补阳还五汤联合骨髓间充质干细胞对脑缺血大鼠血脑屏障通透性的影响

目的:为了研究补阳还五汤联合骨髓间充质干细胞(MSCs)对脑缺血再灌注大鼠血脑屏障(blood brain barrier, BBB)通透性及其影响因素AQP4的表达。方法:将大鼠80只随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤组、MSCs组、补阳还五汤联合MSCs组(联合组),每组各16只。利用改良线栓法制备大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery obstruction,MCAO)缺血再灌注大鼠模型,在3、5 d运用干湿重法测定缺血脑组织含水量,采用伊文思蓝(Evans blue, EB)法检测血脑屏障的通透性,用透射电镜观察血脑屏障超微结构的变化,采用Western Blot法检测缺血脑组织中AQP4的表达。结果:与假手术组相比,在造模后3、5 d时间点,MCAO模型组大鼠脑组织含水量、EB含量显著升高,AQP4的蛋白表达水平上升,具有极显著性统计学意义(P0.01);与模型组相比,补阳还五汤组、MSCs组、联合组中缺血脑组织含水量、EB含量及AQP4的蛋白表达水平显著下降,各组间有显著统计学意义(P0.05)。联合组的作用在第5天更为明显,与MSCs组及补阳还五汤组相比,具有显著性差异(P0.05)。结论:补阳还五汤联合MSCs可以降低脑组织的含水量及血脑屏障的通透性,维持BBB结构的完整性,其作用机制与水通道蛋白AQP4的调控密切相关。     

补阳还五汤对脑梗死大鼠内源性神经干细胞的影响

目的:研究补阳还五汤对脑梗死大鼠内源性神经干细胞(neural stem cell,NSC)的干预作用。方法:将240只雄性大鼠随机分为模型组、假手术组、补阳还五汤组、正常对照组,采用线栓法制作脑梗死模型,分别给予相应处理,于术后1 d、3 d、7 d、14 d、21 d、28 d 6个时间点分批处死大鼠。用免疫组织化学方法检测各组大鼠海马区Nestin标记的阳性细胞情况和梗死区域及相对应区域的MBP标记的阳性细胞情况。结果:正常对照组和假手术组大鼠的海马区可见到少量的Nestin标记阳性细胞,而脑缺血大脑皮质和相对应区域可见大量的MBP标记阳性细胞,两组差异均无统计学意义(P>0.05);与假手术组相比,模型组和补阳还五汤组大鼠Nestin标记阳性细胞数目明显增多,MBP标记阳性细胞数目明显减少,差异均具有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,补阳还五汤组大鼠Nestin、MBP标记阳性细胞数目均增多,差异均具有统计学意义(P<0.05),且第7 d时Nestin标记阳性细胞数目达到高峰,第14 d时MBP标记阳性细胞数目达到高峰。结论:补阳还五汤可以促进脑梗死后内源性神经干细胞的增殖和分化,提示此为其促进受损神经再生的机制之一。     

补阳还五汤联合骨髓间充质干细胞移植对脑缺血再灌注大鼠行为学及脑梗死体积的影响

目的:研究补阳还五汤联合骨髓间充质干细胞移植对局灶性脑缺血再灌注大鼠行为学及脑梗死体积的影响。方法:用右侧大脑中动脉线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,检测脑梗死体积,并比较其神经功能行为积分。结果:移植组与联合组均能够使大鼠神经功能损害评分降低,以联合组第7d恢复最为明显(P0.05)。脑组织切片经TTC染色,可见右侧大脑中动脉供血区出现大小不等的梗死灶,MSCs组及补阳还五汤联合MSCs组与缺血再灌注组比较有显著意义(P0.01),前两者之间比较无显著性意义(P0.05)。结论:补阳还五汤联合骨髓间充质干细胞移植可减少局灶性脑缺血再灌注大鼠脑梗死体积,改善脑缺血后神经行为症状。     

