酪氨酸激酶抑制剂tyrphostin AG1478对乳腺癌细胞作用的机制探讨

目的:探讨表皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)的小分子酪氨酸激酶抑制剂tyrphostin AG1478对乳腺癌细胞的作用机制.方法:以乳腺癌细胞MCF-7(EGFR-/+)和MDA-MB-468(EGFR+++)为研究对象,采用MTT及克隆形成实验检测AG1478对乳腺癌MCF-7和MDA-MB-468细胞增殖和生长效应的影响;Western 印迹法测定EGFR、Akt和丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)的表达及活化水平;进一步应用FCM检测AG1478对MDA-MB-468细胞早期凋亡的影响.结果:AG1478 可抑制MDA-MB-468细胞的增殖和生长(P＜0.05),对MCF-7细胞增殖则无明显的抑制效应(P＞0.05);同时,MDA-MB-468细胞经AG1478处理后,细胞中磷酸化Akt(p-Akt)和磷酸化MAPK(p-MAPK)的表达水平明显降低(P＜0.05);FCM检测结果表明,AG1478可增加MDA-MB-468细胞的早期凋亡水平(P＜0.05).结论:AG1478可下调PI3K/Akt及Ras/Raf/MAPK信号通路,从而抑制乳腺癌MDA-MB-468细胞增殖及生长,并促进细胞凋亡;但其对MCF-7细胞无明显作用.     

EGFR信号通路调节A375细胞侵袭转移分子机制探讨

目的:探讨EGFR信号通路对人黑色素瘤A375细胞增殖、粘附和侵袭的影响及其分子机制。方法:用稀释克隆技术筛选EGFR高表达细胞株;采用MTT法检测A375细胞增殖和粘附情况;利用Boyden小室模型检测A375细胞体外侵袭力;WesternBlot法检测P-EGFR和P-AKT蛋白表达;半定量RT-PCR检测MMP-2,MMP-9,TIMP-1和TIMP-2mRNA表达。结果:EGF(10ng/ml)作用A375细胞24h时使P-EGFR和P-AKT蛋白表达明显升高,同时A375细胞对Matrigel基质胶的粘附力和体外侵袭力均明显提高(P<0.05),但作用时间达72h时才表现出促细胞增殖作用;AG1478(20!mol/L)和LY290042(10!mol/L)分别封闭EGFR和PI3K活性后均能阻止EGF的作用,并以时间依赖方式抑制A375细胞生长(P<0.01),降低细胞粘附力和体外侵袭力(P<0.01)。EGF具有上调MMP-2,MMP-9和下调TIMP-1,TIMP-2mRNA表达水平作用,而AG1478能下调MMP-2,MMP-9和上调TIMP-1mRNA表达水平,但对TIMP-2mRNA表达改变不明显,结果使MMP-2/TIMP-2和MMP-9/TIMP-1mRNA比值均明显下降。结论:EGFR—PI3K/AKT信号通路参与调节黑色素瘤侵袭转移过程,MMP-2/TIMP-2和MMP-9/TIMP-1mRNA比值变化可能发挥重要作用。     

