地塞米松对PMA诱导CD18表达的抑制作用

目的:研究GC抑制CD18表达的作用。方法:选用PMA刺激下的U937细胞为实验模型,运用定量RT-PCR、Northern杂交检测U937细胞CD18 mRNA的表达水平。结果:Dex能明显抑制PMA诱导CD18 mRNA的表达,这种抑制作用具有明显的剂量依赖性,GR的拮抗剂RU38486能够明显扭转Dex的抑制作用。结论:Dex通过GR介导能在转录水平上抑制PMA诱导的CD18 mRNA的表达,该作用可能与糖皮质激素受体(GR)在转录水平拮抗NF-κB有关。     

PMA促进CD18表达的信号转导通路及机制

细胞激活剂肉豆蔻酰佛波醇乙酯 (ＰＭＡ)是蛋白激酶Ｃ(ＰＫＣ)的特异性激动剂 ,ＰＭＡ具有促进Ｕ937细胞和ＨＬ - 60细胞分化的作用 ,能使Ｕ937细胞和ＨＬ - 60细胞膜上的整合素 β2 亚族ＣＤ1 8蛋白增多。但ＰＭＡ诱导作用的机制尚未明了。目的 :进一步阐明ＰＭＡ促进ＣＤ1 8表达的信号传导通路及机制。方法 :定量ＲＴ -ＰＣＲ法、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交法、流式细胞术研究了细胞激活剂ＰＭＡ对人组织淋巴瘤细胞系Ｕ937细胞和人早幼粒白血病细胞系ＨＬ - 60ＣＤ1 8表达的作用及有关的信号传导通路。结果 :Ｕ937细胞经不同浓度的ＰＭＡ( 5ｎ…     

PMA对U937细胞CD18mRNA表达的诱导作用及其机制

目的:研究PMA对CD18mRNA表达的促进作用及机制。方法:选用PMA刺激下的U937细胞为实验模型,运用定量RT-PCR方法检测U937细胞CD18mRNA的表达水平。结果:PMA具有浓度和时间依赖性地诱导U937细胞CD18mRNA表达的作用,这种作用能分别被PKC、NF-κB抑制剂所抑制,但不能被转录因子AP-1抑制剂所抑制。结论:PMA能激活细胞的PKC,进而通过其后的信号转导通路促进CD18mRNA的表达,转录因子NF-κB为PMA刺激下的U937细胞CD18基因转录所必需,而AP-1则相反。     

TLSFJM对PMA诱导Jurkat细胞IL—2Ra链基因表达的抑制作用

本文应用原位杂交和双ＭｃＡｂ夹心ＥＬＩＳＡ方法，探讨了来自ＪＭＴ细胞白血病细胞系产生的抑制因子（ＴＬＳＦＪＭ）对ＰＭＡ诱导的Ｊｕｒｋａｔ细胞ＩＬ－２Ｒａ链基因表达的影响。结果表明：ＴＬＳＦＪＭ可明显抑制ＰＭＡ诱导的ｊｕｒｋａｔ细胞ＩＬ－２Ｒａ链ｍＲＮＡ转录，并降低膜表面ＩＬ－２Ｒａ链ｍＲＮＡ转录，并降低膜表面ＩＬ－２Ｒａ链的表达和细胞培养上清中可溶性ＩＬ－２Ｒ（ｓＩＬ－２Ｒ）水平。     

淋巴因子对PMA活化的扁桃体B淋巴细胞CD23分子表达的影响

研究了人淋巴因子ｒｈＩＬ－４、ｒｈＩＬ－２、ｒｈＩＦＮ－γ对ＰＭＡ活化的扁桃体Ｂ淋巴细胞ＣＤ２３分子表达的调节作用。实验结果表明：１．ｒｈＩＬ－４能够显著增加ＰＭＡ作用下的Ｂ细胞ＣＤ２３表达，呈剂量依赖性反应；ｒｈＩＦＮ－γ对活化后Ｂ细胞ＣＤ２３表达呈明显抑制作用；ｒｈＩＬ－２对ＣＤ２３表达的抑制作用微弱。２．在ＰＭＡ单独刺激下Ｂ淋巴细胞ＣＤ２３的表达在第３天达高峰，而ＰＭＡ与ＩＬ－４共同作用下ＩＬ－４能够持续促进ＰＭＡ作用下的扁桃体Ｂ细胞ＣＤ２３的高表达，在作用的第５天ＣＤ２３阳性率可高达７５．４％。由此可见Ｂ细胞ＣＤ２３分子的表达受到Ｔ细胞源性淋巴因子的调控，这种调控对于免疫应答的调节可能具有重要意义。此外对Ｂ淋巴细胞经ＰＭＡ及淋巴因子活化后，反映细胞分裂状态的￣３Ｈ－ＴｄＲ、￣３Ｈ－ＵＲ掺入ｃｐｍ值与ＣＤ２３表达的相关性进行探索。发现两者无明显相关性。     

