硒对体外培养大骨节病软骨细胞生长及凋亡的影响

目的 观察硒对体外培养大骨节病(KBD)患者和正常人关节软骨细胞增殖和凋亡的影响,探索补硒防治KBD的作用,并为硒对正常软骨细胞生长的影响提供依据.方法 依据<大骨节病临床诊断标准>(GB 16003-1995),选择Ⅱ度和Ⅲ度KBD患者5例和非病区正常人意外事故者5例的关节软骨进行体外分离、培养.KBD组和对照组分别给予不同剂量的硒(0、0.0125、0.0250、0.0500、0.1000、0.2500、0.5000、1.0000 mg/L)进行干预,采用四氮唑蓝(MTT)法、流式细胞仪和免疫组化法观察细胞生长和凋亡情况.结果 对照组第6天时各剂量组的细胞增殖率(0.086±0.025、0.077±0.012、0.073±0.027、0.071±0.017、0.058±0.028、0.052±0.028和0.046±0.037)比0 mg/L组(0.138±0.026)明显降低(P均＜0.05);0.1000～1.0000 mg/L剂量组的平均细胞增殖率为负值(-0.001±0.001、-0.003±0.000、-0.003±0.001和-0.004±0.001),显著低于0 mg/L组(0.025±0.003,P均＜0.05);KBD组,与0 mg/L组(0.115±0.011)比较,0.2500 mg/L剂量组促进细胞增殖(0.128±0.037,P＜0.05),1.0000 mg/L剂量组细胞生长受到抑制(0.071±0.019,P＜0.05).对照组0.0500～1.0000mg/L剂量组的细胞凋亡率[(18.88±0.02)%、(17.58±0.01)%、(17.09±0.04)%、(56.00±0.02)%、(57.85±0.03)%]比0 mg/L组[(13.51±0.01)%]增高(P均＜0.05);KBD组,与0 mg/L组[(25.84±0.02)%]比较,0.0250～0.2500 mg/L剂量组的细胞凋亡率[(13.69±0.02)%、(15.96±0.03)%、(16.68±0.03)%、(16.67±0.02)%]降低,0.5000、1.0000 mg/L剂量组的细胞凋亡率[(59.58±0.03)%、(73.48±0.04)%]明显增高(P均＜0.05).KBD组0.0500～0.2500 mg/L剂量组的Fas表达[(41.2±1.5)%、(40.3±2.0)%、(50.2±2.5)%]低于同剂量硒干预的对照组[(52.4±1.0)%、(67.2±4.0)%、(75.1±5.0)%,P均＜0.05],0.0500、0.1000 mg/L剂量组的Caspase-3表达[(40.8±1.1)%、(45.1±2.1)%]低于同剂量硒干预的对照组[(68.0±3.0)%、(70.6±3.5)%,P均＜0.05].结论 适宜的补硒剂量(0.1000～0.2500 mg/L)具有促进KBD软骨细胞生长的作用,降低细胞凋亡率,但补硒剂量＞0.5000 mg/L时具有损伤作用;促进KBD软骨细胞生长的硒剂量并非也能促进正常人活体软骨细胞的生长.     

氟对体外培养乳鼠软骨细胞增殖的影响

目的 探讨氟对体外培养乳鼠软骨细胞增殖的影响.方法 采用细胞培养的方法,原代培养昆明乳鼠软骨细胞,传第3代后按染氟剂量不同分为O(对照)、5、10、20、40 ms/L组,10 d后光、电镜观察软骨细胞形态学变化;采用生长曲线、噻唑蓝(MTT)方法,在染氟24、48、72 h测定细胞数量变化及细胞增殖率.结果 染氟10 d后,镜下0、5、10mg/L组软骨细胞表现为增殖,细胞生长旺盛,均可见部分细胞核中核仁数增加:40mg/L组部分软骨细胞中有染色质固缩或凝结成块状,可见到凋亡细胞.在染氟24 h,细胞增殖活力各染氟组组间比较差异无统计学意义(F=2.313,P＞0.05).在染氟48、72 h,0 mg/L组[(23.5±4.6)%、(29.9±1.7)%]、5mg/L组[(34.6±4.7)%、(45.3±5.9)%]、10mg/L组[(39.9±4.8)%、(56.8±5.5)%]、20mg/L组[(31.8±4.1)%、(38.3±6.5)%]、40 mg/L组[(28.3±4.3)%、(33.4±4.8)%]组问比较差异有统计学意义(F值分别为11.401、25.671,P＜0.05);各染氟组细胞增殖活力与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05),其中5、10ms/L组明显高于40mg/L组(P＜0.05).结论 低剂量氟在较短作用时间内可以促进体外培养小鼠软骨细胞的增殖,剂量升高时表现为抑制.     

