以氨基酸为连接子的吉西他滨-聚谷氨酸偶合物设计、合成及评价

目的 设计、合成抗肿瘤药物吉西他滨与聚谷氨酸的偶合物,通过调节连接子的结构以控制药物的释放,提高抗肿瘤药物的疗效。方法 首先合成吉西他滨3′-或5′-的氨基酸酯衍生物,然后在DCC作用下,氨基酸的氨基与聚谷氨酸分子中的羧基缩合,得到以氨基酸为连接子的吉西他滨-聚谷氨酸偶合物;用紫外法测定偶合物载药量;用HPLC法测定偶合物在水溶液或血浆中的稳定性。结果与结论 共合成目标化合物11个,载药量为25%～30%。稳定性试验结果表明,偶合物在水溶性或血浆中能够稳定地释放游离药物,氨基酸类型及连接位置可影响药物的释放速率,偶合物PG-Ala-3′-Gem的释放速率最快,4 h释放50%的药物,而PG-Val-3′-Gem和PG-Ala-5′-Gem在48 h分别释放30.3%和43.5%;偶合物在血浆中的释放速率略快于水溶液中的释放速率。     

外周血细胞的分离及其在免疫偶合物研究中的应用

目的：探讨分离外周血细胞的方法及该方法在免疫偶合物制备过程中的应用价值。方法：应用Ficoll/Hypaque分离液经密度梯度离心得到单个核细胞、红细胞及混有红细胞的粒细胞;用0．83％氯化铵溶解混杂的红细胞得到粒细胞;利用单核细胞粘附玻璃的特性除去淋巴细胞中的单核细胞;用AET－E玫瑰花试验分离T淋巴细胞及B淋巴细胞。将分到的各血细胞与单克隆抗体及免疫偶合物反应,活细胞免疫荧光法测定。结果：分到的各种血细胞2h活性达96％以上,细胞得量较高。所测定的单抗特异性高,活性保持良好。结论：该法是一种简单易行、经济方便的方法,可用于免疫偶合物的制备研究中。     

活细胞免疫荧光法在免疫偶合物研究中的应用

目的：探讨活细胞免疫荧光法在免疫偶合物制备过程中的应用价值。方法：将被测试物与活细胞作用，正常兔血清作封闭，加入ＦＩＴＣ—羊抗鼠ＩｇＧ，固定液固定后荧光显微镜观察。结果：含抗Ｔ淋巴细胞白血病单抗腹水、单抗纯化物及单抗偶合物的效价分别为１∶１０２４０、５ ｘ １０－８ｍｏｌ／Ｌ和 ５ ｘ １０－８ｍｏｌ／Ｌ。结论：活细胞免疫荧光法是一种简单、快速、结果易观察的方法，可用于单抗偶合物制备过程中的抗体活性测定。     

噻唑蓝法测定免疫偶合物对肿瘤细胞的杀伤作用

目的：探讨噻唑蓝法应用于测定免疫偶合物对肿瘤细胞的杀伤作用的可能性。方法：将被测试物与肿瘤细胞共同孵育2h后撤去测试物，加入新鲜培养液培养巩，然后加入噻唑蓝染液，4h后酶标仪测定。结果：所测试的两种免疫偶合物对靶肿瘤有较强的细胞毒作用，这种作用明显强予对非靶细胞的作用。结论：噻唑蓝法是一种敏感、简单、客观性强的测定免疫偶合物细胞毒作用的方法。所测定的两种免疫偶合物具有临床应用价值。     

单克隆抗体（HI30）—丝裂霉素免疫偶合物的研究

用Dextran T-40的氧化产物葡聚糖多聚醛(polyaldehyde,PAD)作为中间载体,将鼠抗人T淋巴细胞表面分化抗原的单克隆抗体HI_(30)与抗癌药丝裂霉素(mitomgcin C,MMC)形成共价连接,制备HI_(30)-PAD-MMC免疫偶合物。偶合物的特异性毒性依赖于单克隆抗体(单抗)和靶细胞表面抗原位点的结合。偶合物基本上保持原有的抗体结合活性及药物细胞毒,并具有良好的稳定性。     

多聚N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺-抗肿瘤药物偶合物的组成和应用研究进展

多聚N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺(HPMA)-抗肿瘤药物偶合物可通过靶向分子及肿瘤细胞的增强渗透和滞留效应实现药物的靶向治疗,显著减少传统药物全身毒副作用,以其独特的优势成为目前抗肿瘤药物的研究热点之一。本文对多聚HPMA-抗肿瘤药物偶合物的组成及近几年来的临床前和临床应用研究现状和前景进行综述。     

