主动外排泵系统介导鲍氏不动杆菌多药耐药机制的研究进展

鲍氏不动杆菌广泛分布于水、土壤、医院环境和人体的皮肤黏膜表面,已成为医院获得性感染的主要致病菌,主要引起医院获得性肺炎,尤其是呼吸机相关性肺炎(VAP)、菌血症、尿路感染、继发性脑膜炎等。通过DNA杂交技术,不动杆菌属被分为个基因种,其中个已命名,其中临床     

外排泵adeFGH基因与鲍氏不动杆菌多药耐药的关系研究

目的探讨临床分离鲍氏不动杆菌主动外排基因adeFGH的表达与其多药耐药的关系。方法对2012年1-2月临床分离的60株鲍氏不动杆菌进行回顾性分析,采用BD CRYSTAL细菌鉴定系统进行细菌检测,采用法国生物梅里埃公司ATB药敏系统进行药物敏感试验,PCR检测外排泵基因adeFGH的分布和表达水平。结果痰液及伤口分泌物中分别检出鲍氏不动杆菌51及8株,分别占85.0%、13.3%;科室分布主要为ICU、神经外科、呼吸内科、烧伤科,分别占43.3%、28.3%、10.0%、10.0%;60株鲍氏不动杆菌按药敏结果分为A组全耐药共31株,B组为氨基糖苷类和磺胺甲噁唑/甲氧苄啶敏感、其他抗菌药物耐药共13株,C组为耐阿莫西林和一、二代头孢菌素类抗菌药物、其他抗菌药物敏感,共16株;A组均检出外排泵基因adeFGH,B组均检出外排泵基因adeFGH,C组检出外排泵基因adeG16株、adeH3株,未检出adeF。结论外排泵基因adeFGH与鲍氏不动杆菌对氨基糖苷类和磺胺甲噁唑/甲氧苄啶的耐药无关,外排泵基因adeG与鲍氏不动杆菌对青霉素类和一、二代头孢菌素类抗菌药物耐药有关。     

多药耐药鲍氏不动杆菌adeABC外排系统研究

目的 调查临床多药耐药鲍氏不动杆菌外排泵耐药基因adeA、adeB、adeC和调控基因adeS、adeR分布情况及与抗菌药物耐药的关系.方法 在全国范围21所医院选择同期多药耐药鲍氏不动杆菌101株和敏感菌12株进行研究；测定其对6种抗菌药物的MIC值；PCR筛选外排泵耐药基因adeA、adeB、adeC及其调控基因adeS、adeR,克隆测序明确基因型.结果 101株多药耐药鲍氏不动杆菌对美罗培南、亚胺培南、米诺环素、头孢噻肟、庆大霉素、环丙沙星耐药率分别为52.5％、62.4％、71.3％、80.2％、94.1％、95.0％,其中对以上6种抗菌药物全部耐药的菌株36株；adeA、adeB、adeC、adeS、adeR基因阳性菌株分别为74、76、75、73、77株；以上5种基因均阳性(基因型命名为组Ⅰ)的菌株检出64株,检出率为63.4％,为分布最广且最主要的基因型；根据脉冲场凝胶电泳菌株的同源性分析结果发现,克隆A、B、C、E中以组Ⅰ为主,而D克隆中以组Ⅶ(5种基因均阴性)为主；12株敏感鲍氏不动杆菌外排泵耐药基因adeA、adeB、adeC阳性率也均＞40.0％,但调控基因adeS、adeR阳性率较低.结论 鲍氏不动杆菌临床分离株中,adeABC外排泵基因在耐药菌和敏感菌中阳性率均高,而且地区分布和克隆分布十分广泛,其与多耐药的获得有极大的相关性,其基因的播散可能主要通过菌株的克隆播散得以实现.     

泛耐药鲍氏不动杆菌β-内酰胺酶、膜孔蛋白、外排泵编码基因研究

目的 调查泛耐药鲍氏不动杆菌(PDRAB)β-内酰胺酶、膜孔蛋白、外排泵编码基因携带情况.方法 收集临床样本分离的20株PDRAB,采用PCR法检测33种β内酰胺酶基因,包括A类13种、B类(金属β-内酰胺酶)10种、C类(AmpC酶)两种、D类8种,膜孔蛋白carO编码基因以及外排泵adeB编码基因.结果 β-内酰胺酶编码基因中,A类TEM-1、C类ADC-30检出率均为100.0％;D类OXA-23的阳性率为65.0％;未检出B类基因,20株PDRAB膜孔蛋白carO基因、外排泵adeB基因阳性率均为100.0％.结论 临床分离的PDRAB,可携带多种β-内酰胺类耐药基因,普遍带有膜孔蛋白和外排泵adeB基因.     