低氧诱导因子-1α对老年骨关节炎软骨细胞活性的影响

目的探讨低氧诱导因子(HIF)-1α与老年骨关节炎(OA)软骨细胞增殖和凋亡的关系。方法选择老年OA患者84例,另选健康人群80例作为对照。免疫组织化学方法检测HIF-1α、bcl-2蛋白和增殖细胞核抗原(PCNA)在OA和正常软骨细胞中的表达,分析其对OA软骨细胞增殖和凋亡的影响。结果 OA组HIF-1α阳性表达率为83.9%,明显高于正常对照组(χ2=30.312,P=0.000)。正常软骨细胞中bcl-2蛋白表达量明显高于OA软骨细胞。TUNEL法检测细胞凋亡结果显示,OA软骨组中细胞凋亡碎片明显多于正常软骨细胞,正常组软骨细胞凋亡指数为7.16±9.01,而OA组软骨细胞凋亡指数为39.7±7.23,两者差异显著(P0.05)。PCNA计数,OA组中软骨细胞增殖活性明显低于正常组。结论 HIF-1α表达与OA软骨细胞活性密切相关,可能通过调控bcl-2蛋白及PCNA影响软骨细胞的增殖与凋亡。     

艾塞那肽对棕榈酸诱导成骨细胞凋亡的影响

目的为探讨胰高血糖素样肽-1 (glucagon-like peptide-1,GLP-1)受体激动剂对骨保护作用的机制,应用GLP-1受体激动剂(艾塞那肽)干预高脂导致的小鼠成骨细胞凋亡实验,观察艾塞那肽在成骨细胞凋亡过程中的保护作用。方法体外应用含500μmol/L棕榈酸(palmitic acid,PA)完全培养基处理小鼠成骨细胞MC3T3-E1 14模拟体内高脂环境,分组如下:正常对照组(0μmol/L PA)、高脂组(500μmol/L PA)、高脂+艾塞那肽(1、10、100、1 000 nmol/L)浓度梯度组分别孵育成骨细胞24 h。根据实验结果选择艾塞那肽最佳浓度100 nmol/L进行后续实验,分正常对照组、艾塞那肽组、高脂+艾塞那肽组、高脂组,观察艾塞那肽对成骨细胞增殖和凋亡的影响。Cell Counting Kit-8试剂盒检测细胞增殖活性; Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡率; RT-qPCR技术检测各组细胞内质网应激相关基因GRP78、CHOP、Caspase-12mRNA的表达。结果与正常对照组相比,高脂组细胞活性明显下降(OD值:2. 612±0. 106 vs. 2. 394±0. 088,P0. 01);与高脂组相比,高脂+艾塞那肽1 000 nmol/L组、高脂+艾塞那肽100 nmol/L组、高脂+艾塞那肽10 nmol/L组细胞增殖活性明显升高(OD值:2. 394±0. 088、2. 547±0. 068、2. 579±0. 060、2. 496±0. 114,P0. 05),高脂+艾塞那肽1 nmol/L组对细胞的增殖活力无明显影响(P 0. 05)。选择艾塞那肽100 nmol/L为最佳浓度重复干预后发现,与高脂组相比,高脂+艾塞那肽100 nmol/L组的细胞增殖活力明显升高(OD值:2. 161±0. 203,2. 399±0. 193,P0. 01);细胞凋亡率明显下降(19. 633%±3. 169%,5. 400%±2. 304%,P0. 01); GRP78、CHOP mRNA的表达量明显下降(P 0. 01),Caspase-12 mRNA的表达量回升(P0. 05)。结论 GLP-1受体激动剂艾塞那肽可能通过内质网应激途径,改善PA造成的小鼠成骨细胞增殖活性减低以及凋亡的发生。     

西藏大骨节病患者血清透明质酸、一氧化氮和硒水平检测分析

目的测定西藏成人大骨节病患者血清透明质酸(HA)、一氧化氮(NO)和硒(Se)水平的变化,探讨HA、NO和Se在西藏大骨节病发生发展的机理。方法在西藏拉萨大骨节病病区随机选取大骨节病患者30例(大骨节病组)、病区内健康者30例(病区内对照组)、非大骨节病病区健康者30例(病区外对照组),3组人群年龄、性别无显著差异。采取静脉血离心制备血清,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HA、硝酸还原酶法测定NO、荧光法测定血清Se水平。结果①大骨节病组、病区内、外对照组血清HA水平分别为(68．56±8．34)、(90．55±18．25)、(92．18±14．61)μg/L,大骨节病组血清HA水平显著低于病区内、外健康对照组(P<0．05);②3组血清NO水平分别为(102．98±26．15)、(35．73±13．32)、(34．65±12．21)μmol／L,大骨节病组血清NO水平显著高于病区内、外健康对照组(P<0．05);③3组血清Se水平分别为(73．34±22．72)、(68．76±20．56)、(98．73±37．20)μg／L,病区人群血清Se水平显著高于非病区人群(P<0．05);④血清HA水平与血清Se水平呈显著正相关(r=0．196,P<0．05),血清Se水平与NO水平有负相关趋势,但差异无统计学意义(r=～0．085,P>0．05)。结论西藏成人大骨节病的发生发展与血清HA水平降低和NO水平升高有关。     