补阳还五汤促进神经干细胞治疗脑缺血损伤的研究进展

补阳还五汤是具有补气活血通络功效的名方,对缺血性脑损伤后中风后遗症的好转和致残率的减少有着重要的作用。而近年,由于成功地在体外培养了神经干细胞,致使治疗脑损伤应用神经干细胞移植术成为可能。神经干细胞的移植可整合宿主细胞、取代受损细胞、重建神经环路,产生营养因子使休眠的受体细胞发挥代偿,并且移植的神经干细胞可以透过血脑屏障分化成与宿主细胞相同的细胞整合到原神经网中。当前神经干细胞移植作为基因治疗技术已经在动物试验中取得一定进展,说明此策略对缺血性脑病的治疗有着广阔的前景。     

补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血后神经干细胞迁移的影响

目的:观察补阳还五汤对大鼠大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)后神经干细胞(neural stem cells,NSCs)迁移的影响.方法:采用MCAO模型,缺血90 min后再灌.将造模成功的大鼠分层并随机分组分为模型和补阳还五汤组,24 h后ig补阳还五汤12g.kg-1,1次/d,连续3周.另16只不阻塞动脉大鼠设为手术组.分别在给药后1,2,3周进行行为学评分;并在第4天和18天ip 5-溴-2-脱氧尿苷(5-bromo-2-deoxyuridine,BrdU)50 mg· kg -1,各连续3d.2,3,5-三苯基四氮唑(TTC)染色测量梗死面积;免疫组化检测BrdU阳性细胞;酶联免疫法(ELISA)检测基质细胞衍生因子1(stromal cell derived factor-1,SDF-1)蛋白表达水平.结果:与假手术组比较,模型组1周和3周神经行为学评分显著升高(P ＜0.05或P＜ 0.01),脑梗死面积、缺血侧室管膜下区(subventricular zone,SVZ)及纹状体区BrdU阳性细胞数均显著增加(P＜ 0.05或P＜ 0.01).与模型组相比,补阳还五汤能显著改善大鼠MCAO神经功能缺失症状,药后1,2,3周神经功能评分为(1.33±0.60),(o.89±0.58),(0.50±0.31)分,明显低于模型组的(1.72±0.46),(1.56±0.51),(1.89±0.50)分(P＜0.01);降低脑梗死面积,药后1,3周分别为(16.1±5.2)％,(10.3±0.40)％,明显低于模型组的(35.2±6.3)％,(29.8±6.9)％,(P＜0.01),提高SVZ和纹状体区BrdU阳性细胞数,药后1周分别为(71.17±5.19),(83.8±3.83)个,明显高于模型组的(52.17±6.52),(60.20±6.72)个,药后3周分别为(43.33±6.06),(54.60±5.77)个,明显高于模型组的(35.83±4.88),(22.00±3.87)个(P＜0.01);给药3周时显著提高SDF-1表达,3周时为(36.3±2.71) pg·mg-1,明显高于模型组的(28.65±3.47)pg·mg-1(P＜ 0.05).结论:补阳还五汤能促进MCAO大鼠缺血侧NSCs迁移,其可能机制是通过上调SDF-1蛋白的表达水平实现的.     

补阳还五汤联合脂肪来源干细胞移植对脑缺血大鼠神经功能的影响

目的 探讨补阳还五汤联合脂肪来源干细胞（ADSCs）移植对脑缺血损伤大鼠的神经保护作用.方法 采用线栓法制备大鼠脑缺血模型,大鼠随机分为假手术组、模型组、ADSCs移植组（移植组）、补阳还五汤联合ADSCs移植组（联合组）.各组又分7、14、21d 3个时间点的亚组,观察各组大鼠不同时间点的神经功能评分、脑梗死面积及脑组织病理形态学变化.结果 与模型组比较,移植组、联合组大鼠造模后14、21d神经功能评分均显著降低（P＜ 0.05或P＜ 0.01）,且联合组大鼠21d神经功能评分明显优于移植组（P＜0.05）;各时间点移植组与联合组大鼠脑梗死面积明显小于同时相的模型组（P＜0.01）,且14、21 d联合组优于移植组（P＜0.05）;造模后HE染色显示模型组大鼠脑组织缺血周边神经元数量减少,细胞明显水肿,治疗后脑组织损伤明显减轻,联合组的病理损伤最轻.结论 补阳还五汤联合ADSCs移植能减轻脑缺血后神经功能损伤,具有脑保护作用.     

