庆大霉素对豚鼠耳蜗柯替器毛细胞凋亡作用的影响

目的 研究庆大霉素对于豚鼠耳蜗柯替器毛细胞的凋亡作用。方法 将豚鼠分为生理氯化钠溶液对照组和庆大霉素组,连续给药14d,利用TUNEL法原位检测动物耳蜗柯替器毛细胞的凋亡情况。结果 生理氯化钠溶液对照组豚鼠耳蜗未见凋亡柯替器毛细胞,庆大霉素组中耳蜗基底回柯替器内外毛细胞均消失,第三回中第1排外毛细胞消失,第2、3排外毛细胞均呈阳性表达,第二回中第1、第2排外毛细胞呈阳性表达。结论 庆大霉素作用于豚鼠耳蜗时可引起柯替器毛细胞凋亡,细胞凋亡是豚鼠耳蜗柯替器毛细胞损伤的一条途径;庆大霉素耳毒性的产生可能与其引起耳蜗柯替器毛细胞凋亡有关。     

豚鼠球囊毛细胞的钾离子流

目的 探讨前庭毛细胞膜上钾通道的类型及其动力学特征,以利于对前庭的生理、病理及药理学的研究。方法 用全细胞式膜片钳技术在豚鼠球囊Ⅱ型毛细胞侧膜上研究钾通道电流。结果 ①阻断内向电流后,当钳制电位为-100mV,以10mV的步距阶跃,阶跃从-70mV至+20mV,随着膜电位的去极化,可记录到一系列快速、瞬时的A型钾通道电流,四氨基吡啶对其有特异性阻断作用。激活电压为(-56.43±4.9)mV。②除A型钾离子流外,当钳制电位为-70mV,以10mV的步距阶跃去极化(-50mV～+40mV),可产生一系列无衰减的延迟整流性钾离子流,四乙基氯化氨能使该电流幅度下降(53.43±6.0)％。结论 豚鼠球囊毛细胞膜上含有A型钾通道和延迟整流性钾通道。     

胆碱能激动剂引起的前庭毛细胞内钙离子浓度升高及庆大霉素对它的影响

目的 通过观察胆碱能受体激动剂对离体前庭毛细胞内钙离子浓度的影响,以探讨前庭毛细胞膜所存在的胆碱能受体分型及庆大霉素对钙离子通道的阻断作用。方法 用胶原酶消化后机械分离法,分离豚鼠前庭毛细胞（VHC）,钙敏荧光探针Fluo-3染色,用激光扫描共聚焦显微镜记录VHC的钙荧光图像及细胞内游离钙离子浓度（[Ca^2 ]i）的动态变化。结果 ①胆碱能M和N型受体激动剂乙酰胆碱（ACh）、氨甲酰胆碱（CCh）均可引起离体VHC内[Ca^2 ]i的升高;N型受体激动剂化乙酰胆碱（ACh-Br)仅在高浓度（10mmol/L）时引起部分（4／5个）离体CHC内[Ca^2 ]i升高,在低浓度（1mmol/L）时影响不明显;②阿托品对ACh、CCh引起的VHC内[Ca^2 ]i的升高有抑制作用;加入0．1mmol/L阿托品可使1mmol/LACh或CCh引起的VHC内[Ca62 ]i升高的峰值明显减小（P＜0．01）;③0．1mmol／LACh引起VHC内[Ca^2 ]i升高之后,再加入0．5mmol／L庆在霉素,VHC内[Ca^2 ]i出现显著下降,至低于静息时的水平。结论 豚鼠壶腹嵴前庭毛细胞膜上存在M型和N型两种受体,M型受体激动剂引起VHC内[Ca^2 ]i的升高较N型明显。阿托品对M型受体激动剂引起的[Ca^2 ]i升高有抑制作用大;庆大霉素对前庭毛细胞膜的钙离子通道可能有阻滞作用。     

