小鼠胚胎心脏发育过程中胰岛素基因增强子结合蛋白1的时序表达与组蛋白乙酰化酶p300的关系

目的观察小鼠胚胎心脏发育过程中转录因子胰岛素基因增强子结合蛋白1(Islet-1)的时序性表达规律,并探讨其与组蛋白乙酰化酶p300介导的组蛋白乙酰化调控网络中的关系。方法以健康6～8周龄昆明小鼠为研究对象,下午1700雄雌按12比例合笼,次日观察阴栓,观察到阴栓最早之日计为胎龄0.5 d(E0.5)。取胎龄为E11.5、E14.5、E17.5的胎鼠和新生鼠的心脏,利用Western blot方法定量分析Islet-1的时序性表达规律,并利用蛋白质免疫共沉淀(Co-IP)和串联质谱分析方法(MS)鉴定Islet-1与组蛋白乙酰化酶p300的关系,同时应用Western blot方法反验证实验结果。结果 1.在小鼠胚胎心脏发育过程中,Islet-1在E14.5时的表达水平(0.434±0.353)明显高于与其在E11.5(0.074±0.456)、E17.5(0.120±0.127)和新生鼠(0.049±0.083)的表达水平,差异均有统计学意义(Pa<0.05),而其他时间点(E11.5、E17.5和新生鼠)间的表达差异无统计学意义(Pa>0.05)。2.在胚胎心脏发育过程中,Islet-1与组蛋白乙酰化酶p300相互结合,以蛋白复合物的形式存在。结论在小鼠胚胎心脏发育过程中,Islet-1可能作为枢纽因子,募集组蛋白乙酰化酶p300参与组蛋白乙酰化修饰调控。     

p300/CBP相关因子的生物特性及其与疾病的关系

p300/CBP相关因子(p300/CBP-associated factor,PCAF)是真核细胞内一种重要的组蛋白乙酰转移酶.PCAF除了能乙酰化组蛋白,还能乙酰化非组蛋白.PCAF参与细胞内多种生物学过程,并参与病毒与细胞的相互作用.PCAF失衡可导致多种器官的发育异常,且与某些肿瘤的发生发展相关.     

组蛋白H3K9ac乙酰化与H3K9me3甲基化修饰对小鼠心脏发育的交互调控作用

目的 探讨组蛋白乙酰化和甲基化修饰对心脏发育的交互调控作用,为先天性心脏病的防治提供新的理论基础。方法 将24只昆明孕小鼠随机分为胚胎14.5 d（ED 14.5）组、胚胎16.5 d（ED 16.5）组、新生0.5 d（PND 0.5）组及新生7 d（PND 7）组,采集各组胎鼠及新生小鼠心脏,每组检测标本数为6。运用比色法检测心肌组织组蛋白乙酰化酶（HATs）及组蛋白甲基转移酶（HMTs）活性;Western blot法检测心肌组织组蛋白H3第9位赖氨酸乙酰化（H3K9ac）及组蛋白H3第9位赖氨酸三甲基化（H3K9me3）表达水平。结果 比色法结果表明：HATs和HMTs活性在出生前均呈现高表达,出生后均呈现低表达;且PND 0.5和PND7时小鼠心肌组织HATs活性与ED 14.5时相比,以及PND 7时小鼠心肌组织HATs活性与ED 16.5时相比差异均有统计学意义（P < 0.05）;小鼠心肌组织HMTs活性在PND 7时与ED 14.5和ED 16.5时相比差异有统计学意义（P < 0.05）。Western blot结果显示：组蛋白H3K9ac和H3K9me3在出生前呈现高表达,出生后呈现低表达,且PND 0.5和PND 7时小鼠心肌组织组蛋白H3K9ac和H3K9me3分别与ED 14.5和ED 16.5时相比差异均有统计学意义（P < 0.05）。结论 在心脏发育过程中HATs、HMTs及组蛋白H3K9ac、H3K9me3呈现动态表达,提示HATs和HMTs介导的组蛋白H3K9ac乙酰化及H3K9me3甲基化修饰在心脏发育过程中可能发挥了交互调控作用。     

