粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子对HBV宫内感染婴儿的免疫调节作用

目的 观察粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)对HBV宫内感染免疫失败婴儿的免疫调节作用.方法 宫内感染婴儿分为治疗组和对照组(均为20例),都给予乙肝疫苗10μg免疫用量,同一部位三角肌注射(疫苗注射时间按0、1、6方案),乙肝免疫球蛋白200IU臀部肌肉注射,20天1次,共3次.治疗组注射乙肝疫苗3天后,同一部位皮内注射GM-CSF 10μg/Kg.1岁时抽外周静脉血检测T淋巴细胞亚群的水平、血清干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)的水平.结果 (1)治疗组CD4+T细胞百分数及CD4 +/CD8+比值高于对照组(t=11.67,P＜0.05;t=13.06,P＜0.05),CD8+百分数低于对照组(t=6.25,P＜0.05),两组比较差异均有显著意义.(2)患者外周血IFN-γ水平治疗组高于对照组(t=13.92,P＜0.05);IL-4水平与对照组相比,差异无统计学意义(t=1.30,P＞0.05).结论 GM-CSF可提高HBV宫内HBV感染免疫失败婴儿CD4 +/CD8+比值,并且调节Th1/Th2细胞因子比例平衡.     

卡介苗联合Poly I:C接种对新生期小鼠脾脏T细胞的影响

目的 研究卡介苗(BCG)联合Poly I:C新生期接种对小鼠脾脏T细胞功能亚群发育的影响.方法 新生清洁级BALB/c小鼠32只,分4组:对照组、BCG组、Poly I:C组、BCG和Poly I:C联合接种组,新生期接种4周后取脾细胞用流式细胞仪检测CD3+ CD8+ IFN-γ+、CD3+ CD8- IFN-γ+、CD3+ CD8+ IL-4+ 、CD3+ CD8- IL-4+、CIM+ Foxp3+ T细胞的比例,其分别代表Tc1、TH1、Tc2、TH2和调节性T细胞(Treg)亚群.结果 BCG组、Poly I:C组、BCG和Poly I:C联合接种组TH1、Tc1细胞比例明显高于对照组(P＜0.05或P＜0.01),3个接种组间比较差异无统计学意义;Tc2、TH2和Treg比例各组间比较差异没有统计学意义;3个接种组TH1/TH2和总IFN-γ/IL-4比值明显高于对照组(P＜0.05或P＜0.01),联合接种组TH1/TH2比值高于BCG组(P＜0.05),Tc1/Tc2比值各组间差异没有统计学意义;CD4+ Foxp3+ T细胞比例各组间比较差异没有统计学意义.结论 新生期BCG和Poly I:C接种均能促进TH1、Tc1细胞亚群的发育,提高TH1/TH2比值,其联合接种在TH1/TH2水平可能具有一定的协同作用,但不能影响CD4+ Foxp3+ Treg细胞的比例.     

广州市0～14岁儿童卡介苗特异性Th1细胞免疫水平分析

目的分析广州市0～14岁儿童卡介苗特异性Th1细胞免疫水平。方法随机抽取288例广州市妇女儿童医疗中心儿童院区健康体检的0～14岁儿童静脉抗凝血,经BCG刺激后,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测Th1细胞因子(IFN-γ,TNF-α和IL-2)的水平,并用流式细胞术(FACS)检测IFN-γ和TNF-α的细胞来源。结果 BCG刺激可显著诱导儿童外周血细胞产生IFN-γ(median=726.37 pg/ml),TNF-α(median=934.98 pg/ml)和IL-2(median=48.25 pg/ml)。与不刺激组相比,差别具有统计学意义(n=288,P<0.001)。此外,IFN-γ的产生水平与年龄呈一定的正相关(r2=0.4069,P<0.05)。流式分析结果表明,BCG刺激可诱导CD4+T细胞和非CD4CD8细胞分泌IFN-γ或TNF-α,而不诱导CD8+T细胞产生细胞因子。经BCG刺激后,分别有35.71%和39.29%的儿童CD4+T细胞能够产生IFN-γ和TNF-α。结论广州市0～14岁儿童外周血细胞经BCG刺激后,主要是由CD4+T细胞和非CD4CD8细胞产生Th1细胞因子,但是CD4+T细胞能够产生Th1细胞因子的儿童比例较低,这可能是卡介苗接种免疫效果并不理想的原因之一。     