RhIL-18对核辐射诱导小鼠脾细胞凋亡的抑制作用

目的探讨重组人白细胞介素18(rhIL-18)对核辐射所致小鼠脾细胞凋亡的抑制作用及其对免疫功能的调节调节。方法对32只C57小鼠分4组进行核辐射损伤,2周后取小鼠脾淋巴细胞体外培养,用细胞死亡ELISA试剂盒测定胞浆中核小体含量,用DAN琼脂糖电泳检测凋亡细胞DNA片段,用淋巴细胞转化实验测定rhIL-18对脾细胞免疫功能的调节作用。结果与对照组比较,rhIL-18能够明显降低核辐射所致的小鼠脾细胞凋亡;提高核辐射损伤后小鼠的脾细胞细胞转化能力。结论rhIL-18可能通过抑制核辐射诱导的细胞凋亡而增强小鼠脾细胞功能。     

模拟肽对LPS诱导CD14的表达

本文观察PMB及其模拟肽处理前后FITC-LPS与J774A1的结合能力及CD14表达,并检测培养上清中细胞因子TNF-α、IL-6的含量变化。结果发现①FITC-LPS分别与PMB、peptide 1孵育后,细胞膜平均通道荧光显著减少,LPS与J774A1的结合能力显著降低;②100 ng/ml LPS刺激J774A1 3 h后CD14阳性率明显增加;LPS分别与PMB和peptide 1预孵育后可显著降低LPS刺激J774A1细胞膜CD14表达;③LPS刺激J774A1分泌TNF-α和IL-6显著增加,LPS分别与PMB和petide 1预孵育后能显著减少细胞因子TNF-α和IL-6分泌。结果证实多粘菌素B及其模拟肽(peptide 1)可能通过下调J774A1 CD14表达,降低细胞因子水平来减少LPS诱导的炎症反应。     

流式细胞仪检测T_H1及T_H2细胞时PMA对CD4分子表达的影响

应用流式细胞仪结合胞浆内染色技术检测辅助性Ｔ淋巴细胞 (ＴＨ)胞浆内细胞因子分泌以区分ＴＨ1 /ＴＨ2细胞是近年来新建立的一种方法 ,我们发现目前广泛使用的丝裂原ＰＭＡ(Ｐｈｏｒｂｏｌ 1 2 ｍｙｒｉｓ ｔａｔｅ 1 3 Ａｃｅｔａｔｅ)对ＴＨ 细胞表面ＣＤ4分子表达有明显下调作用 ,现报道如下。1 0例健康体检儿童及 2 7例呼吸道感染患儿静脉血标本淋巴细胞分离洗涤后 ,加入有丝分裂原刺激物ＰＭＡ ,3 7℃7%ＣＯ2 共培养后 ,用抗ＣＤ4 ＰｅｒＣＰ单抗做细胞表面抗原染色 ,抗ＩＬ 4 ＦＩＴＣ及ＩＦＮ γ ＰＥ单抗做淋巴细胞胞浆内细胞…     

HDACi诱导B细胞淋巴瘤表达CD47分子机制研究

研究探讨B细胞淋巴瘤中组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitor, HDACi)调控CD47表达及相关分子机制。课题组对小鼠B淋巴瘤细胞系A20进行不同剂量和不同时间长度的广谱HDACi (Vorinostat,SAHA)处理后,流式细胞术检测细胞表面CD47分子表达水平。随后用TRIzol法提取经SAHA处理的小鼠和人源B淋巴瘤细胞系样本中总mRNA,检测CD47转录水平。为进一步研究HDACi调控CD47表达的分子机制,课题组采用染色质免疫共沉淀法检测H3K4ac、H3K9ac和H3K27ac与CD47 DNA启动子区域的结合情况。最后在SAHA和BRD4特异性抑制剂JQ1的联合处理下,通过流式细胞术检测淋巴瘤细胞中CD47表达水平变化。研究发现CD47的蛋白质水平及mRNA水平均与SAHA处理时间和作用剂量呈正相关性。而在CD47启动子区域,H3K4、H3K9和H3K27的乙酰化水平在SAHA处理后都有显著提高。此外,SAHA和JQ1的联合使用能够显著抑制SAHA单独作用时对CD47的上调。以上结果说明SAHA通过增强CD47启动子区域所结合组蛋白的乙酰化水平,促进基因的转录表达,上调了CD47的mRNA和蛋白质水平,而抑制BRD4可以逆转SAHA对CD47的上调作用。     