组蛋白去乙酰化酶在小鼠神经元发育中的作用与机制研究

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶(HDAC)1和HDAC2在小鼠神经元发育中的作用及机制.方法 将具有突触蛋白1启动子Cre重组酶(Synapsin1-Cre)的小鼠与HDAC1&2flox/flox小鼠杂交,得到在神经元中特异性敲除HDAC1&2的小鼠纳入敲除组,同窝出生的未敲除HDAC1&2的小鼠纳入对照组.观察小鼠一般...     

p300的生物特性及其在心血管系统中作用的研究进展

近年来关于组蛋白乙酰化酶的研究越来越多,而在心血管系统巾研究最多的就是p300C.p300不仅是一种广泛的转录辅激活因子,还是一种多功能的组蛋白乙酰化酶.它的失衡不仅可以导致胚胎心脏发育障碍,引起先天性心脏病,还与许多后天性心脏病的发生、发展有关,如心脏肥厚、心肌梗死后的心室重建等.该文就p300的结构、生物特性以及近年来p300在心血管系统的研究进展作一综述.     

法洛四联症患儿组蛋白乙酰化及其酶的表达

目的：观察组蛋白乙酰转移酶（HATs）及组蛋白去乙酰化酶（HDACs）在法洛四联症（TOF）患儿中的表达情况,探讨组蛋白乙酰化及其酶在TOF发病中的作用。方法：TOF组心肌组织标本来源于46例行TOF根治术患儿,对照组心肌组织标本来源于16例意外死亡经尸检未发现心脏畸形的儿童。采用免疫组织化学染色法检测TOF组和对照组中H3K9、H3K18、H3K27 3个组蛋白乙酰化位点的乙酰化水平;采用Real-time PCR技术筛选TOF组与对照组心肌组织中组蛋白乙酰化相关酶HATs和HDACs的mRNA表达水平,并分析其与组蛋白乙酰化水平的相关性。结果：与对照组比较,TOF组H3K9位点的乙酰化水平明显增高（P=0.0165）;而H3K18、H3K27两个位点的乙酰化水平明显降低（均P<0.05）。分别对4个HATs和6个HDACs检测发现,TOF组中EP300和CBP mRNA水平较对照组升高（均P<0.05）;而其他HATs和HDACs mRNA表达水平在两组间差异均无统计学意义（均P>0.05）。相关分析显示,H3K9乙酰化水平与EP300和CBP mRNA表达呈显著正相关（分别r=0.71、0.72,均P<0.01）。结论：H3K9乙酰化水平增高可能与EP300和CBP mRNA表达上调呈正相关,提示EP300和CBP可能是通过调控H3K9乙酰化状态影响心脏发育。     

