结核分枝杆菌L型的培养及临床研究

目的探讨肺结核患者结核分支杆菌L型培养结果与临床状况的关系。方法对151例活动性肺结核、31例非活动性肺结核、27例非肺结核作痰结核分支杆菌L型培养,并分别作痰抗酸涂片、培养、PCR检测,结核分支杆菌L型培养阳性病例进行病程长短、初复治、有无空洞的比较;对70例活动性肺结核、12例非活动性肺结核作外周血结核分支杆菌L型培养。结果151例活动性肺结核、31例非活动性肺结核、27例非肺结核痰结核分支杆菌L型培养阳性分别为30例、3例、0例,其中87例抗酸染色与罗氏培养均阴性的活动性肺结核结核分支杆菌L型培养阳性12例(13.79%)。病程大于12月者明显高于小于1月者(P<0.01),复治病人明显高于初治病人(P<0.01),有空洞者明显高于无空洞者(P<0.05)。结论结核病患者L型结核菌的存在是结核病难治、复发的主要原因之一。开展痰、血等标本的结核分支杆菌L型检测,对于提高结核病诊断正确率有重要意义。     

聚合酶链反应检测稳定L型结核分枝杆菌

目的探讨聚合酶链反应(PCR)在结核分枝杆菌稳定L型检测的应用价值.方法采用结核分枝杆菌染色体基因重复保守序列为引物的PCR诊断试剂检测非高渗培养的结核分枝杆菌稳定L型纯培养物的染色体DNA.结果结核分枝杆菌稳定L型的染色体DNA经PCR扩增后电泳可见2条DNA带,其中1条主带与其亲代细菌型一致,另1条为相对分子质量较小的次带.结论结核分枝杆菌稳定L型仍保留了与细菌型染色体PCR引物反应的特异性序列和出现1条相对小分子质量的带,但仍然可用结核分枝杆菌PCR对其进行特异性检测与鉴定.     

结核分枝杆菌L型与肺结核复发的研究

目的:探讨结核分枝杆菌L型(MTB-L)与结核病复发、恶化的关系,为提高结核病治愈率、减少复发提供帮助.方法:取2004年1月1日至2005年12月31日来广东省江门市结核病防治所就诊的所有初治涂阳肺结核患者328例痰标本进行MTB-L型的培养,并对患者进行近期和3年远期的随访观察.结果:MTB-L培养阳性39例,培养阳性率为11.9%.随访观察病例数为296例,至2009年6月30日有28例肺结核患者复治或复发,其中MTB-L型培养阳性者7例,MTB-L阳性患者复治或复发率为20.0%(7/35);MTB-L培养阴性者21例,MTB-L型培养阴性患者复治或复发率为8.0%(21/261),两者差异有显著意义(P<0.05).结论:MTB-L与结核病复发、恶化存在一定关系,若在结核患者就诊时同时进行结核分枝杆菌细菌型和L型培养,并对MTB-L培养阳性结核患者进行抗MTB-L型治疗,对提高结核病治愈率,减少复治或复发可能有一定的帮助.     

结核分枝杆菌稳定L型致病性的研究

目的探讨结核分枝杆菌稳定L型的致病性.方法将不同浓度结核分枝杆菌稳定L型纯培养物经腹部皮下注射感染豚鼠,观察动物局部皮肤反应、腹股沟淋巴结肿大情况、结核菌素试验、病理变化、病变组织涂片染色及分离培养.结果剂量为2×104个/ml的结核分枝杆菌稳定L型注射后15d发生腹股沟淋巴结肿大,但局部皮肤未见红肿.2×106个/ml在12d后可见腹股沟淋巴结肿大,局部皮肤也未见红肿.病变组织病理切片是非特异性改变,切片抗酸染色未见抗酸菌但可见抗酸阴性的圆球体,分离培养未能够检出结核分枝杆菌L型或细菌型.结论结核分枝杆菌稳定L型仍然具有致病性,但毒力显著减弱,大剂量时能够引起动物局部组织发生非特异性的炎性病变.     

肺癌组织中结核分枝杆菌L型的检出与鉴定

目的了解肺癌组织中结核菌L型的存在情况,并探讨其相互关系.方法用IK抗酸染色、免疫组化染色(ABC法)、液体培养和聚合酶链反应(PCR)技术检查肺癌组织的病理切片标本和新鲜活检、手术标本.结果肺癌组织切片标本中,抗酸染色结核菌L型检出率为48 0%(24/50),ABC染色结核菌抗原阳性率为58.0%(29/50),活检肺癌组织中,抗酸染色和ABC染色阳性率分别为29.4%(10/34)和35.3%(12/34).手术肺癌组织中,抗酸染色和ABC染色阳性率分别为33.3%(4/12)和41 6%(5/12),并有5例培养出结核菌L型,6例PCR检测阳性.肺癌组织中所检出的结核菌均为L型,未见典型结核杆菌.结论结核菌L型可能与肺癌的发生有关,但其确切关系及机制尚有待于进一步研究.     