蛋白激酶C和JNK在溶血磷脂酸诱导人肺成纤维细胞MCP-1表达中的作用

目的：研究蛋白激酶C（PKC）和c-Jun氨基末端激酶（JNK）在溶血磷脂酸（LPA）诱导人肺成纤维细胞（HLF-1）单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）表达中的作用。方法：培养HLF-1细胞,以不同浓度（0、1、3和10 μmol/L）的LPA处理细胞不同时间（0.5、6、12和24 h）后,ELISA检测细胞培养基上清液中MCP-1的蛋白表达,荧光定量PCR检测MCP-1 mRNA的表达水平。用不同浓度的PKC抑制剂Bisindolylmaleimide I（0、0.1、1和10 μmol/L）或JNK抑制剂SP600125（0、0.1、1和10 μmol/L）预孵育细胞30 min后,用LPA（10 μmol/L）刺激2或6 h后,ELISA方法检测细胞培养基上清液中MCP-1的蛋白表达,荧光定量PCR检测MCP-1 mRNA的表达水平。用PKC抑制剂Bisindolylmaleimide I（1 μmol/L）预孵育30 min,以浓度为10 μmol/L的LPA处理细胞不同时间（0、5、30和60 min）后,Western blot检测c-Jun蛋白磷酸化水平。结果：LPA可诱导HLF-1细胞MCP-1蛋白释放,并呈剂量效应和时间效应关系。LPA的浓度为10 μmol/L时,HLF-1细胞释放MCP-1蛋白的量是对照组的2.4倍（P < 0.05）;细胞在LPA处理24 h后,MCP-1蛋白的释放量较对照组增加约1倍（P < 0.05）。LPA可诱导HLF-1细胞MCP-1 mRNA的表达并呈时间效应,LPA处理2 h后,MCP-1 mRNA表达水平是对照组的5.3倍（P < 0.05）。PKC抑制剂Bisindolylmaleimide I和JNK抑制剂SP600125均可显著抑制LPA诱导的HLF-1细胞MCP-1 mRNA表达及MCP-1蛋白释放。Bisindolylmaleimide I的浓度为1 μmol/L时可阻断LPA诱导的HLF-1细胞MCP-1蛋白释放量的60%（P < 0.05）,浓度为3 μmol/L时对MCP-1 mRNA表达有明显抑制效果,抑制率达40%（P < 0.05）;而SP600125的浓度为1 μmol/L时可阻断LPA诱导的HLF-1细胞MCP-1蛋白释放量的78%（P < 0.05）,对MCP-1 mRNA表达有明显抑制效果,抑制率达87%（P < 0.05）。10 μmol/L的LPA可显著诱导HLF-1细胞c-Jun磷酸化,同时PKC抑制剂Bisindolylmaleimide I（1 μmol/L）可显著抑制LPA（10 μmol/L）诱导的HLF-1细胞c-Jun磷酸化。结论：PKC与JNK通路均参与LPA诱导HLF-1细胞MCP-1的表达。     

TGF-β1通过TRAF6活化Notch3信号通路促进卵巢癌细胞迁移和侵袭的研究

背景与目的：转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)与Notch3在卵巢肿瘤组织中的异常表达与扩增分别与肿瘤转移和患者的低生存率有关。尽管TGF-β1与Notch3信号通路的交互作用促进多种肿瘤细胞的侵袭和转移,但其具体机制尚存在争议。该研究通过体外细胞学实验,探究TGF-β1与Notch3信号通路对卵巢癌细胞生物学行为的影响及其可能的相互作用机制。方法：以上皮性卵巢癌细胞Hey A8和Hey为细胞模型,用ELISA检测培养上清液中TGF-β1的表达;分别用500 ng/mL TGF-β1中和抗体(对照组)、10 ng/mL TGF-β1、50 μmol/L DAPT、10 ng/mL TGF-β1和50 μmol/L DAPT、50 μmol/L TRAF6多肽抑制剂、10 ng/mLTGF-β1和50 μmol/L TRAF6多肽抑制剂处理细胞,采用蛋白［质］印迹法(Western blot)检测各处理组TGF-β1和Notch3信号通路分子以及TRAF6蛋白表达水平的变化;采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)、划痕实验和Transwell小室测定各处理组细胞增殖、迁移和侵袭能力的变化。结果：Hey A8和Hey细胞培养上清液中TGF-β1浓度随时间延长而明显增加;与对照组相比,TGF-β1处理组Notch3-ICD、Hes1表达增加,Notch3抑制剂DAPT与TGF-β1共同处理组Notch3-ICD、Hes1表达水平无明显变化,TGF-β1明显促进细胞增殖、迁移和侵袭,Notch3抑制剂DAPT削弱了TGF-β1对卵巢癌细胞的促增殖、迁移和侵袭能力,说明TGF-β1通过激活Notch3信号通路促进卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭;进一步研究发现,TGF-β1激活Notch3信号通路的同时上调TRAF6表达,特异性抑制TRAF6能够抑制TGF-β1对Notch3信号通路的激活作用。结论：TGF-β1可能通过TRAF6活化Notch3信号通路,从而促进卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

