猪链球菌Ⅱ型的实验室诊断

目的探讨AP I 20 STREP鉴定猪链球菌Ⅱ型的实验室快速诊断。方法无菌采集血样或脑脊液进行细菌培养,阳性菌用AP I 20 STREP做生化鉴定。结果脑脊液2~7 h阳性报警,血样6~12 h报警,AP I 20 STREP生化鉴定编码:4641453、4641003,属猪链球菌Ⅱ。结论BACTEC 9050细菌全自动培养仪,BD公司培养液能够使细菌快速增长,短时间内阳性报警,AP I 20 STREP生化鉴定系统能准确鉴定出菌种。     

RapID STR系统和API 20 Strep系统临床链球菌鉴定结果的比较

目的 用RapID STR和API 20 Strep系统两种方法同时鉴定92株临床分离菌(88株链球菌、4株李斯特菌),将两者的鉴定性能进行比较.方法 RapID STR系统和API 20 Strep系统的鉴定板条严格按照各自系统产品说明书中的标准操作流程进行.结果 两系统对于临床A群链球菌、B群链球菌、D群肠球菌属及常见浅绿群链球菌的鉴定准确性和一致率达到100%,而对少见浅绿群链球菌的检出率和准确性都较低.结论 在鉴定准确性和相符率比较一致的基础上RapID STR系统相比API 20 STP系统操作更简便、鉴定更快速.上述两种系统都是较为可靠的链球菌鉴定商业试剂盒,但在鉴定少见浅绿群链球菌时应联合使用血清学试验,以使鉴定的准确性有所保障及提高.     

RapID STR系统和API 20 Strep系统临床链球菌鉴定结果的比较

目的 用RapID STR和API20 Strep系统两种方法同时鉴定92株临床分离菌（88株链球菌、4株李斯特菌），将两者的鉴定性能进行比较。方法 RapID STR系统和API20 Strep系统的鉴定板条严格按照各自系统产品说明书中的标准操作流程进行。结果 两系统对于临床A群链球菌、B群链球菌、D群肠球菌属及常见浅绿群链球菌的鉴定准确性和一致率达到100％．而对少见浅绿群链球菌的检出率和准确性都较低。结论在鉴定准确性和相符率比较一致的基础上RapID STR系统相比API 20 STP系统操作更简便、鉴定更快速。上述两种系统都是较为可靠的链球菌鉴定商业试剂盒．但在鉴定少见浅绿群链球菌时应联合使用血清学试验．以使鉴定的准确性有所保障及提高。     

G群链球菌的分子鉴定及耐药特征分析

目的探讨16S r DNA测序法鉴定β-溶血性G群链球菌的价值,通过体外药物敏感性试验确定G群链球菌对青霉素、红霉素和克林霉素等抗菌药物的耐药性,并确定红霉素耐药菌株的耐药表型及基因型。方法采用API 20 Strep链球菌鉴定系统、兰氏抗原血清分型和16S r DNA测序法对复旦大学附属华山医院临床分离的50株β-溶血性G群链球菌进行鉴定。采用琼脂稀释法对该50株G群链球菌进行体外药物敏感性试验,并通过纸片法D试验测定红霉素耐药菌株的耐药表型。通过聚合酶链反应(PCR)检测其大环内酯类耐药基因erm B和mef A。结果 50株链球菌经手工API 20 Strep链球菌鉴定系统鉴定,均为停乳链球菌。16S r DNA PCR扩增及测序,42株为停乳链球菌,8株为咽峡炎链球菌,鉴定概率97%。以测序结果为标准,API 20 Strep链球菌鉴定系统鉴定的准确率为84%。兰氏抗原血清分型均为G群。药物敏感性试验结果显示,50株G群链球菌中没有对左氧氟沙星、头孢曲松、万古霉素和青霉素耐药的菌株。红霉素耐药菌株共28株(56%),其中c MLs型耐药菌株26株(52%),Ms型耐药菌株2株(4%),没有发现i MLs型耐药菌株,红霉素中介菌株4株(8%)。克林霉素耐药菌株共31株(62%),其中红霉素敏感而克林霉素耐药菌株3株(6%),红霉素中介而克林霉素耐药菌株2株(4%)。c MLs型耐药菌株中均检测到erm B基因,2株Ms型耐药由mef A基因介导,4株红霉素中介菌株中检出erm B和mef A基因各1株。结论 16S r DNA测序法能准确鉴定G群链球菌。G群链球菌对红霉素和克林霉素的耐药率有所提高,但对青霉素敏感,β-内酰胺类药物可以作为治疗G群链球菌感染的首选药物。     