京尼平苷对老年大鼠软骨细胞凋亡的保护作用及机制

目的探讨京尼平苷对硝普钠诱导大鼠软骨细胞凋亡的保护作用及机制。方法取8周龄的SPF级SD大鼠20只,颈椎脱臼处死后,酶消化法提取膝关节软骨细胞。采用硝普钠终浓度0. 75、1. 00、1. 50、2. 00 mmol/L,分别加入6孔板软骨细胞中,选取合适终浓度诱导软骨细胞凋亡。终浓度分别为20、40、80、160μg/L的京尼平苷加入96孔板软骨细胞,24 h后CCK-8检测京尼平苷抑制软骨细胞增殖的效果。选择硝普钠终浓度为1 mmol/L,京尼平苷终浓度分别为80、160μg/L的6孔板软骨细胞中,Hoechst34580染色观察凋亡软骨细胞核形态,罗丹明(Rho) 123染料检测线粒体膜电位,流式细胞技术检测软骨细胞凋亡; Western印迹法检测凋亡软骨细胞内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、Bax蛋白水平。结果硝普钠适宜浓度为1. 00 mmol/L,且细胞凋亡数与硝普钠浓度呈正相关(P<0. 05)。京尼平苷在20～160μg/L浓度范围内对体外培养二代软骨细胞无增殖抑制效果(P>0. 05)。80、160μg/L的京尼平苷对SNP诱导软骨细胞凋亡有一定保护作用,呈剂量依赖(P<0. 05);京尼平苷可降低凋亡软骨细胞中iNOS、Bax的表达(P<0. 05)。结论京尼平苷对硝普钠诱导大鼠软骨细胞凋亡有一定的保护作用,其机制可能是通过降低软骨细胞iNOS的表达、抑制软骨细胞的凋亡。     

丹皮酚联合5-FU对食管癌EC9706细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨丹皮酚(paeonol,Pae)单独及联合5-Fu对人食管癌EC9706细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用.方法:采用6种浓度的Pae(7.81、15.63、31.25、62.50、125.00、250.00 mg/L)、3种浓度的5-FU(12.50、25.00、50.00 mg/L)及Pae(31.25 mg/L)和5-FU(12.50 mg/L)联合分别处理EC9706细胞24、48、72 h.同时设对照组(细胞不做处理),采用MTT法检测各个时间段细胞的增殖情况:采用流式细胞术检测4种浓度的Pae(31-25、62.50、125.00、250.00 mg/L)处理EC9706细胞72 h后细胞周期的变化:倒置显微镜下观察各Pae组细胞各时间段形态学变化,HE染色光镜下观察凋亡细胞:采用免疫细胞化学法检测经Pae(31.25 mg/L)、5-FU(12.50mg/L)单独和联合作用48 h后细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax的表达.结果:Pae、5-FU可明显抑制EC9706细胞增殖,并随着浓度的增加和作用时间的延长而增强(P<0.05),Pae与5-FU联合用药比单用Pae或5.FU抑制效果更明显(P<0.05);Pae作用后EC9706细胞中G0/G1期和G2/M期细胞比例下降、S期细胞比例上升(Pae 125.00 mg/L组:G0/G1期21.18%±2.28% vs 62.17%±5.23%、G2/M期0.76%±0.54% vs 9.92%±3.10%、S期78.06%±2.82% vs 27.91%±2.13%,均P<0.05):HE染色光镜下可见典型的肿瘤细胞凋亡改变:Pae、5-FU可下调EC9706细胞中Bcl-2蛋白表达,同时增强EC9706细胞中Bax蛋白的表达,联合用药组较单药组作用更为明显(2.21±0.14 vs 5.67±0.30,4.22±0.34;8.55±0.33 vs 3.90±0.27,6.28±0.26,均P<0.05).结论:Pae可明显抑制人食管癌EC9706细胞的增殖.促进其凋亡,Pae联合5-FU作用更为明显.     

