微囊化猪肝细胞移植治疗大鼠急性肝衰竭

目的探讨微囊化猪肝细胞移植(HTx)治疗大鼠急性肝衰竭(ALF)的效果。方法采用原位胶原酶循环肝灌注法分离中国实验用小型猪肝细胞,海藻酸钠-氯化钡法微囊化。应用 D-氨基半乳糖(D-gal)1．2 g／kg体重腹腔内注射制作SD大鼠ALF模型。ALF大鼠随机分为3组。注药24 h后分别将PRMI 1640培养液2 ml腹腔注射为对照(I组)、2 ml游离猪肝细胞(2×107个／ml)腹腔内移植(Ⅱ组),以2 ml微囊化猪肝细胞腹腔内移植(2×107个／ml,Ⅲ组)。观察移植后大鼠14 d存活率、谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TB)、血氨(NH3)的改变和肝脏的病理变化。结果肝细胞移植后大鼠14 d存活率:I组为20．0％(5／25),Ⅱ组为66．7％(16／24),Ⅲ组为76．0％(19／ 25),3组间差异有统计学意义(P<0．05)。移植后第1天I组ALT、TB和移植前相比差异无统计学意义,Ⅱ、Ⅲ组ALT、TB下降。第4天3组ALT、TB均继续下降,Ⅱ、Ⅲ组低于I组(P<0．05), Ⅱ、Ⅲ两组间差异无统计学意义(P>0．05)。移植后第7天,ALT进一步下降,3组间差异有统计学意义(P<0．05);TBⅢ组显著低于Ⅱ组和I组(P<0．05),Ⅱ组低于I组但差异无统计学意义 (P>0．05)。移植后第14天,肝功能均明显恢复,ALT、TBⅡ、Ⅲ组均低于I组(P<0．05),Ⅱ、Ⅲ两组间差异无统计学意义(P>0．05)。各组治疗前后NH3有所改善,但各时间段及各组之间差异无统计学意义(P>0．05)。微囊组和游离肝细胞组移植后肝脏病理损害修复较快,而阴性对照组肝脏再生修复较差。结论微囊化猪肝细胞腹腔内移植可以提高药物诱导急性肝衰竭大鼠的存活率,改善急性肝衰竭大鼠的肝功能,有利于受体受损肝脏的再生修复,但对降低血氮的效果不明显。     

海藻酸钠纯度对微囊化肝细胞腹腔移植中微囊纤维化？…

目的 研究海灌酸钠纯度对微囊纤维化的影响。方法 采用逐步对滤和氯仿／丁醇萃取的方法纯化海藻酸钠,用纯化和未纯化的海藻酸钠制作两种微囊化肝细胞分别给两大组鼠（各２０只）腹腔移植,观察不同的时期微囊的回收率、微囊纤维化、囊内肝细胞的功能和结构。用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定纯度移植,观察不同时期微囊的回收率。结果 纯化且的微囊回经较未纯化明显增高（Ｐ,０．０１）。纯化移植１个月后大部分肝细胞形态及酶组化染     

微囊化大鼠胰岛异种移植的实验研究

目的　通过动物实验明确微囊化胰岛是否具有免疫隔离作用。方法　SD大鼠胰腺原位消化 ,Ficoll间断密度梯度离心法纯化、分离胰岛 ,气流吹喷制作海藻酸钠 /聚赖氨酸 /海藻酸钠(APA)微囊化大鼠胰岛 ,比较微囊化与未微囊化胰岛的胰岛素释放试验 ;将微囊化 (实验组 )与未微囊化 (对照组 )大鼠胰岛植入链脲佐菌素 (STZ)诱导的I型糖尿病小鼠中 ,作两组间血糖正常持续时间比较。结果　实验组与对照组的胰岛素释放试验差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;实验组血糖正常持续时间为 2 3～ 6 5d(平均 48d) ,对照组为 3～ 6d(平均 5d) ,两组差异有极显著性 (P <0 .0 1)。已排斥的实验组小鼠腹腔灌洗发现部分微囊化胰岛存活 ,部分已坏死 ,但微囊膜皆完整 ,囊壁无纤维化。结论　微囊具有良好的免疫隔离作用 ,可使胰岛移植物存活时间明显延长。同时推测微囊内移植物死亡与细胞因子、自由基作用或营养不足等有关。     

