柔红霉素C-14羟化酶基因在变铅青链霉菌TK24中的表达

将柔红霉素C-14羟化酶基因与酪氨酸酶基因启动子和红霉素抗性基因启动子串联连接,克隆到变铅青链霉菌TK24中进行表达.经过SDS-PAGE蛋白电泳、CO结合差光谱分析结果证明,重组克隆表达的羟化酶分子量约45kD、重组的蛋白量约占细胞总蛋白的12%,并具有细胞色素P-450的特征.     

柔红霉素C-14羟化酶基因在E.coli中的克隆、融合表达及酶的纯化

doxA基因编码柔红霉素C-14羟化酶（DoxA）。本研究将来自Streptomyces coeruleorubidus SIPI-1482的doxA基因克隆至高效表达载体pET32a中，并在E.coli中表达。经Western blotting实验证明产物融合蛋白表达正确且以包函体形式存在，并初步研究了DoxA的分离纯化方法。     

天蓝淡红链霉菌SIPⅠ-1482中dnrⅤ基因的克隆及应用

通过PCR从柔红霉素产生菌天蓝淡红链霉菌SIPⅠ-1482基因组DNA中扩增出约840bp的目的片段，其中包括了长度为828bp的dnrⅤ全长序列。将dnrⅤ基因克隆至大肠杆菌表达载体pET-32a（＋）及pET-28a（＋）中，在宿主菌BL21（DE3）中经IPTG诱导后表达，经SDS-PAGE电泳和Western blotting验证正确。进一步将dnrⅤ和doxA基因克隆至链霉菌表达载体pYG505和pYG907并转化SIPⅠ-1482，筛选得到的硫链丝菌素抗性转化子发酵实验证明两个基因的协同表达能提高柔红霉素的产量。     

天蓝淡红链霉菌SIPI-1482中dnrV基因的克隆及应用

通过PCR从柔红霉素产生菌天蓝淡红链霉菌SIPI-1482基因组DNA中扩增出约840bp的目的片段,其中包括了长度为828bp的dnrV全长序列。将dnrV基因克隆至大肠杆菌表达载体pET-32a( )及pET-28a( )中,在宿主菌BL21(DE3)中经IPTG诱导后表达,经SDS-PAGE电泳和Western blotting验证正确。进一步将dnrV和doxA基因克隆至链霉菌表达载体pYG505和pYG907并转化SIPI-1482,筛选得到的硫链丝菌素抗性转化子发酵实验证明两个基因的协同表达能提高柔红霉素的产量。     

柔红霉素产生菌Streptomyces coeruleorubidus SIPI-1482中dnmV基因的克隆及阻断

从柔红霉素产生菌SIPI-1482菌株基因组DNA中PCR扩增得dnmV及其上游dnmU基因片段。利用同源重组对SIPI-1482菌株的dnmV基因进行基因阻断,得到一株遗传稳定的破坏子。验证了在该菌株中进行同源重组所需交换臂长度。     

顶头孢霉乙酰转移酶基因的克隆、表达和活性研究

头孢菌素C是工业上制备半合成β-内酰胺类抗生素的重要原料。头孢菌素C生物合成途径中的最后一步是将脱乙酰头孢菌素C在乙酰转移酶的作用下形成头孢菌素C，编码催化这一步骤的乙酰转移酶的基因是cefG。由于cefG在染色体上具有内含子，通过RT-PCR的方法从头孢菌素产生菌顶头孢霉总RNA中获得了约1．1kb的cefG基因，将cefG基因克隆到大肠埃希菌质粒pET28a进行表达，SDS-PAGE电泳显示有明显的条带，体外活性测试表明表达产物能将脱乙酰头孢菌素C转化成头孢菌素C。     

葡萄球菌蛋白A抗体结合区基因的克隆、表达和纯化

目的构建表达金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)抗体结合区基因SPA-ZZ的pET-32a-ZZ表达载体,在大肠杆菌BL21中进行高效表达并初步纯化。方法用PCR从pEZZ18中克隆SPA抗体结合区基因ZZ,构建重组表达质粒pET32-ZZ,经酶切和测序确认,将阳性重组质粒转化BL21感受态细菌,IPTG诱导表达,表达产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳检测(SDS-PAGE),并用Q-Sephrose Fast Flow柱进行初步纯化。结果得到了高效表达SPA-ZZ的pET32-ZZ表达载体,表达产物经SDS-PAGE检测相对分子质量为41 000,初步纯化后可得到较纯的表达蛋白。结论SPA抗体结合区蛋白ZZ能在大肠杆菌中高效表达,为SPA-ZZ的应用奠定了一定的基础。     

Association study of polymorphism in the serotonin transporter gene promoter,methylation profiles,and expression in patients with major depressive disorder

The serotonin transporter (5HTT) may be associated with the pathogenesis of major depressive disorder (MDD). The 5HTT‐linked polymorphic region (5HTTLPR) genotype may determine how levels of 5HTT mRNA are influenced by promoter methylation. We examined the association of 5HTT gene methylation, which influences gene expression, and the 5HTTLPR genotype before antidepressant treatment and expression before and after treatment. The aims of this study were (1) to investigate the association between 5HTT methylation or expression in leukocytes and depression and (2) to investigate a possible effect of 5HTT methylation, expression, and genotype on clinical symptoms in MDD. The 5HTTLPR genotype was significantly associated with mean methylation levels in patients only (patients: r = 0.40, p = 0.035, controls: p = 0.96). The mean methylation level was significantly increased in patients compared with controls (patients: 5.30 ± 0.24, controls: 4.70 ± 0.19, unpaired t‐test, p = 0.04). 5HTT expression using real‐time PCR and Taqman probes was increased in unmedicated patients compared with controls and then decreased 8 weeks after antidepressant treatment. The mean 5HTT expression level was not associated with the 5HTTLPR genotype in patients or controls. Increased depressive symptoms were related to decreased levels of methylation. Copyright © 2016 John Wiley & Sons, Ltd.     

