谈中西药物对骨髓基质细胞增殖分化的影响

骨组织工程是随着细胞学的发展而逐渐发展起来的一门学科,用以治疗大段骨缺损。骨组织工程中最基本的研究和临床实践对象是种子细胞的选择。目前,骨髓基质细胞被证明是最适宜的种子细胞,作为组织工程学的种子细胞,越来越受到中西医学研究者的重视,但是,因其数量少、可自动分化等特点,不易控制其分化方向,而不同类型的中西药物可以对其增殖分化起到良好的诱导作用,今就此问题试述如下。     

杜仲对大鼠骨髓基质细胞增殖及成骨分化影响的实验研究

目的:观察杜仲含药血清对骨髓基质细胞(BMSCs)增殖、成骨分化的影响,探讨其促进骨折愈合的细胞学机制。方法:SD大鼠18只,随机分为杜仲水提物、醇提物和对照组,每组各6只,分别灌胃相应药物取含药血清,观察各含药血清对BMSCs的影响,进行碱性磷酸酶染色、茜素红染色观察和碱性磷酸酶比活性、骨钙素含量测定。结果:碱性磷酸酶染色、茜素红染色除空白对照组外均有钙复合物形成,碱性磷酸酶比活性、骨钙素含量空白较对照组高。结论:杜仲有促进BMSCs增殖和成骨分化的作用。     

心肌成纤维细胞Wnt信号通路在高糖环境下的调控变化

目的:观察乳鼠心肌成纤维细胞在高浓度葡萄糖作用下胶原蛋白分泌和细胞增殖及Wnt信号通路调控的变化。方法:基于高糖刺激诱导心肌成纤维细胞体外增殖的培养方法,CCK8法检测细胞增殖能力;流式细胞仪检测细胞的增殖周期;ELISA法观察细胞TGF-β1蛋白及I型、Ⅲ型胶原的分泌能力;western blot法检测蛋白β-catenin,GSK-3β,P-GSK-3β的表达水平;观察心肌成纤维细胞在高糖环境中Wnt信号通路传导的变化。结果:高浓度葡萄糖环境可以引起细胞的增殖(P0.01);促进TGF-β1的合成(P0.01);提高细胞I型、Ⅲ型胶原分泌的能力(P0.01);在分子水平上可以增强β-catenin的表达(P0.01),抑制P-GSK-3β的表达(P0.05)。结论:心肌成纤维细胞在高糖环境中增殖明显,心肌成纤维细胞TGF-β1和胶原的分泌会增加,引发Wnt信号通路的异常表达。研究其作用机制,对糖尿病心肌纤维化的防治及研究具有重大意义。     

黄芪对兔骨髓基质细胞增殖和向成骨细胞分化的影响

祖国医学认为黄芪具有补中益气、升阳固表、托毒敛疮等功效。近来有研究表明,黄芪注射液(astragalus membranaceus injection,AMI)可以促进贫血小鼠骨髓纤维细胞集落(colony-formingunit-firbroblastie,CFU-F)增殖,升高贫血小鼠骨髓基质细胞分泌干细胞因子(stem cell fator,SCF)的水平。骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)具有     

人参皂苷Rg1对高糖培养的心肌成纤维细胞Wnt信号通路的影响

目的 建立体外高糖培养心肌成纤维细胞(CFs)的方法,观察人参皂苷Rg1对高浓度葡萄糖培养的心肌成纤维细胞增殖和蛋白分泌及Wnt信号通路的影响.方法 采用体外高糖诱导心肌成纤维细胞增殖模型,应用MTT法检测细胞增殖能力;流式细胞仪检测细胞增殖周期;ELISA法观察细胞Ⅰ型、Ⅲ型胶原及肿瘤生长因子β1(TGF-β1)蛋白的分泌;Western blot法检测β-catenin、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、磷酸化糖原合成酶激酶3β(P-GSK-3β)的蛋白表达水平以观察人参皂苷Rg1对于心肌成纤维细胞Wnt信号通路的影响.结果 人参皂苷Rg1可以抑制细胞增殖(P＜0.05);降低Ⅰ型、Ⅲ型胶原分泌(P＜0.05);减少TGF-β1的合成(P＜0.01);在分子水平上可以抑制β-catenin的表达(P＜0.05),上调P-GSK-3β的表达(P＜0.05).结论 人参皂苷Rg1能抑制心肌成纤维细胞的增殖,减少高糖培养心肌成纤维细胞胶原和TGF-β1的分泌,抑制Wnt信号通路的异常表达,具有潜在的抗心肌纤维化作用.     