茶多酚抑制人甲状腺乳头状癌细胞生长

目的通过体外细胞培养,观察茶多酚对人甲状腺乳头状癌细胞(CGTHW3)的增殖、侵袭能力及凋亡的影响。方法用MTT法检测细胞增殖活性,观察不同浓度茶多酚对CGTHW3细胞增殖活性的影响;并通过培养板划痕法观察茶多酚对CGTHW3细胞侵袭能力的影响;应用流式细胞仪检测各浓度茶多酚诱导CGTHW3细胞凋亡的作用。结果茶多酚(50～400mg/L)抑制CGTHW3细胞增殖,其作用呈浓度、时间依赖关系。茶多酚对CGTHW3细胞的半量抑制浓度(IC50)为第1天240mg/L,第3天229mg/L,第5天200mg/L,第7天118mg/L。在细胞侵袭实验中,茶多酚可使反映细胞侵袭能力的无细胞带增宽。经茶多酚作用48h后,CGTHW3细胞凋亡百分比明显增加,对照组凋亡百分比为3.51%,100mg/L茶多酚组为12.61%,200mg/L茶多酚组为52.97%,400mg/L茶多酚组为70.79%(P<0.01)。结论茶多酚抑制CGTHW3细胞增殖。茶多酚对CGTHW3细胞的侵袭能力有一定的抑制作用。茶多酚可诱导CGTHW3细胞凋亡。     

罗哌卡因对大鼠脂肪干细胞增殖、凋亡及成骨分化的影响观察

目的 观察罗哌卡因对大鼠脂肪干细胞（ADSCs）增殖、凋亡及成骨分化的影响。方法 分离并提取大鼠ADSCs,传代培养后,取对数生长期ADSCs分别加入含0 mg/mL、200 mg/mL、500 mg/mL罗哌卡因的培养基100μL,分别记为对照组、200 mg/mL组、500 mg/mL组。取各组细胞,继续培养24、48、72 h时,采用CCK-8实验观察细胞增殖能力。取各组细胞,继续培养24 h,使用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。取各组细胞,加入成骨诱导培养基,观察各组细胞成骨分化能力,包括成骨潜能（以ALP活性表示）、矿化能力（以OD值表示）和成骨相关蛋白骨钙素（OCN）表达水平。结果 与对照组相比,200 mg/mL组、500 mg/mL组细胞培养24、48、72 h时的增殖能力均显著下降,且500 mg/mL组低于200 mg/mL组。对照组、200 mg/mL组、500 mg/mL组细胞凋亡率分别为2.78%±0.23%、4.15%±0.62%、5.88%±0.78%,组间相比,P均<0.05。与对照组相比,200 mg/mL组、500 mg/mL组细胞ALP活性、矿化...     

Fas/FasL途径在氟致人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡中的作用

目的 探讨Fas/FasL途径在氟致人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡中的作用.方法 用不同剂量氟化钠[NaF,0(对照)、20、40、80 mg/L].SH-SY5Y细胞进行染毒,24 h后检测细胞存活率、凋亡率和Fas、FasL mRNA表达;选择40 mg/L NaF组,观察在Fas受体激动剂(CH11)或拮抗剂(ZB4)作用下细胞凋亡率及Fas、FasL mRNA表达水平的改变.结果 40、80 mg/L组细胞存活率[(84.63±2.57)%、(69.04±5.63)%]明显低于对照组(100.00%),组间比较差异有统计学意义(P<0.01);细胞凋亡率随染毒剂量的升高呈上升趋势.40、80 mg/L组细胞凋亡率[(8.54±1.95)%、(17.94±2.71)%]明显高于对照组[(3.32±1.33)%],组间比较差异有统计学意义(Jp<0.05);NaF能不同程度地上调Fas、FasL mRNA表达,使Fas/β-actin[40mg/L组(0.94±0.51)、80 mg/L组(0.99±0.12)]和FasL/β-actin[40 mg/L组(0.96±0.42)、80 mg/L组(0.99±0.24)]比值增加.与对照组[Fas/β-actin(0.50±0.33)、FasL/β-actin(0.58±0.23)]比较,差异均有统计学意义(P<0.05).在对细胞凋亡率和Fas、FasL mRNA表达水平的影响中,NaF与CH11之间存在协同作用(,值分别为32.89、18.46、14.69,P<0.01),NaF与ZB4之间存在拈抗作用(F值分别为5.73、24.26、10.17,P<0.05或<0.01).结论 NaF可诱导SH-SY5Y细胞凋亡,Fas/FasL途径在NaF诱导SH-SY5Y细胞凋亡中起重要作用.     

