缺氧-复氧损伤对大鼠心肌微血管内皮细胞NF-κB、FKN和p53 mRNA表达的影响

目的 观察缺氧复氧损伤对大鼠心肌微血管内皮细胞(MMECs)NF-κB p65、fractalkine(FKN)和p53 mRNA表达的影响.方法 将培养的SD大鼠MMECs随机分为缺氧复氧组(H-R组,缺氧2h,复氧2h,n＝6)和正常对照组(N组,n＝6).Hoechst荧光染色观察凋亡细胞形态,膜连蛋白V-异硫氰酸荧光素(annexin V-FITC)和碘化丙啶(PI)双标记法测定细胞凋亡率,MTT法测定细胞活力,RT-PCR检测NF-κB p65、FKN和p53 mRNA转录水平.结果 与N组比较,HR组细胞活力降低(0.156±0.014 vs.0.103±0.006) (P＜0.01),凋亡率升高[(20.69±2.46)％ vs.(55.48±3.38)％](P＜0.01),NFκB p65、FKN和p53 mRNA表达上调[(0.327±0.095 vs.1.489±0.076)、(0.174±0.098 vs.1.308±0.131)和(0.173±0.047 vs.1.850±0.129)](P＜0.01).结论 缺氧复氧能促使大鼠MMECs细胞凋亡,抑制细胞增殖,上调NF-κB、FKN和p53 mRNA的表达.     

二氮嗪对缺氧-复氧心肌微血管内皮细胞p53表达的影响

目的 观察二氮嗪(DZ)预处理对缺氧-复氧(H-R)心肌微血管内皮细胞(MMECs)中p53 mRNA表达的影响,探讨线粒体三磷酸腺苷敏感性钾通道(mito-KATP)开放剂在抑制H-R MMECs凋亡中的作用机制.方法 培养大鼠MMECs,制作MMECs H-R模型模拟H-R损伤.24只大鼠随机分成4组,每组6只:正常对照组(N组)、H-R组、H-R+DZ组(DZ组),H-R+DZ+5-HD组(5-HD组);RT-PCR测定p53mRNA的表达.结果 在H-R 2h,与N组比较,H-R组、DZ组、5-HD组MMECs细胞凋亡率及MMECs内p53 mRNA表达明显增加(P<0.01);DZ组细胞凋亡率及MMECs内p53 mRNA表达低于H-R组、5-HD组(P<0.01).结论 H-R使MMECs凋亡显著增加,p53转录活性增加;开放mito-KATP使H-R诱导的MMECs凋亡减少,可能与p53转录活性减少有关.     

PI3K/Akt信号途径在二氮嗪抑制缺氧-复氧大鼠心肌微血管内皮细胞凋亡中的意义

目的 研究磷脂酰肌醇-3-激酶/Akt (PI3K/Akt)信号途径在二氮嗪抑制缺氧-复氧(H-R)大鼠心肌微血管内皮细胞(MMECs)凋亡中的意义.方法 将培养的SD大鼠MMECs随机分为正常对照组(C组)、缺氧-复氧组(H-R组,缺氧2h复氧2 h)、二氮嗪+缺氧-复氧组(DZ组,二氮嗪100 μmol/L预处理2 h+缺氧2h复氧2 h)、PI3K特异性阻滞剂LY294002+二氮嗪+缺氧-复氧组(LY294002组,LY294002 100 μmol/L预处理2 h+二氮嗪100μmol/L预处理2 h+缺氧2h复氧2 h).Hoechst染色观察凋亡细胞结构,Annexin V-FITC/PI双染法测定细胞凋亡率,RT-PCR和Western blot分别检测Akt的mRNA和蛋白表达水平.结果 与C组比较,H-R组细胞凋亡率升高,Akt mRNA和蛋白表达增加(P＜0.05或P＜0.01);与H-R组比较,DZ组细胞凋亡率降低,Akt mRNA和蛋白表达增加(P＜0.05或P＜0.01);与DZ组比较,LY294002组细胞凋亡率升高,Akt mRNA和蛋白表达减少(P＜0.01).结论 H-R损伤引起MMECs凋亡.线粒体三磷酸腺苷敏感性钾通道(mito-KATP)开放后通过PI3K/Akt信号途径能部分抑制该作用.     