人类巨细胞病毒特异性CD8+ T细胞IFN-γ和穿孔素水平的检测

目的研究人巨细胞病毒(hCMV)结构蛋白pp65衍生抗原肽(pp65495-503, NLV)特异性CD8+ T细胞的功能特性.方法将HLA-A2/NLV四聚体染色与细胞内细胞因子或穿孔素染色相结合,以流式细胞仪直接分析NLV特异性CD8+ T细胞内穿孔素的表达水平,或者在NLV抗原肽刺激6 h后分析γ-干扰素(IFN-γ)的表达水平.结果 NLV抗原肽能诱导hCMV特异性CD8+ T细胞分泌IFN-γ,不同供者特异性CD8+ T细胞产生IFN-γ的比率存在较大差异(55.69±17.64) %,当NLV抗原肽质量浓度为10 μg/mL时IFN-γ阳性细胞百分率最高;未经刺激的特异性CD8+ T细胞内表达较高水平的穿孔素(53.90±16.41)%.结论识别单一表位的hCMV特异性CD8+ T细胞合成IFN-γ和穿孔素的能力存在多样性.     

CD244抑制活动性肺结核患者CD8+T细胞细胞因子分泌的实验研究

目的 探讨表面受体CD244在活动性肺结核患者CD8+T细胞中的功能.方法 密度梯度离心法提取活动性肺结核患者和健康对照者的外周血单个核细胞,通过流式细胞术检测CD244在CD3+ CD8+细胞中的表达;通过细胞内染色方法检测CD244与细胞因子IFN-γ和TNF-α表达的关系.结果 CD244在活动性肺结核患者CD8+T细胞表达强度显著高于健康对照者(P=0.0003);复治肺结核患者的CD244表达强度显著高于新发肺结核患者(P=0.0011);CD244-细胞表达IFN-γ比例显著高于CD244+细胞(P=0.0013);CD244-细胞表达TNF-α比例显著高于CD244+细胞(P =0.0016).结论 CD244抑制活动性肺结核患者CD8+T细胞的细胞因子分泌表达.     

结核杆菌全菌裂解物和全脂质抗原对人外周血单个核细胞的作用

目的观察结核杆菌全菌裂解物和全脂质抗原对人外周血单个核细胞(PBMC)活化和增殖的作用。方法健康成人PBMC(1×106/ml)分别加结核杆菌全菌裂解物(10μg/ml)或全脂质(10μg/ml)进行刺激,同时给予重组人白介素-2(rhIL-2,50 U/ml)维持细胞增殖,另外设仅加rhIL-2的对照组,培养至第6、9、12天,收集培养扩增细胞,流式细胞术检测T细胞以及不同亚群的增殖情况和IFN-γ的产生。结果 2组抗原均能刺激PBMC中T细胞的增殖和活化,第9天时反应最为明显,与对照组相比,全菌裂解物组CD8+T细胞比例降低而CD4-CD8-T细胞比例明显增高;全脂质组CD4+T细胞以及CD4+CD8+T细胞比例增高,差异有统计学意义(P0.05)。培养至第12天,对分泌IFN-γ的细胞亚群分析,全菌裂解物组与全脂质CD8+T细胞所占比例均高于其相应的rhIL-2对照组(P0.05);全菌裂解物组CD8-T细胞所占比例低于其相应对照组(P0.05),而全脂质组高于其相应对照组(P0.05)。结论结核杆菌全脂质抗原与全菌裂解物一样,能激活特异性免疫反应,具有潜在的疫苗组分可能性。     