阻断糖皮质激素受体的雏鸡抵抗地塞米松诱导的免疫抑制作用

给予雏鸡地塞米松（Dex）10mg～75mg／kg后24h，诱导脾淋巴细胞产生IL－2和IFN诱生的活性，T、B细胞对Con-A的反应性，以及免疫器官（脾脏、胸腺及法氏囊）重量与体重比值均降低（p＜0．01）。用50mg／kg的RU486阻断GR后，对Dex诱导的免疫抑制无明显地逆转作用，表现为阻断GR后，给予（10～75）mg／kg的Dex24h，上述免疫参数仍明显低于正常雏鸡（P＜0．01），与只给予Dex的雏鸡相比较，无明显差异（P＞0．05）。用25mg／kg的RU486阻断GR，对Dex诱导的免疫抑制作用具有明显地逆转作用，阻断GR后再给予（10～75）mg／kg的Dex后24h，上述免疫参数明显高于只给予Dex的雏鸡（P＜0．01）。若给予10mg／kg或25mg／kg的Dex时，上述免疫参数接近正常水平，表明Dex对雏鸡的免疫抑制作用主要由GR所介导，给予适当量的RU486阻断GR的功能，有利于雏鸡抵抗糖皮质激素诱导的免疫抑制作用。     

PMA对THP-1细胞和RA患者单核细胞及培养上清中CD147表达的影响

目的：研究豆蔻佛波醇乙酯（PMA）刺激前后,体外培养的人单核细胞系THP-1细胞和类风湿关节炎（RA）患者外周血单核细胞（human peripheral blood monocytes,HPBM）上及培养上清中CD147的表达.方法：以贴壁法分离RA患者HPBM.用PMA刺激体外培养的RA患者HPBM和THP-1细胞,采用流式细胞术动态检测THP-1细胞、RA患者HPBM膜表面CD147的表达.用双抗体夹心ELISA法检测培养上清中CD147分子的含量.结果：PMA刺激前,THP-1细胞膜及RA患者HPBM表面CD147分子的表达均较高,培养上清中均可检测到CD147分子.PMA刺激后,THP-1细胞培养上清中CD147的含量升高,THP-1细胞上CD147的表达先升高后降低,最后进入稳定期;RA患者的HPBM上CD147的表达下降,培养上清中CD147的含量升高,于刺激后2 d进入稳定期.结论：THP-1细胞、RA患者HPBM膜表面CD147分子可从细胞上脱落或由细胞直接分泌到培养液中.PMA可上调可溶性CD147的表达.     

TLSF_（JM）对PMA诱导Jurkat细胞IL－2Rα链基因表达的抑制作用

本文应用原位杂交和双ＭｃＡｂ夹心ＥＬＩＳＡ方法，探讨了来自ＪＭＴ细胞白血病细胞系产生的抑制因子（ＴＬＳＦ_（ＪＭ））对ＰＭＡ诱导的Ｊｕｒｋａｔ细胞ＩＬ－２Ｒα链基因表达的影响。结果表明：ＴＬＳＦ_（ＪＭ）可明显抑制ＰＭＡ诱导的Ｊｕｒｋａｔ细胞ＩＬ－２Ｒα链ｍＲＮＡ转录，并降低膜表面ＩＬ－２Ｒα链的表达和细胞培养上清中可溶性ＩＬ－２Ｒ（ｓＩＬ－２Ｒ）水平。     

抗CD4抗体对SEB诱导的PBMC增殖反应的抑制作用机理

目的：探讨抗CD4抗体在SEB诱导的外周血单个核细胞（PBMC）增殖择应中的作用机理。方法：采用MTT法,以SEB为刺激原,观测在不同条件诱导的BMC增殖反应中抗CD4抗体的作用。采用形态学、生物化学、流式细胞仪等方法,检测抗CD4抗体诱导的CD4^ T细胞凋亡。结果：抗CD4人-鼠嵌合抗体和鼠源性单抗对由SEB诱导的PBMC增殖均有抑制作用。嵌合抗体能特异性诱导CD4^ T细胞发生凋亡。结论：抗CD4抗体的增殖抑制作用能直接作用于TCR诱导的早期活化信号,嵌合抗体的抑制作用强度与单核细胞的存在密切相关,抗CD4嵌合抗体的进一步广泛交联是诱导凋亡的关键。     