急性期川崎病γ干扰素组蛋白乙酰化改变及意义初探

目的探讨急性期川崎病(KD)患儿IFN-γ组蛋白乙酰化改变及其在KD免疫发病机制中的作用。方法以2015年2月至2016年6月深圳市儿童医院诊断并住院治疗的KD患儿为KD组,经IVIG治疗后为KD-IVIG组,KD组依冠状动脉有无损伤分为冠状动脉损伤(KD-CAL+)亚组和无冠状动脉损伤(KD-CAL-)亚组,于IVIG治疗前、后取血备检;同期体检的健康儿童为对照组。采用染色质免疫共沉淀法检测外周血CD4+T细胞IFN-γ组蛋白H3乙酰化水平及组蛋白乙酰化酶p300和去乙酰化酶HDAC1/2结合水平;流式细胞术检测外周血CD4+IFN-γ+细胞(Th1)比例及IFN-γ、p STAT4、p STAT5和T-bet蛋白表达水平;实时荧光定量PCR检测CD4+T细胞IFN-γ、IL-2Rα/β、IL-12Rβ1/2、IL-18Rα/β和ITLR4m RNA表达;ELISA检测外周血浆中IL-12、IL-2和IL-18浓度。结果 1KD患儿38例(男20例),年龄1~5.2岁;KD-CAL+亚组16例,KD-CAL-亚组22例。对照组32例(男17例),年龄1.2~4.9岁。KD组和对照组年龄、性别差异无统计学意义。2急性期KD患儿Th1细胞比例、IFN-γm RNA和蛋白表达及其组蛋白乙酰化水平显著高于对照组(P0.05),且KDCAL+亚组高于KD-CAL-亚组(P0.05),经IVIG治疗后明显恢复(P0.05)。3急性期KD患儿CD4+T细胞IFN-γ组蛋白乙酰化酶p300结合水平显著增加(P0.05),HDAC1/2结合水平明显降低(P0.05),p300/HDAC1/2明显高于对照组且与IFN-γ组蛋白H3乙酰化水平呈正相关(r=0.52;P0.05),经IVIG治疗后均有所恢复(P0.05)。其中KD-CAL+亚组p300结合水平及p300/HDAC1/2比值均高于KD-CAL-亚组(P0.05),而HDAC1/2结合水平则低于后者(P0.05)。4急性期KD患儿血浆IL-2、IL-12和IL-18浓度显著增高(P0.05),CD4+T细胞表面受体IL-2Rα/β、IL-12Rβ1/2、IL-18Rα/β和TLR4及其下游信号分子p STAT5、p STAT4、T-bet和My D88表达明显上调(P0.05),且KD-CAL+亚组前述各项均高于KDCAL-亚组(P0.05),经IVIG治疗后均有不同程度恢复(P0.05)。结论 IFN-γ组蛋白过度乙酰化可能是导致急性期KD患儿免疫功能紊乱的重要因素之一。     

Gata4转录后蛋白共价修饰

目的：Gata4是心脏发育重要的转录因子,其转录活性和DNA亲和力受转录后蛋白共价修饰的调节,并影响下游目的基因和相关转录因子表达,胚胎干细胞分化,心肌细胞生长和心脏发育。该文总结Gata4转录后蛋白共价修饰对其转录活性的影响,寻找其与心脏发育和先天性心脏病（congenital heart disease, CHD）的关系。结果发现乙酰化、磷酸化、SUMO化使其转录活性和DNA亲和力升高,下游基因表达上升,促进胚胎干细胞分化等呈正性调节;去乙酰化和甲基化下调Gata4转录活性,呈负性调节。因此,Gata4蛋白共价修饰对研究先天性心脏病及其他一些心脏疾病有重要的临床意义。     

组蛋白乙酰化修饰在儿童哮喘中的作用及糖皮质激素治疗

支气管哮喘(哮喘)在儿童中发病率日趋增高,越来越多的研究发现表观遗传学在哮喘发病中起重要作用,其中最重要的即为组蛋白乙酰化与去乙酰化修饰,分别由组蛋白乙酰基转移酶(HAT)和组蛋白去乙酰基酶(HDAC)所催化,通过引起Th1/Th2失衡、增加气道高反应性、调节各种炎症介质等介导哮喘发病.该文综述HAT和HDAC介导哮喘发病的最新及其他可能机制、糖皮质激素治疗儿童哮喘的表观学机制,以期能指导从组蛋白乙酰化作为切入点.     

