难治性肺炎支原体肺炎患儿支气管肺泡灌洗液中肺炎支原体耐药基因检测分析

目的 分析难治性肺炎支原体肺炎(refractory Mycoplasmapneumoniaepneumonia,RMPP)患儿支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中肺炎支原体(Mycoplasmapneumoniae,MP)耐药性及耐药基因分布,并阐明23SrRNAⅤ...     

儿童肺炎支原体肺炎肺泡灌洗液中T细胞亚群及细胞因子检测的意义

目的 探讨肺炎支原体肺炎(mycoplasma pneumoniae pneumonia,MPP)患儿支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中,白细胞介素(interleukin,IL)-6、单核细胞趋化因子(monocyte chemotactic protein,MCP)-1、干扰素(interferon,IFN)-γ及T 细胞亚群的水平及临床意义.方法 选取2014年10月至2016年3月在我院住院的36例肺炎患儿,按诊断标准分为难治性肺炎支原体肺炎(refractory mycoplasma pneumoniae pneumonia,RMPP)组(18例)和MPP组(18例),及同期收治的支气管异物患儿16例作为对照组.分别采用双抗体夹心ELISA法及碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶(APAAP)桥联酶标法测定3组患儿BALF中的IL-6、MCP-1、IFN-γ及T细胞亚群水平.结果 (1) MPP组及RMPP组急性期患儿的BALF中,CD3 +、CD8 +T细胞水平高于对照组(P<0.05),但两组急性期间比较差异无统计学意义(P >0.05).(2)RMPP 组急性期 IL-6水平高于对照组(P <0.05), RMPP 组及MPP组急性期IL-6水平高于恢复期(P<0.05).(3)RMPP组急性期及 MPP组急性期IFN-γ水平均高于对照组,3组间比较差异有统计学意义(P<0.05),且RMPP组急性期较MPP组急性期明显升高(P<0.05),RMPP组恢复期高于MPP组恢复期.(4)RMPP组急性期及MPP组急性期MCP-1水平高于对照组(P<0.05),且RMPP组急性期高于MPP组急性期,RMPP组恢复期高于MPP组恢复期,RMPP组急性期及MPP组急性期MCP-1水平均分别高于恢复期(P<0.05).结论 肺炎支原体感染后,患儿存在细胞免疫调节及功能的紊乱;IL-6、MCP-1及IFN-γ是重要的细胞因子,可能参与了MPP 的发病过程,并且IFN-γ及MCP-1可作为预测MPP难治性的重要指标.     

支气管肺泡灌洗液荧光定量PCR对儿童肺炎支原体肺炎诊断研究

目的探讨荧光实时定量PCR(FQ-PCR)检测肺泡灌洗液(BALF)中MP-DNA基因在肺炎支原体肺炎(MPP)早期病原诊断中的价值。方法采用FQ-PCR检测61例患儿BALF中MP-DNA,并与目前常用血清MP抗体检测方法颗粒凝集法进行比较。结果 FQ-PCR检测MP-DNA敏感度94%,特异度100%;病程早期及难治性病例中FQ-PCR检测BALF中MP-DNA准确性优于单份血清MP抗体检测(P<0.01)。难治性病例中MP-DNA拷贝数显著高于普通MPP组(P<0.05),且与CRP呈正相关(r=0.845,P<0.01)。结论 FQ-PCR检测BALF中MP-DNA是早期MPP特别是难治性MPP病原诊断的可靠方法,优于血清MP抗体检测。MP-DNA的拷贝量可以作为评价难治性MPP的转归以及判断药物疗效的指标。     