Dot1及其同源物的研究进展

 Dot1(disruptor of telomeric silencing 1)最初在芽殖酵母中通过遗传筛选基因被发现, 缺失则会引起端粒沉默。Dot1和其脊椎动物同源物DOT1L(Dot1-like)都具有催化组蛋白H3第79位赖氨酸(H3K79)甲基化的组蛋白甲基转移酶活性。在人类各种组织中, DOT1L基因启动子区域的CpG岛均呈现极低的DNA甲基化水平, 说明DOT1L基因在人体中广泛中等程度表达。DOT1L基因在EBV转化的细胞及睾丸中表达水平升高。Dot1/DOT1L介导的H3K79甲基化参与多种生物学过程, 并在小鼠基因损伤实验中发现DOT1L在心功能、红细胞生成、白血病及多种肿瘤的疾病发展中起重要的作用, 因而DOT1L已成为针对表观遗传修饰因子的重要药物靶点。本文对Dot1/DOT1L在生理和病理方面的研究进展作一综述。     

McAb共刺激PBLs细胞超微结构的变化和作用肝癌细胞时间的选择

目的 根据McAb共刺激PBLs在不同抗体和不同时间里淋巴细胞的形态变化,找出免疫治疗的最佳时间。方法 用McAb抗CD3,CD28 CD80激活健康人的PBLs,对各组不同时间段的淋巴细胞超微结构进行观察,并将淋巴细胞作用于肝癌细胞后BEL-7402。结果 CD3及CD28 CD80除刺激淋巴细胞增殖外,也能使淋巴细胞活化,细胞表现为胞体增大,细胞器增多,具有粗大的绒毛和突出伪足,并可见单核细胞吞噬活跃;CD28 CD80McAb组PBLs72h后作用BEL-7402肝癌细胞出现典型的凋亡现象。结论 本研究对肿瘤的T细胞治疗有重要意义,为肿瘤生物治疗用药时机提供依据。     

刺激型血小板McAb对人血小板胞浆内钙离子浓度的影响

McAb APt_4、HIP_2、HI117和SJ-9A_4的结合位点分别在血小板膜GPⅡb/Ⅲa、GPⅡb和CD9抗原上,其均能引起血小板聚集,但其作用机理尚不清楚.据报道许多血小板诱聚剂可使血小板胞浆内Ca~(2+)浓度升高,本实验观察这4种McAb对人血小板胞浆内Ca~(2+)浓度的影响。 取正常人全血,ACD抗凝,分离血小板,与Ca~(2+)荧光指示剂fura2-AM共同温育45min,使fura2载入血小板,然后用Hepes液洗3遍.采用单激发光源的日立F-3010型荧光分光光度计测量载有fura2     

接种二价脊髓灰质炎疫苗偶合胸腺淋巴体质、心肺功能衰竭发生死亡1例调查

目的调查某患儿的死亡原因是否为注射疫苗。方法对患儿开展个案调查,收集患儿出生病历、住院病历、预防接种以及尸检等资料。市级预防接种异常反应调查诊断专家组综合分析,提出诊断意见。结果患儿于当天15:30接种二价脊髓灰质炎减毒活疫苗,15:55出现口唇发紫,鼻腔流白沫;16:45到达市中医院急诊,经抢救45 min无效后宣告死亡。尸检结果符合胸腺淋巴体质,排除过敏反应。市级预防接种异常反应调查诊断专家组调查诊断为不属于预防接种异常反应。结论患儿偶合胸腺淋巴体质,以及心、肺功能衰竭,属于接种疫苗偶合反应。     

抗乳腺癌单抗的制备及应用

目的：制备抗人乳腺癌单克隆抗体（McAb),用于临床肿瘤的免疫病理诊断与分型研究,为药物导向诊断和治疗奠定基础。方法：以乳腺癌细胞系ZR75免疫Balb/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体。用免疫荧光、免疫组化和免疫印迹法研究其识别抗原特性。结果：获得恒定分泌抗ZR75的杂交瘤细胞系BM109。单抗BM109属IgC1类型,其识别抗原是分子量为37KD的蛋白性抗原,主要表达在靶细胞膜上。在乳腺癌的免疫反应率为86.7%（26/30）,与胃癌、食管癌、卵巢癌等6种肿瘤的免疫反应率为9.5%（4/42）,而对乳腺纤维瘤、囊性增生症和周围正常乳腺组织未见阳性反应。结论：获得1株较特异的抗乳腺癌单克隆抗体,该McAb对乳腺癌特异性高,对其他肿瘤交叉反应较小,可望进一步用于乳癌的诊断治疗以及发生发展的研究。     