扫描电镜测定豚鼠耳蜗基底膜长度与毛细胞宽度等正常值的方法

为了用扫描电镜观察记录耳蜗损伤的部位和范围,定量比较损伤程度,首先需要建立耳蜗基底膜与毛细胞的正常值。本法用扫描电镜测定了豚鼠正常耳蜗基底膜和毛细胞的几项正常值。结果如下:基底膜长度为17.42mm,内毛细胞与单排外毛细胞数目之比为1∶1.20,内、外毛细胞平均宽度分别为8.60μm和7.20μm,外毛细胞数目为7208个,内毛细胞数目为2001个,单排外毛细胞平均密度为139个/mm,内毛细胞平均密度为116个/mm,外毛细胞平均自然缺失率为1.04%。所测各项结果的变动范围较小。     

豚鼠耳蜗毛细胞静纤毛连接桥的超微结构观察

目的观察豚鼠耳蜗毛细胞静纤毛连接桥的超微结构和功能。方法借助单宁酸样品处理技术，用扫描电镜观察了豚鼠耳蜗毛细胞静纤毛的超微结构。结果豚鼠耳蜗外毛细胞的静纤毛之间存在着侧面连接桥，这些连接桥呈水平走向，将每一个毛细胞上的同一排和不同排的静纤毛连接起来。第1圈到第4圈外毛细胞静纤毛上均可观察到侧面连接桥。排列整齐，结构完整的静纤毛之间的连接桥就比较多。静纤毛排列紊乱时，这些连接桥就比较少。第1圈和第4圈毛细胞静纤毛的侧面连接桥多一些，而第2圈和第3罔毛细胞静纤毛的连接桥就少一些。静纤毛表面的小泡状结构多时，静纤毛之间的连接桥也就多一些，静纤毛表面的小泡状结构少时，静纤毛之间的连接桥也就少一些。结论耳蜗毛细胞静纤毛的侧面连接桥是一个独立的形态学结构，它在维持耳蜗毛细胞静纤毛束的结构和功能的完整性方面起重要作用。     

强次声波对豚鼠前庭功能的影响

目的 观察强次声波对豚鼠前庭功能的影响。方法 将１５只豚鼠置于频率８Ｈｚ、强度为１３５ｄＢ ＳＰＬ的次声声次中连续暴露９０ｍｉｎ。应用正弦摆动试验（ＳＰＴ）记录技术定量评价强次声波暴露前后豚鼠前庭功能的变化。结果 强次声波暴露后不同时间正弦摆动诱发的豚鼠前庭性眼震的最大慢相速度（ＳＰＶ）和频率较次声暴露前有轻微降低趋势,但差异无显著性意义,在观测终期,眼震ＳＰＶ及频率（ＳＰＶ）和频率较次声暴露前有     

豚鼠耳蜗前庭膜的扫描电镜观察

目的探讨前庭膜在维技蜗管内外离子和液体平衡中的作用和功能,方法借助扫描电子显微镜观察豚鼠 前庭膜的表面结构,结果前庭膜外淋巴侧间皮细胞表面界限不太清楚,细胞边缘不连续,细胞表面和边缘策毛少,间皮细胞核呈圆形略凸起,前庭膜内淋巴侧为单层多角不规则性上皮细胞,细胞呈圆形或椭圆形状,细胞扁平界限清晰,细胞游离面有策绒毛,而细胞周边绒毛丰富,细胞之间连接比较紧密,结论,前庭膜是中阶和前庭阶之间的屏障,在维持内外淋巴外离子和液体的平衡方面起重要作用。     