姜黄素对小鼠胚胎心脏发育中Tbx5表达的影响

目的 探讨组蛋白乙酰化酶p300抑制剂姜黄素对小鼠胚胎心脏早期发育转录因子Tbx5表达的影响.方法 取清洁级健康成年昆明小鼠,雌雄合笼,受孕成功后于妊娠期第7.5天(E7.5)开始腹腔注射姜黄素75 mg·kg-1·d-1,分别在胚胎心脏发育不同时间点(E11.5、E14.5和E17.5)断颈处死孕鼠,取胎鼠心脏,提取RNA,实时荧光定量(RT)-PCR检测Tbx5的表达.同时设立二甲基亚砜(DMSO)组(腹腔注射相同剂量DMSO)和空白对照组(不做任何处理)作为对照.结果 1.E11.5时,姜黄素组、DMSO组和空白对照组Tbx5的表达水平分别为2.06±0.16、1.08±0.13和1.08±0.18,姜黄素组Tbx5表达较空白组升高1.90倍,差异有统计学意义(P＜0.05).2.E14.5时,姜黄素组、DMSO组和空白组Tbx5的表达水平分别为1.21±0.08、0.71±0.04和0.64±0.10,姜黄素组Tbx5表达较空白组升高1.88倍,差异有统计学意义(P＜0.05).3.E17.5时,姜黄素组、DMSO组和空白对照组Tbx5的表达分别为1.09±0.07、0.79±0.06和0.75±0.06,姜黄素组Tbx5表达较空白组升高1.45倍,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 姜黄素能透过胎盘,升高小鼠胚胎心脏早期发育转录因子Tbx5的表达.     

STAT6和ORMDL3在哮喘小鼠肺组织中的表达及布地奈德的干预作用

目的 探讨信号转导和转录激活因子6（STAT6）以及哮喘易感基因血清类黏蛋白1 样蛋白3（ORMDL3）在哮喘小鼠气道重塑中的作用,并观察布地奈德（BUD）对上述两种物质水平的干预作用。方法 BALB/c 雌性小鼠30 只,随机分为对照组、哮喘组和BUD 组。应用鸡卵清蛋白（OVA）激发试验建立哮喘小鼠模型,BUD 组在每次激发前30 min 应用生理盐水溶解的BUD 雾化液进行雾化吸入,对照组应用生理盐水替代OVA 溶液。苏木精-伊红染色及Masson 染色观察各组小鼠气道病理学改变;ELISA 法检测各组小鼠肺组织匀浆中IL-13 水平;RT-PCR 法检测各组肺组织STAT6 及ORMDL3 的mRNA 表达。结果 哮喘组气道病理学改变较正常组和BUD 组明显,而BUD 组气道病理学变化较哮喘组减轻。哮喘组和BUD 组IL-13 水平、STAT6 及ORMDL3 的mRNA 表达均明显高于对照组（PPr=0.676,P=0.032）。结论 STAT6 和ORMDL3 可能参与了小鼠气道重塑过程,BUD 可能通过下调STAT6和ORMDL3 的mRNA 表达,改善气道重塑。     

儿童非霍奇金淋巴瘤ZO-1基因甲基化状态分析及临床意义

目的 探讨紧密连接蛋白（ZO-1）基因启动子区甲基化状态在儿童非霍奇金淋巴瘤（NHL）Ⅳ期检测中的临床意义,以进一步寻找病因及早期诊断方法。方法 将55 例确诊为NHL Ⅳ期（T 细胞型40 例,B 细胞型15 例）患儿的骨髓标本作为病例组,20 例非血液肿瘤患儿骨髓标本作为对照组。采用甲基化特异性PCR 法（MS-PCR）检测病例组与对照组骨髓中ZO-1 基因启动子区甲基化状态,并检测光密度积分值（IOD）。逆转录PCR 法（RT-PCR）检测病例组与对照组ZO-1 基因mRNA 的表达情况。结果 MS-PCR 检测结果显示病例组治疗前39 例出现ZO-1 基因甲基化条带,阳性率为70.9%（39/55）,对照组20 例均呈非甲基化状态;治疗过程中,行动态观察NHL 患儿47 例,其中T 细胞型32 例,B 细胞型15 例,治疗前ZO-1 基因甲基化阳性率分别为72% 和67%,两者差异无统计学意义（P>0.05）。T 细胞型与B 细胞型NHL 患儿治疗前与化疗早期、中期比较差异均无统计学意义（P>0.05）,而与化疗后期比较差异均有统计学意义（Pr=0.093,P=0.575）;骨髓中恶性肿瘤细胞数与ZO-1 基因IOD 值呈正相关关系（r=0.669,P结论 ZO-1 基因在儿童NHL 中呈特异性高甲基化状态,其程度与骨髓中恶性肿瘤细胞数呈正相关。ZO-1 基因可能成为新的分子标志,为临床早期诊断、疗效判断、预后评价、微小残留检测提供新的指标。     

