脐血间充质干细胞移植对大鼠肺动脉高压的治疗作用研究

目的:观察脐血间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)移植对SD大鼠肺动脉高压(PAH)的治疗作用。方法:将60只健康雄性SD大鼠随机分为4组,每组15只(n=15),即①正常对照组:不做任何处理;②模型组:以腹主动脉-腔静脉瘘分流术(abdominal aortocaval fistula shuning,A-VF)+单野百合碱(monocrotaline,MCT)注射建立大鼠PAH模型,故也可称为A-VF+MCT组;③干细胞移植组:在建立PAH模型后4周,经尾静脉注射Ho-echst 33342荧光染料标记的脐血MSCs,故此组也可称A-VF+MCT+MSCs组;④培养液对照组:在建立PAH模型后4周,经尾静脉注射培养脐血MSCs的培养液,故此组也可称为A-VF+MCT+培养液组。4周后以右心导管法测定平均肺动脉压(mPAP)、右心室肥厚指数[RVHI=RV/(LV+S)]、肺小动脉中层厚度占血管外径的百分比[MA(%)]和血管壁中层横截面积占血管总横截面积的百分比[MA(%)],观察肺小动脉重构情况。检测血流动力学、肺小动脉重塑及脐血MSCs的定植情况。结果:与正常对照组比较,造模实验证实,4周后A-VF+MCT组大鼠可形成典型的PAH,8周后mPAP明显增高,动脉中膜明显增厚,右心室出现明显肥厚;而A-VF+MCT+MSCs组大鼠mPAP、RV/(LV+S)、MT%和MA%均显著下降(P<0.01)。PAH大鼠死亡率从66.7%下降到13.3%。荧光显微镜观察显示脐血MSCs已成功定植到肺血管内膜。结论:以A-VF+MCT建立的大鼠PAH模型可形成重度PAH。脐血MSCs移植能显著降低肺动脉压力,减轻肺小动脉重构及右心室肥厚,显著降低PAH大鼠的死亡率。     

辛伐他汀对野百合碱诱导肺动脉高压大鼠Rho／Rock的影响

目的观察辛伐他汀在野百合碱（MCT）诱导的肺动脉高压（PAH）大鼠模型中对Rh0／Rock表达的影响,探讨辛伐他汀改善MCT所致PAH的机制。方法雄性SD大鼠30只随机均分为对照组、MCT模型组和辛伐他汀干预组（SS组）。测量各组大鼠干预后平均肺动脉压力（mPAP）、右心室肥厚指数（RVHI）;观测大体的组织形态病理改变,采用免疫组化和Westernblot检测肺组织中的PCNA、α-SMA、Rho／Rock的表达。结果与对照组及干预组相比,MCT组的mPAP及RVHI显著增加（P〈0．05）,PCNA、α—SMA、Rho／Rock的表达显著增多（P〈0．05）;与对照组相比,SS组的mPAP及RVHI差异无统计学意义（P〉0．05）;而PCNA、α—SMA、Rho／Rock的表达显著增多（P〈0．05）。结论辛伐他汀可有效减轻MCT诱导的PAH大鼠肺动脉压力,其机翩可能与辛伐他汀通过Rho／Rock信号通路改善肺动脉平滑肌增生重构有关。     

人源性脐带间充质干细胞治疗实验性肺动脉高压所致右心衰竭的疗效观察

目的 拟通过建立MCT诱导的PAH大鼠模型,观察人脐带间充质干细胞（UC-MSCs）干预对大鼠PAH和右心衰竭的治疗效应。方法 实验动物分为3组（空白对照组、PAH组和UC-MSCs组）,在MCT腹腔注射1周后进行干预,UC-MSCs组舌下静脉注射UC-MSCs悬液,空白对照组和PAH组舌下静脉注射等量生理盐水。第4周大鼠行右心超声心动图、右心导管测压、右心肥厚指数以及肺组织病理等检测。结果 与对照组相比,PAH组大鼠右心室游离壁厚度(RVWT)和右心室内径(RVID)显著增大,肺动脉血流加速时间与射血时间比值（PAT/PET）显著下降,右心收缩压（RVSP）和右心肥厚指数(RVHI)显著增高,肺小动脉血管壁厚度（WT）明显增厚。与PAH组相比,UC-MSCs组RVWT和RVID显著减小,PAT/PET明显升高,RVSP和RVHI明显降低,WT明显变薄。结论 利用MCT腹腔注射成功制备PAH大鼠模型,经舌下静脉注射UC-MSCs可以显著降低肺动脉压力,改善右心功能,逆转肺血管重构。     

