患者源性非小细胞肺癌异种移植模型的建立及个体化治疗策略研究

目的 通过将患者非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）临床手术标本接种于BALB/c裸小鼠,建立相应的移植瘤模型,为肺癌患者个体化治疗药物的筛查和临床前疗效的评估提供理想的动物模型。方法 收集患者非小细胞肺癌手术标本并将其植入裸鼠体内建立患者源性异种移植（patient-derived xenograft,PDX）模型,分析病理组织学形态,检测人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)和表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）的表达,以及潜在靶标单胺氧化酶A(monoamineoxidase A,MAOA)的表达。进一步在此患者源性NSCLC异种移植模型中评估靶向药、临床一线化疗药物顺铂的抗肿瘤功效。结果 成功建立了患者源性的NSCLC异种移植瘤模型,该模型保留了源肿瘤组织病理学形态,且EGFR、MAOA呈阳性表达。使用EGFR抑制剂奥希替尼联合顺铂体现出良好的治疗效果;此外,MAOA抑制剂氯吉林也具有良好的抗肿瘤潜能,...     

免疫系统人源化的非小细胞肺癌异种移植小鼠模型临床前研究应用

肺癌是世界上发病率和死亡率最高的癌症之一,而非小细胞肺癌则是肺癌中恶性程度和占比相对较高的亚型。近年来,非小细胞肺癌的免疫治疗成为热点方向,涌现出大量的免疫单药及联合治疗方案,这些方案的开展亟需临床前验证。因此,提供可靠的临床前实验动物模型以评估治疗效果、探索最佳用药方案以及推动个体化医疗是目前急需解决的问题。基于免疫系统人源化的异种移植小鼠模型由于同时具有人体免疫系统和肿瘤细胞,能够高度模拟人体内肿瘤免疫微环境,在肿瘤免疫治疗研究中具有广阔的应用前景。本文主要从人源化模型在非小细胞肺癌治疗的应用方面进行综述,为各种非小细胞肺癌免疫治疗方案的临床前实验提供指导,以期推进这些方案的临床试验。     

人白血病细胞裸鼠异种移植模型的建立

我们成功地将人T淋巴细胞白血病细胞（MOLT－4）、人早幼粒细胞白血病细胞（HL-60）移植到裸鼠体内。裸鼠经环磷酰胺（2.5mg／只）预处理后分别将（5～10）×10~6MOLT-4细胞及（2～4）×10~7HL－60细胞移植到动物皮下能形成实体瘤，该肿瘤呈进行性生长。MOLT－肿瘤在裸鼠间连续传代4次，移植成功率为69.2％，HL-60肿瘤连续传代3次，成功率为100％。肿瘤染色体分析属于人体细胞核型，细胞学研究显示裸鼠体内MOLT-4、HL-60细胞与体外培养的细胞具有良好的一致性，故裸鼠体内MOLT-4、HL-60肿瘤模型的建立对于研究人白血病提供了有用工具。     

非小细胞肺癌鸡胚绒毛膜移植瘤模型的建立

目的建立非小细胞肺癌的鸡胚绒毛膜(CAM)模型。方法以梯度递增的肺癌细胞株A549接种鸡胚,并对生长出的移植瘤行原位解剖学显微镜摄影,体积测量,切片显微观察。结果细胞数为(0.6~2.5)×106的A549细胞株可在CAM上形成移植瘤,该移植瘤与人体肺癌的形态学一致。结论成功建立非小细胞肺癌鸡胚绒毛膜移植瘤模型,为非小细胞肺癌的研究打开一个新的技术平台。     

前列腺癌人源性异种移植裸鼠模型的建立与治疗

目的建立前列腺癌人源性异种移植(patient-derived xenograft,PDX)模型,评价不同治疗方案的抗肿瘤效果。方法将人新鲜的前列腺癌手术标本与基质胶混合后移植入补充有外源性雄激素的裸鼠皮下,连续监测肿瘤生长,评估其保真度并连续传代;将荷瘤鼠分为四组:多西他赛组、去势组、多西他赛联合去势组以及对照组,治疗期间测量肿瘤体积及小鼠体重变化,治疗结束后,检测血清中总前列腺特异性抗原(total prostate specific antigen,tPSA)浓度及组织病理学变化,评估治疗效果。结果成功建立了前列腺癌PDX模型,包括激素敏感型(D17225)和去势抵抗型(C40019)肿瘤,病理学分析发现移植瘤较好的保持了患者原发瘤的主要特征;病理组织学及血清tPSA检测发现多西他赛组及多西他赛联合去势组在D17225模型中显示出良好的治疗效果,且后者抑瘤效果更为明显。结论成功建立了前列腺癌PDX模型并稳定传代,多西他赛单药或联合去势处理对激素敏感型(D17225)前列腺癌PDX模型具有显著治疗效果。     