二氮嗪预处理对大鼠缺氧-复氧心肌微血管内皮细胞FKN、p53 mRNA表达的影响

目的观察二氮嗪预处理对大鼠缺氧-复氧(H-R)心肌微血管内皮细胞(MMECs)Fractalkine(FKN)和p53 mRNA表达的影响。方法培养SD大鼠MMECs,分为四组:正常对照组(N组)、H-R组、二氮嗪组(DZ组)、二氮嗪+mitoKATP特异性阻断剂5-羟葵酸预处理组(DZ+5-HD组)。DZ组和DZ+5-HD组分别加入二氮嗪100μmol/L、二氮嗪100μmol/L+5-羟葵酸100μmol/L预处理2 h,然后和H-R组同样进行H-R 2 h。观察凋亡细胞形态,测定细胞凋亡率和活力、RT-PCR检测FKN和p53 mRNA转录水平。结果与N组比较,H-R组细胞凋亡率显著升高,细胞增殖率显著下降,p53 mRNA和FKN mRNA表达显著增强(P<0.01);与H-R组比较,DZ组细胞凋亡率显著降低,细胞增殖率显著增强(P<0.05),FKN mRNA和p53 mRNA表达显著降低(P<0.01);DZ+5-HD组取消了DZ组的作用。结论二氮嗪预处理通过抑制细胞凋亡,促使细胞增殖,下调FKN mRNA和p53 mRNA表达而实现对H-R MMECs损伤的保护。     

大黄素调控NF-κB信号通路抗缺氧缺糖/复氧复糖诱导的PC12细胞损伤

目的 研究大黄素对缺氧缺糖/复氧复糖诱导的PC12细胞损伤的影响和机制.方法 PC12细胞分成Normal(空白对照)、Model(缺氧缺糖/复氧复糖)、EMO L(30 mmol/L的大黄素,缺氧缺糖/复氧复糖)、EMO M(60 mmol/L的大黄素,缺氧缺糖/复氧复糖)、EMO H(90 mmol/L的大黄素,缺...     

迷迭香酸调控SIRT1/NF-κB通路对缺氧复氧神经元炎症及氧化应激损伤的影响

目的:探讨迷迭香酸调控沉默信息调节因子1(SIRT1)/核因子κB(NF-κB)通路对缺氧复氧神经元炎症及氧化应激损伤的影响.方法:体外培养小鼠海马神经元HT-22,通过缺氧复氧处理来建立细胞模型,以CCK-8实验检测终浓度0,5,25,50,75,100 μmol·L-1的迷迭香酸对其增殖影响,筛选其最佳作用浓度.将...     

MG132对缺氧/复氧大鼠心肌细胞的保护作用及其与核因子-κB信号通路的相关性

目的 探讨免疫蛋白酶体抑制剂MG132对缺氧/复氧(H/R)条件下心肌细胞的保护作用及其与核因子-κB(nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated Bcells, NF-κB)信号通路的相关性。方法 分离培养新生SD大鼠心肌细胞,建立心肌细胞H/R模型。将心肌细胞随机分为对照组、MG132组、H/R组和H/R+MG132组。应用CCK-8比色法检测各组细胞增殖与活力,用二硝基苯肼法测定培养液上清中乳酸脱氢酶(LDH)活性,用TUNEL法检测细胞凋亡,RT-PCR法测定细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素6(IL-6)mRNA水平,Western blot法测定细胞中p-IκB和p-P65的蛋白水平。结果 与对照组相比,H/R组细胞活力降低,LDH活性和细胞凋亡增加,IL-1β、IL-6及TNF-αmRNA水平升高,p-IκB和p-P65蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.05);与H/R组相比,H/R+MG132组细胞活力明显提高,LDH活性和细胞凋亡率降低,IL-1β、...     