肺结核合并肺癌患者的结核分枝杆菌耐药性分析

[目的]探讨肺结核合并肺癌患者结核分枝杆菌耐药性监测情况.[方法]选取肺结核合并肺癌患者72例作为肺结核合并肺癌组,选取同期入院治疗的单纯肺结核患者94例作为肺结核组,比较两组患者结核分枝杆菌对异烟肼(INH)、利福平(RFP)、链霉素(SM)、乙胺丁醇(EMB)的耐药性情况.[结果]合并肺癌组获得性耐药为89.47％,明显高于肺结核组,差异有统计学意义(P＜0.05);肺结核合并肺癌组耐RFP、耐EMB的几率明显高于肺结核组,差异有统计学意义(P＜0.05);肺结核合并肺癌组耐多药几率71.93％明显高于肺结核组39.04％,差异有统计学意义(P＜0.05).[结论]与单纯肺结核比较,肺结核合并肺癌组获得性耐药率、耐多药率较高,耐RFP、耐EMB频次增加.     

结核病和肺癌患者痰及胸腔积液中结核分枝杆菌L-型的检测

目的探讨结核分枝杆菌L-型(MTB-L)在结核病和肺癌患者痰、胸腔积液两种临床标本中检出的意义。方法选取华北石油总医院2007年2～11月门诊及住院确诊为肺癌的患者110例为肺癌组,选择同期该院健康体检者42例为健康健康对照组,选择同期门诊及住院101例肺癌胸腔积液患者为结核病组,比较3组的MTB-L的资料。结果结核病组IK抗酸染色检测痰和胸腔积液标本中阳性率分别为42.9%、34.4%,均高于肺癌组(26.8%,21.1%,P<0.05);结核病组痰和胸腔积液标本中MTB-L阳性率分别为57.1%、40.6%,均高于肺癌组(24.4%,26.3%,P<0.05)。结论 MTB-L感染在肺癌的形成过程中可能起到一定的作用。     

结核分枝杆菌稳定L型染色体DNA的PCR-SSCP分析

目的探讨结核分枝杆菌稳定L型变异的核酸分子基础.方法对结核分枝杆菌稳定L型纯培养物的染色体DNA特异性聚合酶链反应(PCR)扩增产物进行产物单链构象多态性分析.结果产物单链构象多态性分析显示稳定L型的染色体DNA保留了与其亲代细菌型一致的主要带型,但也显示出少数不同于其亲代细菌型的DNA条带.结论结核分枝杆菌稳定L型可保留与其亲代细菌型一致的特异性染色体基因,但也发生了染色体基因的点突变.     

结核分枝杆菌稳定L型染色体DNA的PCR-SSCP分析

目的探讨结核分枝杆菌稳定L型变异的核酸分子基础。方法对结核分枝杆菌稳定L型纯培养物的染色体DNA特异性聚合酶链反应(PCR)扩增产物进行产物单链构象多态性分析。结果产物单链构象多态性分析显示稳定L型的染色体DNA保留了与其亲代细菌型一致的主要带型,但也显示出少数不同于其亲代细菌型的DNA条带。结论结核分枝杆菌稳定L型可保留与其亲代细菌型一致的特异性染色体基因,但也发生了染色体基因的点突变。     

分枝杆菌及其L型液体鉴定培养基的研制与应用

目的研制用于鉴定培养结核与非结核分枝杆菌(包括细菌型和L型)的液体鉴定培养基.方法在92-3TBL液体培养基中分别加入不同浓度对硝基苯甲酸(PNB)和α-羧酸肼噻吩(T2H),接种分枝杆菌及其L型标准株进行试验,根据生长情况选择适宜浓度PNB和T2H制成液体鉴定培养基,并对48份分离自结核患者标本的分枝杆菌和L型进行了鉴定培养.结果加入0.25 mg/mlPNB的液体培养基可抑制人型和牛型结核杆菌及其L型的生长,加入2 5μg/ml T2H的液体培养基可抑制牛型结核杆菌及其L型的生长,而非结核分枝杆菌均不被抑制.即由92-3TBL培养基、0.25 mg/ml PNB培养基和2 5μg/ml T2H培养基各1管组成液体鉴定培养基.48份结核患者标本经鉴定培养,人型、牛型及非结核分枝杆菌及其L型分别占83.33%、4 17%和12.50%.结论该液体鉴定培养基既保持了液体培养检出率高、所需时间少的优势,又可使分离与鉴定一次完成,更为简便和节省时间,有利于临床早期诊治.     

