放疗对血清miR-150-5p和miR-23a-3p表达水平的影响

目的 通过采集肿瘤患者放疗前后外周血,探讨照射对人外周血血清miR-150-5p、miR-23a-3p表达的影响,以期为寻找辐射生物标志物提供科学依据。方法 以2021年10月至2022年3月63例行放疗的肿瘤患者为研究对象,采用实时荧光定量PCR(qPCR)方法,检测患者放疗前后外周血血清miR-150-5p与miR-23a-3p的相对表达水平。比较两种miRNAs放疗前后在患者外周血血清中的差异表达变化,分析其与肿瘤类型等因素的关系。结果 放疗后,患者外周血血清miR-150-5p与miR-23a-3p的相对表达量明显低于放疗前(t=4.97,Z=-2.77,P<0.05)。不同的肿瘤类型中,乳腺癌、食管癌和其他消化道肿瘤患者放疗后miR-150-5p的相对表达量降低(t=3.47、2.47、2.87,P<0.05),消化道肿瘤患者放疗后miR-23a-3p相对表达量下降(Z=-1.99,P<0.05)。在放疗前、后miR-150-5p的表达改变均不受性别、年龄、化疗和肿瘤类型等因素影响(P>0.05),而miR-23a-3p的表达改变在放疗后受性别、年龄和化疗等因素影响(t=2.04、 -3.34、-2.29,P<0.05)。结论 放疗可影响肿瘤患者血清中miR-150-5p的表达,其有作为辐射生物学标志物的潜力。     

miR-214-5p通过靶向调控PTEN的表达对破骨分化和骨质疏松的影响

 目的 探讨miR-214-5p通过靶向调控PTEN的表达对破骨分化和骨质疏松的影响。方法 选取2019-03至2020-05在空军军医大学唐都医院外科进行脊柱手术的骨质疏松患者20例(骨质疏松组),同时选取非骨质疏松症患者20例为对照组,抽取两组骨髓血。将miR-214-5pmimics(miR-214-5pmimics组)、miR-214-5p空质粒(miR-214-5pvector组)、shZFAS1载体(sh PTEN组)、shZFAS1空载体(sh vector组)转染到骨质疏松患者细胞,对照组细胞不进行任何转染处理。采用RT-qPCR 检测骨髓单个核细胞中的miR-214-5p和PTEN mRNA及 Raw264.7单核巨噬细胞中NFaTc1、MMP9、TRAP、CTSK的mRNA水平;通过TRAP染色检测TRAP染色的阳性率;通过Western blot 检测PTEN、NFATc1、AKT和PI3K蛋白水平。结果 骨质疏松组miR-214-5p水平的表达明显高于对照组(P＜0.001),骨质疏松组PTEN的表达显著低于对照组(P=0.009);miR-214-5pmimics组中TRAP表达阳性率明显高于对照组和miR-214-5p vector组(P＜0.001);sh PTEN组中TRAP表达阳性率明显高于对照组和sh vector组(P＜0.001);miR-214-5p mimics组中的NFaTc1、MMP9、TRAP和CTSK水平显著高于对照组(P<0.001);sh PTEN组中的NFaTc1、MMP9、TRAP和CTSK水平显著高于对照组(P<0.001);与miR-214-5p mimics组相比,miR-214-5pmimics+PTEN组中TRAP表达阳性率显著降低(P＜0.001)。结论 骨质疏松症患者的骨髓单个核细胞中miR-214-5p表达上调,miR-214-5p可以调控PTEN表达,过表达miR-214-5p可能通过靶向PTEN促进破骨细胞分化。     

创伤性脑损伤患者高压氧治疗后血清miR-3195、miR-328-5p和miR-6867-5p水平及其与预后的关系

目的:探讨创伤性脑损伤患者高压氧治疗后血清miR-3195、miR-328-5p和miR-6867-5p水平及其与预后的关系。方法:选取2018年5月至2020年8月在山西医科大学第一医院就诊的124例创伤性脑损伤患者作为研究对象,根据患病后6个月患者的格拉斯哥预后评分(GOS),将其分为预后良好组( n＝...     