补阳还五汤联合神经干细胞移植对脊髓损伤大鼠后肢功能恢复的影响

目的观察补阳还五汤与神经干细胞移植联合应用对脊髓损伤大鼠后肢运动功能恢复的影响。方法大鼠胸10脊髓段全横断损伤造模成功后,随机分为对照组、中药组、干细胞组、中药干细胞组。各组在第8周时进行行为学和电生理检测并观察脊髓组织结构变化情况。结果对照组大鼠后肢完全瘫痪,其余各组均能观察到大鼠后肢的运动,中药干细胞组BBB分数高于其他组;对照组大鼠后肢不能爬行网格,干细胞组5只、中药组4只和中药干细胞组7只大鼠能通过爬行网格攀上平台;脊髓损伤后,对照组的皮质运动诱发电位的潜伏期增长和峰值变小,中药干细胞组的潜伏期和峰值均较中药组和干细胞组有明显的改善。结论补阳还五汤与神经干细胞移植联合应用能促进脊髓损伤大鼠后肢运动功能的恢复。     

超微补阳还五汤对侧脑室移植神经干细胞存活和分化的影响

目的:探讨超微补阳还五汤对侧脑室移植神经干细胞(NSCs)存活和分化的影响。方法:采用大脑中动脉线栓法建立局灶性脑缺血大鼠模型,将动物随机分为正常组、假手术组、模型组、模型加空白移植组、模型加NSCs移植组、移植联合中药组,给予不同处理,分别于1、7、14、28天处死动物,采用免疫组织化学法观察内源性神经再生情况。结果:正常组和苏醒2h后假手术组动物未见神经功能缺损,造模后各手术组动物都存在有明显神经功能缺损,但神经功能评分差异无统计学意义(P>0.05)。随着存活时间延长,各组动物积分逐步减少。用药7天和14天,NSCs移植联合中药组神经功能缺损积分降低与其它组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。14天和28天时模型加NSCs移植组积分降低多于模型组和模型加空白移植组(P<0.05)。正常组可见少量BrdU阳性细胞散在分布于各脑区,但数量少且排列比较稀疏。脑缺血后即可见BrdU阳性细胞增加,7天时达高峰,而且排列紧密,然后逐渐下降,14天仍高于正常。7天和14天时NSCs移植联合中药组阳性细胞数目明显多于同期各组(P<0.05);7天时模型加NSCs移植组阳性细胞数量多于模型组(P<0.05)。结论:超微补阳还五汤通过影响侧脑室移植NSCs存活和分化,促进内源性神经再生及神经功能恢复。     

补阳还五汤联合间充质干细胞移植对脑缺血再灌注损伤大鼠bFGF mRNA表达的影响

目的探讨补阳还五汤联合骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对脑缺血损伤的神经保护机制。方法将48只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、MSCs移植组(MSCs组)、补阳还五汤联合MSCs移植组(联合组),每组12只。建立局灶性脑缺血再灌注模型,MSCs组、联合组从尾静脉注入MSCs,联合组并给予补阳还五汤,给药10天后检测碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)基因表达情况。结果 MSCs组与联合组均能上调大鼠脑组织bFGFmRNA表达水平,与模型组和假手术组相比,差异均有统计学意义(P<0.05),联合组表达明显高于MSCs组(P<0.05)。结论补阳还五汤联合MSCs移植能通过上调脑组织bFGFmRNA表达水平,促进内源性神经营养因子bFGF基因表达而起对脑缺血再灌注损伤起保护作用。     