胞黏蛋白对结直肠癌细胞增殖的影响及作用机制的初步探讨

目的:探讨胞黏蛋白在人结直肠癌细胞增殖中的作用及可能的作用机制.方法:分别采用RT-PCR法和免疫荧光法检测结直肠癌HT-29、HCT-116、SW620和SW480细胞中胞黏蛋白的表达情况.MTT法检测阻断剂SecinH3阻断胞黏蛋白,或小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)干扰胞黏蛋白-2(ARNO)表达后对HT-29细胞增殖的影响.蛋白质印迹法检测SecinH3阻断或ARNO-siRNA干扰对HT-29细胞中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)通路分子激活情况的影响,对HCT-116细胞中胰岛素样生长因子Ⅰ型受体(insulin-like growth factor type Ⅰ receptor,IGF-IR)通路分子激活情况的影响.结果:胞黏蛋白的4个亚型在HT-29、HCT-116、SW620和SW480细胞中均有表达:其中以ARNO的表达量较高;SecinH3处理HT-29细胞后使细胞生长受到抑制,作用72 h后细胞增殖抑制率达(57.22±1.01)％,ARNO- siRNA干扰ARNO蛋白的表达亦能使该肿瘤细胞的增殖受到抑制,ARNO- siRNA转染HT-29细胞48 h后,其细胞增殖抑制率为(58.95±3.42)％.蛋白质印迹法检测结果提示,阻断剂SecinH3及ARNO-siRNA均能下调结直肠癌细胞中ARNO蛋白的表达,使HT-29细胞中EGFR信号通路、HCT-116细胞中的IGF-IR信号通路受到抑制,其相应的下游信号通路因子亦出现明显的下调.结论:胞黏蛋白与EGFR或IGF-IR信号通路的活化具有相关性,其有可能成为结直肠癌治疗的一个新的靶点.     

PI3K/AKT信号通路参与AG1478对肺癌细胞中FOXO3a分子的上调及核转位

目的:探讨表皮生长因子酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)AG1478对非小细胞肺癌细胞(NSCLC)中叉头转录因子O3a(FOXO3a)表达及其在细胞核质分布的调控及分子机制。方法:Western blot法检测AG1478及EGFR下游信号通路抑制剂LY294002、U0126、AG490作用后A549细胞中FOXO3a的表达及其在细胞核质分布情况。瞬时转染AKT、FOXO3a小干扰RNA(siRNA),RT-PCR及Western blot检测转染效率及相关蛋白的表达改变。结果:AG1478呈时间依赖性诱导FOXO3a表达上调并促进其核转位。与U0126、AG490相比,PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002呈时间依赖性抑制p-FOXO3a的表达,促进其核转位;沉默AKT后,p-AKT及p-FOXO3a分子的表达明显下调。结论:AG1478可能通过PI3K/AKT信号通路上调FOXO3a的表达并促进其核转位,进而下调FOXM1及下游增殖蛋白的表达,抑制肺癌细胞的增殖,提示FOXO3a为肺癌治疗及药物开发的重要靶点。     

全氟辛酸对HK-2 细胞的毒性及对α-酮戊二酸盐受体1 表达的影响

目的： 研究全氟辛酸(perfluorooctanoic acid, PFOA)对HK-2细胞的毒性,及其对α-酮戊二酸盐受体1(oxoglutarate receptor 1,OXGR1)表达的影响。方法：采用MTT法检测不同浓度(0、0.1、1、10、100、1 000 μmol/L)PFOA对HK-2细胞增殖的影响。RT-PCR法检测0、100、300 μmol/L PFOA对HK-2细胞中OXGR1、琥珀酸盐受体1(succinate receptor 1,SUCNR1)、缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)mRNA表达的影响。当PFOA为300或0 μmol/L时,采用MTT法检测不同浓度(0、1、10、100、1 000、10 000 μmol/L) OXGR1配基α-酮戊二酸钠(α-ketoglutarate sodium, AKG)对HK-2细胞增殖的影响。流式细胞术检测300 μmol/L PFOA和100 μmol/L AKG共同作用HK-2细胞48 h后细胞的凋亡情况。结果：在培养24 h条件下,PFOA达1 000 μmol/L时可表现出毒性作用(P<0.01)。在培养48或72 h条件下,PFOA≥100 μmol/L时表现出毒性作用(P<0.01)。RT-PCR结果显示,PFOA可上调HK-2细胞中OXGR1 mRNA表达(P<0.01),但对SUCNR1及HIF-1α mRNA表达无明显影响(P>0.05)。MTT及流式细胞术检测结果显示,AKG与PFOA可协同作用抑制HK-2细胞增殖(P<0.01)并诱导细胞凋亡(P<0.05)。 结论：PFOA对HK-2细胞具有增殖抑制作用,并可上调细胞OXGR1 mRNA表达;PFOA可诱发HK-2细胞凋亡;AKG可与PFOA产生协同作用,该协同作用可能与OXGR1有关。     