羟基积雪草苷对LPS诱导小胶质细胞增殖的抑制作用及机制研究

目的:研究羟基积雪草苷对LPS刺激的小胶质细胞增殖的抑制作用及机制。方法:取SD大鼠的新生小鼠,进行小胶质细胞的原代培养,分离纯化小胶质细胞;MTT法筛选LPS刺激小胶质细胞增殖的最佳浓度,观察不同浓度羟基积雪草苷对LPS刺激小胶质细胞后的作用。ELISA检测细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)的含量,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡,Western blotting法检测Toll样受体4(TLR4)蛋白的表达,RT-PCR检测NF-κB mRNA的表达。结果:LPS可以明显诱导体外培养小胶质细胞的增殖和炎症因子释放。与LPS组比较,羟基积雪草苷对LPS诱导的小胶质细胞增殖具有显著抑制作用,且具有剂量依赖性,羟基积雪草苷处理小胶质细胞48 h的IC50为10.97 nmol/L。同时羟基积雪草苷使小胶质细胞TNF-α和IL-6的释放显著降低(P0.05);羟基积雪草苷使小胶质细胞的G2期细胞与细胞凋亡率增加,并降低小胶质细胞TLR4和NF-κB的表达。结论:羟基积雪草苷对LPS刺激的小胶质细胞的增殖和炎症因子的生成具有抑制作用,其作用机制可能与抑制TLR-4和NF-κB表达、改变细胞周期并诱导细胞凋亡有关。     

普通小麦对OVA诱导小鼠过敏反应的抑制作用及机制北大核心CSCD

目的 旨在探讨普通小麦（TA）对卵清蛋白（OVA）致敏小鼠过敏反应的作用及其机制.方法 将25只BALB/c雌鼠随机分为对照组、OVA组、TA 100 mg/kg组、TA 200 mg/kg组和地塞米松（dexamethasone,DEX）组,每组5只.将OVA 20μg与氢氧化铝1 mg溶解于100μl PBS溶液中,并向每只实验组小鼠腹腔内注射以致敏小鼠,而对照组小鼠腹腔内则注射100μl 0.9％生理盐水,饮用水饲养.首次致敏后2周,重复上述操作,并将不同浓度药物稀释于1％CMC溶液中继续饲养,饲养过程中记录每只小鼠的过敏症状与行为评分.首次致敏后12 d对照组、实验组小鼠外耳皮下分别注射20μl 0.9％生理盐水与OVA溶液,6 h、24 h测量每只小鼠外耳厚度,24 h后剪取各组小鼠外耳组织经苏木精-伊红（HE）染色后观察过敏症状.首次致敏后6周,颈椎脱臼法处死小鼠,经腹主动脉采集的血液经离心、取上清后,通过ELISA试剂盒检测IgE、IgG1、TNF-α、IL-4及抗OVA IgE、IgG1了解各炎性细胞因子的分泌情况;取出的脾脏组织提取其淋巴细胞后接种于培养皿,以不同的药物刺激后利用ELISA检测Th1细胞因子（IFN-γ、IL-12）及Th2细胞因子（IL-4、IL-5、IL-13）,利用RT-PCR检测脾淋巴细胞中IFN-γ、IL-4、IL-5、IL-12及IL-13的表达情况.结果 OVA组小鼠的过敏症状行为评分与外耳厚度均显著高于对照组及其他实验组,差异有统计学意义（P〈0.05）,实验组中其与TA呈剂量依赖性降低,组织病理学结果也证实了上述结果.ELISA结果显示,实验组小鼠血浆中IgE、IgG1、IL-4及TNF-α水平与对照组比较显著升高,其水平与TA呈剂量依赖性降低,尤其是IgE、TNF-α在TA高浓度组显示出与DEX组相似的抑制效果.RT-PCR结果显示,实验组较对照组Th1细胞因子（IFN-γ、IL-12）的含量显著增加,差异有统计学意义（P〈0.05）,其水平与TA未显示出剂量依赖性效应,而DEX组显示出明显的抑制作用.实验组Th2细胞因子（IL-4、IL-5及IL-13）的表达显著高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）,TA组的IL-4、IL-5、IL-13表达均较OVA组有不同程度的降低,尤其在TA 100μg/ml组中其表达较OVA组分别降低了约60％、18％与20％,显示出了明显的抑制作用.结论 TA可能通过选择性抑制Th2细胞因子（IL-4、IL-5、IL-13）及IgE、IgG,而未抑制Th1细胞因子（IFN-γ、IL-12）,在保持体内免疫平衡的基础上有效降低过敏相关免疫应答,从而发挥抗过敏作用.本研究为新型抗过敏治疗药物（TA）的开发提供理论基础和实验依据.     