多药耐药鲍氏不动杆菌外排泵耐药基因及同源性分析

目的分析临床多药耐药鲍氏不动杆菌外排泵耐药基因adeA、adeB、adeC及其调控基因adeR、adeS分布与抗菌药物耐药的关系,为ICU感染鲍氏不动杆菌的同源性有效应对医院感染。方法 2012年ICU检出鲍氏不动杆菌102株,采用K-B法进行药敏试验,PCR测定所有菌株的药物外排泵基因,并利用脉冲场凝胶电泳进行同源性分析。结果 94株耐药鲍氏不动杆菌对头孢唑林和呋喃妥因耐药率均为100.0%,对亚胺培南和氨苄西林/舒巴坦的耐药率为75.8%和95.0%,对其他抗菌药物耐药率均>85.0%;102株鲍氏不动杆菌中adeA、adeB、adeC、adeR、adeS基因型的阳性株分别为78、79、76、77、74株;5种基因均以阴性为主;敏感株中调控基因adeR、adeS表达率较低分别为37.5%和25.0%。结论 ICU分离的鲍氏不动杆菌中呈现严重的多药耐药,adeABC外排泵耐药基因相对于敏感株在耐药菌株中大量存在,外排泵基因的高表达与鲍氏不动杆菌的多药耐药存在相关性关系,而且其基因的播散主要通过克隆播散得以传播。     

连翘对多药耐药鲍氏不动杆菌主动外排泵影响的研究

目的探讨中药连翘对多药耐药鲍氏不动杆菌(ABA)主动外排泵的影响。方法从临床分离的30株多药耐药鲍氏不动杆菌中筛选出对环丙沙星(CIP)外排表型和外排泵编码基因均阳性的9株菌作为试验菌株,应用琼脂对倍稀释法检测连翘水煎剂0、1.25、2.5、5 mg/ml作用后CIP对上述9株菌的最低抑菌浓度(MIC)的变化。结果连翘对ABA1~9的MIC值分别为20、40、10、20、10、10、20、40、20 mg/ml;5 mg/ml和2.5 mg/ml组与0 mg/ml组比较,差异有统计学意义(P<0.05),1.25 mg/ml组与0 mg/ml组比较,差异无统计学意义。结论连翘水煎剂可抑制鲍氏不动杆菌的主动外排泵,对改善鲍氏不动杆菌对CIP的耐药性具有一定的作用。     

鲍氏不动杆菌泛耐药株的耐药机制研究

目的了解临床分离的鲍氏不动杆菌泛耐药株(PDRABA)β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类、氯霉素、四环素、利福平和磺胺类等7类抗菌药物耐药基因及多种药物外排泵基因和质粒、转座子、整合子遗传标记存在状况。方法采用K-B纸片扩散法测定22种抗菌药物的敏感性,并用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法检测β-内酰胺酶基因、氨基糖苷类耐药基因(包括氨基糖苷类修饰酶基因、16S rRNA甲基化酶基因)、gyrA突变喹诺酮耐药基因、利福平耐药相关基因、四环素耐药相关基因、氯霉素耐药相关基因、磺胺耐药相关基因、多种药物外排泵基因、质粒遗传标记、转座子遗传标记和整合子遗传标记等73种耐药基因及遗传标记。结果该PDRABA除对头孢哌酮/舒巴坦敏感以外,其余21种抗菌药物均为耐药,共检出TEM、OXA-23、ADC、aac(3)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅰb、ant(3″)-Ⅰ、aph(3′)-Ⅰ、tetB、mdf A、qacE△1-sul1、intⅠ1、tnpU、tnp513、ISaba1、gyrA突变等15种耐药基因及遗传标记,其余58种基因均阴性。结论携带多种耐药基因和多种药物外排泵基因mdf A是该菌株泛耐药的成因,同时该PDRABA株携带多种可移动遗传元件,极易造成耐药基因的水平转移,对PDRABA感染者应实行严格的隔离措施,同时携带TEM、OXA-23、ADC、aac(3)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅰb、ant(3″)-Ⅰ、aph(3′)-Ⅰ、tetB、mdf A、qacE△1-sul1、intⅠ1、tnpU、tnp513、ISaba1基因伴喹诺酮作用靶位gyrA基因突变为国内首次报道。     