神经干细胞迁移研究平台的建立及补阳还五汤的干预影响

目的:建立体外神经干细胞(neural stem cells,NSCs)迁移研究的平台,并通过经典名方补阳还五汤对此平台进行适用性验证。方法:分离、培养大鼠脑胚胎NSCs,利用NSCs放射性迁移、划痕修复动态检测以及Transwell趋化性迁移检测的方法,建立体外NSCs迁移研究平台。利用此平台评价经典名方补阳还五汤(300,600 mg·L~(-1)),有效单体川芎嗪(10,50 mg·L~(-1))以及阳性对照基质细胞衍生因子-1(stromal-derived factor 1,SDF-1)等对NSCs迁移的影响。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测放射性迁移系统及Transwell培养上清液中SDF-1及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的含量。结果:经过不同时间点的观察,放射性迁移、划痕修复动态检测以及Transwell趋化性迁移均可见不同程度的NSCs的迁移;与空白组比较,补阳还五汤及川芎嗪能够明显促进放射性迁移体系中NSCs的迁移,还能够显著增加向Transwell下室迁移的细胞数,且具有剂量依赖性(P0.05,P0.01),此外还可显著提高NSCs培养上清中SDF-1,VEGF的含量(P0.01),其中对SDF-1含量上调作用高于VEGF;给予AMD3100预处理后,600 mg·L~(-1)补阳还五汤及10,50 mg·L~(-1)川芎嗪促进Transwell向下室迁移的细胞数显著降低。结论:该研究建立的NSCs迁移研究平台动态、多维,能模拟不同临床病理生理过程,且经济实用、简便易行,可供中药复方和单体成分活性筛选之用。     

不同黄芪剂量的补阳还五汤对大鼠脑缺血后神经干细胞增殖的影响

目的: 研究不同黄芪剂量的补阳还五汤对大鼠脑缺血后室下区神经干细胞增殖的影响。 方法: 采用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞模型,缺血24 h后分别ig黄芪剂量为120, 60, 30, 15 g的补阳还五汤(剂量分别为13.07, 7.61, 4.88, 3.55 g·kg^-1),并ip 5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU,50 mg·kg^-1),1次/d,连续14 d。在缺血后第1, 7, 14天,采用改良的神经症状严重程度评分和角实验评价感觉运动功能;缺血后第14天,采用BrdU/Nestin免疫荧光双标检测室下区神经干细胞增殖情况。 结果: 与模型组比较,在缺血后第7, 14天,黄芪剂量为120, 60 g组的补阳还五汤显著改善神经症状评分和减少大鼠右转次数(P<0.01或P<0.05);缺血后第14天,黄芪剂量为120, 60 g组的补阳还五汤显著促进室下区神经干细胞增殖(P<0.01)。 结论: 大剂量黄芪组方的补阳还五汤能显著促进脑缺血后室下区神经干细胞增殖和神经功能恢复,以黄芪剂量为120 g的效果最佳。     

补阳还五汤载药血清对缺氧性神经干细胞增殖和分化的影响

目的:观察补阳还五汤载药血清对缺氧环境中神经干细胞的增殖及其分化的影响。方法:从孕14d(E14d)大鼠获得神经干细胞,经无血清培养基悬浮培养并传代。取传3代神经干细胞,添加不同浓度的载药血清,在5%O2三气培养箱中培养。MTT法检测不同缺氧时间点神经干细胞的增殖情况。兔抗人神经元特异性烯醇化酶(NSE)和兔抗人胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫细胞化学染色观察神经干细胞的分化情况并分别计数。结果:10%缺氧载药血清组神经干细胞MTT检测的OD值显著增高;各浓度组分化的NSE及GFAP阳性细胞的比例均升高,尤以10%缺氧载药血清组升高显著。结论:补阳还五汤药物血清对神经干细胞缺氧性损伤具有明显的保护作用,并可促进缺氧性神经干细胞的分化,10%浓度为最佳干预浓度。     