神经生长因子对大鼠骨髓基质细胞增殖和向成骨分化的影响

目的:观察神经生长因子(NGF)对大鼠骨髓基质细胞(BMSC)增殖和向成骨分化的影响。方法:体外培养大鼠BMSC,流式细胞术鉴定表面标志物;加成骨培养液培养至第3代,分为对照组(不加NGF)和实验组(加入100 ng/ml NGF),测定第1、3、5天第3代BMSC细胞增殖活性(MTT法)和碱性磷酸酶(ALP)活性,应用Von Kossa染色比较2组成骨性能。结果:CD90、CD105为强阳性表达,CD34、CD45为阴性。MTT法测得实验组第1、5天细胞的平均吸光度与对照组差异均无统计学意义(P>0.05),而第3天实验组高于对照组(P<0.05),实验组ALP表达明显高于对照组(P<0.01);Von Kossa染色形成钙化结节也较对照组数量增多,面积增大。结论:NGF无明显促进大鼠BMSC增殖的作用,但可促进其向成骨细胞分化。     

双氢青蒿素通过Wnt信号通路对胶质瘤细胞增殖侵袭的影响

目的:研究双氢青蒿素(dihydroartemisinine,DHA)对人胶质瘤U251细胞的增殖、侵袭的影响及其作用机制。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法观察DHA对胶质瘤活性的影响;细胞划痕实验检测细胞迁移力; Transwell小室法检测细胞侵袭力;免疫印迹试验(Western blot,WB)检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin及β-catenin、GSK-3β、Axin2、c-myc蛋白的表达水平。结果:DHA显著抑制胶质瘤U251细胞的增殖活性、迁移能力及侵袭能力且呈浓度依赖性; WB法显示DHA下调E-cadherin、β-catenin、c-myc蛋白的表达水平,上调N-cadherin、Vimentin、GSK3β、Axin2蛋白的表达水平且呈浓度依赖性。结论:DHA可以抑制人胶质瘤U251细胞增殖、迁移及侵袭,其机制可能与其抑制Wnt/β-catenin通路从而抑制EMT相关进程。     

黄芩苷对高糖环境下肾小球系膜细胞增殖的影响

目的 探讨不同剂量的黄芩苷对高糖环境下肾小球系膜细胞(GMC)增殖的影响,以期探索黄芩苷防治DN的药效机制,为中医药防治DN提供新的视角和实验根据.方法 体外培养大鼠肾小球系统细胞(GMC)并分为9组:正常组(LG 5.5mmol/L)、模型组(HG 25mmol/L)、黄芩苷1组(HG 25mmol/L+黄芩苷3.125μmol/L)、黄芩苷2组(HG 25mmol/L+黄芩苷6.25μmol/L)、黄芩苷3组(黄芩苷(HG 25mmol/L+黄芩苷12.5μmol/L)、黄芩苷4组(HG25mmol/L+黄芩苷100μmol/L)、黄芩苷5组(HG 25mmol/L+黄芩苷50μmol/L)、黄芩苷6组(HG 25mmol/L+黄芩苷100μmol/L)和PKC抑制剂组(HG 25mmol/L+ PKC抑制0.5 nmol/L),每组设平行6孔,培养24h、48h、72h后,应用MTT比色法检测各组GMC增殖情况,倒置显微镜下观察各组GMC生长情况,评价黄芩苷对GMC生长的影响.结果 从各时间点测得的OD值可见,用药组与高糖组比较差异有统计学意义(P<0.05),黄芩苷组与PKC阳性药组比较差异均有统计学意义(P<0.05).从抑制率可见,24h时,除了黄芩苷6组(即给药剂量为100μmol/L)对高糖刺激后GMC增殖有抑制作用之外,其余各组对高糖刺激后GMC增殖均无抑制.48h、72h随着时间增加,各组对高糖刺激后GMC增殖的抑制率逐渐升高,且随着黄芩苷浓度增加抑制率逐渐增高.结论 高糖环境下,体外培养GMC存在异常增殖现象,黄芩苷对高糖刺激GMC增殖有抑制作用,且具有一定剂量效应关系.即抑制率随着黄芩苷浓度的增高而升高,尤其是25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L三组的时间剂量依赖关系更加明显,且在72h的时间点抑制率最高,抑制效果最佳.     

