参皂苷Rg1 40、60、80 mg/L不同剂量均不同程度抑制细胞的增殖,且有明显的量-效、时-效关系;人参皂苷Rg1对BGC-823细胞具有明显的细胞毒作用,其IC50为29.56 mg/L;人参皂苷Rg1可明显减少肿瘤细胞内蛋白含量,提高细胞内Bax-2、caspase-3 mRNA含量,提高经人参皂苷Rg1作用后,凋亡细胞皱缩,胞浆稀少或缺乏,淡红色;染色质凝聚,成深紫色;细胞核固缩碎裂成数个圆形颗粒。结论:人参皂苷Rg1可明显抑制细胞增殖,降低细胞活性,表现出较好的抗肿瘤活性,其作用机制可能与抑制肿瘤细胞蛋白质合成、促进BGC-823细胞凋亡有关。     

全反式维甲酸对胃癌BGC-823细胞增值和凋亡的影响及其机制研究

目的探讨全反式维甲酸（a11．transretinoicacid,ATRA）对体外培养的胃癌BGC-823细胞增殖和细胞凋亡的影响。方法不同浓度全反式维甲酸处理培养的胃癌BGC-823细胞后,采用MTT法检测细胞的增殖活性,采用TUNEL法检测细胞凋亡情况,采用RT．PCR检测细胞Survivin基因mRNA的变化。结果全反式维甲酸对胃癌BGC-823细胞的生长具有明显的抑制作用,其作用表现为剂量依赖性和时间依赖性（P〈0．05）。TUNEL检测显示：以5Ixmol／L的全反式维甲酸对BGC-823细胞处理0、24、48、72h后细胞凋亡率逐渐增加（P〈0．05）,呈时间依赖性。RT-PCR检测显示BGC-823细胞Survivin基因的mRNA表达呈时间依赖性下调。结论全反式维甲酸对胃癌BGC-823细胞株具有明显的增殖抑制和诱导凋亡作用,其作用机制可能与下调Survivin基因表达有关。     

牡蛎天然活性肽BPO-1诱导人胃腺癌BGC-823细胞凋亡的形态与超微结构观察

目的观察BPO-1对人胃腺癌BGC-823细胞形态与超微结构的影响,以探索BPO-1对胃癌细胞的作用机制。方法采用酸抽提、凝胶柱层析等方法,从牡蛎体内分离提取到牡蛎天然活性多肽组分BPO-1,以细胞凋亡诱导物姜黄素和癌细胞分化诱导物HMBA为平行对照,用光镜、透射电镜观察BPO-1处理细胞的形态和超微结构变化。结果经处理后的BGC-823细胞体积缩小、染色质凝聚、线粒体空泡化、内质网腔扩大和出现凋亡小体等多种典型的细胞凋亡形态和超微结构特征。结论牡蛎天然活性肽BPO-1对人胃腺癌BGC-823细胞凋亡的诱导具有显著作用。     

重组人p53腺病毒联合奥沙利铂对胃癌细胞BGC-823的生长抑制作用

目的观察重组人p53腺病毒(rAd-p53)联合奥沙利铂对胃癌细胞BGC-823的生长抑制作用。方法用rAd-p53注射液(A组)及奥沙利铂(B组)及两者联合(C组)作用于胃癌细胞株BGC-823不同时间后,MTT法检测其对体外培养细胞的抑制率,免疫组织化学SP法检测p53蛋白表达,流式细胞术分析其细胞凋亡蛋白半胱天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)表达;结果与对照组(D组)比较。结果在A组、B组中,随药物浓度及作用时间的增加,细胞的生长抑制率逐渐增高;C组作用24h,在较低浓度时细胞生长抑制率即明显增高(P<0.05)。C组与D组比较,胃癌细胞Caspase-3蛋白的含量升高(P<0.05),但p53蛋白无明显升高(P>0.05)。结论 rAd-p53有增强奥沙利铂化疗敏感性的作用;其机制可能与其通过线粒体途径激活下游的Caspase-3诱导细胞凋亡有关。     

FAM3B基因cDNA克隆及其在胃癌细胞系BGC-823的表达

目的克隆FAM3B cDNA,构建FAM3B重组表达载体并在胃癌细胞系BGC-823中表达,观察其对细胞系的影响,探索新的肿瘤治疗途径。方法构建pEGFP-N2-FAM3B真核表达质粒,将pEGFP-N2-FAM3B转染人胃癌细胞系BGC-823,研究其对胃癌细胞产生的作用。结果重组pEGFP-N2-FAM3B真核表达质粒构建成功,经pEGFP-N2-FAM3B转染后,荧光显微镜下可见转染的BGC-823细胞有绿色荧光蛋白的表达,转染后的BGC-823细胞生长减慢。结论构建完成真核表达载体pEGFP-N2-FAM3B,重组pEGFP-N2-FAM3B质粒在胃癌细胞系BGC-823细胞内成功表达。     

表没食子儿茶素没食子酸醋对人胃癌细胞迁移、袭和FoxM1基因表达的影响

目的观察表没食子儿茶素没食子酸醋（表没食子儿茶素没食子酸醋,EGCG）对人胃癌细胞迁移、侵袭的影响,并探讨其可能机制。方法采用不同浓度的EGCG处理人胃癌BGC823细胞后,以划痕试验方法检测癌细胞迁移能力,以Transwell方法检测癌细胞侵袭能力,采用蛋白质印迹方法检测FoxM1基因蛋白水平变化。结果人胃癌BGC823细胞经EGCG处理后,迁移和侵袭能力均明显下降,且呈剂量依赖性（P〈0.01）。EGCG处理组FoxM1基因蛋白水平明显下调,且呈浓度依赖性。结论 EGCG可降低人胃癌细胞侵袭能力,下调FoxM1基因表达,是其重要机制之一。     

葫芦素B对人胃癌BGC-823细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨葫芦素B对人胃癌BGC-823细胞增殖及凋亡的影响及其作用的分子机制。方法体外培养BGC-823细胞,MTT法观察葫芦素B对细胞增殖的影响,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用分光光度法检测Caspase-3、Caspase-9的活性,采用Western blot方法检测葫芦素B对Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。结果葫芦素B对BGC-823细胞的增殖有抑制作用,且此作用呈剂量和时间依赖性;流式细胞仪检测结果显示,葫芦素B诱导BGC-823细胞凋亡,呈剂量依赖性。葫芦素B处理后Caspase-3、Caspase-9活性升高,细胞抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少,促凋亡蛋白Bak的表达增加。结论葫芦素B可以抑制人胃癌BGC-823细胞的增殖并诱导细胞凋亡。     

紫杉醇诱导胃癌BGC-823和SGC-7901细胞凋亡作用的比较

目的研究胃癌BGC-823细胞和SGC-7901细胞对紫杉醇诱导凋亡的敏感性。方法用0．1～0．5μmol·L^-1紫杉醇作用于BGC-823和SGC-7901细胞,再用0．3μmol·L^-1紫杉醇对BGC-823和SGC-7901细胞分别作用0、6、12、24、36、48h,通过形态学观察及流式细胞术检测细胞凋亡率的变化。结果（1）紫杉醇对两种胃癌细胞均有明显诱导凋亡作用,且均呈时间依赖性及剂量依赖性;（2）中分化的SGC-7901细胞株对紫杉醇的敏感性明显高于低分化的BGC-823细胞株。结论不同分化程度的胃癌细胞株对紫杉醇的敏感性不同。