电鳐乙酰胆碱酯酶单链抗体基因的克隆及表达(英文)

目的　欲用计算机模拟及分子对接技术揭示抗乙酰胆碱酯酶单克隆抗体 3F3抑酶的分子基础 ,但 3F3分子远大于乙酰胆碱酯酶 (AChE) ,难以操作 ,故拟用其单链抗体为工具进行研究。本研究旨在设计、克隆并表达抗AChE单链抗体Sc3F3基因 ,推演重组单链抗体的氨基酸顺序 ,并证明纯化的重组单链抗体有抑制AChE的作用。方法　使用分泌抗电鳐AChE单克隆抗体 3F3(3F3Ab)的杂交瘤细胞提取总RNA。用RT PCR技术扩增重链可变区 (VH)cDNA及轻链可变区 (VL)cDNA基因 ,通过连接肽(Gly4 Ser) 3 基因将VH 基因和VL 基因连接 ,制成单链抗体基因 (ScFv)。将ScFv基因插入载体pCANTAB 5E用于表达。在大肠杆菌中表达的 3F3单链抗体(Sc3F3)用SephadexG75凝胶过滤和QAE SephadexA 5 0离子交换层析纯化。AChE与抗体的免疫反应性用ELISA法测定。AChE活性用微量羟胺比色法测定。结果　测序结果证明所克隆的ScFv基因是功能重排基因 ,长度为 72 3bp。重、轻链基因长度分别为 35 7bp和 32 1bp。ScFv基因 (含连接肽基因 )所编码的纯化的重组Sc3F3的分子量为 31.6ku。Sc3F3与AChE反应良好 ,但对AChE活性的抑制明显弱于 3F3Ab。Sc3F3的抑制效力约为 3F3Ab的 1/10。结论　在计算机模拟及分子对接研究中使用本研究设计的单链抗体Sc3F3应是可靠的     

载脂蛋白C-Ⅲ基因多态性与血脂水平的关系

目的探讨载脂蛋白C-Ⅲ(ApoC-Ⅲ)C-482T基因多态性与血浆脂质的关系.方法用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法(PCR- RFLP)检测172例心内科住院病人ApoC-Ⅲ基因多态性,同时检测血脂水平.结果ApoC-ⅢC-482T基因型以CT型最多,占57.54%,CC型及TT型分别占33.72%及14.53%,C等位基因频率为59.59%,T等位基因频率为40.41%.各基因型间血脂水平比较,总胆固醇(TC),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)有显著性差异,P<0.05.进一步两两比较显示,CT型TC较TT型高,P<0.05;CT型LDL-C较CC型、TT型高,P<0.05.结论ApoC-Ⅲ-482T多态性位点与血TC、LDL-C水平关系密切.     

膀胱癌组织P~(53)基因表达的研究

本文采用免疫组织化学技术对32例膀胱癌组织P~(53)基因表达进行了检测,试图探讨抑癌基因(P~(53))与膀胱癌组织病理分级及生物学行为的相互关系。结果显示,32例膀胱癌组织P~(53)基因蛋白总阳性表达率为50％,G_1期为30％,G_2期为44.4％,G_3期为69.2％。化疗后复发的12例膀胱癌组织P~(53)阳性表达率为75％。实验结果提示P~(53)基因表达水平与膀胱癌的生物行为及病理学分级密切相关。     

载TK基因聚丙交酯乙交酯纳米粒的性质及表达研究

目的载pEGFP-TKAFB重组质粒纳米粒的性质及其表达研究。方法以无毒的可生物降解的高分子材料聚丙交酯乙交酯作为载体材料,采用双乳化溶媒蒸发法制备了载pEGFP-TKAFB重组质粒纳米粒,考察其形态学及包封率,琼脂糖电泳分析抗核酸酶抗超声的能力,MTT法测定GCV对细胞的抑制率,流式细胞仪测定报告基因EGFP的表达。结果制得的纳米粒,形态圆整,大小均匀,平均粒径(72±12) nm,平均包封率91.25%,质粒制成纳米粒后提高了质粒对抗超声剪切及核酸酶降解的能力,细胞转染效率也显著优于裸质粒。结论质粒DNA制成纳米粒可进一步研究基因药物的给药系统。     

中心体相关蛋白55、睾丸表达基因14在结直肠癌组织中表达及其临床意义

目的 回顾性分析中心体相关蛋白55(CEP55)、睾丸表达基因14(TEX14)在结直肠癌组织中表达及其临床意义。方法选取2015年10月至2016年10月在南阳市中心医院行手术治疗的78例结直肠癌病人癌组织及其癌旁组织为研究对象。利用Ualcan数据库分析CEP55和TEX14在结直肠癌组织及癌旁组织中的表达情况；实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测CEP55和TEX14 mRNA表达；免疫组化染色法检测CEP55和TEX14蛋白表达；分析CEP55和TEX14蛋白表达与病人临床病理特征的关系；对病人随访5年，使用Kaplan-Meier法绘制生存曲线，分析CEP55和TEX14蛋白表达与结直肠癌病人5年生存率的关系；使用Cox回归模型分析影响结直肠癌病人预后的因素。结果 Ualcan数据库分析结果显示，结直肠癌组织中CEP55和TEX14表达量均明显高于癌旁组织（P<0.05）。结直肠癌组织中CEP55、TEX14 mRNA水平（2.34±0.70比1.00±0.26、1.57±0.44比0.98±0.25）及蛋白阳性表达率均明显高于癌旁组织（P<0.05）。CE...