强次声波对豚鼠Corti器外毛细胞脱氢酶活性的影响

目的 观察强次声波暴露后豚鼠Corti器外毛细胞（OHC）的脱氢酶活性变化及形态变化。方法 将20只豚鼠随机等分为对照组和4个实验组（每组4只）,置于频率8Hz、强度为135dB的次声声场中连续暴露90min。采用“Adobe Photoshop”软件测定豚鼠耳蜗OHC琥珀酸脱氢酶（SDH）显色灰度值（GSV）,比较强次声波暴露前、后8h、2d、5d和21d时OHC的SDH的活性变化,并在光镜下观察耳蜗损伤情况。结果 次声暴露后各组动物耳蜗OHC的SDH显色灰度值明显高于正常对照组（P＜0．01）,光镜下观察发现散在性或局限性OHC肿胀及缺失,细胞境界不清,SDH染色浅谈,且部分OHC的缺失为永久性改变。结论 强次声波能影响OHC的能量代谢,从而明显降低耳蜗OHC的功能,并可导致豚鼠耳蜗OHC永久性的损伤。     

体液头向转移对豚鼠前庭器官超微结构的影响

为了探讨失重对前庭器官的影响,本实验采用了头低位30°悬吊方法模拟失重,比较三组豚鼠(对照组,平卧组,悬吊组)在实验第四天前庭器官超微结构的变化。结果是正常对照组和平卧组前庭器官的超微结构无明显改变,而悬吊组豚鼠前庭器官感觉上皮的Ⅰ型细胞出现了线粒体肿胀,嵴缺损和膜破裂,纤毛散乱倒伏,表皮板皱折、膨隆。结果说明体液头向分布所引起的前庭器官结构变化可能是航天运动病发病机理之一。     

强次声波对豚鼠前庭终器超微结构的损伤

目的观察强次声波对豚鼠前庭终器超微结构的损伤情况.方法将豚鼠置于频率8Hz、强度为135dB(声压级)的次声声场中连续暴露90min.应用扫描电镜和图像分析技术对强次声波所致的前庭终器损伤进行定量研究,分别观测强次声波暴露后即刻(2h内)、2d和7d时动物外半规管壶腹嵴嵴顶受损区平均毛细胞静纤毛束密度(AHBD)、各半规管壶腹嵴、椭圆囊斑和球囊斑的受损率.结果强次声波暴露后各存活期动物外半规管壶腹嵴嵴顶区AHBD分别为(6.90±4.95)、(6.70±5.27)和(5.60±4.65)束/900μm2,均明显低于正常对照组的(16.25±0.71)束/900μm2(P＜0.01).外、上、后三个半规管壶腹嵴受损率为40%～90%,椭圆囊斑和球囊斑受损率分别为10%～30%和30%～50%.损伤早期的病理变化可见前庭终器感觉毛细胞动、静纤毛缺失、倒伏、散乱,散在性毛细胞(HC)表皮板破裂,在较长存活期,还可见到纤毛融合,部分细胞的表皮板破裂,与支持细胞分离,细胞溶解,形成空洞.前庭终器受损的特点是壶腹嵴重于球囊斑和椭圆囊斑.结论强次声波可对豚鼠各前庭终器超微结构造成不同程度的损伤.     

牛蛙球囊毛细胞A型钾离子流的研究

为了进一步探讨前庭毛细胞膜上钾通道的类型及动力学特征，本实验用全细胞式膜片钳技术在牛蛙球囊毛细胞侧膜上研究了钾通道电流。结果表明：（１）阻断内向电流后，当钳制电位为－１００ｍＶ，阶跃从－７０ｍＶ至＋２０ｍＶ，随着膜电位的去极化，可记录到快速、瞬时的Ａ型钾通道电流，４－Ａｐ对其有特异性阻断作用。激活电压为（－５３．８３±７．８）ｍＶ。（２）Ａ型钾通道的数量在牛蛙毛细胞间存在差异。（３）除Ａ型钾通道外，细胞膜上还含有其它类型的钾通道，这种钾通道能被ＴＥＡ阻断，其性质待定。     