褪黑素干预动脉性肺动脉高压大鼠的实验研究

目的探讨褪黑素(MEL)干预对野百合碱(MCT)诱导的动脉性肺动脉高压(PAH)大鼠肺动脉压及肺组织环氧合酶-2(COX-2)表达情况的影响。方法 36只大鼠按随机数表法分为对照组、造模组(MCT)、干预组(MCT+MEL)。造模组和干预组分别按2.5 ml/kg(50 mg/kg,溶于无水乙醇+生理盐水混合液)规格腹膜内注射MCT溶液。对照组按2.5 ml/kg接受腹膜内注射溶媒。造模后第1～28天,干预组予以MEL 10 ml/kg (10 mg/kg,溶于无水乙醇+生理盐水混合液)腹膜内注射,1次/d,对照组和造模组予以单位等体积溶媒腹膜内注射,1次/d。测量并记录3组大鼠平均肺动脉压(mPAP)、右心室肥厚指数(RVHI)、肺小动脉管壁厚度占血管外径的百分比(WT%)、肺小动脉血管壁面积占血管总面积的百分比(WA%)及肺小动脉COX-2平均光密度值(AOD)。应用SPSS 22.0统计软件对数据进行分析。结果与对照组比较,造模组大鼠mPAP、RVHI、WT%、WA%、AOD显著升高;与造模组比较,干预组大鼠上述指标均有不同程度降低,但仍高于对照组,差异均具有统计学意义(P0.001)。相关性分析显示,AOD与mPAP、RVHI、WT%、WA%呈显著正相关(r依次为0.836、0.749、0.823、0.821,P均0.01)。结论 MEL能够降低MCT诱导的PAH大鼠的肺动脉压,改善肺血管重塑,这可能与其抑制COX-2表达水平有关。     

槲皮素对野百合碱诱导的大鼠肺动脉高压的影响

目的:观察槲皮素对野百合碱(MCT)诱导的肺动脉高压大鼠的治疗效果。方法:30只成年雄性SD大鼠随机分成3组:MCT诱导的肺动脉高压组(MCT组)、治疗组和对照组。MCT组和治疗组一次性皮下注射MCT 50mg/kg,饲养21d;对照组一次性皮下注射等量0.9%氯化钠溶液,饲养21d。造模后治疗组以槲皮素100mg.kg-1.d-1灌胃20d;MCT组和对照组以0.9%氯化钠溶液2ml/d灌胃20d。20d后,测定3组大鼠平均肺动脉压(mPAP),计算右心室肥大指数(RVHI);光镜下观察大鼠肺组织形态学的改变及肺血管增殖细胞核抗原(PCNA)增殖度的变化,并计算肺中、小动脉管壁厚度占血管外径的百分比(WT%)和肺动脉管壁面积/管总面积的百分比(WA%)。结果:MCT组的mPAP、RVHI、肺中、小动脉WT%、WA%及PCNA增殖度均显著高于对照组及治疗组。结论:槲皮素可降低MCT所致的大鼠肺血管PCNA表达,抑制MCT诱导的肺部炎症、肺血管重建和肺动脉高压形成,对MCT所致的大鼠肺动脉高压具有治疗作用。     

基质金属蛋白酶-2在低氧性肺动脉高压大鼠肺血管中的表达及辛伐他汀对其影响

目的观察基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在低氧性肺动脉高压大鼠肺血管中的表达,及辛伐他汀对其表达的调节作用。方法采用随机分组方法将30只雄性SD大鼠分为对照组、低氧组和预防组,每组10只,低氧组和预防组给予低氧处理,建立大鼠低氧性肺动脉高压模型,且预防组于低氧前给予辛伐他汀灌胃,对照组不做任何处理。3周后观察大鼠平均肺动脉压(mPAP)、右心室肥厚指数即右心室/(左心室+室间隔)和肺血管形态学指标的变化。采用免疫组织化学染色方法检测大鼠肺小动脉MMP-2表达。结果低氧组大鼠mPAP、右心室肥厚指数、肺血管形态学指标和肺小动脉MMP-2染色强度均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);而预防组上述指标低于低氧组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 MMP-2在低氧性肺动脉高压大鼠肺血管中的表达增加,辛伐他汀可抑制其表达,预防低氧性肺动脉高压的形成。     