硫链丝菌肽下调FOXM1的表达对肺癌细胞生长及凋亡的影响

目的 探讨硫链丝菌肽（TST）对肺癌细胞A549增殖、凋亡及其对AG1478 （EGFR-TKI）药物敏感性的影响.方法 CCK-8法检测TST、AG1478单药及两药联用后A549细胞的增殖抑制率;Western blot检测TST对叉头转录因子M1（FOXM1）表达的影响;Caspase-3比色测定法检测TST对Caspase-3活化程度的影响;利用RNAi技术沉默A549细胞中FOXM1基因,检测FOXM1及增殖凋亡相关分子表达变化.结果 TST增加A549细胞对肺癌靶向药物AG1478的敏感性,其IC50值由（4.35±0.45） μmol/L降至（0.73±0.05） μmol/L（t=11.02,P＜0.05）;TST抑制FOXM1及下游c-Myc、Cyclin B1、Bel-2分子的表达,上调P21、Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP表达的同时,呈时间及剂量依赖性诱导Caspase-3分子活化;沉默FOXM1后其下游分子c-Myc、Cyclin B1、Bcl-2、P21及Cleaved PARP的表达改变同TST作用后相似,细胞中Cleaved Caspase-3的荧光表达明显增多.结论 TST介导的FOXM1下调可抑制A549细胞增殖,诱导其凋亡,并增加其对AG1478的药物敏感性.     

mTOR 信号通路在 17-DMAG 克服 EML4-ALK 阳性肺癌细胞株H3122对alectinib耐药中的作用机制研究

目的 观察mTOR信号通路在17-DMAG克服旁路信号通路激活诱导棘皮动物微管相关蛋白样4与间变性淋巴瘤激酶（echinoderm microtubule-associated protein like 4-anaplastic lymphoma kinase,EML4-ALK）融合基因阳性肺癌细胞株H3122（以下简称“H3122细胞”）对alectinib耐药中的变化,并探讨其内在的调控机制。方法 加入100 ng/mL转化生长因子α（transforming growth factor-α,TGF-α）和100 ng/mL表皮生长因子（epidermal growth factor ,EGF）诱导H3122细胞对alectinib耐药,观察加入17-DMAG后上述耐药能否被克服。采用CCK-8法检测不同处理方式下H3122细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质免疫印迹（Western blot）技术检测不同处理方式下细胞中ALK、EGFR及其磷酸化蛋白的表达,观察其下游mTOR信号通路关键蛋白及活化水平的表达情况。结果 alectinib作用72 h后H3122细胞增殖率随药物浓度升高而下降,IC₅₀为0.042 μmol/L;联合TGF-α或EGF后H3122细胞对alectinib耐药,IC₅₀ 远大于10 μmol/L;单药17-DMAG处理后H3122细胞增殖率随药物浓度升高而下降,IC₅₀为 0.245 μmol/L;联合TGF-α或EGF后H3122细胞增殖率亦被17-DMAG抑制,且呈剂量依赖性,IC₅₀分别为 0.251 μmol/L和0.301 μmol/L。经0.05 μmol/L alectinib作用72 h后H3122细胞凋亡率为（30.01±0.92）%,alectinib联合TGF-α或EGF后细胞凋亡率分别为（6.36±0.14）%和（6.13±0.21）%,显著低于alectinib单药处理（P＜0.001）;经0.3 μmol/L 17-DMAG单药或联合TGF-α、EGF作用72 h后H3122细胞凋亡率分别为（28.37±1.75）%、（26.69±1.2）%和（26.62±0.72）%,差异无统计学意义（P＞0.05）。alectinib可抑制H3122细胞中p-ALK、p-mTOR的表达,也可抑制mTOR上、下游关键蛋白的活化状态;EGF可明显增加细胞中p-EGFR、p-mTOR及mTOR上、下游关键蛋白的活化水平表达;alectinib可抑制p-ALK表达,但联合EGF后不能抑制mTOR及mTOR上、下游关键蛋白活化水平的表达;即使联合EGF后,17-DMAG亦能抑制H3122细胞中ALK、EGFR、mTOR信号通路蛋白及其活化状态蛋白的表达。结论 旁路信号通路激活介导EML4-ALK融合基因阳性肺癌细胞株H3122对alectinib耐药的方式具有可行性,mTOR信号通路在 17-DMAG克服旁路信号通路激活引起alectinib的获得性耐药过程中有一定作用。     