CD8+耗竭T细胞在致死型约氏疟原虫感染Balb/c和C57BL/6中的差异表达及意义

目的 探讨致死型约氏疟原虫(Plasmodium yoelii17XL,P.y 17XL)感染Balb/c和C57BL/6小鼠脾脏CD8+耗竭T细胞的差异表达及意义。方法 采用新鲜P.y 17XL感染红细胞(1×106)腹腔感染Balb/c和C57BL/6小鼠,动态检测红细胞感染率并观察小鼠生存率。研磨法分离脾脏淋巴细胞。流式细胞术检测CD8+T细胞效应和耗竭细胞亚群数量和分泌IFN-γ和颗粒酶B(GB)水平。结果 P.y 17XL感染后第4～8天,Balb/c组红细胞感染率显著性升高且明显高于C57BL/6组(P0.001),C57BL/6组生存率明显高于Balb/c组(53.8%vs 0,P0.001)。感染后第5天流式结果显示,C57BL/6组CD8+CD44+CD62L-T细胞(P0.01)、CD8+IFN-γ+T细胞(P0.05)和CD8+GB+T细胞(P0.001)含量均显著高于Balb/c组。与C57BL/6组相比,Balb/c组CD8+PD-1+Tim-3+T细胞数量明显升高(P0.001),且GB荧光强度显著性降低(P0.05)。结论 P.y 17XNL红内期感染诱导产生CD8+PD-1+Tim-3+耗竭T细胞,其IFN-γ和GB分泌水平下调,进而影响原虫血症的控制。     

CD4~+CD25~+T细胞在CD8~+T细胞抗肿瘤免疫中的调节作用

实验旨在研究CD4+CD25+T细胞在CD8+T细胞抗肿瘤免疫中的调节作用。将小鼠脾脏中分离的单个核细胞分为两组,即去除CD4+CD25+T细胞组和未去除CD4+CD25+T细胞组,测定树突状细胞提呈的肿瘤抗原多肽刺激不同T细胞增殖活性、细胞因子IFN-γ分泌,以及多肽特异性CD8+T细胞对同源性胃癌细胞株MFC的杀伤活性。结果显示预先去除未致敏T细胞中的CD4+CD25+T细胞,所诱导的特异性CD8+CTL对肿瘤细胞免疫应答增强,表现为反应性T细胞对树突状细胞提呈的肿瘤抗原多肽增殖反应增强,IFN-γ分泌量提高及CD8+T细胞对MFC杀伤活性增强。这些结果表明,预先去除未致敏T细胞中的CD4+CD25+T细胞,肿瘤抗原多肽修饰的树突状细胞肿瘤疫苗效能可明显增加。CD4+CD25+T细胞在CD8+T细胞抗肿瘤免疫中起下调作用。     

阻断CD40-CD40L共刺激途径对T细胞表型及细胞因子分泌的作用研究

目的探讨应用抗CD40L单克隆抗体阻断CD40-CD40L共刺激途径后对T细胞表型及其分泌的细胞因子的影响,为体外阻断该共刺激途径诱导T细胞对异体移植抗原的免疫耐受提供实验依据.方法供鼠(C57BL/6H-2b)脾T细胞作为反应细胞,受鼠(BALB/CH-2d)脾细胞作为刺激细胞,设单抗组(加抗CD40L单抗)和对照组(不加单抗),初次混合淋巴细胞培养(MLR)7天,在不同时间点采用3H-TdR掺入法检测细胞增殖率,以ELISA法测定培养上清液中IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10等的水平,第5天采用流式细胞仪检测CD4+T和CD8+T细胞上CD25、CD69、CD40L和CD45RA的表达.再次MLR 5天,第1、3、5天采用3H-TdR掺入法测定细胞的增殖情况和ELISA法测定培养上清液中的上述细胞因子的水平.结果初次和再次MLR结果均显示,单抗组细胞增殖反应率明显低于对照组.初次MLR单抗组中CD4+T和CD8+T细胞比例明显低于对照组(P＜0.05);单抗组中CD4+CD25+T、CD4+CD69+T、CD8+CD25+T、 CD4+CD40L+T和CD8+CD69+T细胞比例明显低于对照组(P＜0.05),而CD8+CD40L+T和CD4+CD45RA+T细胞的比例与对照组相比无明显差异(P＞0.05).初次MLR中单抗组和对照组培养上清中IL-4和IL-10几乎无法测出,而单抗组培养上清中IFN-γ和IL-2的水平均明显低于对照组(P＜0.01);再次MLR后培养上清中单抗组IFN-γ、IL-2和IL-4和IL-10的分泌水平明显低于对照组(P＜0.05),但处于低水平,仍明显低于对照组.结论在体外MLR体系中,应用抗CD40L单抗孵育供鼠脾T细胞,可同时作用于CD4+T和CD8+T细胞,使CD40L+,CD25+和CD69+表达下降,引起T细胞早期的活化和成熟障碍,T细胞增殖能力减低,抑制了Th1类细胞因子IFN-γ和IL-2及Th2类细胞因子IL-4和IL-10的分泌水平,可诱导供者T细胞免疫耐受.     