支气管肺泡灌洗液YKL-40与肺炎支原体肺炎患儿气道损害的相关性

目的 探讨支气管肺泡灌洗液（BALF）YKL-40与肺炎支原体肺炎（MPP）患儿气道损害之间的相关性。方法 选取60例MPP患儿为MPP组,12例支气管异物患儿作为对照组。根据影像学表现将MPP组分为3个亚组：斑片状影（n=34）、肺实变（n=19）、毛玻璃样变（n=7）;根据支气管镜下表现分为3个亚组：黏膜充血水肿（n=38）、黏液性分泌物（n=18）、塑型性支气管炎（n=4）。分析MPP患儿的临床表现、实验室检查特点,检测MPP患儿BALF的YKL-40表达水平。结果 MPP组血清乳酸脱氢酶、BALF YKL-40水平高于对照组（P < 0.05）。肺实变亚组血清C-反应蛋白及乳酸脱氢酶水平高于斑片状影亚组（P < 0.05）,肺实变亚组和毛玻璃样变亚组BALF YKL-40高于斑片状影亚组（P < 0.05）;塑型性支气管炎亚组BALF YKL-40均高于黏膜充血水肿亚组、黏液性分泌物亚组（P < 0.05）;黏液性分泌物亚组、塑型性支气管炎亚组气促比例高于黏膜充血水肿亚组（P < 0.05）;塑型性支气管炎亚组血清C-反应蛋白、乳酸脱氢酶水平高于黏膜充血水肿亚组（P < 0.05）。结论 BALF YKL-40与MPP患儿气道损害相关,且与疾病严重程度有关。     

肺炎支原体肺炎患儿支气管肺泡灌洗液中肺炎支原体耐药基因和13种病原检测结果分析北大核心CSCD

目的:了解肺炎支原体肺炎(MPP)患儿支气管肺泡灌洗液(BALF)中肺炎支原体(MP)耐药基因和13种呼吸道病原的分布情况。方法:回顾性选择2018年1月至2019年1月北京大学第三医院和北京大学第一医院100例MPP患儿的BALF标本,采用荧光定量PCR法检测MP核酸及其耐药基因,采用多重PCR核酸检测技术测定甲型流感病毒、甲型流感病毒H_(1)N_(1)、甲型流感病毒H_(3)N_(2)、乙型流感病毒、人副流感病毒、腺病毒、人博卡病毒、人鼻病毒、肺炎衣原体、人偏肺病毒、MP、人冠状病毒和呼吸道合胞病毒核酸,采用 χ^(2)检验进行分析。 结果:100例BALF标本,荧光定量PCR法检测MP及耐药基因,83例(83.00%)MP阳性,其中78例(93.98%)耐药,均为23S rRNA结构域V区A2063G的点突变。多重PCR法检测13种呼吸道病原,89例(89.00%)阳性。79例(79.00%)检测到MP,其中74例(74.00%)仅检出MP,5例(5.00%)同时检出MP合并其他病原。10例(10.00%)检测出其他病原。0~4岁组病毒检出率高于>4~6岁组( P=0.042)和>6岁组( P=0.002),差异均有统计学意义。 结论:MPP患儿的BALF标本绝大部分可检测到MP,耐药现象严重,以A2063G的点突变为主。少数BALF标本中可检测到其他呼吸道病原和2种或3种病原。     

难治性肺炎支原体肺炎患儿支气管肺泡灌洗液中IL-4及INF-γ水平的研究

目的：检测难治性肺炎支原体肺炎（RMPP）患儿支气管肺泡灌洗液（BALF）中IL-4、INF-γ水平,探讨RMPP患儿病变局部Th1、Th2型细胞因子水平的变化及其意义。方法：选择RMPP患儿（42例）为研究对象。根据是否有湿疹、过敏性鼻炎、荨麻疹及相关过敏性疾病家族史等将42例RMPP患儿分为特应性组（11例）和非特应性组（31例）。以同期因支气管异物住院、异物取出4周后纤维支气管镜复查的患儿为对照组（12例）。对RMPP患儿及对照患儿BALF中细胞学成分进行分析,并采用ELISA方法检测BALF中IL-4、INF-γ水平。结果：与对照组比较,RMPP组患儿BALF中细胞总数上升（P0.05）。结论：RMPP患儿BALF细胞数显著增加,尤以中性粒细胞为甚。RMPP患儿BALF中INF-γ、IL-4水平明显升高,但INF-γ/IL-4比值无变化,提示RMPP患儿病变局部炎症反应明显,但尚不能证实RMPP患儿存在Th2占主导的炎症反应。     

