基因变异与疾病发生的相关研究

据美国BIOCOMPARE科技新闻网(2010/2/26)报道,美国杜克大学医学中心(Duke University Medical Center)的研究人员在近期的一份研究中指出,他们确信一些基因变异,可能是造成大部分疾病发生的重要关键,此研究发表于近期的PLoS Biolo-gy期刊,由David Goldstein及Samuel Dickson博士主导研究进行。     

CD36与动脉粥样硬化的相关性研究

目的 探讨清道夫受体CD36在动脉粥样硬化患者血清中的变化及CD36在人主动脉粥样硬化组织中的表达情况,并研究两者的相关性及其临床意义.方法 选择心血管内科冠心病患者(CHD) 100例作为冠心病组,其中包括稳定型心绞痛(SAP)31例,不稳定型心绞痛(UAP) 29例,急性心肌梗死(AMI)40例.同时选择健康体检者50例作为对照组.ELISA法对两组血清进行CD36的浓度检测,检测其甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、hs-CRP、同型半胱氨酸(Hcy)含量,并对结果数据进行统计学分析.选择经冠脉造影诊断为冠心病的心脏手术患者的冠状动脉组织,同时选择因意外伤害需要心脏手术患者的冠状动脉组织作为对照组,免疫组化法检测两组组织中的CD36的表达.结果 ELISE法检测健康对照组CD36的含量为3.81 ±0.95pg/mL,而冠心病患者血清中CD36含量为25.17±3.76pg/mL,冠心病患者血清中CD36含量较健康对照组明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).其中稳定型心绞痛(SAP)CD36含量为18.68 ±2.17 pg/mL,不稳定型心绞痛(UAP)24.19±0.82 pg/mL,急性心肌梗死(AMI)27.17±5.83 pg/mL,不稳定型心绞痛和急性心肌梗死组CD36水平较稳定型心绞痛的明显升高(P＜0.01).动脉粥样硬化患者组CD36表达明显高于健康对照组,差异有统计学意义(x2 =23.018,P＜0.05).结论 清道夫受体CD36在动脉粥样硬化患者血清中浓度明显升高,且在动脉粥样硬化患者组织中高表达,临床上动脉粥样硬化患者检测CD36具有重要临床意义.     

脐血HLA-A位点PCR-SBT分型的研究

目的建立HLA—A位点等位基因的PCR-SBT高分辨分型方法，探讨DNA测序技术在脐血库样本HLA分型中的应用价值。方法利用PCR产物直接测序，对广州脐血库保存的547份脐血样本进行HLA—A位点2、3、4外显子的序列分析，由分型结果得出基因频率，与中华（上海）骨髓库北方人群、上海地区人群及德国白种人进行比较。结果采用PCR-SBT分型方法并结合分析软件确定了全部样本的HLA—A基因型，广州地区人群HLA-A等位基因以A＊110101（30．8％）最为常见，其后依次是A＊24020101／02L（16．18％）、A＊0207（11．88％）、A＊3303（9．42％）。A＊110101在广州汉族人群中出现的频率明显高于中华（上海）骨髓库北方人群，而A＊010101、A＊3001明显低于后者；在HLA-A2亚型人群中，A＊020101在广州、上海两地汉族人群中的频率明显低于德国白种人，而广州汉族人群中A＊020101与A＊0206均明显低于上海汉族人，但A＊0203明显高于后者。结论基于核酸序列测定的HLA分型技术能够直接、准确、快速地进行高分辨分型，将有助提高无亲缘关系供者脐血移植的临床效果。改进实验条件、升级分型软件，可以降低试剂成本和节约时间。     