氟对软骨细胞凋亡因子bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的 观察氟对体外培养软骨细胞中凋亡相关因子bcl-2和Bax蛋白表达的影响,探讨氟在致软骨细胞凋亡中的作用机制.方法 采用软骨细胞体外培养方法,原代培养乳鼠关节软骨细胞,传第3代后按染氟剂量不同分为0(对照)、5、20、40mg/L组,培养10 d后,透射电镜下观察软骨细胞的超微结构改变,采用Western印迹法检测软骨细胞bcl-2和Bax蛋白表达.结果 透射电镜下,对照组和5 mg/L组软骨细胞呈球形,粗面内质网发达,线粒体膜性结构完整;20、40 mg/L组软骨细胞内可见脂滴增多,胞质内出现大量空泡类物质,细胞内膜结构不清,部分细胞出现核固缩.20、40 mg/L组软骨细胞bcl-2蛋白表达(0.626±0.042、0.531±0.039)较对照组(0.876±0.035)明显降低(P均＜0.01);而Bax蛋白表达(0.966±0.047、1.289±0.156)较对照组(0.642±0.050)明显增加(P均＜0.01).5 mg/L组软骨细胞bcl-2、Bax蛋白表达(0.885±0.065、0.657±0.045)与对照组比较,差异无统计学意义(P均＞0.05).此外,40 mg/L组与20 mg/L组比较,bcl-2、Bax蛋白表达差异有统计学意义(P均＜0.01).结论 染氟20、40 mg/L可对软骨细胞超微结构造成损伤,其通过减少抑凋亡因子bcl-2的表达和增加促凋亡因子Bax的表达,从而产生促进软骨细胞凋亡的作用.

Abstract：

Objective To study the effect of fluoride on the expression of bcl-2 and Bax in chondrocyte in vitro, and investigate the mechanism of action of chondrocyte apoptosis induced by fluoride. Methods Articular chondrocytes of neonate rat were cultured in vitro and treated with 0(control),5,20,40 mg/L of fluoride,respectively, for 10 days. Then observed the u]trastructure of chondrocytes under eletronicmicroscope, and tested the expression of bcl-2 and Bax in chondrocyte in different groups by Western blotting. Results Abundant rough endoplasmic reticulums (RERs) and complete structure of mitochondria membranes were presented in globular chondrocytes in the control group and 5 mg/L group; but more lipid droplets and vacuoles were seen in the cytoplasm, and the structure of intracellular membranes became incomplete, and some shrieked chromatin and pyknosis were seen in the chondrocytes of the 20,40 mg/L groups. The expression of bcl-2 markedly decreased in 20 mg/L group(0.626 ± 0.042) and 40 mg/L group(0.531± 0.039) compared to the control group(0.876 ± 0.035,all P ＜ 0.01 ). And the expression of Bax significantly increased in 20 mg/L group(0.966 ± 0.047) and 40 mg/Lgroup ( 1 .289 ± 0.156) compared to the control group(0.642 ± 0.050, all P ＜ 0.01). But there was no statistical significant difference of the expression of bcl-2 or Bax between 5 mg/L group(0.885 ± 0.065,0.657 ± 0.045) and control group (all P ＞ 0.05 ). However there were statistical differences of expressions of bcl-2 and Bax between 20 and 40 mg/L groups(all P ＜ 0.01 ). Conclusions Twenty and 40 mg/L fluoride can cause damage to the ultrastructure of chondrocyte, and fluoride possibly promotes chondrocyte apoptosis by reducing the expression of antiapoptotic factor bcl-2 and increasing the expression of Bax.     

Anti-Fas-induced apoptosis in chondrocytes reduced by hyaluronan: evidence for CD44 and CD54 (intercellular adhesion molecule 1) invovement

OBJECTIVE: To investigate the in vitro effect of therapeutic hyaluronan (HA) of 500-730 kd on anti-Fas-induced apoptosis of chondrocytes from osteoarthritis (OA) patients, and to assess its mechanism of action by analyzing the role of the 2 HA receptors, CD44 and CD54 (intercellular adhesion molecule 1 [ICAM-1]). METHODS: Chondrocytes isolated from human OA knee cartilage were cultured and the effect of HA on both spontaneous and anti-Fas-induced apoptosis was evaluated. Apoptosis was analyzed by JAM test (for quantitative analysis of fragmented DNA), cell death detection immunoassay (for quantitative analysis of oligonucleosome), TUNEL assay, and electron microscopy. Blocking experiments with anti-CD44 and anti-CD54 alone or in combination were performed to investigate the HA mechanism of action. RESULTS: Both quantitative tests demonstrated that anti-Fas significantly induced apoptosis of isolated OA chondrocytes. HA at 1,000 microg/ml significantly reduced the anti-Fas-induced apoptosis of chondrocytes but did not affect spontaneous chondrocyte apoptosis. These data were also confirmed by TUNEL staining and by electron microscopy morphologic evaluation. The antiapoptotic effects of HA on anti-FAS-induced chondrocyte apoptosis were significantly decreased by both anti-CD44 (mean +/- SD 57 +/- 12% inhibition) and anti-ICAM-1 (31 +/- 22% inhibition). The mixture of the 2 antibodies had an additive effect, since the rate of inhibition increased to 87 +/- 13%. CONCLUSION: These data demonstrate that 500-730-kd HA exerts an antiapoptotic effect on anti-FAS-induced chondrocyte apoptosis by binding its specific receptors (CD44 and ICAM-1). Furthermore, this HA fraction may be able to slow down chondrocyte apoptosis in OA by regulating the processes of cartilage matrix degradation.     