EGF和TGF-α促进子宫内膜癌细胞增殖信号转导通路的研究

目的:探讨表皮生长因子(EGF)和转化生长因子α (TGF-α)促进子宫内膜癌细胞增殖的信号转导通路.方法:应用不同浓度的EGF和TGF-α分别处理子宫内膜癌细胞Ishikawa, MTT法检测细胞增殖,Western blot分析EGF和TGF-α处理后,不同时间MAPK通路关键分子ERK1/2的磷酸化水平和调控增殖的重要分子Survivin蛋白的表达.然后应用特异性的MAPK通路阻断剂U0126预处理细胞,观察EGF和TGF-α对细胞增殖和Survivin蛋白表达的影响.结果:不同浓度的EGF和TGF-α均促进了Ishikawa细胞增殖.与对照组相比,0.1、1、10和100 ng/mL的EGF处理组细胞增殖率分别为(112.12±10.23)%、(138.39±6.85)%、(165.50±15.20)%和(162.86±15.17)%;0.1、1、10和100 ng/mL的TGF-α处理组细胞增殖率分别为(102.87±6.44)%、(121.97±3.51)%、(144.42±11.60)%和(141.12±13.50)%.EGF和TGF-α还迅速诱导了ERK1/2的磷酸化,并使Survivin蛋白水平增加了8.35和9.42倍.MAPK通路阻断剂U0126则完全抑制了EGF和TGF-α诱导的ERK1/2磷酸化,阻断了MAPK通路的激活.阻断MAPK通路还明显抑制了EGF和TGF-α诱导的细胞增殖和Survivin蛋白表达的上调.结论:EGF和TGF-α能够促进子宫内膜癌细胞增殖,其机制是通过激活MAPK通路引起Survivin蛋白表达的增加,从而引发增殖的生物学效应.     

Embelin对大肠癌细胞株SW480细胞增殖和凋亡的影响

目的研究Embelin 对大肠癌细胞株SW480 细胞增殖和凋亡的影响。方法SW480细胞在一系列浓度Embelin处理48 h以后,噻唑蓝(MTT)法和流式细胞仪分别定量测定细胞增殖抑制率和凋亡率,Western blot 检测Cyclin D1、survivin 和XIAP的表达水平。结果Embelin可显著抑制SW480的细胞增殖和诱导凋亡,其作用呈浓度依赖性,作用48 h时半数抑制浓度(IC50)为37.02 μM;20 μM 时细胞凋亡率为(15.3±2.5)%,与40 μM时和80 μM时细胞凋亡率相比,差异有统计学意义 (P<0.05,P<0.01)。但相同浓度的Embelin 作用时,细胞的凋亡率低于增殖抑制率。增殖抑制作用可能与下调Cyclin D1蛋白的表达有关。结论Embelin可显著抑制SW480的细胞增殖和诱导细胞凋亡,并可作为一个潜在的具有抗肿瘤活性的化学药物。     