HBV治疗的基因变异及其检测方法研究

拉米夫定(Lamivudine)是一种慢性乙型肝炎抗病毒治疗新药,具有很强的抑制HBV复制的作用。但由于其抑制病毒复制作用短暂,停药后易于复发,因此需要长期用药,然而长期服药治疗可引起HBV DNA多聚酶活性区核苷酸序列的变异,称为YMDD变异[1]。Nancy[2]报道一组Ⅲ期临床试验,拉米夫定治疗1、2、3和4年后HBV变异率分别为17%、40%、55%和67%,且变异后的HBV对拉米夫定的敏感性下降,对临床疗效也产生了一定影响。因此,选择和建立简便、快速、特异并适合临床应用的实验方法用于检测YMDD的变异,对及时调整治疗方案、合理用药及提高疗效具有重要意义。1.基因变异拉米夫定是一类新的双脱氧核苷类似物,最早开发用于治疗HIV,后来发现他具有抑制HBV复制的作用。拉米夫定在服用后于体内代谢成为拉米夫定三磷酸化物(3TC-TP)。HBV在复制过程中存在前基因组RNA的逆转录过程,3TC-TP在逆转录过程中渗入到新合成的DNA链中,由于其戊糖环为双脱氧硫代呋喃糖环,不具有3‘羟基,不能形成磷酸二酯键,所以可以阻止下一个核苷酸的渗入,达到抑制HBV复制的目的。HBV变异株基因存在突变,此突变主要发生在HBV ...     

应用MALDI-TOF-MS技术高通量检测乙肝病毒耐药基因变异

目的 建立基于MALDI-TOF-MS技术的高通量检测乙型肝炎病毒耐药基因变异的临床检测方法 .方法 应用MassARRAY Assay Design软件设计iPLEX引物,按iPLEX反应的操作说明进行PCR扩增、SAP反应、引物延伸、脱盐、点样,MALDI-TOF-MS采集、分析iPLEX反应物的数据,判读基因变异位点.批量检测、分析138例HBV耐药包括拉米夫定、阿德福韦、恩替卡韦单药耐药及多重耐药的慢性乙型肝炎患者血清标本.并对MALDI-TOF-MS所检测的HBV基因变异位点所在区域进行DNA测序,与MALDI-TOF-MS检测结果 对比、分析.结果 建立了基于MALDI-TOF-MS技术的HBV基因突变检测平台,实现了临床血清标本的高通量检测.能一次获得138份标本的HBV基因突变临床检测结果 .MALDI-TOF-MS技术和DNA测序同时检测的33份标本中,有10份检测结果 不一致,其中有2份MALDI-TOF-MS技术未检测到,有1例出现2个检测位点不一致.结论 MALDI-TOF-MS技术灵敏度高、准确度高,可高通量、快速检测HBV基因变异,适用于HBV临床诊治及监测.     

应用PCR方法检测恶性血液病巨细胞病毒感染

近年来，随着医疗技术的不断发展和新的药品大量涌现，对白血病的治疗有了很大的改善，缓解率明显提高。由于免疫抑制剂的大量应用，影响了病人的自体免疫保护，从而使易致病菌侵入，发生感染。ＣＭＶ感染是恶性血液病在用免疫抑制剂化疗期间很常见的传染源。在正常人中ＨＣＭＶ可以引起无症状性感染，而在骨髓移植病人中有２０％的病人并发有ＣＭＶ间质性肺炎，病死率可高达８５％。本文采用ＰＣＲ方法对１８例恶性血液病的ＣＭＶ感染情况进行了检测，现报告如下：所检测的１８例恶性血液病，其中男１１例，女７例，年龄１５－６３岁，包括…     

应用PCR方法检测婴幼儿童的CMV感染

聚合酶链反应 (PCR)是近年来发展起来的分子生物学领域中新一代检测技术。我们实验室应用PCR扩增技术 ,对临床怀疑为CMV病毒感染的患儿 5 5 2例进行了检测 ,其中阳性 2 2 8例 ,阴性 32 4例 ,阳性率为 4 1 30 %。     

CD36与hsCRP、FIB在冠心病中检测的临床意义

近年来hsCRP越来越多被用于预测冠脉病变严重程度,亦可预测斑块的不稳定性.CD36与单核细胞泡沫化有关,在动脉粥样硬化的发生发展中发挥着重要作用.本研究在于探讨CD36、hsCRP及FIB三者在冠心病发生、发展中的作用及临床检测意义.1资料与方法     