氟对体外培养软骨细胞超微结构的影响

目的观察氟化物对体外培养乳鼠软骨细胞超微结构的影响。方法采用细胞培养的方法,原代培养昆明乳鼠软骨细胞,传第3代后按染氟剂量不同分为0（对照）、5、10、20、40mg／L组,染氟培养10d后,制备乳鼠软骨细胞超薄切片,透射电镜下观察软骨细胞的超微结构改变。结果电镜下5、10mg／L组软骨细胞增殖,双核细胞数量增多,细胞器发达,可见囊池扩张;20、40mg／L组细胞表面微绒毛减少,部分细胞染色质固缩,并凝结成块状,聚集在核膜周边,核基质密度下降,核膜迂回曲折,胞浆内线粒体空泡化,有些细胞胞浆内可见大量的囊泡,泡内含有电子致密物质;在40mg／L组中可见到凋亡细胞。结论高氟可以引起乳鼠软骨细胞超微结构的损伤。     

硒对氟中毒鸡淋巴细胞亚群及脾淋巴细胞凋亡的影响

目的 观察硒对慢性氟中毒鸡血液、脾脏CD4~+,CD8~+淋巴细胞亚群以及脾淋巴细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法 将8日龄海蓝褐雏鸡180只按体质量随机分为3组:对照组、氟中毒组、硒拮抗组,每组60只,分别饲以含氟195、1000、1000 ms/kg、含硒0.08、0.08、4.00 mg/kg的全价日粮.于30、60、90 d用流式细胞术检测外周血和脾脏中CD4~+、CD8~+淋巴细胞水平,TUNEL法检测脾淋巴细胞凋亡情况.结果 与对照组比较,30、60、90 d氟中毒组外周血CD4~+淋巴细胞水平降低[(35.36±4.27)%vs(24.29±2.96)%、(47.65±5.42)%vs(41.62±3.96)%、(49.58±3.98)%vs(42.35±6.03)%,P<0.05或<0.01],CD4~+/CD8~+比值也明显降低[(1.701±0.145)%vs(1.393±0.163)%、(2.712±0.345)%vs(1.781±0.201)%、(2.438±0.356)%vs(1.973 ±0.229)%,P<0.05或<0.01];与氟中毒组比较.30、60、90 d硒拮抗组外周血中CD4~+淋巴细胞水平升高[(29.40±3.38)%、(45.40 ±6.01)%、(46.85 ±5.25)%,P<0.05或<0.01],60、90 d时CD4~+/CD8~+比值明显回升[(2.004±0.314)%、(2.211±0.229)%,P均<0.01].与对照组比较,30、60、90 d氟中毒组脾脏中CD4~+淋巴细胞水平降低[(47.33±5.35)%vs(41.91±4.83)%、(49.28±5.24)%vs(41.26 ±4.56)%、(34.31±4.15)%vs(29.33 ±2.89)%,P均<0.01],CD4~+/CD8~+比值也明显降低[(1.927±0.244)%vs(1.525±0.265)%、(1.847±0.224)%vs(1.640±0.198)%、(1.265±0.174)%vs(0.878 ±0.092)%,P<0.05或<0.01];与氟中毒组比较,60、90 d硒拮抗组脾脏中CD4~+淋巴细胞水平升高[(44.87±5.43)%、(32.62 ±3.37)%,P均<0.05],而30、60、90 d时CD4~+/CD8~+比值明显回升[(1.703 ±0.201)%、(1.772±0.215)%、(0.991±0.124)%,P<0.05或<0.01].30、60、90 d时氟中毒组鸡脾淋巴细胞凋亡指数[(2.31 ±0.36)%、(2.76±0.22)%、(3.04 ±0.29)%]明显高于对照组[(1.14 ±0.21)%、(1.23±0.23)%、(1.29 ±0.20)%],而60、90 d时硒拮抗组[(2.42 ±0.32)%、(2.73±0.39)%]低于氟中毒组,差异均有统计学意义(P<0.05或<0.01).结论 一定程度的硒摄入能减少氟中毒鸡淋巴细胞的凋亡、改善失衡的淋巴细胞亚群来拮抗氟的毒性.     