补阳还五汤干预缺氧预适应成纤维细胞促间充质干细胞迁移的机制

目的:探讨补阳还五汤干预缺氧预适应心脏成纤维细胞促间充质干细胞迁移的相关机制。方法:以6.5,13,26 g·kg~(-1)补阳还五汤和等量蒸馏水连续灌胃SD大鼠7 d后,制备补阳还五汤含药血清及空白血清。0.56,1.12,2.25 g·m L~(-1)含药血清干预缺氧预适应的心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)24 h后,酶联免疫吸附测定(ELISA),实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)检测CFs培养液中缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α),单核细胞趋化因子-1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)及肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)的含量,mRNA及蛋白表达情况,并将补阳还五汤干预缺氧预适应CFs的培养液干预间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)后,检测MSC的细胞迁移能力。结果:与常氧组比较,缺氧可以显著促进CFs分泌HIF-1α,MCP-1及HGF(P0.01),同时给予缺氧预处理的CFs培养液干预MSC后,HIF-1α,MCP-1及HGF的水平亦显著升高(P0.01),当给予不同剂量的补阳还五汤含药血清干预后,与缺氧组比较,它们的表达进一步升高(P0.05,P0.01);而给予HIF-1α抑制剂YC-1处理后,补阳还五汤各组可升高MCP-1,HGF的表达(P0.05)。结论:补阳还五汤协同缺氧预适应CFs旁分泌效应能够促进MSC迁移,其可能机制是通过上调HIF-1α的表达,提高迁移因子MCP-1,HGF的表达而实现的。     

补阳还五汤联合鞘内注射间充质干细胞治疗脊髓损伤的研究

目的:探讨补阳还五汤联合鞘内注射大鼠间充质干细胞(rMSCs)对大鼠脊髓损伤(SCI)的修复作用。方法:将66只Wistar大鼠,随机分成模型组、假手术组、PBS对照组(简称对照组)、补阳还五汤组(简称中药组)、鞘内注射rMSCs组(简称移植组)和补阳还五汤联合鞘内注射rMSCs组(简称联合组)。造模后3天,对照组鞘内注射PBS液,中药组予以补阳还五汤灌胃30天,移植组鞘内注射rMSCs,联合组鞘内注射rMSCs同时给予补阳还五汤灌胃30天。治疗后第7、14、21、28天分别行BBB分级法检测神经功能恢复情况,HE染色法观察脊髓损伤病理改变和修复情况,应用免疫组化技术检测BrdU标记的rMSCs胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元特异烯醇化酶(NSE)表达情况。结果:成功制作了大鼠脊髓半横断损伤模型,移植组和联合组BBB分级法检测平均得分较模型组、对照组和中药组有显著提高(P0.05),联合组在不同时间点的BBB平均得分都高于移植组。脊髓组织病理切片显示联合组较移植组组织水肿和炎性细胞浸润减轻更明显,胶质细胞增生更加活跃。双标免疫组化显示移植的rMSCs可迁移到宿主脊髓损伤处并存活,从第7天开始即有NSE和GFAP表达。联合组中GFAP、NSE阳性细胞数目均较移植组多(P0.05)。结论:鞘内注射移植rMSCs对大鼠脊髓损伤具有修复作用,联合应用补阳还五汤有协同增效的效果,有利于大鼠脊髓功能的恢复。     

自体骨髓干细胞移植合补阳还五汤治疗下肢缺血性疾病

目的:研究自体骨髓干细胞移植合中药对下肢缺血性疾病的治疗作用。方法:采用自体骨髓,分离后在下肢缺血性疾病患者双侧肢体多点注射移植,移植后口服补阳还五汤。观察患者手术前后肢体疼痛评分、冷感评分,对比踝肱指数(ABI)及下肢血管超声检查。结果:治疗后1月,患者冷感、麻木治疗有效率100%,静息痛治疗有效率87.5%,而ABI部分逐渐升高,而下肢血管超声检查指标没有明显改善。结论:本方法治疗下肢缺血性疾病可以改善患者临床症状和体征。     