结核分枝杆菌复合群检测在AIDS合并结核病诊断中的应用

目的探讨结核分枝杆菌复合群(MTD)检测在获得性免疫缺陷综合征(AIDS)合并结核分枝杆菌感染实验诊断的临床应用。方法采用MTD、结核分枝杆菌培养及抗酸染色3种方法,对127例AIDS合并疑似分枝杆菌感染患者的痰样本进行同步检测,对照组为同期住院非人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的普通疑似结核病患者25例。结果 127例AIDS患者痰样本MTD阳性率为29.1%;结核分枝杆菌培养法阳性率为25.2%;抗酸染色阳性率为18.9%;对照组MTD和结核分枝杆菌培养法的阳性率均为44.0%,抗酸染色阳性率为40.0%。结论 MTD对AIDS合并结核病的诊断有较高的应用价值,在提高阳性率的同时可在1个工作日内提供结核分枝杆菌感染的实验诊断信息。     

聚合酶链反应—增强化学发光检测结核分枝杆菌

目的 探讨微孔板杂交技术结合增强化学发光（ECL）检测结核分枝杆菌（MTB）。方法 同时应用聚合酶链反应（PCR）－ECL、PCR－比色法与PCR电泳检测60例活动性肺结核和54例健康对照痰标本，比较结果。结果 PCR－ECL、PCR－比色法与PCR电泳总阳性率分别为76.7%、63.3%、50.0%，其中PCR－ECL阳性率显著高于PCR电泳（P＜0.05)；对涂片阳性标本，阳性率分别为85.7%、85.7%、71.4%，差异无显著性（P＞0.05)；对涂片阴性标本，阳性率分别为73.9%、56.5%、43.5%，PCR－ECL阳性率高于PCR电泳（P＜0.05)。另外PCR－ECL、PCR－比色法与PCR电泳特异性分别为92.6%、96.3%、96.3%，差异无显著性（P＞0.05)。结论 PCR－ECL灵敏度高，能提高临床标本MTB检出率，尤其是对涂片阴性痰标本，并且该方法操作简单，结果客观。     

耐左氧氟沙星结核分枝杆菌gyrA基因上新的突变位点

目的:分析耐左氧氟沙星结核分枝杆菌临床菌株gyrA基因的突变情况及其耐药机制.方法:用聚合酶链反应(PER)和DNA直接测序技术(DS)测定64株耐左氧氟沙星结核分枝杆菌gyrA基因的QRDR(quinolone resistance-determining regions)序列.结果:64株耐药菌株有47株QRDR序列发生突变,其中45株为单位点突变,另2株为双位点突变;突变分布为70位突变2株、89位1株、90位12株、91位4株、94位30株,其中70位和89位为新发现的突变位点.结论:结核分枝杆菌喹诺酮类药物耐受现象与gyrA基因QRDR的突变有关,包括新发现的70位和89位突变.     

1860株老年复治肺结核患者结核分枝杆菌耐药性分析

目的：分析老年复治肺结核患者中分离的结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）的耐药性。方法收集上海市肺科医院2005年1月至2013年12月1860例老年复治肺结核患者（复治组）分离菌株,对其进行耐药性分析。另选300例同期初治肺结核患者作为对照（初治组）。比较两组患者病原菌的耐药情况。结果复治组男性与女性患者中分离的病原菌对链霉素、利福平、乙胺丁醇、阿米卡星、卷曲霉素和氧氟沙星的耐药率比较,差异有统计学意义（均 P＜0．05）。男性耐多药比率为24．0％（357／1489）,广泛耐药比率为9．8％（146／1489）;女性分别为34．2％（127／371）,19．7％（73／371）,差异有统计学意义（ P＜0．05）。复治组耐多药比率为26．0％（484／1860）,广泛耐药比率为11．8％（219／1860）;初治组分别为11．3％（34／300）和7．0％（21／300）,差异有统计学意义（ P＜0．05）。复治组耐单药比率为20．0％（372／1860）,初治组为41．0％（123／300）,差异有统计学意义（P＜0．05）。结论老年复治肺结核患者耐药率高,且女性患者耐药发生率高于男性;提示有必要加强老年复治肺结核耐药性监测。     