鲍氏不动杆菌外排泵家族及其抑制剂的研究进展

目的抗菌药物的滥用加重了病原菌对药物的耐药性,也增加了临床治疗病原菌感染的难度。近年来鲍氏不动杆菌引发的病原菌感染病例逐年上升,所以研究鲍氏不动杆菌对抗菌药物的耐药机制是目前研究的热点。本研究对鲍氏不动杆菌外排泵系统的分子结构,蛋白家族,耐药基因所在遗传元件的转移方式以及外排泵抑制剂进行了总结,重点对外排泵超家族和与其对应的抑制剂进行了阐述。通过对外排泵系统介导鲍氏不动杆菌耐药性的作用机制的分析,为治疗鲍氏不动杆菌引起的疾病提供理论依据。     

泛耐药鲍氏不动杆菌代谢谱的研究

目的探究不同来源的泛耐药鲍氏不动杆菌代谢谱的差异。方法用美国BD公司phoenixTMl00全自动细菌鉴定/药敏仪NMIC/ID-4鉴定/药敏板对21株ICU的泛耐药鲍氏不动杆菌痰分离株和38株非ICU泛耐药鲍氏不动杆菌痰分离株及10株非ICU的泛耐药鲍氏不动杆菌非痰分离株进行鉴定,探究3种来源泛耐药鲍氏不动杆菌44种代谢谱的代谢差异。结果 ICU、非ICU痰分离株和非ICU非痰分离株3组泛耐药鲍氏不动杆菌代谢谱阳性检出率中,乙酸分别为66.7%、55.3%、60.0%,D-半乳糖分别为28.6%、26.3%、20.0%,L-苯丙氨酸-AMC分别为47.6%、34.2%、50.0%,Gamma-谷氨酰-NA分别为52.4%、34.2%、40.0%,葡萄糖分别为38.1%、44.7%、40.0%,甲基巴豆酸分别为33.3%、44.7%、50.0%,但差异均无统计学意义。结论不同来源的泛耐药鲍氏不动杆菌代谢谱的差异无统计学意义。     

外排泵adeB基因高表达在鲍氏不动杆菌临床分离株产生泛耐药中的作用

目的探讨外排泵adeB基因高表达在鲍氏不动杆菌临床分离株产生泛耐药中的作用。方法 M-H琼脂稀释法检测临床分离的泛耐药鲍氏不动杆菌(PRABA)对常用抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC)及羰氰氯苯腙(CCCP)处理前后MIC值的变化情况,聚合酶链反应(PCR)和实时荧光RT-PCR检测泛耐药株adeB基因及adeBmRNA量。结果 PRABA对环丙沙星、四环素、头孢噻肟较CCCP处理前其MIC下降两个折点;头孢西丁下降4个折点,1号与5号菌株庆大霉素下降6个折点,为原MIC值的1/64;10株PRABAadeB基因阳性,2株全敏感鲍氏不动杆菌(PSABA)未检测到adeB基因,PRABAadeB基因mRNA的表达量平均为(0.84E+3)拷贝。结论主动外排泵adeB基因高表达与鲍氏不动杆菌产生泛耐药相关。     

鲍曼不动杆菌RND主动外排泵的表达与耐药性的关系

目的检测鲍曼不动杆菌耐药结节分化家族(RND)外排系统的分布,探索其表达与耐药性的关系。方法对南昌大学第一附属医院临床标本分离的59株多重耐药鲍曼不动杆菌进行细菌的鉴定与药敏分析,采用PCR技术检测鲍曼不动杆菌中RND主动外排系统的分布情况,比较不同耐药表型的鲍曼不动杆菌间外排泵基因的表达情况,分析其表达量与耐药的关系,并对RND外排系统的扩增产物进行测序。结果鲍曼不动杆菌对氨苄西林/舒巴坦、亚胺培南、庆大霉素、环丙沙星、左氧氟沙星耐药率高达93.2%、94.9%、88.1%、96.6%、52.5%。59株鲍曼不动杆菌经外排泵及整合子基因PCR扩增检测,adeR、adeS、adeB、adeJ、adeG基因的携带率分别为81.4%、91.5%、93.2%、100.0%、61.0%。不同菌株外排泵基因的表达均不相同,其中庆大霉素、亚胺培南、氨苄西林/舒巴坦耐药组与非耐药组鲍曼不动杆菌adeB、adeJ基因的表达量相比,差异均有统计学意义(均P0.05)。adeABC外排泵的调控基因adeR、adeS的碱基序列未出现基因突变或插入序列。结论 RND外排系统在鲍曼不动杆菌中普遍存在,RND外排系统中adeB、adeJ基因的表达水平升高与细菌对庆大霉素、亚胺培南、氨苄西林/舒巴坦的耐药性有关。     

