MBP-1过表达对食管癌Eca-109细胞增殖和凋亡的影响

<正>MBP-1又称为c-MYC启动子结合蛋白(c-MYC promoter binding protein),其过表达可抑制多种癌细胞的增殖,但对食管癌细胞的影响尚未见报道。本研究构建了MBP-1的重组真核表达质粒,并将该重组质粒转染食管癌Eca-109细胞,检测MBP-1能否在食管癌细胞中过表达及其对食管癌细胞增殖和凋亡的影响。1材料与方法 1.1质粒载体和细胞系:pcDNA3.1(+)质粒(本研究所唐     

过表达ALEX1对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究过表达ALEX1对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响。方法:将重组慢病毒LV5-ALEX1及阴性对照LV5-NC分别感染乳腺癌MCF-7细胞。感染72 h后,采用实时定量PCR和Western blot分别检测感染后ALEX1的表达情况;感染24、48、72、96 h,CCK8法检测细胞增殖情况;感染72 h后,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:感染72 h后细胞ALEX1 mRNA表达水平明显上升(165.81±12.14 vs 52.29±2.32,P0.01),实验组与对照组相比,细胞增殖受到明显抑制,细胞凋亡率明显增加(20.55%±2.50%vs 3.60%±1.614%,P0.05)。结论:过表达ALEX1能明显抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖并诱导细胞发生凋亡。     

PRR11在宫颈癌中的表达意义及对宫颈癌细胞增殖凋亡的影响

目的研究富含脯氨酸蛋白11(proline-rich protein 11,PRR11)在宫颈癌组织中的表达与宫颈癌患者临床病例特征及预后的关系,并探讨PRR11对宫颈癌细胞增殖凋亡的影响及作用机制。方法免疫组化检测PRR11在60例宫颈癌组织和20例正常宫颈组织中的表达水平,并分析宫颈癌组织中PRR11的表达与临床病例特征的关系及患者预后的影响。Western-blot检测PRR11蛋白在宫颈癌细胞系HeLa和人宫颈上皮永生化细胞H8中的表达;HeLa经脂质体分别转染PRR11 siRNA(si-PRR11)和对照(si-NC)48h后,采用MTS实验检测各组细胞增殖能力,流式细胞仪检测各组细胞周期阻滞和凋亡情况,Western-blot检测各组细胞中CyclinD1、caspase-3蛋白的影响。结果免疫组化结果显示宫颈癌组织中PRR11的阳性表达率显著高于正常宫颈组织中的表达,PRR11阳性表达与宫颈癌肿瘤大小及组织学分级显著相关(P均<0.05),宫颈癌组织中PRR11阳性表达患者生存期较短。PRR11在宫颈癌细胞系HeLa中的表达均显著高于人宫颈上皮永生化细胞H8(P<0.05);转染PRR11 siRNA后,HeLa细胞增殖能力下降、细胞阻滞在G1期,凋亡细胞增多,CyclinD1蛋白表达减少,caspase-3蛋白表达增加(P均<0.05)。结论PRR11在宫颈癌组织和细胞系中均高表达,且高表达与肿瘤大小、组织学分级及不良预后相关,同时PRR11可能通过调控CyclinD1、caspase-3蛋白促进宫颈癌增殖和抑制细胞凋亡,PRR11可以作为治疗子宫颈癌的潜在分子靶点。     

ARMCX1对宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响

目的:通过RNA干扰技术敲减含Armadillo重复序列X连锁蛋白1(Armadillo repeat-containing X-linked protein 1,ARMCX1)的表达,观察ARMCX1对人宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡等生物学特性的影响,为研究ARMCX1在宫颈癌发病机制中的作用提供依据。方法:敲减ARMCX1表达后,通过流式细胞术检测SiHa细胞的周期分布和凋亡的变化,利用平板技术观察敲减10 d后宫颈癌SiHa细胞的集落形成情况。利用Western blot实验检测细胞增殖和凋亡相关蛋白水平的变化。结果:敲减ARMCX1表达后SiHa细胞的集落形成能力明显受抑制(P<0.05),细胞周期阻滞在S期,细胞中细胞周期蛋白E(cyclin E)和磷酸化细胞分裂周期蛋白25A(cell division cycle 25A,Cdc25A)的蛋白水平降低。同时,敲减ARMCX1表达促进SiHa细胞的凋亡,Bcl-2蛋白表达量显著减少,Bax和active caspase-3蛋白量显著增加(P<0.05)。结论:敲减ARMCX1的表达抑制SiHa细胞增殖,诱导细胞凋...     