舒肺颗粒对大鼠低氧性肺动脉高压的影响

目的观察舒肺颗粒对大鼠低氧性肺动脉高压的影响。方法将30只雄性Wistar大鼠分为常压对照组、低氧对照组和低氧/中药给药组。以常压低氧复制肺动脉高压模型。观察右心室肥厚指数、肺小动脉管壁厚度的变化。结果低氧/中药给药组应用舒肺颗粒后大鼠肺血管厚度、右心室肥厚指标显著低于低氧对照组(P<0.05),并可抑制低氧所致的大鼠右心室肥厚(P<0.05)。结论舒肺颗粒在防治低氧性肺动脉高压中具有一定的应用前景。     

大鼠肺小动脉重构发生在肺动脉压增高之前

目的 探讨野百合碱(MCT)所致大鼠肺小动脉重构与肺动脉压力增高的关系.方法 雄性SD大鼠32只,体质量200～230 g,随机均分为肺动脉高压(PAH)组和对照组.PAH组一次性腹腔注射MCT 40 mg/kg,对照组一次性腹腔注射相同体积的生理盐水.于注射MCT后2周及4周,分别从以上两组大鼠中随机选择8只,测定肺动脉平均压(MPAP)和右心室肥厚指数(RVHI),并运用ipp6.0图像分析软件分析肺组织切片,测定肺小动脉管壁厚度(WT)占动脉外径(ED)的百分比(WT%)及管壁面积(WA)占血管总面积的百分比(WA%).结果 腹腔注射MCT 2周后MPAP和RVHI在对照组与PAH间差异无统计学意义[(23.6±2.1)vs(26.0±2.8)mm Hg,(23.4±4.6)vs(24.7±3.9)%,P均＞0.05],但是与对照组相比,PAH的WT%、WA%均明显增高[WT:(39.1±2.8)vs(50.8±3.1)%,WA:(51.2±3.0)vs(74.5±2.9)%,P均＜0.05];4周后与对照组相比,PAH的MPAP、RVHI、WT%、WA%都明显增高[MPAP:(24.0±3.0)vs(35.7±3.1)mm Hg,RVHI:(24.2±3.7)vs(44.6±4.3)%,P均＜0.01;WT:(40.1±3.1)vs(57.5±2.0)%,WA:(51.1±2.0)vs(78.3±2.0)%,P均＜0.05].结论 MCT所致大鼠肺小动脉的重构先于肺动脉压力的增高.     

大鼠肺小动脉重构发生在肺动脉压增高之前

目的探讨野百合碱(MCT)所致大鼠肺小动脉重构与肺动脉压力增高的关系。方法雄性SD大鼠32只,体质量200~230g,随机均分为肺动脉高压(PAH)组和对照组。PAH组一次性腹腔注射MCT40mg/kg,对照组一次性腹腔注射相同体积的生理盐水。于注射MCT后2周及4周,分别从以上两组大鼠中随机选择8只,测定肺动脉平均压(MPAP)和右心室肥厚指数(RVHI),并运用ipp6.0图像分析软件分析肺组织切片,测定肺小动脉管壁厚度(WT)占动脉外径(ED)的百分比(WT%)及管壁面积(WA)占血管总面积的百分比(WA%)。结果腹腔注射MCT2周后MPAP和RVHI在对照组与PAH间差异无统计学意义[(23.6±2.1)vs(26.0±2.8)mmHg,(23.4±4.6)vs(24.7±3.9)%,P均>0.05],但是与对照组相比,PAH的WT%、WA%均明显增高[WT:(39.1±2.8)vs(50.8±3.1)%,WA:(51.2±3.0)vs(74.5±2.9)%,P均<0.05];4周后与对照组相比,PAH的MPAP、RVHI、WT%、WA%都明显增高[MPAP:(24.0±3.0)vs(35.7±3.1)mmHg,RVHI:(24.2±3.7)vs(44.6±4.3)%,P均<0.01;WT:(40.1±3.1)vs(57.5±2.0)%,WA:(51.1±2.0)vs(78.3±2.0)%,P均<0.05]。结论MCT所致大鼠肺小动脉的重构先于肺动脉压力的增高。     