单克隆抗体与血卟啉衍生物交联物的制备及其对胃癌靶细胞的杀伤作用

以碳二亚胺(EDCI)为连接剂,将血卟啉衍生物(HPD)与抗胃癌单克隆抗体18M(McAb18M)共价交联。经ELISA法测定及溶血试验表明,该交联物保留了McAb的反应特性及HPD的光故活性。体外试验表明,交联物对靶细胞的光动力杀伤效率提高了11.2倍,对非靶细胞的杀伤作用微弱,表明HPD—McAb具有特异杀伤作用。对游离HPD及交联HPD的吸收光谱,荧光激发光谱及发射光谱的分析比较表明,二者均有一定的差异。     

经皮RFA术与关节腔内MTX-HA注射治疗关节滑膜炎的疗效比较

目的 对比超声引导下经皮关节腔甲氨蝶呤-透明质酸偶合物(MTX-HA)注射与经皮射频消融(RFA)术治疗关节滑膜炎的疗效,初步探讨两种疗法的临床应用前景。方法 40只日本大耳白兔分为RFA组、MTX-HA组、对照组,AIA造模后进行RFA术与MTX-HA关节腔注射治疗,观察兔膝关节肿胀、滑膜炎转归情况,术后4周解剖下观察膝关节面,软骨、骨侵蚀半定量评分评价治疗效果。结果 RFA组与MTX-HA组手术均成功,术后2周时RFA组膝关节径大于MTX-HA组(P<0.01),至术后4周时两组比较,差异无统计学意义(P>0.05),超声显示,滑膜厚度滑膜炎RFA组和MTX-HA组术后积液均显著降低(P<0.01),但组间比较,MTX-HA组滑膜厚度与滑膜炎评分均高于RFA组(P<0.05),解剖下RFA组手术侧软骨侵蚀半定量评分显著低于对侧(P<0.01)。结论 超声引导下滑膜RFA术与关节腔内MTX-HA注射均能明显抑制局部关节滑膜炎症,使局部关节症状好转,阻止关节软骨、骨侵蚀进展,但RFA术的滑膜直接灭活作用优于MTX-HA注射术。     

偶合反应流动注射化学发光法测定镓的研究

本文基于Ｇａ（Ⅲ）置换Ｆｅ（Ⅱ）－ＥＤＴＡ配合物中Ｆｅ（Ⅱ）和Ｆｅ（Ⅱ）－鲁米诺－溶解氧产生化学发光的反应，建立了无机偶合反应，流动注射化学化学发光测定痕量镓的新方法。     

岩白菜素偶氮衍生物的制备

目的设计合成岩白菜素偶氮衍生物。方法对岩白菜素7位进行结构改造,通过重氮化偶合反应制备其衍生物,并通过波谱法进行结构鉴定。结果制备了7个岩白菜素偶氮衍生物,其中7个化合物均为新化合物。结论这些化合物的合成为大量合成同类衍生物并进行药理活性筛选奠定了研究基础,为岩白菜素的深入研究与开发利用提供新的方法。     

柚皮素铜、锌配合物的制备及其对大鼠实验性脉络膜新生血管的抑制作用

目的 制备柚皮素铜、锌配合物,比较配合物与柚皮素对大鼠激光诱发脉络膜新生血管(CNV)的抑制作用。方法 以柚皮素为配体与铜、锌金属离子分别在甲醇、乙醇溶液中配位,合成柚皮素铜、锌配合物,对配合物进行元素分析,利用红外、紫外光谱对配合物进行表征。采用氪激光制作大鼠CNV模型,模型动物随机分为溶媒对照组、柚皮素组及柚皮素铜、锌配合物4组,每组5只。视网膜光凝后开始给药,给药剂量：20 mg/(kg·d),溶媒对照组给等体积的二甲基亚砜（DMSO）。腹腔注射给药,每日1次,连续4周。给药后4周进行荧光素异硫氰酸酯葡聚糖(FITC-D)食下静脉注射,用脉络膜铺片法测量CNV面积。结果 柚皮素与铜、锌金属离子形成了稳定的配合物。实验动物CNV面积（×10³）测定：溶媒对照组（34.56±1.67）μm²、柚皮素组（20.90±1.47）μm²、柚皮素铜配合物组（13.24±1.33）μm²、柚皮素锌配合物组（13.0±1.28）μm²。柚皮素及其铜、锌配合物组CNV面积明显小于溶媒对照组(P<0.05,P<0.01),柚皮素铜、锌配合物组则小于柚皮素组,(P<0.05)。结论 柚皮素与铜、锌金属离子形成配合物后,生物活性显著增加,抑制模型大鼠CNV的作用强于柚皮素。     