微囊化大鼠肝细胞腹腔移植后细胞形态结构,功能及其对急？…

目的 研究微囊化大鼠肝细胞同种异体腹腔移植后微囊细胞形态结构功能及其对急性肝衰竭的治疗作用。方法 采用微囊包被技术微囊化ＳＤ大鼠肝细胞后，移入急性肝衰型Ｗｉｓｔｒａ大鼠腹腔内，对照组为裸肝细胞和空囊。结果 三组大鼠的存活率；微囊化组７０．８％（１７／２４），裸细胞组３３．３％（８／２４）和空微囊组１６．６％（５／３０），微囊化组存活率明显高于其它两组（Ｐ〈０．０１）；移植后，微囊化组血糖升高和胆红     

微囊化SD大鼠周围神经组织移植促进周围神经再生的实验研究

目的 采用微囊化组织研究技术，研究微囊化神经组织移植对周围神经再生的影响。方法 将12只SD大鼠随机分为实验组和空白组。切断SD大鼠左侧坐骨神经并行显微缝合，实验组8只，加入制备好的微囊化同种异体周围神经颗粒无血清培养液30μl，约含微囊颗拉300个；空白组4只，加入不合微囊颗粒的无血清培养液30μl。术后4周取材做组织形态学检查。结果 实验组周围神经再生明显优于空白组。结论 微囊化周围神经移植有促进周围神经再生的作用。     

玻璃化法保存微囊化大鼠原代肝细胞的研究

目的：探讨采用玻璃化法低温保存微囊化肝细胞的效果，优化最佳冷冻条件。方法：使用33%，37%，40%3种不同浓度的乙二醇保护剂，以不同的冷冻速度低温保存微囊化的肝细胞，并检测冷冻后微囊内的肝细胞功能。结果：40%乙二醇浓度的保护剂配方能最有效保护肝细胞，3种冷冻速度的冷冻效果相同，冷冻后肝细胞P450功能和尿素合成功能与冷冻前相同。结论：玻璃化法能够有效的保存微囊化的肝细胞。     

微囊化胰岛细胞移植进展

本文综述了微囊化胰岛细胞移植近年的进展。     

微囊化肝细胞移植对急性肝衰竭大鼠肝组织Smac及细胞色素cmRNA表达的影响

目的动态观察微囊化肝细胞腹腔移植对急性肝衰竭大鼠肝组织Smac／DIABLO及细胞色素c（cyt—c）mRNA表达的影响。方法D-氨基半乳糖诱导大鼠急性肝衰竭模型,并设微囊化肝细胞移植组、裸肝细胞移植组和对照组。RT—PCR法测定大鼠肝脏凋亡指标Smac／DIABLO和cyt—cmRNA表达情况。样本比较采用重复测量的多元方差分析或单因素方差分析,组间比较采用t检验。结果急性肝衰竭大鼠肝组织中Smac／DIABLO及cyhmRNA的表达较对照组明显增加（F值为4．345、14．821、47．565、42．178、62．961,P值均〈0．05）。裸肝细胞移植组和对照组肝组织中的Smac／DIABLO和cyt—cmRNA表达在48h最高,而微囊化肝细胞移植组的峰值略微前移,在24h最高。结论Smac／DIABLO及cyt—CmRNA的表达随着急性肝衰竭的进程而波动,可以较好地判断肝细胞凋亡情况。     

肝细胞移植的新进展

肝细胞移植是继肝移植之后的针对肝功能衰竭的又一有效治疗手段,同时也可以作为急性肝功能衰竭患者等待行肝移植之前的一种桥接治疗手段.与肝移植相比,肝细胞移植具有创伤小、排异反应低等优点,但肝细胞移植同样受到供体短缺的制约.肝细胞移植能否作为一种临床广泛应用的治疗手段主要取决于肝细胞的数量和质量以及合适的移植部位,这方面研究在我国尚未受到充分的重视,因此,本文对肝细胞移植的基础研究与临床应用的新进展作一综述.     