低硒、低碘及联合对亲代和子代大鼠骨、软骨生长的影响

目的 研究低硒、低碘及其联合对亲代和子代大鼠骨、软骨生长的影响.方法 48只断乳SD健康大鼠,按体质量随机分对照组、低硒组、低碘组和低硒低碘组,每组12只.4组大鼠分别采用人工配制的低硒、低碘、低硒低碘及含硒、碘量正常的饲料喂饲.大鼠饲养8周后(约3月龄)进行组内繁殖;亲代大鼠喂饲至6月龄、子代大鼠喂饲至3月龄时,取亲代和子代大鼠血样,测定血清硒及T3、T4;取大鼠右侧胫骨及左侧膝关节.用游标卡尺测定胫骨长度、中段额状横径、胫骨上端关节软骨横径、纵径;膝关节包埋切片后,光镜下测定胫骨近端生长板厚度、生长板软骨肥大层、增殖层细胞层数.结果 低硒对亲代和子代大鼠血清硒有明显影响(F值分别239.56、232.68,P均<0.05),对于代血清T4水平也有明显影响(F=6.95,P<0.05);低碘对亲代和子代大鼠血清T3、T4均有明显影响(F值分别为14.11、14.05,30.29、34.53,P<0.01),低硒、低碘联合对子代大鼠血清T4水平的影响存在交互作用(F=5.99,P<0.01).亲代和子代大鼠血清硒,低硒组[(30.28±6.34)、(43.95±9.75)μg/L]、低硒低碘组[(30.33±5.18)、(35.40±3.06)μg/L]均明显低于低碘组[(345.83±29.55)、(245.24±9.95)μg/L]、对照组[(358.64±30.50)、(236.50±9.75),P均<0.05].低硒低碘组[(0.55±0.05)、(0.88±0.14)mmol/L]亲代和子代大鼠血清T3均明显低于对照组[(0.75±0.08)、(1.26±0.26)mmol/L,P均<0.05],低碘组[(24.11±2.29)、(42.10±8.92)mmol/L]、低硒低碘组[(20.66±1.93)、(26.55±5.98)mmol/L]亲代和子代大鼠血清T4均明显低于对照组[(36.15±2.74)、(52.79±8.84)mmol/L]和低硒组[(28.12±3.33)、(52.02±11.99)mmol/L,P均<0.05];低硒低碘组子代大鼠血清T4明显低于低碘组(P<0.05).子代大鼠中,低硒,低碘对胫骨长度、生长板厚度、增殖细胞层数、肥大细胞层数影响明显(F值分别为24.31、6.98,40.76、56.15,25.24、82.82,10.07、5.57,P<0.01或<0.05).低硒和低碘对胫骨长度、生长板厚度、增殖细胞层数、肥大细胞层数的影响存在交互作用(F值分别为5.68、24.86、41.82、9.12,P<0.05或<0.01);低硒组[(33.17±0.34)mm]、低硒低碘组胫骨长度[(31.30±0.87)mm]明显低于对照组[(34.12±0.32)turn,P均<0.05];低硒低碘组生长板厚度[(1.60±0.18)mm、增殖细胞层数(8.54±0.81)、肥大细胞层数(4.95±0.37)明显低于低硒组[(3.03±0.10)mm、14.68±0.84、6.60±0.31]、低碘组[(2.90±0.09)mm,13.75±0.33、6.61±0.84]及对照组[(3.19±0.09)mm、14.94±0.36、6.64±0.26,P均<0.05)];低碘组生长板厚度、增殖细胞层数小于对照组(P<0.05).结论 低硒影响子代大鼠胫骨生长,低碘影响子代大鼠软骨细胞增殖,降低生长板厚度,低硒低碘联合显著影响子代大鼠骨、软骨的生长.     

沙利度胺对系统性红斑狼疮患者外周血T淋巴细胞的免疫调节作用

目的 探讨沙利度胺(Thd)对系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血T淋巴细胞的免疫凋节作用.方法 用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测Thd对SLE患者外周血T淋巴细胞增殖的影响,用流式细胞术检测T淋巴细胞早期凋亡及CD3~+CD28~+和CD8~+CD152~+的表达,用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测T淋巴细胞白细胞介素(IL)-6、IL-10、肿瘤坏死因子(TNF)-a mRNA的表达,采用单因素方差分析进行统计学处理.结果 在体外,500 μg/ml Thd组CD3~+CD28~+表达为(48±9)%显著低于对照组(57±9)%(P<0.05)、500μg/ml Thd组T淋巴细胞凋亡率为(36±8)%显著高于对照组(23±5)%(P<0.05);100、300、500μg/ml Thd组A_(570nm)值分别为:0.39±0.05、0.34±0.04、0.30±0.03较对照组(0.51±0.07)均有明显下降(P<0.05);100、500 μg/ml Thd组CD8~+CD152~+表达分别为(5.0±0.6)%、(7.8±0.7)%,明显高于对照组(4.2±0.6)%(P<0.05);500μg/ml Thd能抑制IL-6 mRNA的表达,各剂量组均抑制IL-10、TNF-a mRNA表达.结论 Thd可能通过抑制T淋巴细胞增殖、CD28的表达、IL-6、IL-10、TNF-a mRNA的表达和促进T淋巴细胞凋亡、CD152表达来下调SLE患者的免疫反应.     

