不同程度氧化修饰的低密度脂蛋白对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的　研究不同程度氧化修饰的低密度脂蛋白对血管平滑肌细胞增殖的影响。方法　氧化低密度脂蛋白的制备参照Takauya等报道方法。测得天然低密度脂蛋白弱氧化型低密度脂蛋白和氧化型低密度脂蛋白的硫代巴比妥酸反应物质值分别为 0 .37、2 .5 8和 6 .6 7μmol g。消化培养法进行人脐动脉血管平滑肌细胞的原代培养。常规传代取第 3和第 4代细胞用于实验和生物学鉴定。用含 0 .1%小牛血清的DMEM培养基培养 2 4h使细胞静止后 ,用包含 5 0 0mg LB、10mg L胰岛素、2 0mg L转铁蛋白、2 5mg L硒酸钠的DMEM培养基代替进行培养。加入 10mg L的低密度脂蛋白、弱氧化型低密度脂蛋白和氧化型低密度脂蛋白后 ,用氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入法分别检测 11～ 12、15～ 16、19～ 2 0和 2 3～ 2 4h的DNA合成率。结果　在刺激后 12h弱氧化型低密度脂蛋白组DNA合成率明显高于氧化型低密度脂蛋白和低密度脂蛋白两组 (分别为P <0 .0 5和P <0 .0 1) ,氧化型低密度脂蛋白组明显高于低密度脂蛋白 (P <0 .0 5 )。在 16h各组的DNA合成率均较 12h增加 ,弱氧化型低密度脂蛋白组与另两组比较差异更明显 ,而低密度脂蛋白组反比氧化型低密度脂蛋白组高 ,但差异无显著性意义。到 2 0h ,低密度脂蛋白和弱氧化型低密度脂蛋白的DNA合成率快速降     

氧化修饰低密度脂蛋白对培养动脉平滑肌细胞超微结构的影响

本文旨在观察氧化修饰低密度脂蛋白(OX-LDL)对平滑肌细胞(SMCs)形态学的影响,探讨其在动脉粥样硬化形成中的意义.作者用硫酸铜诱导形成OX-LDL,以不同浓度加入培养传至第三代的正常家兔主动脉SMCs中,定期孵育后进行透射电镜观察,并以同样浓度的正常LDL为对照.与对照组比较,OX-LDL有更强的细胞毒性作用,随着浓度的增加,SMCs相继出现基膜及膜下小泡消失,肌丝结构模糊,密斑减少,肌浆网显著扩张,线粒体肿胀,线粒体脊结构消失及空泡状结构等病理变化.结果表明,OX-LDL对培养的动脉SMCs有毒性损伤作用,呈剂量—效应关系.     

脐动脉平滑肌细胞体外培养方法的改进

目的:建立并优化的人脐动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)的体外培养方法。方法:人脐动脉VSMCs的体外原代培养应用优化的组织块贴壁法进行。在分别应用传统细胞培养法和优化后细胞培养法贴壁培养提取的原代细胞10 d后,计数6孔板每孔细胞数目,并做统计比较分析相同时间内原代细胞的数量。以抗α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)抗体和抗CD31抗体进行免疫荧光染色和倒置相差显微镜观察鉴定培养的细胞。结果:与传统细胞培养法相比,在相同的时间周期内优化实验方法后培养的原代细胞数量较传统多,我们可以在较短时间内得到实验所需的细胞量,因此优化后可缩短细胞的培养周期。原代和传代培养的脐动脉VSMCs生长良好,细胞经冻存、复苏后状态依然良好。光镜下细胞呈典型的峰-谷样生长,细胞多为长梭形,具有VSMCs的特征,且传代培养至第7代,细胞生长特性不变。经抗α-SMA、CD31抗体进行免疫荧光染色鉴定证实为VSMCs。结论:优化的组织块贴壁法可缩短原代人脐动脉VSMCs的培养周期,且细胞的生物学特性较稳定,为与平滑肌相关的疾病进展及心血管生长发育的研究奠定了实验基础。     