富血小板血浆PRP促进骨髓基质细胞增殖

目的：探讨富血小板血浆PRP（Platelet—Rich Plasma）对狗骨髓基质细胞BMSCs（Bone Marrow Stromal Cells）增殖的影响,并寻求其适宜的增殖浓度,为PRP用于牙周组织工程提供理论依据。方法：细胞培养技术和MTT法。结果：各实验组细胞增殖相对于对照组有显著性差别（P〈0．01）;实验组除第一天0．5％PRP组与另两组有显著差别外（P〈0．01）,其余时间点各实验组间均无差别（P〉0．05）;随着时间的增加,各时间点间有统计学意义（P〈0．01）。结论：自体PRP能促进狗骨髓基质细胞增殖;随着PRP浓度的增大,细胞增殖的趋势愈明显。     

华蟾素对Wnt/β-catenin通路抑制肾癌细胞增殖及侵袭的影响

目的 探讨华蟾素对肾癌细胞侵袭和迁移的影响,并探讨其对Wnt/β-catenin信号通路的调控机制。方法将肾癌细胞分为对照组（添加PBS）和华蟾素组（添加华蟾素）,CCK-8法检测细胞增殖力,Transwell侵袭和细胞迁移法检测细胞侵袭和迁移力,流式细胞检测细胞凋亡和细胞周期,免疫蛋白印迹法检测Wnt/β-catenin和上皮间质变（epithelial mesenchymal transition,EMT）信号通路相关蛋白表达。结果与对照组相比,华蟾素组可抑制肾癌细胞增殖,抑制细胞侵袭和迁移力,促进细胞凋亡,阻滞细胞周期 (P<005);E-cadherin蛋白表达上调(P<005),Wnt/β-catenin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达下调(P<005)。结论华蟾素可通过调控Wnt/β-catenin信号通路,逆转EMT,抑制肾癌细胞增殖和侵袭。     

七厘散含药血清对大鼠骨膜间质干细胞Wnt/β-catenin信号通路表达的影响

目的 探讨七厘散含药血清促进骨膜间质干细胞(BMSC)的增殖和成骨分化以及与Wnt/β-catenin信号通路的关系.方法 SD大鼠0.5 g ? kg-1七厘散灌服,灌胃6h制得含药血清;取幼龄SD大鼠骨膜通过密度梯度离心法分离纯化制备骨膜间质干细胞(BMSC),以制备所得的七厘散含药血清用于给药.实验分为正常组,含...     

脉冲电磁场对大鼠骨髓间充质干细胞增殖、成骨分化和Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的 探讨脉冲电磁场（pulsed electromagnetic fields, PEMFs）对大鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs）增殖、成骨分化以及对Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法 将培养的第3代大鼠BMSCs分为3组。3个组均以LG-DMEM完全培养基培养1 d,待细胞贴壁后更换新鲜培养基,对照组不做干预处理; PEMFs组进行8 Hz、3.8 mT的PEMFs干预,每天40 min,持续21 d;成骨诱导基(OM)组加入成骨诱导剂,不予磁场干预。采用MTT法测定增殖活性;碱性磷酸酶（ALP）、茜素红S染色进行成骨分化鉴定;利用实时荧光定量PCR（RT-PCR）技术检测Wnt/β-catenin信号通路及成骨分化相关基因的表达。结果 相较对照组,成骨诱导剂在干预第7、14、21 d可提高BMSCs的增殖活性（P<0.05）;PEMFs促增殖作用不明显。在BMSCs分化方面,PEMFs组及OM组ALP、茜素红S染色阳性强度均高于对照组（P<0.05）。定量RT-PCR结果显示,PEMFs组及OM组Wnt1、Wnt3a、LRP5、β-catenin、BMP-2、Runx2、ALP、OC mRNA的表达相较于对照组在相应时间点均有所上调（P<0.05）。PEMFs组各检测结果较OM组低,但趋势基本一致。结论 PEMFs在8 Hz、3.8 mT条件下可促进BMSCs的成骨分化,这可能与激活Wnt/β-catenin信号通路有关。     

Wnt／β-连环蛋白在高糖诱导心肌成纤维细胞增殖中的作用

目的：探讨Wnt／β-连环蛋白（Wnt／[β-catenin）在高糖诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞CFs增殖中的作用。方法：分离新生乳鼠CFs,构建高糖（25mmol／L）诱导CFs增殖细胞模型。采用Wnt／β-catenin抑制剂XAV939以及激动剂SKL2001调控Wnt／8-catenin信号通路。MTr法和细胞计数检测心肌细胞增殖,Westernblot法检测大鼠CFs中β-catenin的表达,实时荧光定量PCR（qPCR）检测增殖细胞核抗原（PCNA）的表达。结果：25mmol／L高糖刺激48h后CFs的细胞增殖显著增加,β-catenin表达显著升高（P〈0．01）,XAV939能抑制CFs增殖（P〈0．01）,降低高糖诱导β-catenin及PCNA的表达（P〈0．01）,SKL2001能对抗XAV939抑制高糖诱导CFs增殖的作用。结论：高糖诱导的CFs增殖可能与激活Wnt／β-catenin途径有关。     