骨形态发生蛋白4 mRNA在低氧大鼠肺血管中的表达

目的观察骨形态发生蛋白4（BMP4）mRNA在低氧性肺动脉高压大鼠肺血管中的表达及其与低氧性肺动脉高压形成的关系。方法将20只雄性SD大鼠随机分为对照组和低氧组,常压低氧3周建立大鼠肺动脉高压模型,以导管法测定平均肺动脉压（mPAP）,分离并分别称量大鼠右心室（RV）和左心室加室间隔（LV＋S）,计算出右心室肥厚指数RV/（LV＋S）。采用图像分析法测定和计算出肺小动脉管壁厚度指标即管壁厚度占外径的百分比（WT%）和管壁面积占总面积的百分比（WA%）,并采用原位杂交方法检测大鼠肺小动脉管壁BMP4 mRNA的表达水平。结果①对照组mPAP为（16.47±1.11）mm Hg,低氧组大鼠为（29.01±0.86）mm Hg,较对照组明显升高（P〈0.01）。低氧组RV/（LV＋S）为（31.13±2.57）%,对照组仅为（23.12±1.38）%（P〈0.01）。②对照组肺小动脉厚度指标为[WT%：（12.63±0.92）%;WA%：（45.24±1.98）%],而低氧组则明显升高,分别为[WT%：（26.06±1.86）%;WA%：（76.07±5.44）%]（P均〈0.01）。③对照组和低氧组大鼠肺小动脉BMP4 mRNA的染色强度分别为（0.16±0.01）、（0.27±0.03）,低氧组BMP4 mRNA表达明显增加（P〈0.01）。结论低氧大鼠肺血管BMP4 mRNA表达明显增加,BMP4可能在低氧性肺动脉高压的形成中具有重要作用。     

槲皮素对肺动脉高压大鼠肺组织细胞凋亡的影响

目的:观察槲皮素对肺动脉高压肺组织细胞凋亡的影响。方法:将成年雄性SD大鼠30只,随机分为三组:正常对照组(对照组)、野百合碱(MCT)诱导的肺动脉高压组(MCT组)和槲皮素预防组(预防组),每组10只。MCT组及预防组给予野百碱造模,对照组仅以等量0.9%氯化钠液注射,预防组在造模同时每天给予槲皮素100mg/(kg.d)灌胃,21d后测肺动脉压力并计算右心肥大指数,肺组织切片用免疫组化法和免疫印迹法观察大鼠肺组织细胞凋亡(Bcl-2)情况。结果:MCT组大鼠肺动脉平均压力[MCT组(42.13±6.28)vs.对照组(14.57±1.59),P0.05;MCT组(42.13±6.28)vs.预防组(20.32±3.85),P0.05]、右心肥大指数[MCT组(0.593±0.100)vs.对照组(0.241士0.050),P0.05;MCT组(0.593±0.100)vs.预防组(0.290±0.065),P0.05]、肺组织细胞的Bcl-2蛋白相对表达量[MCT组(0.964±0.009)vs.对照组(0.684±0.014),P0.05;MCT组(0.964士0.009)vs.预防组(0.849±0.009),P0.05]显著高于对照组及预防组;同时预防组大鼠肺动脉压力[预防组(20.32士3.85)vs.对照组(14.57±1.59),P0.05]、右心肥大指数[预防组(0.290±0.065)vs.对照组(0.241±0.050),P0.05]、肺组织细胞的Bcl-2蛋白相对表达量[预防组(0.849±0.009)vs.对照组(0.684士0.014),P0.05]高于对照组。结论:槲皮素具有减缓MCT诱导肺动脉高压大鼠肺组织细胞凋亡的作用。     