树鼩高密度脂蛋白与动脉平滑肌细胞相互作用的关系研究

树高密度脂蛋白（ＨＤＬ）与培养的动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）的结合既呈饱和性也呈非饱和性，胆固醇刺激细胞后能增加结合率，胰酶消化作用对结合无明显影响，在细胞膜蛋白中未发现有ＨＤＬ的特异结合蛋白。ＳＭＣ膜蛋白合成抑制后细胞清除胆固醇的功能未受明显影响。实验结果提示：树动脉ＳＭＣ与ＨＤＬ之间可能既存在特异性的结合位点，也存在非特异性的结合，细胞膜上ＨＤＬ的特异结合位点可能不是典型的蛋白质。ＨＤＬ主要通过其亚成分ａｐｏＡＩ和磷脂的协同作用转运细胞膜上的胆固醇。     

氧化型高密度脂蛋白对细胞凋亡及细胞内钙离子浓度的影响

目的通过研究氧化型高密度脂蛋白对培养的内皮细胞致凋亡以及细胞内钙离子浓度的影响,阐述其致动脉粥样硬化机理,并探讨其引起细胞损伤的机制.方法用铜离子引发脂质过氧化过程,制备氧化型高密度脂蛋白,用MTT检测法检测细胞活性,PI染色法检测细胞凋亡.结果氧化型高密度脂蛋白可诱导内皮细胞发生凋亡;细胞内钙离子浓度则随氧化型高密度脂蛋白浓度的升高呈现逐渐下降的趋势.结论氧化型高密度脂蛋白引起细胞损伤的机制可能与钙离子浓度升高有关,体内氧化型高密度脂蛋白通过内皮细胞凋亡的途径损伤血管内皮,引发动脉粥样硬化.     

氧化型高密度脂蛋白促进C57BL6J小鼠骨髓源性树突状细胞成熟活化

目的探讨氧化修饰高密度脂蛋白(oxidized high density lipoprotein,ox-HDL)对C57B/6J小鼠骨髓源性树突状细胞(bone marrowderived dendritic cells,BMDC)成熟活化的影响。方法制备C57BL/6J小鼠骨髓细胞悬液,利用动物树突状细胞专用分离液和细胞粘附性差异去除杂细胞,用rmGMCSF     

氨氯地平对氧化型低密度脂蛋白诱导的平滑肌细胞亲环素A表达的影响

目的观察氨氯地平对氧化型低密度脂蛋白诱导的平滑肌细胞亲环素A表达的影响,以进一步探讨氨氯地平对动脉粥样硬化的作用机制。方法用不同浓度氨氯地平(0、0.1、1.0和10.0μmol/L)预孵育平滑肌细胞1h后,与氧化型低密度脂蛋白共同孵育,逆转录聚合酶链反应和Western blotting法检测细胞亲环素AmRNA及蛋白的表达。结果氧化型低密度脂蛋白抑制平滑肌细胞亲环素AmRNA及蛋白的表达,而氨氯地平预处理可上调亲环素A的表达。结论氨氯地平可逆转氧化型低密度脂蛋白抑制平滑肌细胞亲环素A表达的作用。     

体外氧化修饰高密度脂蛋白对人单核细胞源性泡沫细胞内胆固醇流出的影响

目的探讨体外氧化修饰后的高密度脂蛋白（ox-HDL）对人外周血单核细胞源性泡沫细胞内胆固醇流出的影响。方法采用一次性密度梯度超速离心法从血浆中分离低密度脂蛋白（LDL）及高密度脂蛋白（HDL）,分别以Cu2+诱导法将其氧化修饰成ox-LDL及ox-HDL。采用密度梯度离心法和塑料吸附法从人外周血中分离出单核细胞,以50nmol/L佛波酯（PMA）刺激48h使之转化为巨噬细胞。细胞分为对照组（ox-LDL组）、阳性对照组（HDL组）及实验组（ox-HDL组）,对照组仅加入终浓度为80mg/L的ox-LDL;HDL组和ox-HDL组分别先加入终浓度均为50mg/L的HDL和ox-HDL共孵育1h后,再分别加入终浓度为80mg/L的ox-LDL,并于实验的0、6、12及24h测定细胞内总胆固醇（TC）、游离胆固醇（FC）及蛋白（Pro）含量。观察不同时间点各组细胞内TC/Pro比值的变化,并比较ox-HDL与HDL对细胞内TC/Pro比值影响的时效关系。结果成功地由体外氧化修饰了LDL及HDL并制备出理想的泡沫细胞模型。在实验的6、12及24h,ox-HDL组细胞内TC/Pro比值均较HDL组细胞高,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论体外氧化修饰后的HDL导致其胆固醇逆向转运（RCT）功能与效率的降低。     