泛耐药鲍氏不动杆菌获得性耐药基因的指标聚类分析

目的调查一组泛耐药鲍氏不动杆菌获得性耐药相关基因与可移动遗传元件的关系,以了解它们之间是否存在关联。方法收集2010年7-12月某医院住院患者痰标本中分离的泛耐药鲍氏不动杆菌共20株,用gyrA和parC基因的分子鉴定法鉴定菌种,再用聚合酶链反应(PCR)方法分析50种水平转移获得的β-内酰胺类、氨基糖苷类获得性耐药基因和13种接合性质粒、转座子、插入序列、整合子等可移动遗传元件遗传标记检测等。结果 20株泛耐药鲍氏不动杆菌共检出5种获得性β-内酰胺类耐药基因、5种获得性氨基糖苷类耐药基因、2种抗菌制剂外排泵基因、5种可移动遗传元件的遗传标记,连锁检测ISaba1-ADC、ISaba1-OXA-23均呈阳性,而ISaba1-OXA-66均呈阴性;获得性耐药基因TEM-1、ADC、OXA-23、OXA-66、ant(3")-Ⅰ、aph(3')-Ⅰ,adeB、qacE△1与可移动遗传元件intⅠ1、tnpU、tnp513、IS26、ISaba1高度相关。结论泛耐药鲍氏不动杆菌获得性耐药基因与可移动遗传元件一定的关联度,菌株携带的获得性耐药基因可能由可移动遗传元件介导。     

泛耐药鲍氏不动杆菌氨基糖苷类耐药相关基因研究

目的 了解泛耐药鲍氏不动杆菌(PDRAB) 16S rRNA甲基化酶、氨基糖苷类修饰酶基因及其耐药机制.方法 选择2009年1月-2010年3月ICU住院患者痰液标本,分离到20株PDRAB,采用纸片扩散法检测20种抗菌药物的敏感性;PCR法检测15种16S rRNA甲基化酶、氨基糖苷类修饰酶基因.结果 20株PDRAB 16S rRNA甲基化酶基因rmtA、rmtB、rmtC、rmtD和npmA均阴性;氨基糖苷类修饰酶aac(3)-Ⅰ基因阳性15株、aac (6′)-Ib基因阳性18株、ant(3″)-Ⅰ基因阳性19株、aph(3′)-Ⅰ基因阳性13株,armA基因阳性20株.结论 PDRAB对氨基糖苷类药物耐药的主要原因是携带aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ib、ant(3″)-Ⅰ、aph(3′)-Ⅰ和ant(2″)-Ⅰ等5种氨基糖苷类修饰酶基因.     

秀丽隐杆线虫-泛耐药鲍曼不动杆菌感染模型用于外排泵抑制剂逆转环丙沙星耐药的研究

目的建立秀丽隐杆线虫-泛耐药鲍曼不动杆菌感染模型,用于外排泵抑制剂(EPIs)逆转泛耐药鲍曼不动杆菌(XDR-AB)对于环丙沙星耐药的研究。方法建立秀丽隐杆线虫-泛耐药鲍曼不动杆菌感染模型,选用6种EPIs(CCCP、PAβN、NMP、奥美拉唑、利血平和维拉帕米)与氟喹诺酮类药物环丙沙星联合使用,记录秀丽隐杆线虫生存率以评价体内药效,同时进行毒性试验及体外药敏试验。结果不同浓度XDR-AB对秀丽隐杆线虫的致死情况不同,选择5×10~(6 )CFU/mL作为XDR-AB感染秀丽隐杆线虫浓度。秀丽隐杆线虫生存实验显示,XDR-AB感染线虫3 h后线虫组与加入多粘菌素B的对照组生存曲线比较,差异无统计学意义(χ~2=3.154,P0.05),感染线虫6、9 h,与对照组比较,差异均有统计学意义(均P0.001),但感染6 h与9 h组的生存曲线比较,差异无统计学意义(χ~2=0.669,P0.05),最终选择6 h作为感染时长,36 h为合适的抗菌药物治疗时长。环丙沙星联合EPIs应用于感染模型实验中,低浓度的PAβN、NMP、奥美拉唑、利血平可将线虫存活率分别提高30%~40%、15%~20%、20%~30%、20%,高浓度的维拉帕米可将感染线虫的存活率提高30%左右。体外药敏试验和毒性试验结果显示,环丙沙星分别与CCCP、奥美拉唑和维拉帕米联合可降低MIC至原来的1/4,分别联合PAβN,NMP和利血平可降低MIC至原来的1/2,其中CCCP体外联合抑菌效果最佳,但毒性较大不适于体内药效研究。结论首次成功构建了秀丽隐杆线虫-泛耐药鲍曼不动杆菌感染模型,得到6种EPIs逆转环丙沙星耐药性的初步研究。     