Foxp3 对肺癌细胞增殖及成瘤的影响

目的:研究转录因子Foxp3 在肺癌细胞中的高表达对肺癌细胞增殖及成瘤的影响。方法:利用脂质体转染法建立稳定高表达Foxp3 的NCIH-hFoxp3 肺癌细胞株。MTT 法观测NCIH-hFoxp3 及对照细胞的增殖。ELISA 法检测NCIH-hFoxp3 及对照细胞IL-8、IL-10 的分泌。建立移植瘤小鼠模型,观察成瘤情况。结果:成功建立高表达Foxp3 的NCIH-hFoxp3肺癌细胞株;与阴性对照相比,NCIH-hFoxp3 细胞增殖减慢,但成瘤能力强。NCIH-hFoxp3 细胞培养上清IL-8 表达量减低,IL-10 表达量升高。结论:高表达Foxp3 的肺癌细胞可能通过表达细胞因子改变局部生长的微环境,逃逸免疫监视,而促进肿瘤细胞的成瘤和发展。     

CBX8过表达或沉默对人神经胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的:探究染色质结构域蛋白8(chromodomain protein 8,CBX8)对人神经胶质瘤细胞增殖与凋亡的作用。方法:Western blot和RT-qPCR检测组织及细胞系中CBX8的表达。构建过表达CBX8和沉默CBX8载体,转染神经胶质瘤细胞T98G和U87MG,分别用MTT法和BrdU实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。结果:与正常脑组织和星形胶质细胞相比,神经胶质瘤组织及细胞中的CBX8蛋白和mRNA水平明显上升。在T98G和U87MG细胞中,过表达CBX8均促进细胞增殖,抑制细胞凋亡,并上调Rb/E2F1的表达水平,而沉默CBX8则作用相反。sh-E2F1转染细胞之后,cyclin D1的表达以及Bcl-2/Bax的比值降低。结论:CBX8可能通过Rb/E2F1通路调节胶质瘤细胞的增殖和凋亡。     

膜联蛋白A5过表达对宫颈癌细胞系SiHa细胞凋亡的影响

目的:构建膜联蛋白A5的重组表达质粒,转染宫颈癌细胞使其过表达后检测宫颈癌细胞的凋亡情况.方法:PcR法从pJLA503膜联蛋白A5中获得膜联蛋白A5基因;磷酸钙共沉淀法转染宫颈癌细胞系SiHa细胞,免疫印迹法和免疫组织化学ABC法检测了细胞中膜联蛋白A5蛋白的过表达;对过表达膜联蛋白A5的细胞采用免疫荧光法检测其细胞凋亡情况.结果:重组质粒中膜联蛋白A5基因序列正确;转染重组质粒后的SiHa细胞过表达膜联蛋白A5蛋白;过表达膜联蛋白A5的SiHa细胞凋亡显著增多.结论:膜联蛋白A5可促进宫颈癌细胞系SiHa细胞的凋亡.     

KLF2在宫颈癌中的表达及其调控IL-6/STAT3通路影响宫颈癌细胞增殖和凋亡的机制研究

目的:探讨Krüpple样转录因子12(KLF12)在宫颈癌中的表达及对宫颈癌细胞增殖、凋亡及IL-6/STAT3信号通路的影响.方法:Western blot检测宫颈癌组织及宫颈癌C33A、HeLa和SiHa细胞KLF12表达.将KLF12特异性siRNA(si-KLF12)转染至C33A细胞,同时转染阴性对照(si...     

rhIL-16对Tax 1蛋白阳性细胞增殖抑制和凋亡的影响

目的探讨rhIL-16对Tax 1蛋白阳性细胞增殖抑制和凋亡的影响。方法将pCMV-Tax1-Bam质粒稳定转染到Jurkat E6-1细胞后,构建Tax 1基因表达细胞系Tax 1P,用IL-16腺病毒载体转染Tax 1P细胞后,不同时间收获细胞,通过MTT、流式细胞术测定线粒体膜电位等方法,证实Tax 1P细胞增殖抑制和凋亡。结果用MTT法计算细胞生长抑制率,观察到IL-16腺病毒载体转染的Tax 1P细胞增殖受到明显抑制;DNA片段分析在转染6 h后出现凋亡片段;进一步用流式细胞仪检测细胞周期停滞于G1期,IL-16对细胞线粒体膜电位的影响24 h内逐渐增强,预示细胞凋亡。结论重组人IL-16腺病毒载体转染Tax 1P细胞,24 h内即可诱导Tax 1P细胞发生细胞增殖抑制并且出现凋亡,为成人T淋巴细胞白血病防治提出了新思路。     