表皮生长因子受体和细胞外信号调节激酶的表达与舌鳞状细胞癌转移关系的观察

目的　了解表皮生长因子受体 (EGFR )和细胞外信号调节激酶 (ERK )在舌鳞状细胞癌中的表达 ,探讨EGFR和ERK与肿瘤增殖、转移的关系。方法　应用免疫组织化学SABC方法 ,分别对 90例舌鳞状细胞癌术后组织标本的EGFR、活化ERK 1/2和Ki 67进行检测 ,并对各因子间的表达关系进行统计分析。结果　在 90例舌鳞状细胞癌组织中 ,2 6例证实有颈部淋巴结转移 ,EGFR、活化ERK 1/2及Ki 67的阳性表达率分别为 93 .3 3 % ( 84/90 )、10 0 .0 0 % ( 90 /90 )和 10 0 .0 0 % ( 90 /90 ) ,阳性细胞分布和反应强度均以肿瘤深部边界区域最为明显 ,统计分析显示EGFR、活化ERK 1/2与肿瘤细胞增殖和肿瘤转移之间呈明显的正相关 (P <0 .0 1)。结论　EGFR、活化ERK 1/2在舌鳞状细胞癌细胞中多呈现过度表达与肿瘤的增殖、转移密切相关     

吉非替尼与紫杉醇联合对卵巢癌细胞凋亡影响的观察

目的:探讨吉非替尼联合紫杉醇诱导人卵巢癌细胞凋亡的影响。方法:吉非替尼单独或联合紫杉醇作用卵巢癌HO8910细胞,以蛋白质印迹法检测EGFR下游信号磷酸化Akt(p-Akt)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)和细胞核增殖抗原(PCNA),以MTT法检测细胞增殖率,FCM法检测细胞周期分布和凋亡。结果:吉非替尼单用在0.25～4.00μmol/L浓度范围内呈浓度依赖性抑制卵巢癌HO8910细胞增殖,1.0μmol/L浓度单独作用24h则细胞周期主要分布于G1期,p-Akt、p-ERK和PCNA蛋白水平下降,72h时细胞凋亡增加,与对照组比较,差异均有统计学意义,P<0.05。吉非替尼与紫杉醇合用不仅能更显著的抑制细胞增殖,而且凋亡细胞显著增加(P<0.05),与对应浓度单用紫杉醇比较,差异均有统计学意义,P<0.05。结论:吉非替尼与紫杉醇合用能显著抑制卵巢癌HO8910细胞增殖、诱导凋亡,两种药物合用具有协同作用。     

Lupalbigenin通过EGFR信号通路抑制非小细胞肺癌NCI-H1975细胞增殖

目的:探究Lupalbigenin是否通过表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)信号通路诱导非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)系中NCI-H1975细胞增殖。方法:主要采用了MTT法检测细胞毒性;用细胞形态学观察、细胞迁移实验、细胞克隆形成实验观察及检测细胞增殖能力;通过蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测Lupalbigenin对EGFR和其下游MAPK信号通路蛋白ERK及其磷酸化水平及其凋亡相关Cleaved PARP、P21、CDK4、CDK6、CyclinD1和CyclinA2以及抗凋亡蛋Bcl-2的影响。结果:结果显示Lupalbigenin在NCI-H1975细胞系上IC₅₀值为3.246μmol/L,并且呈浓度依赖性抑制细胞增殖;细胞形态学观察结果显示与空白组比较,10μmol/L Lupalbigenin实验组处理细胞24 h导致细胞核固缩、细胞质凝聚及细胞凋亡显著增加;迁移实验和集落形成实验结果显示,5μmol/L LG能够显著抑...     