非小细胞肺癌紫杉醇耐药模型的建立

目的模拟肿瘤微环境缺氧的特征以及周剂量紫杉醇(PTX)用药规律,在缺氧条件下诱导非小细胞肺癌A549细胞系对PTX的耐药性,并分析MAPK激酶抑制剂PD98059对耐药性的影响。方法100μmol/LCoC l2诱导A549细胞7 d,待其适应缺氧环境后,采用12 nmol/L PTX诱导,每次16 h,每周1次,诱导3个月后分析A549对PTX的敏感性。采用PD98059与PTX共同处理耐药细胞,分析耐药细胞对PTX敏感性的变化。结果A549为PTX敏感细胞,IC50为1.25 nmol/L;缺氧条件下低浓度PTX诱导3个月后,IC50值增加为28.62 nmol/L,A549细胞对PTX耐受性明显增加。10μmol/L PD98059促进PTX对耐药细胞的抑制作用,两者具有联合效应。结论缺氧和低浓度PTX诱导可以导致A549细胞耐药性形成;而MAPK激酶抑制剂与PTX联合,可降低耐药性。     

肝素和氢化可的松对人非小细胞肺癌移植瘤模型作用的实验研究

目的 观察肝素和氢化可的松对人非小细胞肺癌(NSCLC)移植瘤模型的抗血管生成作用。方法Balb-c裸鼠30只 ,均接种Calu -6细胞 ,随机分为3组 ,每组10只。A组 :第10～30天、第40天至实验结束饮水内加入肝素500IU/ml、氢化可的松0.45mg/ml。B组 :第10～14天、第31～35天腹腔内注射卡铂10mg/(kg·d)。C组 :对照组 ,不进行任何治疗。观察各时点肿瘤体积的变化 ,并检测细胞凋亡、增殖细胞核抗原(PCNA)、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白、VEGFmRNA阳性细胞数和血管内皮细胞粘附分子 -1(CD31)染色阳性血管数等。 结果 A组在治疗第2、3、4、8周时肿瘤体积均小于C组(均P<0.05) ,第2周时肿瘤体积大于B组(P<0.05)。A组在凋亡细胞、PCNA、VEGF蛋白与VEGFmRNA阳性细胞数和CD31阳性血管数等方面都与B、C组有明显差别(均P<0.05)。 结论 肝素和氢化可的松联合应用能够有效抑制Calu -6细胞在体内的生长。     

人急性淋巴细胞白血病MOLT-4细胞裸鼠异种移植瘤模型的建立

目的　建立可移植于裸鼠的、潜伏期短、高致瘤性的人急性淋巴细胞白血病 MOL T- 4细胞株。　方法　初代移植后 ,通过单纯体内传代法进行皮下埋块和体内、体外交叉传代法进行体外传代培养后移植 ,并对移植瘤的生长、组织形态和超微结构、细胞表面抗原表达、染色体核型等进行观察和检测。　结果　体内、体外交叉传代法进行体外传代培养 2 0代后的 MOL T- 4细胞裸鼠移植瘤平均潜伏期为 (2 1 .2 0± 1 .1 0 ) d,致瘤率 1 0 0 %。移植瘤的生长曲线呈“S”型 ;组织形态、超微结构和表面抗原表达特点符合 MOL T- 4细胞特点 ,染色体核型属人类染色体。　结论　通过体内、体外交叉传代法进行体外传代培养 2 0代后的 MOL T- 4细胞能成为潜伏期短、高致瘤性的细胞株 ,此法较单纯体内传代法快速、简便     