葛根素对缺氧复氧心脏微血管内皮细胞的保护作用

目的:探讨葛根素在心脏微血管内皮细胞(cardiac microvascular endothelial cell,CMEC)缺氧复氧损伤中的作用。方法:将CMEC随机分为空白组、模型组、葛根素低、中、高剂量(25,50,100 mg·L^-1)共3组。四甲基偶氮唑(methylthiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡,比色法检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性,Western blot法检测Caspase-3和Bcl-2蛋白表达。结果:葛根素预处理后,缺氧复氧CMEC细胞活力增强,细胞凋亡率、LDH活性及MDA含量降低,SOD活性增强,Caspase-3蛋白表达减少,Bcl-2蛋白表达增加。结论:葛根素可拮抗缺氧复氧所致的CMEC损伤,可能与其抗氧化及抗凋亡活性相关。     

阻断NF-κB/IκB信号通路对HIBD大鼠脑内炎症因子的影响

目的:建立大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)模型,将IκB通过腺病毒载体导入体内,探讨其对HIBD大鼠脑内NF-κB活性和TNF-α、IL-1表达的影响。方法:40只大鼠随机分为5组:I组(正常对照组),II组(HIBD损伤1d组),III组(HIBD损伤7d组),IV组(IκB干预1d组),V组(IκB干预7d组)。Western-blot检测脑细胞NF-κB的表达,了解NF-κB的活性,放免法检测TNF-α、IL-1的表达。结果:经中心静脉途径导入腺病毒转载的IκB基因,可降低HIBD大鼠脑内NF-κB活性,IκB干预1d组和7d组与HIBD损伤1d组和HIBD损伤7d组比较,NF-κB活性明显减少(P<0.05);降低脑内TNF-α、IL-1含量,IκB干预1d组和7d组与HIBD损伤1d组和7d组比较,TNF-α、IL-1含量明显减少(P<0.05)。结论:通过中心静脉途径注入腺病毒转载的IκB基因,直接增加脑内IκB的表达,阻断炎症因子TNF-α的合成,机制可能与其抑制了NF-κB的活性有关。     

缺氧对人微血管内皮细胞HIF-VEGF-Notch信号通路的影响

目的：观察缺氧对人微血管内皮细胞(HMVEC)中HIF-VEGF-Notch信号通路相关分子表达的影响。方法常规方法培养HMVEC细胞,低氧培养箱制备HMVEC缺氧模型,正常细胞作为对照组。采用Western Blot法检测HMVEC中HIF-1α及Notch-1的蛋白表达,ELISA法检测细胞培养上清液中VEGF蛋白表达水平。结果缺氧组和对照组细胞中Notch1蛋白表达分别为2.07±0.16和0.91±0.04,两者差异有显著意义（P<0.05）;HIF-1α蛋白表达缺氧组为2.53±0.19,对照组为0.67±0.08,差异有统计学意义（P<0.05）。对照组上清液中VEGF表达量为50.04±5.92 ng/L,缺氧组上清液中VEGF表达量为238.04±19.29 ng/L,两者差异有统计学意义（P<0.05）。结论缺氧可上调HMVEC细胞中HIF-VEGF-Notch信号通路相关分子的表达,此可能与重要脏器缺血缺氧性损伤后诱导的血管新生有关。     

VEGF通过NF-κB通路对内皮细胞血清类黏蛋白1表达的影响

目的观察血管内皮细胞生长因子(VEGF)对内皮细胞血清类黏蛋白(ORM)1表达的影响,探讨转录调控核因子-κB(NF-κB)通路在其中的作用。方法 Real-time PCR检测ORM1基因表达。免疫荧光分析P65蛋白核移位。Western blot检测ORM1和P65蛋白表达。结果对照组、低剂量VEGF组、高剂量VEGF组、PDTC组ORM1基因的2~(-△△Ct)值分别为0.324±0.053、0.252±0.042、0.192±0.034、0.166±0.027,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。低剂量VEGF组、高剂量VEGF组、PDTC组细胞核内的P65蛋白表达显著低于对照组。对照组、低剂量VEGF组、高剂量VEGF组、PDTC组细胞核内P65蛋白表达的相对灰度值分别为0.527±0.114、0.316±0.065、0.242±0.038、0.105±0.012,组间比较差异有统计学意义(P<0.05);各组ORM1蛋白表达的相对灰度值分别为0.874±0.142、0.462±0.083、0.305±0.047、0.126±0.014,组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论 VEGF通过抑制NF-κB通路下调ORM1基因、蛋白表达,可能是VEGF致脑水肿的作用机制。     