5-脱氧氮杂胞苷逆转食管鳞癌细胞系p16基因转录表达研究

目的：探讨5种食管鳞癌细胞株中p16基因转录失活以及去甲基化药物对其作用的机制.方法：采用细胞培养、PCR、DHPLC、MSP、Northern印迹、MTT等方法,检测EC1,EC18,EC109,TE1,TE10食管鳞癌细胞株中p16基因的缺失、突变、甲基化状态和p16的转录表达,观察去甲基化药物5-脱氧氮杂胞苷对p16基因转录表达和细胞增殖能力的影响.结果：除了EC1,其余4种食管鳞癌细胞株均检测出p16基因的不同变化：纯合缺失（EC18）,纯合型甲基化（EC18,EC109）,杂合型甲基化（TE1,TE10）,且纯合缺失的发生率较低（20%）,甲基化的发生率较高（80%）,经过5-Aza-CdR处理,可见2株发生了杂合型甲基化的TE1和TE10细胞p16基因的转录表达得到了逆转.结论：不同食管鳞癌细胞株p16基因转录失活的原因是不同的,启动子区甲基化为主要原因,其中杂合型甲基化可以被去甲基化药物5-脱氧氮杂胞苷逆转,使p16的转录表达上调.     

尿液miR-17-5p检测对膀胱癌的诊断价值

目的探讨膀胱癌患者尿液中微小核糖核酸17—5p（miR-17-5p）表达及其诊断价值。方法运用荧光定量PCR检测miR-17-5p在膀胱癌患者尿液中的表达水平,采用△△CT方法计算膀胱癌患者与正常人尿液中miR-17．5p表达量的比值,结合术后病理参数,统计分析miR-17-5p与临床病理资料的相关性。结果膀胱癌患者尿液中miR-17-5p表达较正常人明显升高。26例膀胱癌患者中18例（69．2％）的miR-17-5p表达较正常人显著升高,且与肿瘤大小和恶性程度相关,肿瘤越大、恶性程度越高,尿液中miR-17-5p的表达量越高。结论尿液中高表达miR-17—5p可能成为诊断膀胱癌的重要标志物,并与膀胱癌的临床病理密切相关,可能对膀胱癌的诊断提供新的思路。     

miR-218-5p抑制NRAS表达调控非小细胞肺癌细胞增殖及凋亡

目的 探究miR-218-5p靶向调控NRAS基因表达在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）细胞增殖和凋亡中的作用及其机制。方法 qRT-PCR和Western blot分别检测组织和细胞中miR-218-5p和NRAS的表达。取NSCLC细胞A549进行分组和转染：Blank组、NC组、miR-218-5p mimic组、miR-218-5p inhibitor组、si-NRAS组、oe-NRAS组、miR-218-5pmimic+oe-NC组和miR-218-5pmimic+oe-NRAS组。荧光素酶报告实验验证miR-218-5p与NRAS基因的靶向关系。MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果 miR-218-5p在NSCLC组织及NSCLC细胞株中呈低表达,而NRAS呈高表达（均P<0.05）。与Blank组、NC组比较,miR-218-5p mimic组NSCLC细胞增殖活力降低,凋亡率上升（均P<0.05）;miR-218-5p inhibitor组NSCLC细胞增殖活力增高,凋亡率下降（均P<0...     

miR-7-5p/FGFR4轴与胆囊癌患者预后的关系

目的 探究miR-7-5p/FGFR4轴与胆囊癌(gall bladder cancer,GBC)患者预后的关系.方法 选取武警特色医学中心2016-06至2018-06住院手术的GBC患者47例,收集胆囊癌组织(GBC组)及癌旁组织(PCLT组),选择同期良性胆囊疾病患者43例,收集良性胆囊组织(NC组),用RT-q...     

miR-491-5p对缺氧诱导的滋养细胞凋亡的促进作用及其机制

目的 探讨microRNA-491-5p(miR-491-5p)在缺氧诱导的滋养细胞凋亡中的作用及其对子痫前期的影响。方法 选取人绒毛膜滋养层细胞,分为4组：对照组、缺氧组、缺氧+miR-491-5p mimic组和缺氧+miR-491-5p inhibit组。采用细胞活力染色检测滋养细胞凋亡情况,qRT-PCR检测miR-491-5p的表达,TargetScan数据库预测miR-491-5p的靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证miR-149-5p与B-细胞淋巴瘤因子2样蛋白2基因(BCL2L2)的靶向关系。miR-491-5pmimic和inhibitor分别转染滋养细胞后,qRT-PCR检测miR-491-5p的表达,Westernblotting检测BCL2L2蛋白的表达改变,细胞活力染色、Western blotting、流式细胞术检测滋养细胞凋亡情况。结果 与对照组比较,缺氧组滋养细胞凋亡率明显增高(P<0.001),miR-491-5p表达明显增高(2.784±0.214 vs. 1.000±0.000,P<0.01);生物信息学预测与双荧光素酶检测报告实验显示...     