补阳还五汤新用

1　肠粘连张某 ,女 ,62岁 ,2 0 0 2年 9月 1 2日初诊。平素体质较弱 ,于 1 996年行胆囊切除手术后出现脐腹部胀痛不适 ,时作时止 ,得嗳气后或矢气后则腹胀痛有所减弱 ,时有大便艰涩难解 ,伴有短气、乏力 ,胃纳欠佳 ,舌黯苔白 ,脉缓。考虑为肠粘连。治拟益气行气活血通络 ,方用补阳还五汤加减。黄芪 30 g,当归、川芎、赤芍、地龙、桃仁、红花、泽兰、陈皮、枳壳、鸡内金、黄精各 1 0 g,炒莱菔子 1 5 g。共 5剂 ,每日 1剂 ,水煎 2次 ,早晚分服。服 5剂后 ,患者自觉矢气频频 ,腹胀痛等症亦明显减轻 ,胃纳亦增 ,大便 1日 1行 ,短气、乏力等症亦…     

补阳还五汤与神经组织关系的研究进展

近年来关于补阳还五汤的保护机制研究逐渐深入,发现其对神经组织的作用十分广泛.介绍补阳还五汤的来源、药理作用及其对神经组织的作用,重点从神经组织包括神经元、神经胶质细胞、突触、轴突和树突几个方面简单论述下补阳还五汤的对神经组织的作用,希望有助于认识补阳还五汤对神经组织的作用,为临床治疗提供理论依据。     

补阳还五汤对大鼠脑缺血损伤的保护作用

目的 :为了了解补阳还五汤对大鼠脑缺血损伤的保护作用 ,采用大鼠前脑不全脑缺血模型观察了补阳还五汤对不完全性前脑缺血大鼠脑组织丙二醛 ( MDA )、乳酸脱氢酶 ( L DH)活性 ;红细胞免疫以及可能影响红细胞免疫功能的红细胞 MDA和过氧化物歧化酶 ( SOD)的影响。结果 :补阳还五汤能拮抗脑缺血引起的红细胞 C3b RR降低、红细胞 ICR增高 ;能抑制脑缺血引起的红细胞 MDA生成 ,拮抗脑缺血引起的红细胞 SOD活性下降 ,并能抑制脑缺血后脑组织 MDA生成、增强脑组织 L DH活性。结论 :补阳还五汤对脑缺血后红细胞免疫功能有调节作用 ,对脑缺血后脑组织损伤有保护作用。     

补阳还五汤抗脑缺血作用的研究进展

近年来脑血管疾病的发病率居各种老年疾病的前3位,其中以缺血性脑血管病居多,并有逐渐上升和年轻化的趋势,严重危害人类健康。脑缺血性疾病的治疗成为人们关注的领域,而补阳还五汤抗脑缺血效应的研究则成为热点。补阳还五汤是王清任用来治疗半身不遂、瘫痿不用诸症的首选方。功效：补气,活血,通络。随着现代化技术的发展及医学与分子生物学、遗传学的相互渗透,补阳还五汤的抗脑缺血作用机制得到了更全面及深入的诠释。从临床和实验研究两方面对补阳还五汤的抗脑缺血作用进行总结概括。     

补阳还五汤对脑缺血后神经血管单元的保护作用研究

目的探讨补阳还五汤对脑缺血后神经血管单元功能的保护作用。方法采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血模型,并将大鼠随机分为治疗组和对照组;治疗组给予补阳还五汤灌胃治疗,对照组给予等量0.9%Na Cl溶液灌胃,疗程7天。采用NRSS神经行为学评分评价大鼠脑缺血后行为学表现,采用TTC染色检测梗死面积,采用免疫组织化学染色的方法评价神经元数量情况,IGG染色评价神经血管单元的结构完整性。结果干预处理后,与对照组比较,治疗组NRSS行为学评分降低、脑梗死面积缩小、神经元数量增多及神经血管单元完整性良好(P0.05)。结论补阳还五汤可通过保护神经血管单元的完整性以促进脑缺血后的康复。