深圳市结核分枝杆菌耐药监测疫情趋势分析

目的 监测耐药肺结核的流行情况和趋势，评价本市结核病控制效果。方法 按WHO／IUAT（（结核病耐药指南》的要求对新登记的涂片阳性肺结核病人进行耐药肺结核监测，所选例数不低于全年登记的涂片阳性肺结核病人的40％。结果 监测涂片阳性病例2250例，涂片培养均阳性者2168例；平均耐药率为34．9％，链霉素耐药最高，达24．1％；耐多药率为5．5％，耐药病人主要集中在青壮年。结论 本市结核耐药水平较高，明显受到外来人口的影响，全市推行DOTS策略，是降低区域耐药结核的重要措施。     

恒温扩增实时荧光检测技术在肺结核诊断中的临床价值

目的 评估RNA恒温扩增实时荧光检测技术(SAT)在临床痰液标本结核分枝杆菌检测中的价值.方法 对2011年9至12月上海市肺科医院230例临床确诊肺结核患者和78例其他呼吸系统疾病患者的痰液分别用SAT法、BD960培养法、罗氏培养法和集菌涂片法同时进行检测.SAT法与BD960培养法结果不符标本,再用结核分枝杆菌核酸扩增荧光体外检测试剂盒(PCR-TB)进行检测,同时对BD960培养阳性菌株和SAT扩增产物进行扩增及测序,对菌种进行鉴定.采用x2检验比较SAT法与上述3种方法对结核病患者的阳性检出率.结果 以BD960培养法作为金标准(剔除BD960培养法中有7份污染菌),则SAT方法的敏感度为90.5％( 95/105),特异度为84.2％( 165/196),阳性预测值为75.4％ (95/126),阴性预测值为94.3％( 165/175).SAT法与BD960培养法结果符合率为86.4％( 260/301).223份临床确诊的肺结核患者痰标本SAT法、BD960培养法、罗氏培养法和涂片法的阳性检出率分别为56.5％( 126/223)、45.7％( 102/223)、41.7％( 93/223)和37.2％( 83/223),SAT法显著高于其他3种方法,差异有统计学意义(x2=4.087,P＜0.05).结论 SAT技术用于结核分枝杆菌实验室诊断具有特异度高、敏感度好,操作简便、快速,污染率低的特点,有望成为实验室诊断的新方法.     

抗结核分枝杆菌脂阿拉伯甘露聚糖ELISA的建立及其临床应用

目的提取纯化结核分枝杆菌（MTB）脂阿拉伯甘露聚糖（LAM）,建立抗LAM抗体（LAM-[gG）检测的酶联免疫吸附试验（ELISA）。方法MTB菌体彻底破碎后,去除蛋白、脂质、核酸,得到粗制的脂多糖。经Sephacyl-100凝胶过滤层析分离纯化,得到LAM。以该LAM作为间接ELISA的包被抗原来检测血清中的LAM抗体。,结果所得LAM经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）银染,与对照标准品大小一致,为37000。115例肺结核患者LAM抗体阳性率71．3％;92例非结核肺部疾病患者假阳性率11．9％;188名健康体检者假阳性率3．2％。敏感性71．3％,特异性93．9％。结论本研究成功提取到LAM抗原,此抗原可作为间接ELISA的包被抗原用于结核抗体的检测。     

AIDS合并结核与非结核分枝杆菌肺病CT影像表现

目的探讨AIDS合并结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）和非结核分枝杆菌（non-tuberculous mycobacteria,NTM）肺病CT影像表现的异同。方法回顾性分析32例AIDS合并MTB肺病和13例AIDS合并NTM肺病患者的CT影像资料。结果 2组病变均累及多个肺叶,多种病变同时存在,表现为磨玻璃样或斑片状渗出、大片状实变、沿支气管播散树芽征等;纵隔和/或肺门淋巴结肿大多见;空洞少见;AIDS合并MTB组弥漫粟粒性病变、胸腔积液和/或胸膜增厚比例高于AIDS合并NTM组（P〈0.05）,结节病灶比例低于AIDS合并NTM组（P〈0.05）。结论 AIDS合并MTB和NTM肺病CT均可表现为多肺段分布,多种病变共存,常伴纵隔或肺门淋巴结肿大;如出现两肺弥漫粟粒结节、胸膜增厚或胸腔积液,多提示AIDS合并MTB肺病,而结节病灶多提示AIDS合并NTM肺病。