结核分枝杆菌H37Ra诱导核苷酸结合寡聚结构域2基因敲除(NOD2~(-/-))小鼠的1型辅助T(Th1)细胞型免疫应答

目的探讨1型辅助T(Th1)细胞的细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)和γ干扰素(IFN-γ)及多功能T细胞在感染结核分枝杆菌H37Ra的核苷酸结合寡聚结构域2基因敲除(NOD2~(-/-))小鼠中的作用。方法 NOD2~(-/-)小鼠与野生型C57BL/6小鼠气管分别滴入MTB减毒株H37Ra建立肺部感染模型并设立生理盐水对照组,每组10只。4周后,取肺组织进行HE染色及病理评分;ELISA检测肺组织匀浆中TNF-α和IFN-γ含量;流式细胞术检测脾细胞中多功能CD4~+ T/CD8~+ T细胞的比例。结果 NOD2~(-/-)小鼠感染H37Ra后肺组织炎症加重,肺组织TNF-α和IFN-γ含量增加。与生理盐水组相比,两种小鼠感染后, CD4~+/CD8~+T细胞中TNF-α~+、 IFN-γ~+单阳性细胞及TNF-α~+IFN-γ~+细胞均显著增加;与C57BL/6小鼠感染组相比, NOD2~(-/-)小鼠感染组体内TNF-α~+ CD4~+ T细胞、 IFN-γ~+ CD4~+T细胞及IFN-γ~+ CD8~+ T细胞显著增加。结论 H37Ra可诱导NOD2~(-/-)小鼠的Th1细胞型免疫应答反应。     

活动性结核病患者外周血单个核细胞中结核分枝杆菌抗原特异性多能CD4+和CD8+T淋巴细胞的特征研究

目的 研究活动性结核病患者外周血单个核细胞中结核分枝杆菌抗原特异性多能T淋巴细胞细胞因子的分泌特征.方法 利用γ干扰素释放试验和多色流式细胞术分析了13例活动性结核病患者、11例肺部感染性/肿瘤疾病患者以及14例健康对照者外周血中结核分枝杆菌抗原特异性(ESAT-6和CFP-10)CD4+Th1和CD8+Tc淋巴细胞表达细胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-2的情况.结果 与肺部感染性/肿瘤疾病组和健康对照组相比:(1)活动性结核病组具有较低比例的分泌TNF-α+的CD4+Th1细胞、较高比例的分泌IFN-γ+和IFN-γ+TNF-α+IL-2+的CD4+Th1细胞;(2)活动性结核病组具有较高比例的分泌IFN-γ+TNF-α+IL-2+的CD8+Tc细胞.结论 实验结果提示活动性结核病患者中表达IFN-γ+TNF-α+IL-2+的多能CD4+Th1及CD8+Tc细胞,可能在区别活动性结核病与肺部感染性/肿瘤疾病方面具有一定的临床参考价值.     

Enhanced cellular immune response elicited by a DNA vaccine fused with Ub against Mycobacterium tuberculosis

This study evaluated the immune response elicited by a Ub-fused Ag85A DNA vaccine against Mycobacterium tuberculosis. BALB/c mice were vaccinated with plasmid DNA encoding Ag85A protein, Ub-fused Ag85A DNA vaccine (UbGR-Ag85A) and negative DNA vaccines, respectively. Ag85A DNA vaccine immunization induced a Th(l)-polarized immune response. The production of Th(l)-type cytokine (IFN-γ) and proliferative T cell responses was enhanced significantly in mice immunized with UbGR-Ag85A fusion DNA vaccine, compared with non-fusion DNA vaccine. Moreover, this fusion DNA vaccine also resulted in an increased relative ratio of IgG(2a) to IgG(l) and the cytotoxicity of T cells. IFN-γ intracellular staining of splenocytes indicated that UbGR-Ag85A fusion DNA vaccine activated CD4(+) and CD8(+) T cells, particularly CD8(+) T cells. Thus, this study demonstrated that the UbGR-Ag85A fusion DNA vaccine inoculation could improve antigen-specific cellular immune responses, which is helpful for protection against TB infection.     