肺炎支原体感染BALB/c小鼠肺泡灌洗液中白细胞介素-17含量的变化

目的 探讨肺炎支原体(mycoplasma pneumonia,MP)感染小鼠肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中白细胞介素-17(interleukin-17,IL-17)含量的变化.方法 将64只BALB/c小鼠分为正常组32只,MP感染组32只,两组分别于MP感染第3、7、14、21天取小鼠肺泡灌洗液及肺组织,每次8只.应用 HE染色法观察肺组织病理变化.应用ELISA法检则小鼠BALF 中IL-17 的含量.结果 MP感染后第7天肺组织的炎症改变最明显,第14天炎症已开始消退,第21天基本消失MP感染后3、7、14、21 d小鼠BALF 中 IL-17含量分别为(53.783 ±2.218) pg/ml、(65.913±10.693) pg/ml、(59.915 ±8.085) pg/ml、(57.043±11.997) pg/ml,正常组为(46.220 ±3.260) pg/ml,MP感染组较正常组BALF中IL-17含量有显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05) 在MP感染第7天小鼠BALF中 IL-17含量达到高峰,与其他时间点比较差异有统计学学意义(P＜().05).结论 MP感染可能使小鼠BALF中IL-17含量升高,且在第7天达到最高峰.MP感染可能通过IL-17途径参与哮喘气道炎症的形成.     

肺炎支原体肺炎支气管肺泡灌洗液中23S rRNA耐药基因阳性患儿的临床及支气管镜下特点北大核心CSCD

目的:探讨肺炎支原体肺炎支气管肺泡灌洗液(BALF)中23S rRNA耐药基因阳性患儿的临床及支气管镜下特点,发现能够早期识别肺炎支原体耐药性的临床指标。方法:回顾性分析中国医科大学附属盛京医院小儿呼吸内科2017年10月至2018年6月确诊为肺炎支原体肺炎的61例住院患儿的临床资料,对其进行纤维支气管镜检查,并留取BALF,检测BALF中23S rRNA V区基因的2063位点突变情况,分为耐药基因阳性组和耐药基因阴性组,比较不同组别患儿的临床表现、相关实验室数据、影像学资料、纤维支气管镜的镜下表现。采用 t检验、秩和检验、 χ^(2)检验、 Fisher′ s确切概率法、多因素 Logistic回归分析等统计学方法对数据进行分析。 结果:61例患儿中耐药基因阳性组38例(62.30%),耐药基因阴性组23例(37.70%)。2组患儿性别及年龄差异均无统计学意义(均 P>0.05)。耐药基因阳性患儿的住院天数及发热时间长于耐药基因阴性组,更容易出现难治性肺炎支原体肺炎(RMPP)及肺外并发症,差异有统计学意义( P<0.05),低氧血症差异无统计学意义( P>0.05)。2组患儿白细胞(WBC)、C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)、D-二聚体(D-D)、白细胞介素6(IL-6)比较差异均有统计学意义(均 P<0.05)。除耐药基因阳性组WBC水平低于耐药基因阴性组,其余实验室检查结果耐药基因阳性组均高于耐药基因阴性组;血清乳酸脱氢酶(LDH)及BALF中IL-6水平比较差异无统计学意义( P>0.05)。对几种有统计学意义的实验室指标进行 Logistic回归分析,发现WBC识别耐药基因的敏感性更高,最佳临界值为8.55×10^(9)/L,D-D识别耐药基因的特异性更高,最佳临界值为523 μg/L。耐药基因阳性组中35例(92.11%)影像学表现为大面积肺实变/肺不张,耐药基因阴性组为13例(56.52%),差异有统计学意义( P<0.05)。耐药基因阳性组主要表现为黏膜糜烂、坏死,痰栓/塑型性痰栓及支气管炎性狭窄[19例(50.00%)],耐药基因阴性组以黏膜纵行皱襞、絮状及黏性分泌物表现为主[14例(60.88%)],差异有统计学意义( P<0.05)。 结论:23S rRNA V区基因发生点突变与肺炎支原体肺炎患儿的临床特征密切相关,发生A2063G突变的患儿更容易发生RMPP及肺外并发症,影像学和支气管镜下表现更重。血液中WBC及D-D水平的高低对早期识别耐药性具有一定意义,耐药基因阳性的肺炎支原体肺炎引起的全身过度免疫炎症反应需要引起重视。     