Anti‐Fas–induced apoptosis in chondrocytes reduced by hyaluronan: Evidence for CD44 and CD54 (intercellular adhesion molecule 1) involvement

Objective

To investigate the in vitro effect of therapeutic hyaluronan (HA) of 500–730 kd on anti‐Fas–induced apoptosis of chondrocytes from osteoarthritis (OA) patients, and to assess its mechanism of action by analyzing the role of the 2 HA receptors, CD44 and CD54 (intercellular adhesion molecule 1 [ICAM‐1]).

Methods

Chondrocytes isolated from human OA knee cartilage were cultured and the effect of HA on both spontaneous and anti‐Fas–induced apoptosis was evaluated. Apoptosis was analyzed by JAM test (for quantitative analysis of fragmented DNA), cell death detection immunoassay (for quantitative analysis of oligonucleosome), TUNEL assay, and electron microscopy. Blocking experiments with anti‐CD44 and anti‐CD54 alone or in combination were performed to investigate the HA mechanism of action.

Results

Both quantitative tests demonstrated that anti‐Fas significantly induced apoptosis of isolated OA chondrocytes. HA at 1,000 μg/ml significantly reduced the anti‐Fas–induced apoptosis of chondrocytes but did not affect spontaneous chondrocyte apoptosis. These data were also confirmed by TUNEL staining and by electron microscopy morphologic evaluation. The antiapoptotic effects of HA on anti‐FAS–induced chondrocyte apoptosis were significantly decreased by both anti‐CD44 (mean ± SD 57 ± 12% inhibition) and anti–ICAM‐1 (31 ± 22% inhibition). The mixture of the 2 antibodies had an additive effect, since the rate of inhibition increased to 87 ± 13%.

Conclusion

These data demonstrate that 500–730‐kd HA exerts an antiapoptotic effect on anti‐FAS–induced chondrocyte apoptosis by binding its specific receptors (CD44 and ICAM‐1). Furthermore, this HA fraction may be able to slow down chondrocyte apoptosis in OA by regulating the processes of cartilage matrix degradation.

     

罗格列酮抑制糖基化终产物诱导心肌成纤维细胞增殖和结缔组织生长因子及Smad的表达

目的 探讨糖基化终产物(AGE)对培养乳鼠心肌成纤维细胞增殖、结缔组织生长因子(CTGF)和Smad2、Smad4蛋白表达的影响及罗格列酮的干预作用.方法 采用胰酶消化法和差速贴壁分离法获取心肌成纤维细胞,应用MTT法、流式细胞仪法分别观察不同浓度AGE及罗格列酮对心肌成纤维细胞的细胞增殖、细胞周期的影响,ELISA方法 检测细胞培养上清中TGF-β1水平,Westem印迹技术检测CTGF及Smad2、Smad4蛋白质表达.结果 在一定浓度范围内,AGE干预心肌成纤维细胞,随浓度的增加,细胞增殖更加显著,TGF-β1分泌增加,CTGF蛋白表达增加.罗格列酮(0.1、1、10μmoVL)干预后,随浓度的增加,抑制心肌成纤维细胞增殖(分别为0.823±0.072、0.785±0.060、0.601±0.081对0.981±0.049,P<0.05)、抑制心肌成纤维细胞分泌TGF-β1(分别为257.77±9.09、230.29±6.56、200.84±10.26对300,68±8.56,P<0.01)、抑制CTGF蛋白表达的作用都更加显著(分别为0.769±O.108、0.590±0.095、0.534±0.115对1.021±0.113,P<0.01).罗格列酮(1和10μmol/L)干预后可显著减少AGE诱导的Smad2的蛋白表达(分别为0.424±0.059对0.572±0.073,P<0.05;0.396±0.080对0.572±0.073,P<0.01),同时可显著减少AGE诱导的Smad4的蛋白表达(分别为0.580±0.063对0.672±0.059,P<0.05;0.556±0.051对0.672±0.059,P<0.01).结论 AGE刺激心肌成纤维细胞增殖及分泌TGF-β1,同时诱导CTGF、Smad2及Smad4蛋白表达,罗格列酮在一定程度上抑制AGE上述作用,表明罗格列酮抑制心肌成纤维细胞增殖的效应与CTGF/Smad通路密切相关.