IL-17作为分子佐剂增强HIV DNA疫苗细胞免疫应答的研究

目的 为了进一步增强HIV DNA疫苗的免疫反应,本研究将IL-17作为HIV DNA疫苗的分子佐剂免疫小鼠,旨在探讨IL-17对HIVDNA疫苗诱导体液和细胞免疫应答的影响.方法 将小鼠IL-17构建到真核表达载体,与HW-1膜蛋白DNA疫苗pGX-Env联合免疫BALB/c小鼠;分别在第0、2周进行免疫,在第4周检测T淋巴细胞增殖指数、抗-Env IgG、细胞因子表达水平和体内细胞毒性T淋巴细胞杀伤作用(CTL)等免疫学指标.结果 IL-17能够增强HIV DNA疫苗的特定免疫反应.与单注射疫苗组相比,IL-17作为佐剂组的T细胞增殖、抗体水平和CD4~+T细胞分泌IFN-γ、IL-4和IL-17的表达均无明显增强,但对CD8~+T细胞分泌IFN-γ的表达和体内CTL的效果影响明显(P<0.05).结论 IL-17作为分子佐剂不足以影响Th细胞分化,然而却能够增强特异性CD8~+T细胞中IFN-γ的表达,尤其是增强体内CTL反应.此结果为增强艾滋病DNA疫苗CD8~+T细胞活性和用于艾滋病的治疗提供了一个新的思路.     

CpG ODN激活慢性HBV感染者外周血单个核细胞和CD4+T细胞功能的研究

目的 探讨人工合成硫代修饰的含CpG基序的寡脱氧核苷酸(ODN)作为佐剂对慢性HBV感染者PBMC和CD4+T细胞产生免疫应答的影响.方法 将入选慢性HBV感染者20例分成两组,免疫耐受组和免疫清除组各10例,用CoG ODN、HBsAg、M[CpG ODN+HBsAg]分别与同一感染者的PBMC和CD4+T细胞孵育,采用酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测两种细胞IFN-γ的分泌情况,以斑点数的多少来评价细胞分泌IFN-γ的能力.结果 CpG ODN、HBsAg、MECpG ODN+HBsAg]与PBMC孵育后IFN-γ斑点数是3±8、339±429、375±496;与CD4+Tcell孵育后IFN-γ斑点数是1±4、5±16、5±12.在免疫耐受组,CpG ODN、HBsAg、M[CpG ODN+HBsAg]与PBMC孵育后IFN-γ斑点数是3±8、361±153、375±276;与CD4+ Tcell孵育后IFN-γ斑点数是0±2、2±2、4±4.在免疫清除组,CoG ODN、HBsAg、M[CoGODN+HBsAg]与PBMC孵育后IFN-γ斑点数是3±21、289±345、405±656;与CD4+ Tcell孵育后IFN-γ斑点数是2±14、8±40、7±30.PBMC与HBsAg、M孵育后IFN-γ斑点数比较统计分析P=0.720;CD4+ Tcell与HBsAg、M孵育后IFN-γ斑点数统计分析P=0.890,两种不同细胞中与M孵育后IFN-γ斑点数比较统计分析得P=0.000.结论 在免疫耐受组和免疫清除组,CpG ODN不显著增加HBsAg刺激PBMC和CD4+ T细胞分泌IFN-γ,但CpG ODN对PBMC刺激效果优于CD4+T细胞.     

Role of IFN-γ in the establishment of anterior chamber-associated immune deviation (ACAID)-induced CD8+ T regulatory cells