应用PCR方法检测孕妇血中HCMV感染

聚合酶链反应(PCR)是新发展起来的分子生物学领域中的一项检测技术。我们应用PCR扩增技术，对妇产科临床怀疑为HCMV病毒感染的22～38岁的孕妇160例进行检测，其中阳性68例，阴性92例，阳性率42．5％。     

应用MAC-ELISA方法检测呼吸道合胞病毒IgM抗体

建立酶联免疫吸附试验(MAC-ELISA)检测呼吸道合胞(RS)病毒特异性IgM抗体方法,并与中和试验(NT)进行对比。 取35例患毛细支气管炎婴幼儿的急性期及恢复期双份血清共70份标本进行研究。MAC-ELISA测得急性期血清中RS病毒特异性IgM抗体的阳性率为27/35(77.14％),而恢复期血清中和抗体呈≥4倍升高者为23/35(65.71％)。凡NT阳性病例,MAC-ELISA也呈阳性;凡MAC-ELISA阴性病例,NT也呈阴性。另4例NT阴性而MAC-ELISA呈阳性。两者阳性符合率为88.57％。 本研究也观察了IgM抗体与年龄的关系。在6个月龄以前,MAC-ELISA的阳性率远远高于NT。 实验说明采用MAC-ELISA检测RS病毒特异性IgM是可靠的快速诊断方法。     

肺炎衣原体对SR-A1和CD36表达的影响及相关信号机制研究

目的:探讨肺炎衣原体(Cpn)对THP-1源性巨噬细胞A1型清道夫受体(SR-A1)和B类清道夫受体CD36表达的影响及c-jun氨基端激酶(JNK)信号通路在其中的调控作用.方法:THP-1单核细胞诱导分化为巨噬细胞后随机分为四组:对照组、Cpn组、Cpn+SP600125(JNK特异性抑制剂)组、SP600125组.运用油红O染色观察细胞浆内脂滴的变化,用酶荧光学法检测细胞内胆固醇酯含量的变化,分别用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)和免疫印迹法(Western blot)检测各组SR-A1、CD36 mRNA和蛋白表达.结果:SP600125能呈浓度依赖性的抑制Cpn诱导的泡沫细胞形成和SR-A1表达上调,但对Cpn诱导的CD36的表达无明显影响.结论:Cpn可通过JNK信号通路上调SR-A1表达,而Cpn对CD36表达无明显影响.     

PCR方法检测献血员巨细胞病毒感染

ＰＣＲ方法检测献血员巨细胞病毒感染河北省人民医院遗传室（石家庄，０５００５１）郝玉宾，李洪云，郭文潮，张德峰，余小平血库刘甲俊指导朱俊真人巨细胞病毒是双链ＤＮＡ病毒，系疱疹病毒属。该病毒常与人体自身免疫和移植物排斥相关［１］。我们采用聚合酶链反应（Ｐ...     

使用PCR-SSP方法检测HLA-DR抗原

目的采用顺序特异引物聚合酶链反应(PCR-SSP)建立人类白细胞抗原DR位点的DNA分型方法.方法合成29个特异性引物和1对阳性对照引物,组成20个PCR反应用于DR位点,建立一步法PCR-SSP.结果所有样本PCR-SSP基因分型获得成功,分型结果经标准DNA,限制性核酸内切酶分析证实符合,特异性和重复性100%.结论 PCR-SSP检测HLA-DR的方法具有快速、准确、特异性高等优点,适合临床应用.     