The validity of the MEGX test in correlation with histology after orthotopic rat liver transplantation

Abstract Lidocaine metabolism (MEGX test) as an indicator for liver function in the assessment of different degrees of liver disease and as a predictor for liver outcome after transplantation is well established. Since reduced liver function is associated with an alteration in parenchymal and non-parenchymal cells, we evaluated whether MEGX values correlate with histology in an in vivo model of orthotopic rat liver transplantation (ORLT) to assess histological damage without taking biopsy specimens. Livers from syngeneic Lewis rats were transplanted with rearterialization after 15–30 h of cold storage in UW solution and rinsing with Carolina Rinse Solution prior to implantation. Forty-eight hours after transplantation, the MEGX test was performed and metabolites were measured with a commercial kit as described elsewhere. Biopsy specimens were taken and graded three degrees of damage (mild, moderate, and severe) in a double blind fashion by a pathologist. MEGX values were assigned to the histological results. Statistical analyses were done with a Mann-Whitney test ( n = 58) for mean values. The mean MEGX values attributed to histologies with a mild, moderate, severe degree of damage were 159.96, 78.46 and 44.42 ng/ml, respectively. When the histological groups were compared with the mean MEGX values, mild vs moderate, mild vs severe and moderate vs severe were significant ( P - 0.0001). In conclusion, MEGX values correlate significantly with histological grading in a linear fashion after ORLT. The MEGX test may be of clinical value because it reflects the histological pattern of livers and may reduce the necessity to take biopsy specimens before and after transplantation.     

大鼠肝移植后树突状细胞的迁移变化

目的：研究大鼠肝移植后树突状细胞（DC）的迁移情况。方法：制作Wistar大鼠到SD大鼠的肝移植模型（实验组），并设Wistar大鼠间肝移植作为对照（对照组）。分别于术后第3、5、7天处死受者，切取移植肝组织及腹腔淋巴结，进行组织学观察，并以免疫组织化学染色观察移植肝组织和淋巴结中S-100^＋DC的动态变化，以及CD25^＋T淋巴细胞在淋巴结的活化增殖。结果：肝组织病理学检查显示，实验组移植后第5天即出现轻至中度急性排斥反应，至第7天发展成中至重度排斥反应，受者存活时间（9．7±1．4）d。免疫组织化学染色显示，术后第3天实验组移植肝组织中DC数量明显增多，于第5天达到高峰，第7天则出现下降，明显高于对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）。从第3天开始，淋巴结中DC数量明显增多，第5、7天持续上升，与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．05）。移植术后第3天，实验组淋巴结中CD25^＋T淋巴细胞明显增多，呈现明显的T淋巴细胞活化增殖反应。结论：同种异体肝移植后，DC对抗原的摄取和递呈加速，产生对T淋巴细胞强烈而持久的刺激，最终激活T淋巴细胞，导致排斥反应的发生。     

肝移植后丝裂素活化蛋白激酶级联途径与肝细胞抗应激反应

目的 探讨肝脏移植后丝裂素活化蛋白激酶（MAPK）级联途径与抗应激反应的变化。方法 根据组织病理表现将肝脏标本分为正常肝对照组（A组），移植肝无排斥反应组（B组）和移植肝急性排斥反应组（C组），每例标本行MAPK，Ras,Jun及热休克蛋白70（HSP70蛋白）检测和RasmRNA及HSP70mRNA表达水平检测。结果 MAPK，Ras及Jun蛋白表达在A、B、C组依次增高，HSP70蛋白表达在B组最高，C组较B组有下降；RasmRNA和HSP70mRNA的表达与相应蛋白表达呈现同步性。结论 肝移植后肝细胞MAPK级联途径与抗应激反应发生变化。体现出肝细胞自我修复和保护效应，这种精细的调节机制对维持个体存活有积极意义。     