过表达miR-320a对宫颈癌Hela细胞增殖和侵袭能力的影响及其可能机制

目的 探讨过表达miR-320a对宫颈癌Hela细胞增殖和侵袭能力的影响.方法 将宫颈癌Hela细胞用培养基培养后,将miR-320a模拟物瞬时转染Hela细胞使miR-320a过表达,并通过实时定量PCR进行验证,采用CCK-8方法、Transwell实验检测各组Hela细胞的增殖和侵袭能力,Western blot检测各组Hela细胞E2F1蛋白表达,应用Targetscan7.2网站预测E2F1与miR-320a的靶向关系,应用双荧光素酶报告基因实验进行验证.结果 在转染miR-320a模拟物后,Hela细胞中miR-320a表达上升,细胞增殖能力和侵袭能力下降,E2F1蛋白表达下降,生物信息学分析及双荧光素酶实验证实E2F1为miR-320a的靶基因.结论 过表达miR-320a可以抑制Hela细胞增殖与侵袭,其机制可能与调控E2F1的表达相关.     

小鼠Lewis肺癌细胞Foxp3的表达对T淋巴细胞增殖的影响及机制

目的:检测小鼠Lewis肺癌(LLC)细胞中Foxp3基因的表达,研究小鼠LLC细胞中Foxp3过表达对T淋巴细胞的增殖和TGF-β1和IL-10表达的影响,探讨LLC细胞中Foxp3的表达在肿瘤免疫逃逸中的作用及可能机制。方法:分别采用RT-PCR和免疫组化染色法检测LLC细胞中Foxp3的mRNA和蛋白表达。构建pcDNA3.1-Foxp3重组质粒,采用FuGENEHD瞬时转染LLC细胞,实验分3组:LLC组,pcDNA3.1-LLC组及pcDNA3.1-Foxp3-LLC组。RT-PCR和免疫组化方法分别检测转染48小时后Foxp3基因的表达,通过淋巴细胞转化试验检测Foxp3过表达对T淋巴细胞增殖的影响,RT-PCR和ELISA方法分别检测Foxp3过表达对TGF-β1和IL-10的mRNA表达及蛋白分泌的影响。结果:在LLC细胞中检测到Foxp3mRNA及蛋白的表达;瞬时转染48小时后pcDNA3.1-Foxp3-LLC组LLC细胞中Foxp3表达增高,与LLC组和pcDNA3.1-LLC组相比差异显著(P0.01);pcDNA3.1-Foxp3-LLC组LLC细胞及培养上清对T淋巴细胞增殖的抑制率均明显高于LLC组和pcDNA3.1-LLC组(P0.05);pcDNA3.1-Foxp3-LLC组TGF-β1、IL-10mRNA和蛋白的表达水平明显高于LLC组和pcDNA3.1-LLC组(P0.05)。结论:LLC细胞表达Foxp3,Foxp3可能通过上调TGF-β1和IL-10的表达来抑制T淋巴细胞的增殖,进而参与肿瘤的免疫逃逸。     

溶血磷脂酸对宫颈癌细胞增殖、黏附、迁移和凋亡的影响

目的: 研究溶血磷脂酸(LPA)对宫颈癌HeLa细胞增殖、黏附、迁移和凋亡的影响及其作用机制.方法: LPA作用于细胞后,细胞计数法观察细胞的增殖;MTT法测定细胞对顺铂的敏感性、流式细胞仪检测顺铂诱导的凋亡;transwell小室检测细胞迁移能力变化;黏附实验测定细胞黏附力;同时,观察抑制剂Y27632、 LY294002、 PD98059对LPA功能的影响.结果: LPA以时间和剂量依赖方式促进细胞增殖,MEK1抑制剂显著抑制LPA的促增殖作用;LPA以剂量依赖方式显著促进HeLa细胞的迁移、和对细胞外基质的黏附,Rho激酶抑制剂显著抑制LPA诱导的迁移和黏附;LPA保护顺铂诱导的细胞凋亡,PI3K抑制剂可显著阻止LPA此作用.结论: LPA可以通过多种信号传导通路途径促进宫颈癌细胞的增殖、迁移和黏附,并抑制细胞凋亡.     