小鼠小细胞肺癌模型的建立

目的:建立小鼠小细胞肺癌动物模型,为进一步研究小细胞肺癌的发展进程以及化疗药物的筛选提供实验平台。方法:采用Trp53^loxP/loxP; Rb1^loxP/loxP小鼠肺部插管吸入Adeno-Cre (Ad-Cre)重组腺病毒的方法建立小鼠小细胞肺癌模型,通过对模型小鼠肺组织进行石蜡切片以及HE染色,并通过免疫组化等方法检测肺组织中神经内分泌特异性标记蛋白CgA、Cgrp的表达情况。结果:成功建立了小鼠小细胞肺癌的模型,模型小鼠肺组织中CgA、Cgrp的表达水平显著升高。结论:成功建立小鼠小细胞肺癌动物模型,为后续研究人的小细胞肺癌发病机制以及相关化疗药物的筛选提供了实验手段。     

人早幼粒白血病HL-60细胞裸鼠异种移植模型的建立

HL-60细胞是1株广泛应用于分化诱导研究的人早幼位白血病细胞株.在人肿瘤异种移植研究中,将白血病细胞成功地移植于裸鼠的报道很少,作者于1985年应用BALB/c裸鼠异种移植HL-60细胞系获得成功,建立了实体和腹水2种模型,现将结果报告如下. 材 料 与 方 法 一、人早幼粒白血病细胞株(HL-60)由美国Mount Sinai医学院引进,置含15％小牛血清的RPMI 1640培养基和含5％CO_2的培养箱培养.     

经体外培养的肝癌组织人源性异种移植小鼠模型的建立

目的通过添加人工基质胶,对原代肝癌组织进行体外培养,进而建立肝癌组织人源性异种移植(PDX)小鼠模型。方法收集中山大学肿瘤防治中心肝胆科共5份肝癌组织,经清洗、冻存、复苏等处理,添加人工基质胶,进行为期50～80 d的体外培养;免疫缺陷小鼠肾包膜下接种建立肝癌组织人源性异种移植模型;建模小鼠饲养80～120 d后,取移植瘤进行病理学检测,苏木精-伊红(HE)染色观察组织形态,免疫组化染色检测甲胎蛋白(AFP)和磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)的表达情况,每张玻片取3个视野统计阳性细胞,计算阳性率。结果 5例PDX模型中成功2例,建模成功率为40%。其中001号建模小鼠移植侧肾脏萎缩、质地变硬,移植瘤生长,肾脏周围附着大量附属物;004号建模小鼠腹腔大量腹水,且移植侧肾脏可见黄色肝癌病灶。病理HE染色可见移植瘤组织细胞异型性明显,核分裂增多,失去正常的结构;免疫组化法检测移植瘤组织AFP和GPC3,均呈阳性表达,平均阳性率分别为88%、93%;表明移植瘤组织均保留了原代肝癌组织特性及相应蛋白表达。结论经长期体外培养的原代肝癌组织成功构建人源性异种移植小鼠模型,实现PDX模型构建技术的突破,为进一步的肝癌药物筛选奠定基础。     

人非小细胞肺癌血管内皮细胞的分离培养及鉴定

目的:建立人非小细胞肺癌血管内皮细胞体外分离培养体系,研究其体外生长特性。方法:利用酶消化法分离出肺癌组织微血管片段,采用植块培养法培养原代内皮细胞,先后以局部消化法和差速黏附法进行纯化;应用光镜、免疫细胞化学及免疫荧光技术对所获得的人肺癌血管内皮细胞进行鉴定。结果:所获人非小细胞肺癌血管内皮细胞呈FⅧ-RAg、CD34阳性;电镜下生长状态良好、可传代培养。结论:本研究摸索并建立了人非小细胞肺癌血管内皮细胞的分离培养方法,所获人非小细胞肺癌血管内皮细胞对肿瘤血管生成及抗肿瘤药物的研究具有重要价值。     

腹膜假黏液瘤人源异种移植模型的研究进展

腹膜假黏液瘤(PMP)以腹腔大量黏液聚积为最显著特征,黏液聚积常导致顽固性腹痛、进行性肠梗阻、腹腔脏器粘连及营养不良。但肿瘤高表达黏蛋白的分子病理机制尚不明确,并缺乏相应治疗措施。人源异种移植模型(PDX模型)是探索PMP发病机制、干预性治疗的可靠平台。目前,我国尚缺乏构建PMP PDX模型的经验,国外已有多种不同病理分型的模型,但构建方法各不相同。对不同造模方法的研究有助于比较各种造模方法的优劣,以便构建更加标准的PMP PDX模型。     