支气管肺泡灌洗术对肺炎支原体肺炎伴肺不张患儿治疗效果的影响因素分析

目的 研究支气管肺泡灌洗术（BAL）对肺炎支原体肺炎（MPP）伴肺不张患儿治疗效果的影响因素。方法 将75例MPP伴肺不张患儿根据BAL疗效分为效果明显组（51例）和效果不明显组（24例）,进行LASSO logistic回归分析,探讨影响BAL疗效的因素,并利用受试者工作特征（ROC）曲线及限制性立方样条模型评估BAL治疗时的病程对BAL疗效的预测价值。结果 BAL治疗效果不明显组与效果明显组相比,支气管肺泡灌洗液中淋巴细胞比例更低,多个肺叶不张比例及支气管管腔或开口炎性狭窄比例更高,BAL治疗时的病程及阿奇霉素治疗时的病程更长（P < 0.05）。LASSO logistic回归分析显示：BAL治疗时的病程较长（OR=1.23）、多个肺叶不张（OR=11.99）、支气管管腔或开口炎性狭窄（OR=5.31）为BAL疗效不佳的独立危险因素（P < 0.05）。ROC曲线分析显示,行BAL治疗时的病程≥11.5 d提示BAL疗效不佳,其灵敏度和特异度分别为91.7%和54.9%。限制性立方样条分析结果显示,BAL治疗时的病程连续性变化与BAL疗效的关联强度呈非线性剂量反应关系（P < 0.05）。结论 对于MPP伴肺不张的儿童,早期BAL治疗效果更佳;多个肺叶不张及支气管管腔或开口炎性狭窄等支气管镜下表现提示BAL治疗效果不佳。     

呼吸道吸出物MP-DNA检测对儿童肺炎支原体肺炎诊断的临床意义

目的 探讨鼻咽抽吸物(NPA)和肺泡灌洗液(BALF)中肺炎支原体(MP)-DNA 检测对儿童MP 肺炎(MPP)诊断的意义。方法 收集164 例MPP 患儿入院24 h 内的NPA 及BALF,荧光定量PCR 法检测MP-DNA;同时在入院24 h 内及治疗7~10 d 病情好转时采集所有患儿静脉血,ELISA 法检测血清特异性MPIgM。结果 164例患儿NPA的MP-DNA阳性检出率为51.8%,低于双份血清MP-IgM阳性检出率(63.4%)(P=0.044),两者检出一致性中等(Kappa=0.618,PP>0.05),两者检出一致性好(Kappa=0.793,PPKappa=0.529,PPPP结论 BALF 中MP-DNA 检出敏感性高,对临床早期诊断MPP具有重要意义;而NPA MP-DNA 检测可能会引起漏诊。     

支气管肺泡灌洗液中几丁质酶样蛋白YKL-40对儿童难治性肺炎支原体肺炎的预测价值

目的 探讨支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中几丁质酶样蛋白YKL-40对儿童难治性肺炎支原体肺炎(refractory Mycoplasma pneumoniae pneumonia,RMPP)的预测价值.方法 50例普通型肺炎支原体肺炎(Mycoplasma pn...     

重症肺炎支原体肺炎患儿肺泡灌洗液中Th1/Th2细胞免疫应答状况的研究

目的：检测重症肺炎支原体肺炎（MPP）患儿肺泡灌洗液(BALF)和血清中干扰素-γ（IFN-γ)、白细胞介素-4（IL-4）,研究Th1/Th2细胞免疫应答的状况及意义,并评价BALF中细胞因子检测在MPP诊治中的临床价值。方法：采用双抗体夹心ELISA检测25例重症MPP患儿BALF和血清中IL-4及IFN-γ的浓度,并设支气管异物组（25例）和MPP轻症组（25例）作为对照。结果：重症MPP患儿BALF中IL-4和IFN-γ水平及IL-4/IFN-γ比值明显高于支气管异物对照组,差异有统计学意义(P<0.01或0.05)。重症MPP患儿血清中IL-4水平及IL-4/IFN-γ比值明显高于支气管异物组和MPP轻症组,差异有统计学意义(P<0.01或0.05)。重症MPP患儿BALF中IL-4水平及IL-4/IFN-γ比值高于血清标本,差异有统计学意义(P<0.05)。结论：重症MPP患儿存在Th1/Th2失衡, 以Th2反应占优势;BALF中细胞因子的检测较之血清更为敏感,在MPP诊治中具有较高价值。     