肺动脉高压对右心重构及右心室AT_1R、TGF-β1、ERK1/2蛋白表达的实验研究

目的:探讨肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension,PAH)对大鼠右心重构及右心室AT1R,TGF-β1及ERK1/2蛋白的表达。方法:选取体质量250~260g的健康雄性SD大鼠12只,随机分为:对照组(n=6)、PAH右心重构组(n=6)。对照组和PAH右心重构组分别予以0.9%氯化钠液和野百合碱(MCT)60 mg/kg单次注射于大鼠颈背部皮下,饲养6w建立模型。应用超声生物显微镜测定其右心室前壁厚度(RVAWd)及右心室射血分数(RVEF),应用右心导管测定肺动脉平均压(mPAP)。处死后分别称量右心室(RV)和左心室+室间隔(LV+SP)质量,计算右心室肥厚指数(RVHI)。天狼猩红染色计算心肌组织胶原容积分数(CVF)。应用Western blot测定右心室AT1R,TGF-β1,ERK1/2蛋白表达。结果:与对照组相比,野百合碱诱导6w后,PAH右心重构组的RVAWd、mPAP、RVHI及CVF均高于对照组,差异有统计学意义,分别为RVHI[(25.01±1.20)vs.(40.57±4.17)%],mPAP[(16.56±1.98)vs.(29.46±2.47)mmHg],RVAWd[(0.65±0.09)vs.(1.17±0.08)mm],RVEF[(54.15±4.60)vs.(62.63±9.54)%],均为P0.01;PAH右心重构组右心室心肌组织AT1R、TGF-β1及ERK1/2蛋白表达显著高于对照组(均为P0.05)。结论:肺动脉高压对大鼠右心重构及右心室AT1R、TGF-β1及ERK1/2蛋白表达显著上调。     

罗格列酮通过激活PPARγ改善肺动脉高压大鼠肺血管病变的研究

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）及其配体对野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠肺血管病变的作用及机制。方法将40只SD大鼠随机分为4组：正常对照组、罗格列酮对照组、野百合碱组和罗格列酮干预组。野百合碱组和罗格列酮干预组给予野百合碱60mg／kg皮下注射;2个对照组给予等体积生理盐水皮下注射。罗格列酮对照组和罗格列酮干预组自注射生理盐水或野百合碱后,给予罗格列酮生理盐水混悬液（4．0mg·kg^-·d^-1）灌胃,正常对照组和野百合碱组每日给予等体积生理盐水灌胃,共4周。以右心导管测定右室收缩压（RVSP）和肺动脉平均压（mPAP）,计算右心肥厚指数（RVHI）作为评价右心室肥厚的指标;ELISA法测定血浆N0和内皮素-1（ET-1）水平;采用HE及Elastin Van Gieson染色法观察各级肺动脉的病理改变,测定并计算中膜厚度百分比（WT％）评价血管重塑程度;免疫组织化学法观察PPARγ的表达情况。结果罗格列酮干预组mPAP（28．2±5．3）mmHg、RVHI（0．35±0．05）和WTO（27．7±7．2）％较野百合碱组明显改善,但仍高于正常对照组。与野百合碱组比较,罗格列酮干预组可升高血浆NO水平（t=2．363,P〈0．05）、降低ET-1水平（t=3．522,P〈0．01）,并抑制肺小血管壁的增厚（t=5．192,P〈0．01）。结论罗格列酮可通过激活PPARγ改善野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠肺血管重塑,并延缓肺动脉高压的进展。     

二氯乙酸盐对肺高压血管重构作用机制的研究

目的 观察二氯乙酸盐（DCA）对野百合碱（MCT）诱导的肺高压大鼠肺小动脉重构的作用,以及对bcl-2、bax表达的影响.方法 大鼠60只随机分为三组：对照组、模型组及治疗组.模型组及治疗组皮下注射MCT建立肺动脉高压模型,对照组注射等量溶剂.7d后治疗组以80 mg·kg-1·d-1DCA溶液喂养,对照组和模型组饮用水喂养.各组于第7、14、21、28天随机选3只大鼠行平均肺动脉压力测量.28 d后处死所有大鼠,取心脏及肺进行检测.结果 平均肺动脉压力测量：建模第14天始,治疗组低于模型组;中膜厚度百分比：模型组大于治疗组大于对照组;右心室肥厚指数：模型组大于治疗组大于对照组;bcl-2染色阳性率：模型组高于治疗组高于对照组;bax染色阳性率：治疗组高于模型组高于对照组;TUNEL染色阳性率：治疗组大于对照组大于模型组,以上差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 DCA在抑制bcl-2表达的同时使bax的表达增强,从而抑制肺动脉平滑肌细胞增殖并促进其凋亡,逆转肺血管重构.     