中华眼镜蛇膜毒素与McAb偶联物对白血病细胞的杀伤作用

用中华眼镜蛇膜毒素(CT)与抗人T细胞McAb Wu71偶联制备免疫毒素Wu71:CT。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、免疫双扩散和间接免疫荧光检测,证实结合物中McAb和CT均保持活性。在无Ca~(2+)、Mg~(2+)的培养基中将人白血病T淋巴细胞系CEM细胞与Wu71:CT共同孵育,先加入Ca~(2+)以抑制CT的溶细胞作用,而不影响McAb与靶细胞的结合;一定时间后用Mg~(2+)和金属螯合剂EGTA恢复CT的溶胞作用,结果在Wu71:CT 0.5×10~(-6)mol/L浓度下靶细胞CEM 82.4％被杀伤,而抗原阴性的非靶细胞Raji仅死亡23.3％,表明Wu71:CT有较好的特异性杀伤作用。扫描电镜显示,免疫毒素作用下的CEM细胞膜破裂、萎缩、崩溃,而非靶细胞大部分保持完整。提示McAb与CT偶合物在白血病和肿瘤的导向治疗中可能具有潜在价值。     

载脂蛋白E单克隆抗体的临床应用——1048例分析

用单克隆抗体ELISA夹心法(McAb ELISA)测定了1048人血清载脂蛋白E(ApoE)含量。结果表明:冠心病、糖尿病、高血压等患者血清ApoE均高于正常人(P<0.01)。ApoE敏感性分析和指标判别分析表明,ApoE高于TC和TG。ApoE在正常组与TC相关(P<0.05),在冠心病、糖尿病、高血压三个疾病组与TG相关(P<0.01),高脂血症Ⅱ_b、Ⅳ型中ApoE升高率高于Ⅱ_a型。初步结果提示ApoE是反映脂蛋白代谢障碍敏感的指标。     

一起接种乙肝及卡介苗疫苗偶合死亡病例的调查

目的描述1例乙肝及卡介苗疫苗联合接种后偶合死亡病例的调查经过,为类似事件处置提供参考。方法对定安县一起接种乙肝及卡介苗疫苗后偶合死亡的病例开展个案调查,通过收集病例出生情况、预防接种过程、接种单位及人员资质、疫苗冷链信息、患儿抢救记录以及尸检等资料进行综合分析。结果患儿出生后第35天,于2014年11月18日上午10时完成第2针乙肝疫苗与1针卡介苗接种,留观30 min无异常,家属于当天上午10时40分将其抱回家,11时30分左右家长发现患儿其口唇发绀、手脚冰冷,紧急送到辖区农场医院进行救治,最终抢救无效死亡;结合尸检及案情资料,海南省预防接种异常反应调查诊断专家组调查诊断,受种者为出血坏死性小肠结肠炎致感染性休克而死亡,不属于预防接种异常反应,属于偶合症。结论接种疫苗偶合死亡常引起医疗纠纷及不良影响,有序协调、充分沟通、及时尸检、科学严谨、有法可依地处置此类事件非常关键。     

一起接种疫苗偶合婴幼儿轮状病毒腹泻调查分析

目的:调查发生婴幼儿腹泻的原因.方法:流行病学现场调查,大便标本实验室检测.结果:全村共发生接种疫苗后的偶合腹泻病例4例,死亡2例,大便标本ELISA法检测,A组轮状病毒阳性,均培养未分离到致泻性弧菌、沙门氏菌和致泻性大肠埃希菌.结论:为接种疫苗偶合婴幼儿轮状病毒腹泻,死亡病例为急性腹泻导致严重脱水所致,排除预防接种反应.