胃泌素及其受体拮抗剂对人胃癌细胞株MKN45增殖及HB-EGF表达的影响

目的探讨胃泌素-17及其受体拮抗剂丙谷胺对人胃癌细胞株MKN45增殖及肝素结合表皮生长因子样生长因子（HB-EGF）表达的影响。方法MTT法观察细胞增殖活力;Western blot测定肝素结合表皮生长因子样生长因子（HB-EGF）蛋白的表达。结果MTT结果显示胃泌素-17在10-6～10-9 mol/L时具有明显的促MKN45细胞增殖作用(P<0.05);丙谷胺在10-2～10-3 mol/L时显著抑制MKN45细胞增殖(P<0.05);胃泌素+丙谷胺组中,丙谷胺（10-2～10-3 mol/L）能阻断并抑制胃泌素对胃癌细胞MKN45的促增殖作用（P<0.05）。同时,Western blot结果显示胃癌细胞株MKN45中有HB-EGF蛋白的表达。胃泌素-17在10-6～10-9 mol/L时可显著增强MKN45细胞株中HB-EGF蛋白表达（P<0.05）;丙谷胺（10-2～10-3 mol/L）能阻断并抑制G-17（10-8 mol/L）诱导的HB-EGF蛋白表达上调（P<0.05）。 结论胃泌素-17促进人胃癌细胞MKN45增殖,其受体拮抗剂丙谷胺能阻断这一促进作用。胃泌素受体拮抗剂丙谷胺能抑制人胃癌细胞MKN45增殖。胃癌细胞株MKN45中有HB-EGF蛋白的表达,胃泌素-17促进HB-EGF蛋白表达上调,其受体拮抗剂丙谷胺能阻断并抑制这一促进作用。     

Thiostrepton介导FOXM1下调对非小细胞肺癌细胞生长及其AG1478药物敏感性的影响

目的:探讨硫链丝菌素(thiostrepton,TST)对肺癌细胞A549增殖及其对AG1478药物敏感性的影响。方法:CCK-8法检测TST、AG1478单药及两药联用后A549细胞的增殖抑制率;Western blot检测不同浓度TST对A549细胞中FOXM1的表达影响;利用RNAi技术沉默A549细胞中FOXM1基因,RT-PCR及Westernblot检测转染效率;集落形成实验检测转染前后细胞集落形成能力的改变。结果:TST明显抑制A549细胞增殖并提高其对AG1478的药物敏感性。TST呈剂量依赖性抑制FOXM1、c-myc、CyclinB1及Bcl-2表达;与对照组相比,FOXM1 siRNA转染组的FOXM1 mRNA及蛋白表达均下降,其下游c-myc、Bcl-2的表达下降,Cleaved-PARP的表达明显上调;转染组集落数为(32.0±3.0)个,明显低于空白组及阴性对照组(NC)[集落数分别为(146.0±4.6)个、(128.7±5.7)个],P<0.05。转染组及NC组细胞集落形成抑制率分别为78.08%、11.87%,转染后细胞的集落形成能力明显降低(P<0.05);AG1478单药组的IC50值是TST与AG1478联用组的5.96倍,P<0.05。结论:TST可能通过下调FOXM1的表达抑制A549细胞的增殖、诱导其凋亡,并增加其对AG1478的药物敏感性。     

ERK通路在调节子宫内膜癌增殖凋亡侵袭中的作用

背景与目的 探讨胰岛素/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路在调节子宫内膜癌细胞增殖、凋亡和侵袭中的作用.方法 将无血清饥饿的子宫内膜癌Ishikawa3-H-12细胞分为空白对照组、1×10<'6>mol/L胰岛素单独刺激组以及不同浓度MEK抑制剂PD98059预处理后再用胰岛素刺激组.Western blot检测各组ERK磷酸化(P-EPK)水平,MTF试验观察细胞增殖、流式细胞仪观察细胞凋亡、transwell小室观察细胞侵袭情况.结果 胰岛素可引起子宫内膜癌细胞ERK活化并以浓度依赖模式被PD98059完全阻断.胰岛素显著促进子宫内膜癌细胞增殖.PD98059可以阻断胰岛素诱导的细胞增殖,在24 h、48 h、72 h三个时间点均有统计学差异(F=204.160;33.850;90.764,均P<0.001).胰岛素显著抑制子宫内膜癌细胞凋亡,并以浓度依赖模式为PD98059所阻断(F=165.99,P<0.001).胰岛素明显增加子宫内膜癌细胞侵袭,PD98059可以部分阻断胰岛素诱导的细胞侵袭(F=23.841,P<0.001).结论 胰岛素可以促进子宫内膜癌细胞增殖、抑制细胞凋亡,此过程是ERK途径依赖的;胰岛素可以增加子宫内膜癌细胞侵袭能力.此过程是部分ERK途径依赖的.     