难治性肺炎支原体肺炎患儿支气管肺泡灌洗液中半乳凝素-3水平与细胞免疫的相关性

目的 了解难治性肺炎支原体肺炎（RMPP）患儿支气管肺泡灌洗液（BALF）中半乳凝素-3与肺炎支原体（MP）载量、气道内中性粒细胞及巨噬细胞细胞免疫的相关性。方法 选取2013年1月至2017年1月住院治疗的64例RMPP患儿作为研究对象。64例RMPP患儿在内科保守治疗的基础上,均在急性期（入院治疗5~7 d）、部分患儿（48例）同时在恢复期（入院治疗10~14 d）进行支气管肺泡灌洗术干预治疗,收集患侧肺叶或肺段BALF 4 mL,离心后采用ELISA检测BALF上清中半乳凝素-3水平,实时荧光PCR（RT-PCR）检测MP载量,离心沉淀的细胞成分在苏木精-伊红染色下计数中性粒细胞及巨噬细胞百分比。6例支气管异物患儿作为对照组。结果 与对照组相比,半乳凝素-3水平在RMPP组急性期及恢复期均明显升高（P < 0.01）;与急性期相比,恢复期明显下降（P < 0.01）。与对照组相比,BALF中中性粒细胞百分比在RMPP组急性期及恢复期均明显升高（P < 0.01）;与急性期相比,恢复期显著下降（P < 0.01）。与对照组相比,RMPP组急性期及恢复期巨噬细胞百分比均显著降低（P < 0.01）;恢复期与急性期相比差异无统计学意义（P > 0.05）。与对照组相比,RMPP组急性期及恢复期BALF中MP载量明显升高;与急性期相比,恢复期显著下降（P < 0.01）。RMPP患儿急性期BALF中半乳凝素-3水平与MP载量和中性粒细胞百分比均呈正相关（分别r_s=0.789、0.726,P < 0.01）。结论 半乳凝素-3参与了RMPP气道炎症反应过程,急性期BALF半乳凝素-3水平与MP载量呈正相关。RMPP是以中性粒细胞增加、巨噬细胞减少为主的细胞免疫炎症损害,半乳凝素-3与RMPP患儿中性粒细胞趋化及管腔浸润密切相关。随着RMPP病情恢复,MP载量呈下降趋势,但恢复期仍未被机体免疫系统完全清除。MP感染可诱发RMPP患者巨噬细胞消耗增加。     

支气管肺泡灌洗术对肺炎支原体肺炎伴肺不张患儿治疗效果的影响因素分析

目的 研究支气管肺泡灌洗术（BAL）对肺炎支原体肺炎（MPP）伴肺不张患儿治疗效果的影响因素。方法 将75例MPP伴肺不张患儿根据BAL疗效分为效果明显组（51例）和效果不明显组（24例）,进行LASSO logistic回归分析,探讨影响BAL疗效的因素,并利用受试者工作特征（ROC）曲线及限制性立方样条模型评估BAL治疗时的病程对BAL疗效的预测价值。结果 BAL治疗效果不明显组与效果明显组相比,支气管肺泡灌洗液中淋巴细胞比例更低,多个肺叶不张比例及支气管管腔或开口炎性狭窄比例更高,BAL治疗时的病程及阿奇霉素治疗时的病程更长（P < 0.05）。LASSO logistic回归分析显示：BAL治疗时的病程较长（OR=1.23）、多个肺叶不张（OR=11.99）、支气管管腔或开口炎性狭窄（OR=5.31）为BAL疗效不佳的独立危险因素（P < 0.05）。ROC曲线分析显示,行BAL治疗时的病程≥11.5 d提示BAL疗效不佳,其灵敏度和特异度分别为91.7%和54.9%。限制性立方样条分析结果显示,BAL治疗时的病程连续性变化与BAL疗效的关联强度呈非线性剂量反应关系（P < 0.05）。结论 对于MPP伴肺不张的儿童,早期BAL治疗效果更佳;多个肺叶不张及支气管管腔或开口炎性狭窄等支气管镜下表现提示BAL治疗效果不佳。