异种肝细胞移植排斥机理的探讨

目的：探讨异种肝细胞排斥反应的机理,为治疗异种肝细胞移植排斥反应提供理论依据。方法,用D－氨基半乳糖腹腔内注射制成肝功能衰竭大鼠模型,并在其脾内植入豚鼠肝细胞,通过免疫组化方法,用抗大鼠IgM抗体和抗大鼠IgG抗体,抗大鼠CD4和抗大鼠CD8抗体与因排斥反应在大鼠脾 内可能产生的IgM,IgG抗体和CD4,CD8淋巴细胞结合,在移植后不同时间取受鼠脾脏标本,检测其内是否有IgM,IgG抗体和CD4,CD8淋巴细胞存在。结果：移植后12hIgM抗体存在,移植后24h大鼠脾内出现IgG抗体,同时有CD4^=和CD8^＋淋巴细胞,且在移植后1周大鼠脾内均可见上述4种物质。结论：体液和细胞免疫均参与异种肝细胞移植的排斥反应。     

Role of the bcl-2/bax pathway in hepatocyte apoptosis during acute rejection after rat liver transplantation

Abstract It is well established that hepatocytes undergo apoptotic cell death in the course of rejection of liver grafts. The present study was designed to investigate the role of the bcl-2/bax pathway in liver allograft tissue. Orthotopic liver transplantation was performed in three groups of rats: group 1, a syngeneic combination (Lewis to Lewis), group 2, an allogeneic combination (ACI to Lewis), and group 3, an allogeneic combination (ACI to Lewis) treated with 15-deoxyspergualin. The number of apoptotic cells identified by the TUNEL method in the grafted liver reflected the severity of acute rejection. In group 1, both bcl-2 mRNA and bax mRNA were expressed in trace amounts. In group 2, bcl-2 mRNA was slightly expressed while the expression of bax mRNA rose steadily. In group 3, bcl-2 mRNA expression levels remained similar to group 1, while bax expression levels exceeded those in group 1, but were less than in group 2. Expression of bcl-2 mRNA was stationary in comparison with expression of bax mRNA. Significantly higher levels of bax mRNA were expressed from day 4 in group 2 than in group 1 (on postoperative days 4, 6, and 8, P < 0.05, group 2 vs group 1). We also investigated bax protein and results consistent with the mRNA analysis data were obtained. These findings suggest that apoptotic cell death in liver allograft rejection is regulated, at least in part, by bax.     

nodosin促进大鼠部分肝移植肝细胞再生的实验研究

目的  探讨溪黄草有效成分nodosin对大鼠减体积肝移植术后肝细胞再生的影响。方法  以Wistar大鼠作为供体, SD大鼠作为受体, 采用改良的二袖套法建立大鼠部分肝移植模型, 将24只受体大鼠随机分为nodosin组和对照组。nodosin组于肝移植术后经尾静脉注射nodosin 100μg/ml。在术后3 d和7 d分别处死大鼠取外周血浆及肝脏组织标本。分光光度法检测外周血浆中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)和白蛋白(ALB)含量; 光学显微镜下观察肝组织形态学改变; 采用免疫组织化学法检测肝组织增殖细胞核抗原(PCNA)抗体的表达水平; 采用蛋白印迹法(Western blot)检测肝组织中磷酸化蛋白激酶(p-AKT)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、细胞周期素D1(cyclin D1)、血红素加氧酶(HO)-1蛋白的表达水平; 采用磷脂酰丝氨酸外翻分析(Annexin V法)和dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测肝细胞的凋亡情况。结果  术后3 d和7 d, 与对照组比较, nodosin组大鼠血清中ALT、AST含量较低, ALB含量较高(均为P < 0.05), 同时nodosin能够减轻大鼠肝移植术后肝组织病理损伤。nodosin组的PCNA阳性表达细胞数明显多于对照组(P < 0.05)。nodosin组增殖相关蛋白p-AKT、p-mTOR、cyclin D1和HO-1蛋白表达水平均明显高于对照组(均为P < 0.05)。nodosin组发生凋亡的肝细胞数量和比例明显低于对照组(P < 0.05)。结论  大鼠肝移植术后应用nodosin具有减少肝细胞凋亡数量, 促进肝细胞增殖的作用。     