丹酚酸B通过调控SIRT1/NF-κB/p53通路减轻缺氧/复氧诱导的大鼠肝细胞损伤

目的探究丹酚酸B(salvianolic acid B,Sal B)减轻缺氧/复氧(H/R)诱导的大鼠肝细胞损伤及潜在的分子机制。方法体外培养BRL-3A大鼠肝细胞株,制备BRL-3A的H/R模型,予以Sal B干预。CCK-8检测细胞活力;微板法测转氨酶含量;ELISA测炎性因子的含量;流式细胞术测细胞凋亡水平;Western blot和实时荧光定量PCR(q PCR)检测SIRT1、NF-κB p65、p53、Bax、Bcl-2蛋白及mRNA表达水平。结果 H/R诱导的大鼠肝细胞活力下降;细胞上清液中ALT、AST、TNF-α、IL-1β含量明显增多;细胞凋亡率明显升高;SIRT1和Bcl-2在蛋白及mRNA水平的表达下调,而NF-κB p65、p53和Bax在蛋白及mRNA水平的表达上调。在Sal B预处理后,细胞活力升高;细胞液中ALT、AST、TNF-α及IL-β的含量下降;细胞凋亡率降低;SIRT1和Bcl-2在蛋白水平及mRNA水平的表达升高,NF-κB p65、p53和Bax在蛋白水平及mRNA水平的表达降低。结论丹酚酸B可有效减轻H/R诱导的大鼠肝细胞损伤,其机制可能与SIRT1/NF-κB/p53通路有关系。     

褪黑素对新生鼠缺氧缺血性脑损伤表达NF-κB的影响

目的：探讨褪黑素（melatonin,MT）对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的神经保护作用及作用机制。方法：新生健康7日龄Wistar大鼠120只,随机分为3组：假手术组（40只）、缺氧缺血模型组（40只）、MT治疗组（40只）,参照经典方法建立新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）模型,MT治疗组于模型制作完成后立刻注射MT10mg/kg1次于腹腔内,脑损伤组则于腹腔内注射等量的0.9%氯化钠注射液。各组分别于手术后6、24、48、72 h取脑组织切片,免疫组织化学方法检测核因子-κB（NF-κB）的表达.结果：与假手术组相比,缺氧缺血组NF-κB表达随时间的变化增加显著（P〈0.01）。与缺氧缺血组相比较,MT治疗组NF-κB表达在12,24,48h三个时间点中下降显著（P〈0.01）。结论：MT对HIBD后海马区神经细胞具有保护作用,其作用机制可能与抑制NF-κB在海马区的持续活化有关。     

中药调控核因子-κB（NF-κB）信号通路治疗银屑病的研究进展

银屑病是一种慢性自身免疫性皮肤病,其核心是免疫反应失调和角质形成细胞增殖异常。核因子-κB（NF-κB）在银屑病中是一种关键的调节信号通路,通过抑制NF-κB信号途径或下游转录因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）或白细胞介素-17（IL-17）/白细胞介素-23（IL-23）成为未来银屑病治疗的一个新方向。中药针对NF-κB信号通路在银屑病治疗中具有疗效确切、手段多样、不良反应小等优势。总结了中药调控丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）/NF-κB、NF-κB/信号传导和转录激活因子3（STAT3）、Toll样受体4（TLR4）/NF-κB信号通路治疗银屑病的研究进展,以期为中药治疗银屑病提供更新策略。     