脱氢表雄酮对氧化型低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞中血管细胞粘附分子1表达的影响

目的探讨脱氢表雄酮对氧化型低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞分泌血管细胞粘附分子1的影响。方法用脱氢表雄酮(5μmol/L)作用于氧化型低密度脂蛋白(50 mg/L)诱导的体外培养的SD大鼠血管平滑肌细胞,采用免疫细胞化学、免疫蛋白印迹法、逆转录聚合酶链反应检测其血管细胞粘附分子1蛋白及mRNA的表达。结果当细胞培养基中加入氧化型低密度脂蛋白后,血管平滑肌细胞血管细胞粘附分子1的分泌明显升高(P<0.05),而同时加入脱氢表雄酮可使血管细胞粘附分子1的分泌降低(P<0.05)。结论脱氢表雄酮能够抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞血管细胞粘附分子1的分泌,而且可能是脱氢表雄酮抗动脉粥样硬化的机制之一。     

氨氯地平抑制氧化修饰低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞增殖

许多研究表明 ,血管中膜来源的平滑肌细胞 (VSMC)移行到内膜异常增殖和积聚在动脉粥样硬化 (AS)的发生和发展中起了早期和关键的作用。已知有许多因素能促进VSMC的增殖和移行 ,例如 ,血小板源生长因子 (PDGF)、成纤维细胞生长因子、血清、凝血酶血管紧张素Ⅱ等。近年来还发现 ,氧化修饰的脂蛋白 ,特别是低密度脂蛋白 (LDL)经氧化修饰后致AS的作用增强。从VSMC的生长 /增殖的机制来说 ,细胞内游离钙浓度具有很大的调控能力 ,在这种类型的细胞中 ,电压依从式钙离子通道在细胞内Ca2 + 平衡中起了重要的作用。本实验选用氧化修饰低密…     

泽泻汤对氧化型低密度脂蛋白诱导血管平滑肌细胞增殖的影响

目的观察泽泻汤对血管平滑肌细胞(VSMC)周期蛋白Cyclin D1、Cyclin E、增殖细胞核抗原(PCNA)和p27表达的影响,探讨泽泻汤在氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的VSMC增殖中的作用和机制。方法通过体外50 mg/L ox-LDL诱导VSMC,建立VSMC增殖的动脉粥样硬化细胞模型;应用空白血清及20%泽泻汤含药血清干预。MTS法检测泽泻汤含药血清对VSMC增殖的影响;Western blot检测增殖相关蛋白Cyclin D1、Cyclin E、PCNA和p27表达水平。结果 50 mg/L ox-LDL可明显诱导VSMC增殖。与ox-LDL组比较,泽泻汤含药血清可显著抑制ox-LDL诱导的VSMC增殖,下调细胞Cyclin D1、Cyclin E和PCNA的表达,同时促进p27蛋白表达。结论泽泻汤具有抗VSMC增殖的作用,机制可能与上调p27蛋白和抑制Cyclin D1、Cyclin E、PCNA表达有关。     

血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1介导氧化型低密度脂蛋白促进血管平滑肌细胞表达白细胞介素6

观察氧化型低密度脂蛋白对血管平滑肌细胞白细胞介素 6表达的影响及血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体 1在其中的作用。人脐带动脉平滑肌细胞体外原代培养 ,传至 4～ 5代。氧化型低密度脂蛋白干预 ,观察不同时间点白细胞介素 6mRNA表达 ,及不同浓度氧化型低密度脂蛋白对白细胞介素 6和血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体 1mRNA表达的影响。并观察血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体 1抑制剂多聚肌酐酸对白细胞介素 6mRNA表达的影响。结果发现 ,(1)氧化型低密度脂蛋白作用后 ,白细胞介素 6mRNA表达显著升高 ,作用 6h出现峰值。随着氧化型低密度脂蛋白浓度升高 ,白细胞介素 6mRNA和血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体 1mRNA表达均明显升高 ,后两者呈正相关 (r=0 .94 3,P <0 .0 1)。 (2 )多聚肌酐酸抑制血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体 1后 ,白细胞介素 6mRNA表达明显下降。以上表明氧化型低密度脂蛋白明显促进血管平滑肌细胞白细胞介素 6的表达 ,血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体 1在此过程中起重要介导作用。     