PBOO对豚鼠膀胱卡哈尔间质细胞形态结构的影响

目的探讨豚鼠膀胱流出道梗阻(PBOO)对膀胱卡哈尔间质细胞(ICC)形态结构的影响。方法建立雌性豚鼠PBOO模型,并根据尿动力学检测结果将模型分为PBOO后逼尿肌不稳定(DO)组和PBOO后逼尿肌稳定(DS)组,以假手术组作为对照,饲养4周后取膀胱组织,制成全层组织铺片和冰冻组织切片,c-kit免疫荧光染色分别观察各组膀胱肌层和黏膜下ICC的形态和分布情况。结果PBOO4周后,DO组豚鼠膀胱出现排尿频率、排尿压力的增加(n=12,P<0.05),并且观察到明显的储尿期膀胱不稳定收缩。对照组、DS组和DO组豚鼠膀胱均观察到c-kit染色阳性且呈典型长梭形有突起的ICC,主要分布于平滑肌肌束间和黏膜下层;在DO组豚鼠的膀胱中c-kit染色阳性的ICC分支突起增加且互相连接呈网络状,而在对照组和DS组中ICC呈散在分布,细胞之间联系较松散。结论在PBOO所致DO豚鼠膀胱中ICC发生了形态和结构的变化,相互之间连接呈网络状,ICC的形态和结构的变化可能是逼尿肌不稳定的重要发病基础。     

体外培养豚鼠膀胱Cajal间质细胞的分离与鉴定

目的：探讨豚鼠膀胱Cajal间质细胞的原代分离、培养及鉴定方法。方法：断颈处死豚鼠,无菌条件下分离出膀胱组织,采用酶消化法分离细胞,将细胞悬液接种于含干细胞因子（SCF）的细胞培养基中培养。用酪氨酸蛋白激酶受体（c-kit）特异性抗体标记细胞,证实细胞类型。结果：培养后的Cajal间质细胞保持其固有特征,可见胞体为梭形且胞体有两个细长突起,该类细胞c-kit抗体荧光染色阳性。结论：用酶消化法可获得豚鼠膀胱Cajal间质细胞,并在体外生长良好。     

毛囊生物学及其在皮肤组织工程中的应用

本文讨论了毛囊的胚胎发生和周期性生长特性,重点阐述了毛乳头细胞在毛囊生长过程中的重要作用,毛囊干细胞的特性及定位,以及毛囊生长发育的几种不同机制。通过回顾国外在毛囊生物学研究方面所取得的不同成就及其研究技术手段,探索构建人工复合皮上毛囊的方法和途径。     

毛囊Bulge细胞的分离培养及生物学特性研究

目的分离培养大鼠毛囊Bulge细胞并观察其生物学特性。方法运用显微分离法及酶消化法分离大鼠毛囊Bulge细胞并进行培养,观察其增殖能力及细胞形态等的改变;采用免疫组化方法,检测毛囊Bulge细胞K19、岛整合素的表达情况。结果本方法培养的大鼠毛囊Bulge细胞纯度高、活力好,具有高增殖、低分化特性,同时表达K19、岛整合素。结论成功地分离培养了毛囊Bulge细胞,并在体外长期保持其低分化特性,为进一步深入研究毛囊发育分化提供了实验基础。     

川芎嗪对烫伤豚鼠血管内皮细胞保护作用的实验研究

目的：探讨川芎嗪对烧伤早期血管内皮细胞的保护作用。方法：用豚鼠３０％ＴＢＳＡⅢ度烫伤为模型,分为复苏组（ｎ＝４８）、治疗组（ｎ＝４８）和伤前对照（ｎ＝８）。复苏组在烧伤后立即给予平衡液复苏,治疗组在复苏同时给予川芎嗪。分别在伤前、伤后２、４、８、１２、２４和４８小时,测定血浆内皮素（ＥＴ）、一氧化氮（ＮＯ）;在伤后４和８小时取回结肠动脉中段作透射电镜观察。结果：治疗组各时相点ＥＴ水平较复苏组低（Ｐ〈０．０５,Ｐ〈０．０１）,ＮＯ水平无显著性差异,两组ＥＴ／ＮＯ比值比较,有显著性差异（Ｐ〈０．０５）。病理显示,治疗因管内皮细胞损害明显轻于复苏组。结论：川芎嗪对烧伤早期血管内皮细胞有保护作用。     