多药耐药鲍氏不动杆菌外排泵基因表达的研究

目的探讨鲍氏不动杆菌对常用抗菌药物的耐药性及与外排泵adeA基因表达水平之间的关系。方法琼脂两倍稀释法检测鲍氏不动杆菌对17种常用抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC);PCR法扩增外排泵编码基因adeA;实时荧光定量RT-PCR法检测adeA基因的mRNA表达水平。结果药敏结果显示,耐药率最高的是亚胺培南,其次是头孢哌酮/舒巴坦,耐药率分别为92.9%、78.8%,临床常用的氨苄西林/舒巴坦、头孢吡肟、阿米卡星、氧氟沙星及环丙沙星耐药率均>50.0%;氨曲南、哌拉西林、头孢噻肟、头孢曲松等抗菌药耐药率相对较低;85株鲍氏不动杆菌中有多药耐药株52株,占61.2%;adeA基因的检出阳性率为81.2%,实时定量RT-PCR结果显示,多药耐药菌株adeA基因的mRNA相对表达量均高于敏感菌株,其中3株相对表达量为敏感菌株平均表达水平>20倍。结论临床分离的鲍氏不动杆菌株耐药情况严重,其主动外排系统adeA基因表达增强在多药耐药性形成中起重要作用。     

多重耐药鲍曼不动杆菌耐药性与整合子关系研究

目的了解多重耐药鲍曼不动杆菌整合子的表达及耐药基因的携带情况。方法收集2012年8-10月某院临床分离的51株多重耐药鲍曼不动杆菌,对其进行药敏试验;采用聚合酶链反应（PCR）检测Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类整合酶基因及整合子可变区基因盒,应用限制性片段长度多态性（RFLP）分析和测序结果进行同源性分析。结果多重耐药鲍曼不动杆菌整合酶基因阳性率为78.43%（40/51）,均为 Ⅰ 类整合子,未检出Ⅱ、Ⅲ类整合子。Ⅰ类整合子阳性菌中,39株（97.50%）扩增出可变区,检出5种耐药基因盒组合形式,分别为aacA4（14株）、aacA4+catB8（22株）、arr 3+aacA4 （1株）、dfrA15 （1株）和arr 3（1株）。结论该院临床分离的多重耐药鲍曼不动杆菌的耐药性可能与Ⅰ类整合子表达有关。Ⅰ类整合子主要携带aacA4、aacA4+catB8、arr 3+aacA4、dfrA15和arr 3 基因盒。     

多药耐药鲍氏不动杆菌外排泵adeA基因的检测及分析

目的 了解多药耐药鲍氏不动杆菌(MDRAB)临床分离菌株的耐药性,并检测其外排泵adeA基因的携带状况.方法 收集医院135株MDRAB临床分离菌株,采用纸片扩散法对135株MDRAB进行药物敏感试验,并采用聚合酶链式反应法(PCR)扩增外排泵adeA基因.结果 135株MDRAB对头孢唑林和呋喃妥因耐药率均为100.0％,对亚胺培南、头孢哌酮/舒巴坦的耐药率分别为80.0％、60.7％,对其他抗菌药物的耐药率均较高,仅对阿米卡星较敏感,敏感率为79.3％；135例MDRAB中adeA基因检测共有127株阳性,阳性率为94.0％.结论 MDRAB呈现严重的多药耐药,主动外排泵系统是MDRAB临床分离菌株产生多药耐药性的主要机制之一.     

20株泛耐药鲍氏不动杆菌亲缘性分析

本研究在长江三角洲4家市级医院收集20株泛耐药鲍氏不动杆菌(pandrug-resistant Acinetobacter baumannii，PDR-ABA)，为了解其亲缘性，对这20株菌中的21种β-内酰胺类耐药相关基因、15种氨基糖苷类耐药相关基因以及季胺类耐药相关基因进行分析。