唑来膦酸影响人鼻咽癌HNE-1细胞增殖和凋亡的体外实验

目的 观察唑来膦酸对鼻咽癌细胞系HNE-1的增殖抑制及凋亡诱导作用并探索其相关机制。方法 MTT法检测体外细胞增殖能力;流式细胞仪分析细胞凋亡和细胞周期变化;原位末端标记法 (TUNEL) 检测DNA片段化以标记凋亡细胞;Real-time PCR和Western blot检测凋亡相关基因Bcl-2、Bad、Bax及 Caspase-9 mRNA和蛋白表达。结果 MTT显示不同浓度唑来膦酸处理组(2.5、5、10、20、40 μmol/L)作用24 h,对 HNE-1细胞增殖无抑制作用(P>0.05);作用48和72 h均能明显抑制 HNE-1 细胞增殖(P<0.05);但抑制增殖能力与药物浓度和作用时间未呈时效和量效关系(P>0.05)。10~40 μmol/L唑来膦酸处理后,48和72 h 的早期凋亡率明显高于对照组;S期细胞比例较对照组升高 (P＜0.01);TUNEL 法染色显示,作用72 h后凋亡 细胞明显增多(P<0.05);Real-time PCR和Western blot显示,唑来膦酸下调Bcl-2 mRNA和蛋白的表达,同时上调Bad、Bax及Caspase-9 mRNA和蛋白表达。结论 唑来膦酸可以抑制HNE-1细胞增殖,诱导HNE-1细胞凋亡,可能与促进Bad、Bax及Caspase-9的表达并降低Bcl-2的表达有关。     

黄卡瓦胡椒素B促进EGFR的降解进而抑制H1975肺癌细胞的增殖和迁移

目的:研究黄卡瓦胡椒素B对肺癌细胞H1975增殖及迁移的影响并探讨其机制。方法:培养H1975肺癌细胞株，用不同浓度的黄卡瓦胡椒素B处理细胞24、48和72 h后，采用CCK-8法检测黄卡瓦胡椒素B对H1975细胞增殖的影响。Transwell实验检测黄卡瓦胡椒素B对H1975细胞迁移能力的影响。Western blotting 检测20 μmol/L和40 μmol/L黄卡瓦胡椒素B处理16 h后对H1975细胞EGFR-AKT信号通路相关蛋白表达的影响。采用qPCR技术检测黄卡瓦胡椒素B对H1975细胞EGFR mRNA水平的影响。Western blotting 检测黄卡瓦胡椒素B对H1975细胞LC3-Ⅰ/Ⅱ蛋白表达的影响。CCK-8实验和Transwell实验分别检测黄卡瓦胡椒素B与EGFR小分子抑制剂联用对H1975细胞增殖和迁移的影响。结果:黄卡瓦胡椒素B在体外能抑制H1975细胞的增殖，且抑制作用呈浓度依赖性。黄卡瓦胡椒素B处理组细胞迁移数明显减少（P＜0.05）。Western blotting结果显示，使用黄卡瓦胡椒素B 处理16 h后，H1975肺癌细胞的EGFR、p-AKT和AKT蛋白表达水平明显降低(P＜0.05)，但EGFR mRNA水平无显著改变。当巴佛洛霉素A1（Bafilomycin A1，BAF）或氯喹 (Chloroquine,CQ)阻断自噬时，黄卡瓦胡椒素B诱导的对EGFR蛋白的抑制作用被逆转，并且10、20和40 μmol/L黄卡瓦胡椒素B可促进H1975细胞LC3-Ⅱ蛋白表达。黄卡瓦胡椒素B与EGFR小分子抑制剂联用能够抑制H1975细胞的增殖和迁移以及p-EGFR和p-AKT的表达。结论:黄卡瓦胡椒素B通过促进EGFR的降解进而抑制H1975肺癌细胞的增殖和迁移。