氧化型极低密度脂蛋白诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡

探讨氧化型极低密度脂蛋白诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡的作用。应用低温超速离心法分离健康人血浆极低密度脂蛋白，用CuCl2氧化得到氧化型极低密度脂蛋白。琼脂糖凝胶电泳观察巨噬细胞凋亡DNA断裂“梯状”图谱；流式细胞仪和二苯胺法分别测定凋亡巨噬细胞百分率和：DNA片断百分率；光镜观察凋亡巨噬细胞形态变化。结果发现：①氧化型极低密度脂蛋白能诱导巨噬细胞发生凋亡及DNA断裂；②抗氧化剂二甲基硫脲能部分抑制氧化型极低密度脂蛋白诱导的：DNA断裂；③核转录因子核因子kB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐可完全抑制氧化型极低密度脂蛋白诱导的DNA断裂。提示氧化型极低密度脂蛋白诱导巨噬细胞凋亡可能是动脉粥样硬化形成机制之一；氧化型极低密度脂蛋白诱导巨噬细胞凋亡的作用可能与自由基和激活核因子kB有关。     

神经肽Y影响人血管平滑肌细胞低密度脂蛋白受体表达

通过观察神经肽Y对人血管平滑肌细胞低密度脂蛋白受体表达的影响 ,以探讨神经体液因素在动脉粥样硬化发生中的重要作用。将体外培养的人血管平滑肌细胞分成对照组和不同浓度神经肽Y组 (浓度分别为 1 0 8mol L、1 0 7mol L、1 0 6 mol L和 1 0 5mol L) ,各组分别培养 6h、1 2h、2 4h和 4 8h ,然后经免疫荧光组织化学染色 ,在激光扫描共聚焦显微镜下定量检测神经肽Y对人血管平滑肌细胞的低密度脂蛋白受体表达的影响。结果发现 ,对照组低密度脂蛋白受体表达的平均荧光值在 2 4 2 8～ 2 5 2 7之间 ,且不同培养时间无显著性差异 (P >0 .0 5 )。而各神经肽Y组低密度脂蛋白受体表达的平均荧光值与对照组之间有显著性差异 (P <0 .0 5或P <0 .0 1 ) ,在不同的培养时间中 ,1 0 8mol L神经肽Y组平均荧光值在 1 798～ 2 4 0 8之间 ;1 0 7mol L神经肽Y组在 1 783～ 2 332之间 ;1 0 6 mol L神经肽Y组在 1 72 2～ 2 2 81之间 ;1 0 5mol L神经肽Y组在 1 5 90～ 2 0 1 0之间。与对照组相比 ,分别平均下降 1 5 .5 9%、1 9.78%、2 1 .91 %和 2 6 .83% ,且不同浓度神经肽Y组之间多有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,神经肽Y对成人血管平滑肌细胞的低密度脂蛋白受体表达的下调作用呈现一定的剂量和时间依赖效应。结果提示 ,     

蜂胶水提物对氧化型低密度脂蛋白诱导的平滑肌细胞凋亡的影响

目的研究蜂胶水提物对氧化型低密度脂蛋白诱导的平滑肌细胞凋亡的影响。方法培养人脐动脉平滑肌细胞,培养的细胞随机分为五组:对照组、模型组和三种浓度的蜂胶水提物干预组。采用高效液相色谱法测定细胞内总胆固醇和游离胆固醇含量,从中得出胆固醇酯含量,根据细胞蛋白定量。采用流式细胞仪Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率。结果模型组细胞内胆固醇酯含量高于对照组(P<0.01),50 mg/L、100 mg/L及200mg/L蜂胶水提物干预组细胞内胆固醇酯含量均低于模型组(P<0.01),且随蜂胶水提物浓度的增高细胞内胆固醇酯含量有减少的趋势;模型组细胞凋亡率高于对照组(P<0.01),50 mg/L、100 mg/L及200 mg/L蜂胶水提物干预组细胞凋亡率均低于模型组(P<0.01),且随蜂胶水提物浓度的增高细胞凋亡率有降低的趋势。细胞内胆固醇酯含量与细胞凋亡率之间存在正相关(r=0.964,P<0.01)。结论蜂胶水提物能够降低氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐动脉平滑肌细胞凋亡,可能与蜂胶水提物抑制细胞内胆固醇酯聚集有关。     