Introduction of alloantigens into the AC induces a form of immune tolerance known as ACAID, which induces antigen-specific CD8+ Tregs, contributing to ocular immune privilege by down-regulating immune responses. Recent evidence suggests IFN-γ is needed for the suppressive function of CD8+ ACAID Tregs. This study tested the hypothesis that IFN-γ is needed for alloantigen-specific ACAID CD8+ Tregs to execute their suppressive function but is not required for the establishment of ACAID CD8+ Tregs. To address this hypothesis, ACAID was induced by injecting BALB/c spleen cells into the AC of WT C57BL/6 mice, IFN-γ(-/-) C57BL/6 mice, or anti-IFN-γ-treated WT C57BL/6 mice. LAT assays using C57BL/6 APCs as stimulators, CD4+ T cells from C57BL/6 mice previously immunized toward BALB/c alloantigens as effector cells, and IFN-γ-competent, IFN-γ(-/-), or IFN-γR(-/-) CD8+ Tregs were used to evaluate the suppressive function of CD8+ ACAID Tregs in response to IFN-γ. IFN-γ(-/-) mice or mice treated with anti-IFN-γ antibody prior to AC injection of alloantigen failed to develop ACAID. The suppressive function of IFN-γ(-/-) ACAID CD8+ Tregs was restored through the administration of exogenous IFN-γ. This suppressive responsiveness toward IFN-γ was CD8+ Treg-intrinsic, as CD8+ Tregs from IFN-γR(-/-) mice, which were primed in the AC with alloantigens, were not able to suppress alloantigen-specific DTH responses. These results indicate that IFN-γ is not needed for the induction of CD8+ ACAID Tregs but is required for ACAID Tregs to exert the suppression of allospecific DTH responses.     

Antigen-Antibody Complex as Therapeutic Vaccine for Viral Hepatitis B

In a previous study, hepatitis B surface antigen (HBsAg) complexed to human anti-HBs immunoglobulins (HBIG) in excess of HBsAg was used as therapeutic vaccine to treat chronic hepatitis B patients and promising results were obtained. To study the mechanisms of this approach, mice were immunized with HBsAg or IC (immunogenic complex, i.e. HBsAg complexed with mouse polyclonal anti-HBs). Studies indicate that IC induced enhanced immune responses by increasing uptake of HBsAg through Fc receptors on antigen presenting cells and modulated HBsAg processing and presentation. This modulation led to stimulation of T cell responses, and increased production of IL-2 and IFN-γ. Assay for antibody subclasses showed that higher ratio of IgG 2a was observed in the IC immunized group, which correlated with the production of lymphokine pattern. When alum was used as the adjuvant, though antibody response was enhanced, production of cytokines decreased. When DNA from a recombinant plasmid was added to IC as an adjuvant, the liter of anti-HBs was significantly higher than those in mice immunized only with the DNA or the IC. Since DNA immunization can induce both cellular and humoral immune responses, combined immunization using IC and DNA might serve as another type of therapeutic vaccine for viral hepatitis B.     

灭活与减毒两种甲肝疫苗免疫后诱导细胞免疫应答初探

目的 对国内普遍应用的减毒和灭活甲肝疫苗诱导的细胞免疫水平(产生时间、应答水平)进行检测和比较.方法 筛选健康志愿者18人,随机分组后分别接种甲肝减毒活疫苗和甲肝灭活疫苗.按实验程序以周次为时间点采血,用化学发光法对特异性甲肝抗体(HAY-IgG)进行检测;同时收集外周血单个核细胞(PBMC),用特异性甲肝抗原刺激后,以酶联免疫斑点试验(ELISPOT)法检测效应T细胞分泌TH1型细胞因子IFN-γ的情况;用胞内细胞因子染色法测定CD+ T和CD8+T淋巴细胞中分泌IFN-γ的阳性细胞百分比,Lumlnex法检测细胞培养上清中IFN-γ、IL-2、IL-10、IL-4等多种细胞因子水平.结果 两种疫苗均可诱导产生特异性抗HAV抗体,且观测期间抗体水平差异无统计学意义.两种疫苗接种初期即可诱导产生病毒特异性T细胞免疫应答反应,同时伴随高水平的效应细胞因子IFN-γ产生.在免疫接种后1-3周,灭活疫苗诱导的细胞免疫应答水平高于减毒疫苗;而在4-6周,减毒疫苗诱导的细胞免疫应答水平明显增高,超过灭活疫苗.灭活疫苗所诱导的细胞免疫应答在加强免疫后明显增强.结论 两种疫苗接种初期均可诱导体液和细胞免疫应答;灭活疫苗加强免疫后可激发记忆性免疫应答.     