维生素D受体在病毒性心肌炎小鼠心肌中的表达

目的 探讨维生素D 受体(VDR)在病毒性心肌炎(VMC)小鼠心肌中的表达动态变化和作用。方法 选取120 只4 周龄雄性BALB/c 小鼠,随机分为对照组(n=40)和实验组(n=80),实验组小鼠腹腔注射柯萨奇B3 病毒制备VMC 模型,对照组小鼠腹腔注射等量的DMEM 液作为替代。分别在注射3、7、14和28 d 后各处死15 只实验组小鼠和10 只对照组小鼠,取小鼠心脏标本。用免疫组织化学法检测小鼠心肌组织VDR 的表达动态变化,并用苏木精-伊红染色观察小鼠心肌的病理变化。结果 实验组小鼠接种病毒后VDR表达显著升高,并在第7 天表达水平达到高峰,然后逐渐下降,在第28 天仍处于较高水平(PPP结论 VDR可能参与了VMC发病的炎性免疫过程。     

滤泡辅助性T细胞和滤泡调节性T细胞在儿童过敏性紫癜发病中的作用

目的 探讨外周血滤泡辅助性T 细胞(Tfh 细胞)和滤泡调节性T 细胞(Tfr 细胞)表达的变化在儿童过敏性紫癜(HSP)发病中的意义。方法 采用流式细胞术检测40 例HSP 患儿及25 例对照组儿童外周血Tfh 和Tfr 细胞的表达水平;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测外周血中相关调控因子Bcl-6、c-MAF、Blimp-1、PD-1 mRNA 的表达。结果 与对照组儿童相比,HSP 患儿外周血Tfh 细胞比例显著升高(PPP+ T 细胞Bcl-6、c-MAF mRNA 的表达水平显著升高(PP+CD25+ 调节性T 细胞PD-1 mRNA 表达水平显著升高(PP结论 Tfh及Tfr 细胞的异常表达可能参与了儿童HSP 的发病过程;Bcl-6、c-MAF 和PD-1 的过表达及Blimp-1 的抑制表达可能是导致Tfh 及Tfr 细胞异常表达的重要原因。     

枸橼酸咖啡因对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后髓鞘碱性蛋白的影响

目的研究枸橼酸咖啡因对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后脑白质髓鞘碱性蛋白(MBP)表达的影响及其相关机制。方法将48只7日龄Sprague-Dawley新生大鼠随机分为假手术组、HIBD组和枸橼酸咖啡因干预组,每组16只。左侧颈总动脉结扎并缺氧(80 m L/L氧气和920 m L/L氮气)2 h制作HIBD模型;假手术组仅分离左侧颈总动脉,不行结扎及缺氧处理;干预组在缺氧缺血前、缺氧缺血后0、24、48、72 h给予枸橼酸咖啡因(20 mg/kg)腹腔注射,HIBD组分别在同一时间点以等量生理盐水行替代腹腔注射。各组大鼠于12日龄处死,采用免疫组织化学法检测左侧脑皮层下白质MBP的表达;实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应技术(Real-time PCR)检测各组大鼠左侧脑组织腺苷A1受体(A1R)和A2a受体(A2a R)m RNA的含量。结果 HIBD组左侧脑皮质下白质MBP表达较假手术组明显减少(P0.05),干预组较HIBD组MBP表达增多,但仍低于假手术组(P0.05);HIBD组A1R m RNA较假手术组显著上调(P0.05),干预组A1R m RNA较HIBD组显著下降(P0.05)。结论枸橼酸咖啡因能减轻缺氧缺血后新生大鼠脑白质损伤,这种保护作用可能与下调腺苷A1R表达有关。