大鼠心肌缺血缺氧损伤核转录因子-κB与细胞间粘附分子-1的表达

目的　研究异丙肾上腺素致大鼠心肌损伤对心肌核转录因子 κB(NF κB)以及细胞间粘附分子 1(ICAM 1)表达的影响。方法　大鼠皮下注射异丙肾上腺素造成心肌坏死模型,测定血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸磷酸激酶(CK)活力和丙二醛(MDA)含量,观察心肌坏死程度,免疫组化检测心肌NF κBp65蛋白的表达,Western蛋白质印迹杂交检测IκBα的蛋白质表达,半定量RT PCR检测ICAM 1mRNA含量。观察腹腔注射地塞米松后上述指标的变化。结果　大鼠给予异丙肾上腺素后,血清LDH、CK和MDA含量升高,心肌坏死,NF κBp65蛋白大量表达,IκBα蛋白质表达减弱,ICAM 1mRNA表达上升。地塞米松使升高的LDH、CK和MDA明显下降,减轻心肌坏死程度,显著抑制NF κBp65蛋白和ICAM 1mRNA表达,IκBα蛋白质表达增强。结论　儿茶酚胺大量释放引起的心肌缺血缺氧损伤中,NF κB和ICAM 1mRNA表达增加,表明抑制NF κB激活,减少ICAM 1mRNA的表达及炎性细胞因子产生是减少心肌缺血缺氧损伤的关键点之一。     

辛伐他汀对K562细胞NF-κB信号通路的影响

目的 探讨辛伐他汀是否依赖核因子(NF)-κB信号通路分子的变化诱导K562细胞凋亡.方法 体外培养K562细胞,首先用流式细胞术检测辛伐他汀对K562细胞凋亡的影响,RT-PCR分析NF-κB信号通分子转录水平的变化.然后构建裸鼠K562细胞移植瘤模型,TUNEL法检测辛伐他汀对裸鼠移植的K562细胞晚期凋亡的影响,RT-PCR检测裸鼠体内K562细胞NF-κB信号通路分子转录水平的变化.结果 辛伐他汀在体外能明显引起K562细胞发生凋亡,NF-κB通路大多数分子出现差异表达.不同剂量的辛伐他汀能够诱导裸鼠身上移植的K562细胞发生凋亡,并随药物剂量的增加凋亡率逐渐增高(P＜0.01);辛伐他汀能够引起NF-κB信号通分子在转录水平出现明显差异表达(P＜0.01).结论 辛伐他汀可能通过引起NF-κB信号通路分子的变化来诱导K562细胞凋亡的发生.     

氯离子对心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响

目的　研究氯离子对心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响。方法　利用原代培养的心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,去除细胞外的氯离子或采用氯通道阻断剂DIDS、SITS进行干预,检测细胞存活率及LDH、MDA、SOD、GXH Px活性变化。结果　缺氧/复氧损伤组与对照组比,LDH、MDA活性升高,细胞存活率、SOD、GXH Px降低; Cl- free+A R组、SITS+A R组处理后较缺氧/复氧组LDH、MDA活性低,细胞存活率、SOD、GXH Px升高;DIDS+A R组的上述指标与缺氧/复氧组比无差异。结论　①氯离子在心肌细胞缺氧/复氧损伤中起了重要作用。②氯通道阻断剂SITS对抗心肌细胞缺氧/复氧损伤有明显的保护作用,而DIDS无保护作用。     

人参皂苷Rbl对阿霉素心力衰竭大鼠心肌细胞核因子-κB的影响

目的探讨人参皂苷Rbl(Gs-Rb1)改善阿霉素(Adr)慢性心力衰竭(CHF)效应是否与抑制核因子-κB(NF-κB)有关。方法 Adr诱导CHF大鼠模型被随机分为Adr组(n=15)和Gs-Rbl组(70 mg.kg-1.d-1,n=17),另随机选取同龄健康大鼠作为对照(n=10);同时培养乳鼠心肌细胞并随机分为对照组、Adr组(1μmol.L-1)和Gs-Rbl组(1μmol.L-1Adr+200μmol.L-1 Gs-Rbl)。干预完毕后,检测心脏超声、NF-κB、IκBα、p-IκBα和NF-κB DNA结合活性。结果 (1)Gs-Rb1组LVEF明显改善(P=0.003);(2)在NF-κB p50和NF-κB p65方面,体内或体外的Gs-Rbl组均明显低于Adr组(P<0.001);(3)体内、体外的Gs-Rbl组NF-κBDNA结合活性明显低于Adr组(P<0.01);(4)体内、体外的Adr组IκBα蛋白明显高于对照组,而Gs-Rbl组IκBα最高(P<0.01);Gs-Rbl组p-IκBα和p-IκBα/IκBα比值明显低于Adr组(P<0.01)。结论 Gs-Rb1改善CHF效应与其抑制NF-κB活性有关。