氧化型低密度脂蛋白对平滑肌祖细胞增殖和表型的影响

目的 研究氧化型低密度脂蛋白对血管平滑肌祖细胞生物学性状的影响.方法 分离人外周血单个核细胞,用纤粘连蛋白、血小板源性生长因子BB和EGM培养基诱导培养出平滑肌祖细胞,用细胞免疫荧光法和逆转录-聚合酶链反应法鉴定.用分别含终浓度为25、50、100、200 mg/L氧化型低密度脂蛋白的培养基培养平滑肌祖细胞24 h,然后用噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖能力,用细胞免疫荧光法和逆转录-聚合酶链反应法检测α-平滑肌肌动蛋白的表达.结果 平滑肌祖细胞呈"峰、谷"样生长,可表达α-平滑肌肌动蛋白和调宁蛋白.4种不同浓度氧化型低密度脂蛋白组细胞增殖能力均高于对照组(P<0.05),当氧化型低密度脂蛋白为50 mg/L时细胞增殖能力最强,氧化型低密度脂蛋白组细胞内α-平滑肌肌动蛋白的表达明显弱于对照组.结论 氧化型低密度脂蛋白可以促进血管平滑肌祖细胞的增殖并减弱其α-平滑肌肌动蛋白的表达.     

姜黄素水解衍生物对血管平滑肌细胞增殖及低密度脂蛋白受体表达的影响

目的研究姜黄素水解衍生物对氧化型低密度脂蛋白促牛主动脉平滑肌细胞增殖和对牛血管平滑肌细胞膜低密度脂蛋白受体表达的影响。方法用盐酸加三氯化铝水解姜黄素,获得姜黄素水解衍生物;用氧化型低密度脂蛋白培养牛血管平滑肌细胞建立促增殖模型,MTT比色法观察姜黄素水解衍生物对牛血管平滑肌细胞增的抑制作用;流式细胞仪检测血管平滑肌细胞膜上低密度脂蛋白受体表达的影响;采用逆转录聚合酶链反应检测c-myc的表达。结果姜黄素水解衍生物对10mg/L氧化型低密度脂蛋白培养的血管平滑肌细胞增殖有明显的抑制作用,高中低剂量组的抑制率分别为46%、37%和22%(P<0.01或0.05);对血管平滑肌细胞膜上的低密度脂蛋白受体的表达均有明显的上调作用,高中低剂量组低密度脂蛋白受体表达率分别比对照组高33.85%、17.95%和5.75%(P<0.01或0.05);能够下调c-myc的表达。结论姜黄素水解衍生物能明显抑制牛主动脉平滑肌细胞增殖,上调低密度脂蛋白受体的表达,从而延缓动脉粥样硬化的发生发展。     

蜂胶水提物对平滑肌细胞胆固醇酯聚集的影响

目的 通过研究蜂胶水提物对氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐动脉平滑肌细胞胆固醇酯聚集的影响,探讨蜂胶水提物抗动脉粥样硬化作用的可能机制,为蜂胶的进一步开发应用提供实验依据.方法 采用贴块法培养人脐动脉平滑肌细胞,制备平滑肌源性泡沫细胞模型:分别以25、50和75 mg/L氧化型低密度脂蛋白与平滑肌细胞共同培养,于12、24、36、48及60 h检测细胞内总胆固醇和游离胆固醇含量,选择50 mg/L氧化型低密度脂蛋白作用48 h作为制备平滑肌源性泡沫细胞模型的适宜条件.培养的细胞随机分为五组:对照组、模型组、50、100和200 mg/L蜂胶水提物干预组.对照组加正常培养基;模型组和蜂胶水提物干预组分别加50mg/L氧化型低密度脂蛋白共同作用48 h.采用高效液相色谱法测定细胞内总胆固醇和游离胆固醇含量,根据细胞蛋白定量,从中得出平滑肌细胞胆固醇酯含量.结果 采用50 mg/L氧化型低密度脂蛋白与平滑肌细胞共同培养48 h,细胞内胆固醇酯/总胆固醇比值>50%,转变为泡沫细胞.模型组细胞内胆固醇酯含量高于对照组(P<0.01);50、100争200mg/L蜂胶水提物干预组细胞内胆固醇酯含量低于模型组(P<0.01),且随蜂胶水提物浓度的增高,细胞内胆固醇酯含量有减少的趋势.结论 氧化型低密度脂蛋白可引起体外培养的人脐动脉平滑肌细胞内胆固醇酯聚集,而转变为泡沫细胞,蜂胶水提物能够降低氧化型低密度脂蛋白所致的人脐动脉平滑肌细胞内胆固醇酯聚集的程度,从而抑制泡沫细胞的形成,可能是蜂胶发挥抗动脉粥样硬化作用的机制之一.