肝癌人源肿瘤异种移植模型构建及初步应用

目的建立肝癌人源肿瘤异种移植(patient-derived xenografts,PDX)模型,探讨其在肝癌精准医疗中的作用。方法取临床肝癌新鲜手术切除标本,NCG小鼠皮下接种肿瘤组织建立PDX模型,HE染色比较移植肿瘤组织与患者肿瘤组织形态结构的一致性。将成功传至第三代的PDX模型制备肿瘤细胞悬液,BALB/c裸鼠皮下接种制作肝癌移植瘤模型15只,成瘤后随机分为5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)组、索拉非尼(sorafenib)组和阴性对照组,每组5只。定期监测各组荷瘤小鼠肿瘤体积和重量,根据瘤重计算抑瘤率,评估疗效。结果本研究共建成肝癌PDX模型6例,成功率为33.3%(6/18),模型较好的保持了原发肿瘤的特征。1例PDX模型中,5-FU与索拉非尼组肿瘤抑瘤率分别为63.7%和29.6%,5-FU组抑瘤率比较差异有显著性(P0.05),索拉非尼组抑瘤率比较差异无统计学意义,与临床结果相符。结论肝癌PDX模型保持了患者肿瘤组织的组织形态,可以适用于肝癌患者的精准医疗。     

非小细胞肺癌EMPE来源树突状细胞的分离培养和鉴定

目的:建立非小细胞肺癌(NSCLC)渗出性恶性胸腔积液(EMPE)来源树突状细胞(PEDCs)的分离培养方法,研究PEDCs功能性抗原的表达规律。方法:用密度梯度离心的方法,从非小细胞肺癌EMPE中分离获得富含PEDCs的细胞群;用抗CD3免疫磁珠提纯PEDCs;用IL-4、GM-CSF、TNF-α,分1、2、4、8 d 4个时间段培养PEDCs;用荧光抗体标记、流式细胞仪检测不同培养时间PFDCs功能性抗原的表达。结果:建立了PEDCs的分离培养方法。培养2d PEDCs的功能性抗原HLA-ABC、HLA-DR、CD54、CD80、CD83、CD1a的表达率显著升高。结论:从EMPE中分离的PEDCs,体外培养2d多种功能性抗原的表达率显著升高。     

人源性肝癌异种移植动物模型的建立及 CD90、ALDH1表达鉴定

从新鲜的人肝癌标本上切除肿瘤组织,移植于裸鼠皮下,建立原代移植瘤并连续传代3次,观察移植瘤的成瘤潜伏期、成瘤率、肿瘤体积、肿瘤的侵袭和转移情况。通过 HE染色,与临床标本进行组织病理学比较,利用免疫组化方法比较肿瘤干细胞标志物 CD90和乙醛脱氢酶1（ALDH1）在临床和动物模型组织中的表达变化。结果显示动物模型肿瘤组织和临床肿瘤组织结构类似;CD90、ALDH1表达一致。建立人源性肝癌移植动物模型,其组织结构稳定,某些特定蛋白表达一致,可成为肝癌基础研究的重要工具。     

前列腺癌人源性肿瘤异种移植模型的发展与应用

前列腺癌(prostate cancer,PCa)是最常见的男性生殖肿瘤之一,治疗前若能通过体内外实验准确地反映患者的肿瘤特征、合理预测最佳治疗方案与预后,将有效提高治疗效率.人源性肿瘤异种移植(patient-derived tumor xenograft,PDX)模型是将不同个体来源的肿瘤直接移植至免疫缺陷的动物体...     

组织块移植法建立人肺癌裸鼠移植瘤模型

肺癌对人类的健康构成了严重的威胁,人肺癌裸鼠移植瘤模型的建立对于肺癌的研究是一项重要的工具.建立肺癌移植瘤模型的方法主要有细胞培养移植法、组织块移植法和匀浆液移植法.组织块移植法建立的模型能最大限度地模拟人体内环境,是一种理想的模型.就组织块移植法建模的操作方法及当前研究进展作一综述。