Kupffer cell and hepatocyte function in rat transplanted liver

The liver consists essentially of two compartments, parenchymal cells (PC) and non parenchymal cells (NPC) i.e. Kupffer cells, endothelial cells, fat storing cells and pit cells. PC remain after transplantation but NPC are eventually exchanged with host cells. Dynamic liver scintigraphy with albumin colloid, extracted by NPC, and IODIDA, extracted by PC, were tested to evaluate function as determined by clearance rates in these two cellular compartments. Experimental liver transplantation was performed in 15 syngeneic rats. Following transplantation, we performed dynamic liver scintigraphy with 0.5 ml 5 MBq ^99mTc-Nanocoll and 0.5 ml 20 MBq ^99mTc-IODIDA, 10 s per frame, 30 min for each examination. Percentage clearance rate, per minute was calculated from uptake curves over the liver. Uptake curves were nearly exponential and clearance rates could be estimated from a logarithmic plot of uptake versus time. The clearance rate was 25 ± 4% per min (mean ± SD) for NPC and 32 ± 15% per min for PC in controls. After liver transplantation it was 31 ± 7% per min for NPC and 30 ± 15% per min for PC. Dynamic liver scintigraphy with ^99mTc-Nanocoll and ^99mTc-IODIDA alloweds a separate assessment of the function of PC and NPC after experimental liver transplantation in rats.     

肝细胞、胰岛细胞肝内移植对肝硬变影响的研究

目的避免脾切除、门腔分流术后所致向肝血流减少造成的肝功能损害。方法白蛋白将分离纯化的肝细胞、胰岛细胞经肝动脉灌注肝内移植。结果细胞组与对照组比较血总蛋白、白蛋白、胆红素改善程度,差异有极显著意义（Ｐ＜０．０１）。肝纤维化光镜检查及Ⅰ、Ⅲ型胶原免疫组织化学染色及图象分析结果,差异有显著意义（Ｐ＜０．０５）。结论肝细胞、胰岛细胞经肝动脉灌注肝内移植,不但能改善肝功能,还能促进肝脏胶原纤维降解,逆转肝纤维化、肝硬变的程度。     

重组肝细胞生长因子促进大鼠移植肝细胞的再生

目的探讨术后应用重组肝细胞生长因子(r HGF)对大鼠移植肝细胞再生的促进作用。方法采用改良“二袖套法”建立SD大鼠原位部分肝移植模型,受鼠分为实验组和对照组,术后经尾静脉分别给予r HGF和相同体积的生理盐水,2次/d。两个组分别在术后第1、2、4、7d时随机挑取5只大鼠处死,称取移植物湿重,采血检测血清丙氨酸转氨酶及白蛋白,流式细胞仪检测移植肝的增殖活性,免疫组织化学法检测移植肝Ki-67的表达情况。结果术后第1、2d,实验组移植物湿重较对照组同时间段明显增加;术后第4、7d,实验组血清丙氨酸转氨酶水平较对照组同时间段明显降低,而白蛋白水平较对照组同时间段明显增高;术后第2、4d,实验组的移植肝增殖指数和Ki-67表达较对照组高(P<0.05)。结论大鼠部分肝移植后使用r HGF能够明显促进移植肝细胞的再生。