雷米普利对肺动脉高压大鼠血管紧张素-(1-7)浓度的影响

目的 探讨雷米普利对野百合碱（MCT）诱导的肺动脉高压大鼠血浆中血管紧张素-（1-7）[Ang-（1-7）]浓度的影响.方法 雄性SD大鼠60只,随机分为对照组、MCT组和雷米普利组.MCT组和雷米普利组一次性颈部注射MCT 60 mg/kg后,雷米普利组给予雷米普利灌胃,MCT组用生理盐水灌胃.对照组颈部注射生理盐水后,用生理盐水灌胃.三组大鼠给予雷米普利或生理盐水2周和4周后,测定大鼠的右室收缩压（RVSP）和心室重量变化,测定肺小动脉管壁厚度（WT）占动脉外径（ED） 的百分比（WT%）及管壁面积（WA）占血管总面积的百分比（WA%）.采用酶联免疫分析（ELISA）检测各组大鼠血浆中Ang-（1-7）的浓度.结果 野百合碱诱导2周后,MCT组与对照组相比,RVSP、各心室的重量无明显变化,WT%、WA%以及Ang-（1-7）的浓度显著升高;野百合碱诱导四周后,MCT组与对照组相比,RVSP、各心室的重量、WT%、WA%和Ang-（1-7）的浓度显著升高.野百合碱诱导2周和4周后,雷米普利组与MCT组相比,Ang-（1-7）的浓度显著升高,其他指标与对照组相比无明显的差异.结论 对野百合碱诱导的肺动脉高压模型,雷米普利可预防肺动脉高压的发生,其机制可能与升高血浆中Ang-（1-7）浓度有关.     

肺栓塞大鼠肺动脉和右心室HIF-1α的表达

目的观察肺栓塞大鼠肺细小动脉和右心室HIF-1α的表达,并探讨其在疾病发展过程中的作用。方法大鼠,体外制备栓子,经颈静脉注入栓子,两周后同法进行二次栓塞。测定平均肺动脉压（mPAP）;心肺组织：（1）测定肺动脉相对中膜厚度（PAMT）和管壁面积／管总面积（WA／TA）及右心室肥大指数（RVHI）;（2）分别用原位杂交方法和免疫组化方法检测肺动脉和右心室HIF-1α mRAN和HIF-1α蛋白的表达。结果（1）mPAP从4周组开始持续明显升高（P均〈0.01）;PAMT和WA／TA在栓塞8周组开始升高（P均〈0.05）;RVHI在12周组明显高于对照组（P〈0.01）。（2）肺动脉和右心室HIF-1α mPAN2周组开始升高（P均〈0.01）;肺动脉HIF-1α蛋白3天组开始升高（P均〈0.01）,右心室HIF-1α蛋白1周开始升高（P均〈0.01）。（3）相关关系：肺动脉HIF-1α mRAN和HIF-1α蛋白均与mPAP、PAMT和WA／TA呈正相关关系;右心室HIF-1α mRAN和HIF-1α蛋白均与mPAP和RVHI呈正相关关系。结论HIF-1α在肺动脉和右心室表达明显增高并与肺动脉高压,肺动脉重构的病理生理过程有明显相关关系。     

环磷酰胺在野百合碱诱导大鼠肺动脉高压模型中的作用

目的 应用环磷酰胺(CTX)对野百合碱(MCT)诱导的大鼠肺动脉高压(PAH)模型进行干预,观察CTX在该模型中的疗效,并对其机制进行初步探讨.方法 建立MCT诱导的PAH模型,用CTX对模型进行预防干预和治疗干预,分别在建模2、4周,通过右心导管技术测量大鼠肺动脉平均压( mPAP),与模型组比较,判断干预是否有效;...