下肢动脉硬化闭塞症患者介入治疗后血清miR-342-5p水平及其意义

【摘要】 目的 探讨下肢动脉硬化闭塞症患者介入治疗后血清miR-342-5p水平及其意义。方法 选取2015年3月至2018年3月甘肃省中医院诊治的195例下肢动脉硬化闭塞症患者作为研究对象。根据患者预后情况,分为预后良好组（n=160）和预后不良组（n=35）。检测介入治疗前后患者血清miR-342-5p相对表达,分析其与预后的关系。结果 介入治疗后两组患者血清miR-342-5p相对表达均降低,预后良好组降低幅度高于预后不良组（P＜0.05）。Logistic多因素回归分析结果显示,伴糖尿病、伴高脂血症、吸烟史、泛大西洋学会联盟（TASC）分型、C反应蛋白（CRP）、miR-342-5p与下肢动脉硬化闭塞症患者介入治疗预后密切相关。二元回归分析显示,模型B评估介入治疗预后曲线下面积（AUC）高于miR-342-5p和模型A,差异均有显著统计学意义（Z=2.683,P=0.007;Z=4.624,P＜0.001）。结论 miR-342-5p与介入治疗后下肢动脉硬化闭塞症患者预后密切相关,检测血清miR-342-5p相对表达有助于评估患者介预后。     

MiR-129-5p靶向抑制高迁移率族蛋白B1表达增加甲状腺髓样细胞MZ-CRC-1放射敏感性的实验研究

目的 探讨miR-129-5p靶向抑制高迁移率族蛋白B1（HMGB1）对甲状腺髓样细胞MZ-CRC-1放射敏感性的影响机制。方法 建立抗辐射细胞株MZ-CRC-1/R;克隆形成实验分析细胞存活分数;qRT-qPCR检测miR-129-5p在MZ-CRC-1和MZ-CRC-1/R细胞中的表达;噻唑蓝（MTT）法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光酶报告基因实验验证miR-129-5p与高迁移率族蛋白B1（HMGB1）之间的靶向关系;Western blot检测HMGB1和p-AKt的蛋白表达。结果 与MZ-CRC-1细胞相比,MZ-CRC-1/R细胞的细胞存活分数显著提高（t=3.038、4.330、4.885、4.568,P<0.05）;细胞活力增加（t=3.637、7.734、11.896、14.522,P<0.05）;与MZ-CRC-1细胞（1.00±0.06）相比,miR-129-5p在MZ-CRC-1/R细胞中的表达（0.26±0.03）显著降低（t=19.107,P<0.05）;与miR-NC-inhibitor组细胞相比,miR-129-5p-inhibitor组细胞的细胞活力显著增加（t=5.156、6.005、9.649,P<0.05）,细胞凋亡率降低（t=8.659,P<0.05）。与miR-NC组细胞相比,miR-129-5p mimic组细胞的细胞活力显著降低（t=3.118、5.034、6.005、7.488,P<0.05）,细胞凋亡率升高（t=6.362,P<0.05）;过表达miR-129-5p可抑制HMGB1及p-AKt信号通路的表达（t=9.325、10.614,P<0.05）;与miR-129-5p inhibitor组细胞相比,miR-129-5p inhibitor+si-HMGB1组细胞的细胞凋亡率显著升高（t=6.700,P<0.05）;与miR-129-5p mimic组细胞相比,miR-129-5p mimic+si-HMGB1组细胞的细胞凋亡率显著降低（t=7.073,P<0.05）。结论 miR-129-5p可靶向抑制HMGB1增加甲状腺髓样细胞MZ-CRC-1的放射敏感性。     