交感神经及其递质去甲肾上腺素对小鼠子宫巨噬细胞CD14和CD204表达的抑制作用

目的:研究交感神经在小鼠子宫局部免疫中的作用。方法:昆明种雌性小鼠,实验组连续5d腹膜腔注射6-羟多巴胺(6-OHDA)进行交感神经阻断实验,分别于注射后第1、3、5、7、9、14天取子宫;所有小鼠腹膜腔注射6-OHDA阻断交感神经,之后实验组每天腹膜腔注射5、10、25μg去甲肾上腺素(NE)进行NE处理实验,在注射的第5天取子宫。免疫组织化学检测子宫巨噬细胞膜受体CD14和CD204的表达。结果:与对照组相比,交感神经阻断后子宫内膜、肌层和外膜CD14~+巨噬细胞均显著增多,CD14表达显著上调;对照组和实验组第1天未检测到CD204的表达,其余各组均有CD204的表达,且表达量随着时间推移而增多,第9天达到高峰。各实验组注射NE后,子宫CD14~+、CD204~+巨噬细胞显著减少,CD14、CD204表达显著下调,中、高浓度组下调较明显。结论:交感神经及其递质NE可以通过调节巨噬细胞数量和膜受体CD14、CD204的表达参与子宫局部免疫状态的维持。     

糖皮质激素对体外中央记忆性CD8~+ T淋巴细胞的诱导分化作用

目的:以糖皮质激素对人CD8~+ T淋巴细胞的诱导作用为线索,探究其对体外CD8~+ 中央记忆性T淋巴细胞(central memory T cells,T_(CM))的诱导分化作用,以期为CD8~+ T_(CM)过继性免疫疗法提供新的扩增方案。方法:通过密度梯度离心法分离健康人外周血单个核细胞,经磁珠和流式细胞术分选出初始CD8~+ T细胞,将细胞使用细胞因子激活之后分为对照组和实验组,在实验组中加入不同浓度的2种糖皮质激素(醋酸可的松和氢化可的松),进行体外培养,最后通过流式细胞术检测2组细胞中CD8~+ T_(CM)的诱导分化情况,并通过CFSE染色判断细胞增殖情况,通过早期凋亡试剂Annexin V染色判断药物本身对CD8~+ T细胞的毒性作用。结果:浓度梯度实验发现,1μmol/L醋酸可的松对CD8~+ T_(CM)表现出良好的诱导效果,氢化可的松在0.5μmol/L的诱导效果较好。分别在体外培养的第3天和第6天,CFSE染色法检测细胞的增殖情况,经统计学分析发现实验组和对照组之间的差异无统计学显著性,表明糖皮质激素不影响细胞的自然增殖。Annexin V染色法表明,这2种药物无显著的促进凋亡作用,对淋巴细胞毒性小。结论:糖皮质激素在体外对人CD8~+ T_(CM)具有良好的诱导作用。这为改善过继免疫治疗中T_(CM)的体外扩增提供新的参考方法,并且在理论上加深对糖皮质激素生物学功能的理解。     

槲皮素对毒胡萝卜素诱导的巨噬细胞内质网应激凋亡途径的抑制作用及机制

目的: 研究槲皮素(quercetin, Que)对毒胡萝卜素(thapsigargin, TG)诱导的巨噬细胞RAW264.7内质网应激凋亡途径的抑制作用及机制。方法: 1 μmol/L TG作用RAW264.7细胞24 h诱导内质网应激,不同浓度Que(80、120或160 μmol/L)与TG共同作用后,MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测凋亡率及[Ca²⁺]_i,激光共聚焦显微镜观察细胞形态变化,Western blotting法检测糖调节蛋白78 (glucose-regulated protein 78,GRP78)及C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein, CHOP)的表达;Western blotting法检测Que(160 μmol/L)和(或)磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K)抑制剂LY294002(15 nmol/L)与TG共同作用时GRP78和CHOP的表达。结果: Que能够抑制TG诱导的RAW264.7细胞内质网应激损伤,与TG组相比,细胞存活率升高(P<0.05),凋亡率降低(P<0.05),[Ca²⁺]_i降低(P<0.05),GRP78及CHOP表达减少(P<0.05);LY294002单独作用可抑制TG诱导的GRP78及CHOP表达上调(P<0.05),但与Que联合应用与二者单独使用时抑制作用无显著差异。结论: Que可以抑制TG诱导的RAW264.7细胞内质网应激凋亡途径,该作用可能与其抑制PI3K信号通路从而降低CHOP蛋白的表达有关。