CpG-ODN和氢氧化铝复合佐剂对流感病毒裂解疫苗免疫效果的影响

目的 研究CpG-ODN和氢氧化铝复合佐剂对流感病毒裂解疫苗体液免疫和细胞免疫效果的影响,为今后研制新佐剂流感疫苗和解决流感疫苗产能不足的问题提供依据.方法 以不同剂量的2009 H1N1流感病毒裂解疫苗为抗原,分别以CpG-ODN、氢氧化铝以及CpG-ODN和氢氧化铝复合佐剂为疫苗佐剂免疫BALB/c小鼠,通过ELISA、血凝抑制试验和假病毒中和试验等方法评价体液免疫效果,通过ELISPOT、胞内细胞因子染色和体内CTL杀伤等方法评价细胞免疫效果.结果 与无佐剂对照组相比,CpG-ODN或氢氧化铝单独使用能够在一定程度上增强体液免疫,2针免疫后不同抗原剂量组中抗原特异性IgG抗体滴度、血凝抑制抗体滴度和中和抗体滴度分别提高3～6倍、2～4倍和4～8倍.CpG-ODN和氢氧化铝复合佐剂具有更强的佐剂效应,2针免疫后不同抗原剂量组中抗原特异性IgG抗体滴度、血凝抑制抗体滴度和中和抗体滴度分别提高23～ 57倍、9～20倍和16～64倍.根据体液免疫结果,复合佐剂能够使流感病毒裂解疫苗的抗原用量降低至少16倍.此外,复合佐剂能够显著增强流感病毒裂解疫苗的细胞免疫应答,不但能够促进抗原特异性CD4+T细胞的IFN-γ分泌,而且能够促进抗原特异性CD8+T细胞的CTL杀伤活性.结论 CpG-ODN和氢氧化铝复合佐剂能够增强流感病毒裂解疫苗的体液免疫和细胞免疫应答并显著降低抗原用量.     

Local recall responses in the stomach involving reduced regulation and expanded help mediate vaccine-induced protection against Helicobacter pylori in mice

Helicobacter pylori is recognised as the chief cause of chronic gastritis, ulcers and gastric cancer in humans. With increased incidence of treatment failure and antibiotic resistance, development of prophylactic or therapeutic vaccination is a desirable alternative. Although the results of vaccination studies in animal models have been promising, studies in human volunteers have revealed problems such as 'post-immunisation gastritis' and comparatively poor responses to vaccine antigens. The focus of this study was to compare the gastric and systemic cellular immune responses induced by recombinant attenuated Salmonella Typhimurium-based vaccination in the C57BL/6 model of H. pylori infection. Analysis of lymphocyte populations in the gastric mucosa, blood, spleen, paragastric LN and MLN revealed that the effects of vaccination were largely confined to the parenchymal stomach rather than lymphoid organs. Vaccine-induced protection was correlated with an augmented local recall response in the gastric mucosa, with increased proportions of CD4(+) T cells, neutrophils and reduced proportions of CD4(+) Treg. CD4(+) T cells isolated from the stomachs of vaccinated mice proliferated ex vivo in response to H. pylori antigen, and secreted Th1 cytokines, particularly IFN-γ. This detailed analysis of local gastric immune responses provides insight into the mechanism of vaccine-induced protection.     

Breaking tolerance in hepatitis B surface antigen (HBsAg) transgenic mice by vaccination with cross-reactive, natural HBsAg variants

Processing exogenous hepatitis B surface antigen (HBsAg) of the hepatitis B virus (HBV) generates the K(b)-binding S(208-215) epitope 1; processing endogenous HBsAg generates the K(b)-binding S(190-197) epitope 2. Cross-reactive CD8(+) T cell responses were primed to epitope 1 but not epitope 2 when mice were immunized with natural HBsAg(ayw), or HBsAg(adw2) variants differing within both epitopes by one or two residues. Expression of HBsAg(ayw) from a transgene in the liver renders (HBs-tg) mice tolerant to epitope 1 of HBsAg(ayw). CD8(+) T cells specific for epitope 1 could be primed in HBs-tg mice by HBsAg(adw2); these specific CD8(+) T cells cross-reacted with epitope 1 processed from the transgene-encoded HBsAg(ayw). The liver of vaccinated HBsAg(ayw) transgenic mice showed severe histopathology and contained functional (IFNgamma-producing), cross-reactive CD8(+) T cells, and vaccinated HBs-tg mice showed reduced antigenemia. Hence, vaccination with natural HBsAg variants from different HBV sero/genotypes can prime cross-reactive, specific CD8(+) T cell immunity that breaks tolerance to HBsAg.