紫外线B辐射敏感的miR-365在皮肤鳞癌发生中的作用研究

目的 探讨紫外线(UVB)辐射敏感miR-365在皮肤鳞状细胞癌发生中的作用.方法 取对数生长期正常人皮肤角质细胞HaCaT分为对照组和照射组,照射组给予50 J/m²的UVB照射.照射后培养不同时间,分析miRNA的表达谱.实时荧光定量PCR分析HaCaT细胞和皮肤鳞癌细胞系A431、Tca8113和HSC-1的miR-365的表达.平板克隆形成实验和Transwell小室细胞运动实验分别检测细胞的克隆形成能力和体外运动能力.构建miR-365高表达的HaCaT细胞系HaCaT^{pre-miR-365-2}.裸鼠皮下注射HaCaT^{pre-miR-365-2}观察其成瘤能力.结果 UVB照射后,HaCaT差异表达的miRNAs共30个,其中miR-365最敏感,且照后6 h升高最明显,为对照的6.7倍;皮肤鳞癌细胞系A431、Tca8113和HSC-1的miR-365的表达均高于HaCaT细胞(P<0.05),其中,A431增加最多,为(15.67±1.12)倍,Tca8113最少,为(4.72±0.85)倍;抑制皮肤鳞癌细胞系miR-365的表达可以显著抑制其克隆形成能力(t=13.68,P<0.05)和体外细胞迁移能力(t=19.98,P<0.05),而提高HaCaT的miR-365的表达则可以显著提高其克隆形成能力(t=7.11,P<0.05)和体外细胞迁移能力(t=22.03,P<0.05),且能够在裸鼠皮下成功地成瘤.结论 miR-365是一种皮肤鳞状细胞癌的促癌基因.     

干预FoxM1表达对食管癌细胞增殖、周期及凋亡的影响

 目的 探讨干预FoxM1表达对食管癌细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法 选择FoxM1高表达食管癌细胞株,构建FoxM1-shRNA干扰质粒转染食管癌细胞,观察干预FoxM1表达对食管癌细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。结果 成功转染后细胞中FoxM1蛋白水平表达明显降低(t=13.17, P<0.01),细胞增殖明显受抑并呈时间依赖性,72 h抑制效果最显著(68.0%±6.4%,P<0.05);干预组细胞增殖周期发生G₁期阻滞(59.14%±1.69% vs 40.51%±1.45%,t=14.23,P<0.01)、细胞凋亡增加(2.48%±0.49% vs 35.37%±0.56%,t=76.56,P<0.01)。结论 干预FoxM1表达使细胞周期发生G1期阻滞并能促进细胞凋亡,从而抑制TE1细胞增殖,FoxM1可能是食管癌基因治疗潜在的有效靶点。     

辐射表达载体Egr1-survivin shRNA联合放疗对食管鳞癌ECA109细胞放疗敏感性的影响

 目的 探讨辐射表达载体Egr1-survivin shRNA联合放疗对食管鳞癌ECA109细胞凋亡及放射敏感性的影响。方法 将合成的辐射表达载体Egr1-survivin shRNA经Lipofectamine^TM2000转染ECA109细胞后给予放疗,并以YM155联合放疗为主要对照,对比通过qPCR、Western-Blot检测处理后24 h各组细胞survivin的mRNA及蛋白表达,用流式细胞仪检测处理后48 h细胞周期及凋亡率变化。结果 ECA109细胞经Egr1-survivin shRNA质粒转染联合放疗处理后,survivin mRNA及蛋白的表达量不但明显低于空白对照组和空载体对照组,也明显低于YM155处理联合放疗。经Egr1-survivin shRNA联合放疗处理后,ECA109细胞的G2与S期细胞比例明显增加,产生明显G2与S期阻滞;凋亡率明显增高,高于YM155联合放疗组,更明显高于空白对照组和空载体对照组,差异均有统计学意义(P＜0.01)。结论 辐射表达载体Egr1-survivin shRNA联合放疗可进一步增加食管鳞癌ECA109细胞凋亡,增强其放射敏感性,是一种值得探索的辅助放疗途径。     