microRNA干扰Id3基因表达对A549细胞增殖和凋亡功能的影响

目的:研究微小RNA(miRNA)干扰细胞分化抑制因子3(Id3)基因表达对人肺腺癌细胞株A549细胞体外增殖和凋亡作用的影响。方法:构建含靶向Id3 mRNA的miRNA所对应寡核苷酸的重组干扰载体pcDNATM6.2-GW/EmGF-PmiRId3(pcDNA/miRId3),通过脂质体转染技术将miRNA干扰质粒pcDNA/miRId3和含Id3基因的重组表达载体pEGFP/Id3共转染A549细胞。荧光显微镜观察EGFP表达情况;流式细胞术(FCM)分析转染24 h后A549细胞的EGFP表达效率;半定量RT-PCR和Western blot技术检测转染后A549细胞内Id3 mRNA及蛋白的表达;MTT法和Annexin V-FITC/7-AAD双染法结合FCM检测靶向Id3基因的miRNA转染A549细胞后对增殖和凋亡的影响。结果:RT-PCR和Western blot结果表明,将pEGFP/Id3和pcDNA/miRId3共转染A549细胞24 h后,A549细胞中外源性Id3 mRNA和Id3蛋白质的表达量均明显受到抑制。MTT和Annexin V/7-AAD双染法结果表明,pEGFP/Id3转染A549细胞24 h后,对A549细胞增殖功能有明显抑制作用,细胞早期凋亡率明显增加,与pEGFP对照组相比均呈统计学差异(P0.01),但pEGFP/Id3与pcD-NA/miRId3共转染A549细胞后,细胞增殖率和凋亡率均未发生明显变化。结论:外源性Id3基因在A549细胞中的表达能够抑制细胞增殖并诱导凋亡,同时导入靶向Id3 mRNA的miRNA干扰质粒pcDNA/miRId3,可逆转外源性Id3表达对细胞增殖的抑制和致凋亡作用,重组MiRNA表达载体的构建及应用为研究Id3致A549细胞增殖抑制和诱导凋亡的作用机制奠定了实验基础。     

宫颈癌细胞增殖及凋亡与bcl-2表达的研究

本研究旨在探求宫颈癌变中细胞增殖和细胞凋亡的变化规律,以及凋亡出现频率与ｂｃｌ－２癌蛋白的关系。结果发现宫颈癌组织的增殖指数（ＰＩ）和凋亡指数（ＡＩ）明显高于正常宫颈组织和宫颈不典型增生组织（Ｐ＜０．０１）,而ＡＩ／ＰＩ显著低于两者（Ｐ＜０．０１）。ｂｃｌ－２癌蛋白常见于正常宫颈上皮和不典型增生上皮的基底细胞层,宫颈癌组织中其表达随临床期别升高呈下降趋势,ｂｃｌ－２阳性组的ＡＩ与阴性组无显著差异。证实宫颈癌变是细胞无限增殖,凋亡异常被抑制的结果。ｂｃｌ－２是宫颈癌变的早期特征,但不是调节细胞凋亡的唯一因素     

PIAS3敲低对前列腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的研究PIAS3敲低对人前列腺癌细胞系DU145细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响。方法构建PIAS3shRNA表达质粒pSilencer4.1/PIAS3,转染DU145细胞。MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪分析细胞周期和凋亡。结果测序证实PIAS3shRNA表达质粒构建成功。转染后DU145细胞PIAS3蛋白表达明显下调。MTT分析显示PIAS3敲低促进细胞增殖,并存在剂量-效应关系。流式细胞术分析显示:PIAS3敲低后S期细胞比例增加,G0/G1期细胞比例减少,凋亡细胞比例减少。结论PIAS3敲低促进体外前列腺癌细胞增殖,抑制其凋亡。     