夹心免疫PCR方法检测蓖麻毒素

目的：建立了双抗夹心免疫PCR的检测技术，检测极微量的抗原，方法：以亲和素作为连接分子连接生物素化抗体和生物素化DNA，应用于免疫PCR中，检测极微量的抗原。结果：建立了双抗夹心免疫PCR的检测技术，检测蓖麻毒素的灵敏度达0．1pg/ml，与夹心ELISA方法比较灵敏度高10^3倍。结论：建立的免疫PCR系统灵敏度高，可用于各种微量抗原的检测。     

多重RT-PCR方法检测甲型流感病毒

目的建立一种快速、敏感、特异的多重RT-PCR,同时检测甲型流感病毒中的3个分型:甲型H1N1流感病毒,季节性H1N1流感病毒,季节性H3N2流感病毒,并将此方法应用到实验室流感病毒核酸检测技术中。方法利用甲型流感病毒3个分型病毒的引物,在同一个RT-PCR反应体系中,对疑似流感咽拭子标本进行检测。结果多重RT-PCR对甲型流感病毒中分型病毒有较高的灵敏度和特异性,可直接从疑似流感标本中同时进行甲型流感病毒分型检测。结论此实验中采用的多重RT-PCR具有与常规RT-PCR一样的特异性和敏感度,而且比普通RT-PCR和病毒分离法更快速,也更简便。     

应用ELISA方法检测抗呼吸道合胞病毒免疫核糖核酸免疫活性的研究

本文报导在小鼠模型系统中,应用ELISA方法对兔抗呼吸道合胞病毒(RSV)免疫核糖核酸(i-RNA)诱生血清特异性抗体及抗体生成的动态进行观察。实验结果表明:抗呼吸道台胞病毒免疫核糖核酸(RSV-i-RNA)在小鼠体内具有诱生血清特异性抗体能力。RSV-i-RNA常规致敏后24h抗体水平明显增高,72h达高峰,11天左右降至正常水平,RNase处理使RSV-i-RNA诱生血清特异性抗体能力明显减低,而DNase、Pronase对其则无明显影响。     

沈阳地区汉族人群HLA-DRB1的PCR-SBT分型研究

HLA(humanleukocyteantigen ,HLA)位于人类第 6号染色体短臂 6p2 1.3区域 ,具有高度的遗传多态性 ,作为个体组织细胞的遗传标志物 ,在抗原识别、递呈、免疫应答与调控等方面起着非常重要的作用。其中HLA DR抗原是异基因移植免疫反应中最重要的抗原之一 ,决定其特异性的主要编码基因DRB1座位具有高度多态性 ,DRB1基因分型对器官移植的供体选择、法医学个体认定、HLA与疾病相关性及人类学等研究均具有重要意义。我们用聚合酶链反应 直接测序方法 (PCR SBT)对沈阳地区汉族健康个体进行了DRB1高分辨率的等位基因分析。沈阳地区汉族…     

实时荧光定量PCR方法检测人正常组织及癌组织中CD109蛋白的表达

目的CD109是最近克隆到的一种细胞表面抗原,为糖基化磷脂酰肌醇联结的糖蛋白,属于含硫酯的啦巨球蛋白家族成员,本研究的目的是探讨CD109基因在人正常组织及癌组织中的分布。方法使用实时荧光定量PER方法分析了CD109在人正常组织及癌组织中的表达。结果研究结果表明,该蛋白的mRNA丰度在睾丸组织中最高,而在其他组织中较低,在癌组织标本中检测到CD109表达水平上调。结论以上结果提示表达在细胞表面的CD109蛋白可能是治疗恶性肿瘤的一个潜在的分子靶点。     

基因芯片技术对乙型肝炎病毒拉米夫定耐药基因变异检测的临床应用

目的通过对应用拉米夫定治疗患者HBV基因耐药性变异的长期监测，验证基因芯片技术的临床应用前景。方法针对HBV3个主要的拉米夫定耐药性相关突变设计探针，制成HBV耐药寡核苷酸芯片，选取51例应用拉米夫定进行治疗的乙型肝炎患者分别采用基因芯片和传统测序的方法对其进行24个月的监测，观察HBV基因变异情况。结果39％的患者在用药2年内发生了耐药性突变，使用基因芯片与传统的测序方法得到的结果一致，并且可以在早期方便检测出混合感染。结论应用基因芯片技术可以准确，高效的检测出耐药基因变异，具有临床应用价值。