食管癌及癌旁组织p53蛋白、VEGF及MVD联合检测的临床意义

目的讨论食管癌及癌旁组织中MVD、VEGF和p53蛋白表达与食管癌临床、病理因素之间的关系,探讨其表达在食管癌患者转移、预后中的作用,并为以食管癌血管生成为靶点的靶向治疗提供理论基础。方法采用免疫组织化学方法,检测30例食管癌患者手术切除标本中癌灶、癌近旁、癌远旁组织的p53蛋白、VEGF的表达,并用FⅧ相关抗原标记、检测MVD。进行统计学分析,探讨其在性别、年龄、临床分期、淋巴结转移、生存率中的关系。结果①癌灶内VEGF阳性染色主要位于癌细胞胞浆内,癌灶p53蛋白阳性染色主要位于癌细胞胞核内,呈棕褐色。肿瘤内血管分布呈明显异质性,在癌组织浸润的边缘较密集,p53蛋白、VEGF、MVD与食管鳞癌关系在性别、年龄、TNM中无显著性差异。但在不同部位、有无淋巴结转移和5年生存率中有显著的统计学差异。②p53蛋白与VEGF表达有显著相关性（P〈0．05）。③p53、VEGF表达与MVD相关性具有显著统计学差异。结论在食管鳞癌组织及癌近旁、癌远旁组织中p53蛋白、VEGF、MVD均有不同程度表达,阳性表达率有显著性差异。联合检测可作为食管鳞癌恶性潜能的重要生物学指标．并为食管癌手术切除长度从一个新的角度提供参考及理论基础,并可作为其判断预后的重要生物学指标,并为以血管生成为靶点的靶向治疗提供参考。     

食管鳞状细胞癌高分辨率显微内镜图像定量分析的诊断价值

 

目的 探究食管鳞状细胞癌高分辨率显微内镜图像定量分析的诊断价值。方法 选择35例食管鳞状细胞癌和正常食管黏膜的大体标本,在前期制定的食管鳞状细胞癌高分辨率显微内镜(high resolution microendoscopy,HRME)诊断标准的基础上,回顾性分析其HRME图像特征。根据标本病理结果,由一名经验丰富的HRME医师挑选出1张HRME图片,纳入训练集,用计算机软件对图像特征进行定量分析,制定图像分析诊断标准。在此基础上,将100例内镜下疑诊食管鳞状细胞癌的活检标本的HRME图像纳入测试集,进行HRME图像定量分析,将计算机分析得出的预诊断结果与病理结果进行比较,评估定量分析HRME图像对食管鳞状细胞癌的诊断价值。结果 通过定量分析HRME图像中细胞的核面积(nuclear area,NA)对食管鳞状细胞癌和正常食管黏膜进行区分,经统计学分析,在训练集中的敏感性和特异性分别为90%和97%,测试集中的敏感性和特异性分别为97%和90%。结论 定量分析HRME图像可以区分食管鳞状细胞癌组织和正常食管黏膜,并能够增加诊断的客观性,有利于HRME技术的推广应用。

     

流式细胞术检测食管鳞癌患者外周血循环肿瘤细胞

目的 利用密度梯度离心法和流式细胞术联合检测食管鳞癌患者外周血循环肿瘤细胞（circulating tumor cells,CTCs）,以建立一种高效简单易行的食管鳞癌CTCs分离和检测方法。方法 选取中国人民解放军总医院第六医学中心胸外科2017年10月—2018年5月收治的20例食管鳞癌患者和5名健康志愿者,抽取外周血7.5 mL,用密度梯度离心法提取外周血中单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）,然后用流式细胞术的方法对提取的PBMC进行标记,用抗EpCAM、抗CD45以及抗Cytokeratin（CK）单克隆抗体对PBMC进行抗体染色标记,将其中CD45阴性,EpCAM阳性且CK阳性的细胞定义为CTCs。同时将健康志愿者外周血中加入不同数量的食管鳞癌细胞来检测该方法的敏感度。结果 以CTCs≥3/7.5 mL基数定义为CTCs阳性;CTCs<3/7.5 mL基数定义为CTCs阴性。观察组中CTCs检出率达75%,对照组中未检出。用流式细胞术检测食管鳞癌外周血中CTCs的敏感度为10-6。结论 初步建立了一种特异性好,敏感度较高,操作简单易行的食管鳞癌CTCs分离和检测方法。