急性白血病骨髓基质细胞对HL-60细胞增殖、分化的影响

目的 为探讨急性白血病骨髓基质对HL-60细胞的影响。方法 骨髓基质与白血病细胞共培养，采用MTT检测基质对白血病细胞的粘附，流式细胞仪检测粘附的HL-60细胞周期，非特异性酯酶及过氧化物酶染色观察白血病细胞分化及绘制白血病细胞生长曲线。结果 白血病骨髓基质对HL-60细胞的粘附率及粘附的白血病细胞处于G0／G1期比例均明显高于正常骨髓基质；正常骨髓基质对HL-60细胞的生长抑制作用及诱导分化作用均明显强于白血病基质。结论 急性白血病骨髓基质对HL-60细胞的增殖、分化作用均存在异常。     

大鼠骨髓基质细胞体外增殖分化的实验方法研究

目的:研究大鼠骨髓基质细胞(MSC)在体外增殖分化为神经元样细胞的条件,为MSC的移植提供实验参考。方法:用DMEM冲洗SD大鼠四肢骨的骨髓腔,通过密度梯度离心获得有核细胞后接种于DMEM/10%胎牛血清培养液中,观察在培养液中加入神经生长因子后对MSC的增殖、分化及存活的影响,并以β-巯基乙醇(β-ME)作对照观察MSC分化及分化后的存活情况。结果:在DMEM/10%胎牛血清培养液中加入神经生长因子后MSC增殖速度加快,培养7~9 d后有神经元样细胞形成,表达神经元特异性烯醇化酶(NSE)为(52±9.2)%,神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)为(15±7)%,细胞分化后继续培养仍可存活7 d以上。而用β-ME诱导MSC,6 h后表达NSE为(71.0±8.8)%,GFAP阴性,分化细胞24 h后逐渐死亡。结论:MSC在DMEM/10%胎牛血清培养液中加入神经生长因子后增殖速度加快,可以分化为神经元样细胞,分化细胞存活时间延长。     

三七总皂甙通过P38MAPK信号通路促进大鼠骨髓基质细胞向成骨细胞的增殖、分化

目的:研究P38MAPK信号通路在三七总皂甙调节大鼠骨髓基质细胞向成骨细胞增殖、分化的作用。方法:分离、纯化大鼠骨髓基质细胞(bonemarrow strowal cells,BMSCs),实验分诱导组、PNS组,SB203580组分别采用成骨诱导液、含100mg/LPNS的成骨诱导液及PNS诱导分化液加10uMSB203580培养,对各组细胞进行形态学观察,采用MTT法、对硝基苯磷酸盐法、茜素红染色方法观察各组细胞增殖、ALP活性、矿化结节的形成。结果:在3、5天各组细胞增殖无显著差异(P>0.05);在7、9天,PNS组细胞增殖明显高于诱导组及SB203580组(P<0.01),SB203580组低于骨诱导组(P<0.05)。PNS组ALP活性及钙结节染色高于骨诱导组和SB203580组(P<0.05～P<0.01),而SB203580组与骨诱导组比较无显著差异(P>0.05)。结论:BMSCs成骨诱导过程中,PNS可促进其成骨分化及增殖,其机制可能与P38MAPK信号通路活化相关。     

高糖对大鼠GMC表面β1整合素表达和ECM分泌的影响

目的观察高糖对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(GMC)表面β1整合素表达和细胞外基质(ECM)分泌的影响.方法应用不同浓度的葡萄糖刺激培养GMC,采用MTT法检测细胞增殖,RT PCR法检测GMC表面β1整合素的表达,ELISA法检测纤维连接蛋白(FN)、层粘蛋白(LM)的分泌情况.结果高糖抑制GMC的增殖,促进β1整合素的表达,且与FN和LM的分泌呈显著正相关,并具有浓度依赖性.结论高血糖作为糖尿病肾病的启动因素可能是通过上调β1整合素mRNA的表达,从而促进ECM成分FN和LM的合成分泌.