茯苓酸对宫颈癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响

目的 探讨茯苓酸对宫颈癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响,并初步探讨其调控机制。方法 体外培养人宫颈癌Hela细胞,分别以5.0、10.0、20.0μmol/L的茯苓酸处理细胞,未进行任何处理的Hela细胞作为对照组。克隆形成实验与MTT实验测定不同浓度茯苓酸对Hela细胞增殖的影响;Transwell实验检测不同浓度茯苓酸对细胞侵袭能力的影响;流式细胞仪检测不同浓度茯苓酸对细胞凋亡情况的影响;Western blot方法检测不同浓度茯苓酸对细胞Wnt、Cyclin D1与基质金属蛋白酶(MMP)-2表达的影响。结果 与对照组相比,5.0、10.0、20.0μmol/L的茯苓酸均能明显抑制宫颈癌Hela细胞的增殖能力与侵袭能力,同时诱导Hela细胞凋亡;不同浓度的茯苓酸均能抑制Hela细胞Wnt、Cyclin D1与MMP-2蛋白的表达水平,且呈浓度依赖性。结论 茯苓酸能够抑制人宫颈癌Hela细胞增殖与侵袭,并促进凋亡。     

HPV阳性与阴性宫颈病变患者外周血中Foxp3 mRNA及RORγt mRNA的表达

目的:观察叉头状转录因子信使核糖核酸(Foxp3 mRNA)、视黄酸相关孤儿受体γt信使核糖核酸(RORγt mRNA)在HPV感染的宫颈病变患者外周血中相对表达量的变化,探讨其与该病变的关系。方法:收集2016-01—2017-06本院门诊及住院宫颈病变患者373例,用聚合酶链式反应(PCR)和基因芯片检测技术筛选出HPV阳性感染者158例,包括宫颈炎组40例、宫颈上皮内瘤变(CIN)76例(CINⅠ级组25例、CINⅡ级组25例、CINⅢ级组26例)、宫颈癌组42例;HPV阴性者215例,包括宫颈炎组124例、CIN 68例(CINⅠ级组26例、CINⅡ级组22例、CINⅢ级组20例)、宫颈癌组23例。选择同期体检健康者为正常对照组(39例)。采用实时荧光定量PCR方法检测受试者外周血单个核细胞中Foxp3mRNA、RORγt mRNA的相对表达量。比较HPV阳性与HPV阴性各组Foxp3mRNA、RORγt mRNA表达差异,分析Foxp3mRNA、RORγt mRNA与宫颈变变严重程度的相关性。结果:随着宫颈病变的加重,HPV阳性检出率增加。HPV阳性各组宫颈病变患者Foxp3mRNA、RORγt mRNA相对表达量的差异均有统计学意义(P0.05)。Foxp3mRNA相对表达量在宫颈炎组与CINI级组组间差异无统计学意义(P0.05),其余组间呈CIN I级组CINⅡ级组CINⅢ级组宫颈癌组,差异有统计学意义(P0.05)。RORγt mRNA的相对表达量在宫颈炎组与CINI级组组间差异无统计学意义(P0.05),其余组间呈CIN I级组CINⅡ级组CINⅢ级组宫颈癌组,差异有统计学意义(P0.05)。Foxp3mRNA、RORγt mRNA相对表达量在HPV阴性各组宫颈病变中差异均无统计学意义(P0.05)。HPV阳性宫颈病变患者Foxp3mRNA相对表达量与宫颈病变严重程度呈正相关(r=0.697,P0.05),RORγt mRNA的相对表达量与宫颈病变严重程度呈负相关(r=-0.657,P0.05)。结论:HPV阳性患者宫颈发生病变与其Foxp3 mRNA表达量升高、RORγt mRNA表达量降低有关。     

HPV感染与宫颈癌的预防

近年来宫颈癌的发病率有不断上升的趋势，而且曾经多发于50岁左右女性的宫颈癌如今正悄悄地向年轻女性逼近。而宫颈癌是女性恶性肿瘤的第二高发病，其发病率仅次于乳腺癌，严重威胁妇女的健康。研究表明，人乳头状病毒（HPV）已被认为是导致宫颈癌的主要危险因素，以HPV-16与宫颈癌的发病关系最密切。而根据医学家的长期观察。     

Foxp3mRNA和SCCA联合检测对宫颈癌的诊断价值

目的:回顾分析宫颈癌患者外周血叉状头螺旋转录因子3(Foxp3)mRNA、鳞状细胞癌抗原(SCCA)等的水平变化,相关性及联合检测对诊断宫颈癌的价值.方法:92例宫颈癌患者(宫颈癌组)和87例体检健康女性(对照组)分别采用RT-PCR和化学发光法检测两组外周血Foxp3 mRNA和SCCA以及糖类抗原CA50、CA12...