豚鼠耳蜗神经分布的扫描电镜观察

本研究借助扫描电子显微镜观察了豚鼠耳蜗的神经分布。标本用戊二醛和锇酸固定，显微解剖暴露观察的微细结构，临界点干燥，离子镀膜。结果表明，传出神经纤维穿过Ｃｏｒｔｉ氏器隧道，经外柱细胞之间，在Ｎｕｅｌ氏间隙内几次分支后到达外毛细胞；传入神经纤维经Ｃｏｒｔｉ氏器隧道底部和外柱细胞脚之间，在Ｎｕｅｌ氏间隙形成外螺旋纤维到达外毛细胞。扫描电镜观察可得到耳蜗神经分布三维图像。     

Hair testing for cocaine in living men: an epidemiological study on hair samples collected for various medico-legal purposes

The collection and analysis of hair samples offers higher chances of identifying people addicted to drugs than urine samples. In our study we propose hair analysis as a useful epidemiological indicator to identify the extent of cocaine use in different medico-legal situations: currently the epidemiological trends of substance abuse are estimated indirectly, mainly through large-scale surveys or through medical and crime statistics that may be too generic. We conducted a cross-sectional study, analysing hair samples, collected for various medico-legal purposes, from living men belonging to different categories, in order to complete a previous study conducted in 2016. Of 104 samples collected for different purposes, 55 were positive for drugs (52.88% of total) and, in this group, positivity for cocaine was found in 28 cases (26.92% of total), with a mean concentration of 4.58 ng/mg of hair, and a mean concentration of 0.75 ng/mg of hair of its major metabolite (benzoylecgonine). This datum is in line with the Italian Superior Health Institute reports, which declared a reduction in the use of cannabis and benzodiazepines, but a notable increase in cocaine use. Despite its limitations, this study adds further information to the previous one conducted in the same context, and furnishes an interesting picture of the phenomenon of cocaine addiction in Italy.     

MR Imaging of Hair and Scalp for the Evaluation of Androgenetic Alopecia

Purpose:Although androgenetic alopecia (AGA) is a common cause of hair loss, little is known regarding the magnetic resonance imaging (MRI) of the AGA or scalp. This study aimed to analyze whether MRI for hair and scalp (MRH) can evaluate anatomical changes in the scalp caused by AGA.Methods:Twenty-seven volunteers were graded for the severity of AGA using the Hamilton–Norwood Scale (HNS), commonly used classification system. All subjects underwent MRH; two radiologists independently analyzed the images. As a quantitative measurement, the number of hair follicles was analyzed and compared with the HNS. As a qualitative analysis, each MRH scan was visually graded in terms of the severity of alopecia, using a 4-point MR severity score. The scores were compared with the HNS.Results:The volunteers were divided into two groups of 12 and 15 males without and with AGA at their vertex, respectively. Inter-observer agreements for the hair count and the MR severity score were excellent. The mean hair count on MRI in the normal group was significantly higher than that in the AGA group (P < 10⁻⁴). The MR severity score in the AGA group was significantly more severe than that in the control group (P < 10⁻⁴). In terms of the presence or absence of thinning hair, the MR severity score was consistent with the HNS determined by a plastic surgeon in 96% of cases. MR severity scores of clinically moderate AGA cases were significantly lower than those of severe cases (P = 0.022).Conclusion:MRH could depict scalp anatomy showing a clear difference between AGA and normal scalps, in both hair count and subjective visual assessment. The MR severity score was in good agreement with the clinical stages by HNS. The results support the potential of MRH as a promising imaging technique for analyzing healthy and pathological scalps.