梅里埃API 20NE生化鉴定系统在布鲁氏菌鉴定中的局限性

目的 对梅里埃API 20NE生化鉴定系统在布鲁氏菌鉴定中出现的错误结果进行总结分析,并探索相应的改正措施,提醒微生物实验室工作人员不能过分依赖生化鉴定结果。方法 对2011年1月～2016年3月陕西省人民医院门诊及住院病人血液、脓液、关节腔积液分离的33株氧化酶阳性、泥沙样、疑似布鲁氏菌的G^-细小杆菌,采用梅里埃API 20NE快速生化鉴定板条进行鉴定,对得到的错误结果进行分析,并结合布鲁氏菌的生物学特征进行补充试验,以得到正确的鉴定结果。结果 API 20NE生化鉴定板条,误将上述33株菌,2株鉴定为人苍白杆菌,其余31株均鉴定为苯丙酮酸嗜冷杆菌,且ID值=91.5%,T值=1。对这种看似可信度很高的鉴定结果,结合菌落细小、48 h后产生橘红色色素、菌体为G^-泥沙样、快速脲酶试验阳性特征,和病人临床症状、接触史及血清学鉴定也证实,上述33株菌均为布鲁氏菌。结论 API20 NE生化鉴定系统,不适合对布鲁氏菌进行鉴定,对疑似错误的鉴定结果,要结合菌落、菌体特点及其它生物学特征和病人的临床表现、接触史及一些辅助实验来确定细菌,过分依赖生化鉴定,会得出错误结果。另外,商家也应补充和完善该鉴定系统,进一步提高API快速鉴定系统的临床应用价值。     

人感染猪链球菌的病原学及分子生物学特征的研究

目的对人感染猪链球菌的病原学及其分子生物学特征进行研究。方法将疑似猪链球菌感染患者血液、脑脊液进行增菌培养，对所分离的病原菌进行染色形态观察、A P I Strep20生化鉴定，并合成引物检测人感染猪链球菌特异性16SrRNA基因片段、2型猪链球菌特异性夹膜多糖编码基因片段cps2J、溶菌酶释放相关蛋白编码基因片段mrp、细胞外蛋白因子编码基因片段cf、溶血素基因片段sly以及甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因片段gapdh。结果将患者脑脊液中分离的病原菌，经A P I20Strep生化鉴定编码为0640473，证实为猪链球菌2型。PER扩增结果也证实是猪链球菌2型，基因测序结果与Genebank中注册的猪链球菌2型序列同源性在96％以上。结论人感染猪链球菌的病原学及其分子生物学特征符合猪链球菌2型。     

4例人感染猪链球菌病的回顾性分析

目的通过对益阳市4例人感染猪链球菌患者的临床资料进行回顾性分析,为猪链球菌病的诊断和治疗提供依据。方法回顾性分析该院4例人感染猪链球菌病患者的临床资料,职业特征,实验室血液和脑脊液检验结果,分离菌株的细菌培养鉴定。结果从4例患者血液分离培养出病原菌,1例患者脑脊液分离出病原菌,均经梅里埃VITEK-2Compact全自动细菌鉴定及药敏分析系统鉴定为猪链球菌Ⅱ型。结论微生物工作人员应加强猪链球菌的认知,快速而准确地得出病原学结果,为临床诊断提供依据。     

VITEK2 compact微生物分析系统对猪链球菌2型快速鉴定

目的对VITEK2compact鉴定猪链球菌的方法的快速性和准确性展开分析,为及时诊断和治疗猪链球菌引发的各种类型疾病提供依据。方法应用VITEK2compact微生物分析系统对疫情中采集的不明原因的病原菌进行细致的鉴定检测。结果对系统所分离出的111株可疑病原菌所得鉴定结果进行认真细致比对,其中有110株被准确鉴定为猪链球菌2型,还有1株被准确鉴定为猪链球菌1型,整体检测的平均用时最短在4h以内。结论 VITEK2compact微生物分析系统能够快速准确检测和鉴定猪链球菌2型,结果可靠,适合临床推广。     

探讨全自动快速微生物检测系统在鉴定流感嗜血杆菌的应用

目的探讨全自动快速微生物检测系统(VITEK MS)在鉴定流感嗜血杆菌的应用价值。方法收集广州市黄埔区红十字会医院与广东省中医院2014年3月至2015年1月从痰液或咽拭子标本中分离的流感嗜血杆菌35株,用16SrDNA测序确证。并且用VITEK MS质谱仪,API NH常规生化鉴定与MH琼脂平板上V+X因子需求性试验3种方法对上述菌株鉴定分析。结果在35株流感嗜血杆菌细菌中,VITEK MS质谱仪与API NH常规生化鉴定差异无统计学意义(P0.05),而VITEK MS与MH琼脂平板上V+X因子需求性试验差异有统计学意义(P0.05)。结论对于API NH常规生化鉴定与MH琼脂平板上V+X因子需求性试验,VITEK MS能快速、准确地鉴定流感嗜血杆菌,对临床诊治提供很大的帮助,有非常好的应用前景。     

全自动快速微生物质谱检测系统鉴定流感嗜血杆菌及其可靠性分析

目的分析全自动快速微生物质谱检测系统(VITEK MS系统)在鉴定流感嗜血杆菌(HI)中的应用及其可靠性。方法选取2016年1月至2017年1月该院生化实验室收集的咽拭子或痰液标本1 265份,利用细菌16SrDNA序列测序方法对细菌进行种属鉴定,得出HI菌株36株。然后分别使用3种不同方法[VITEK MS系统、常规生化鉴定系统(API NH系统)、M-H琼脂药敏试验]对所得到的36株HI菌株进行鉴定。观察3种不同方法对36株HI菌株的鉴定结果及临床使用特点。结果 VITEK MS系统对HI菌株的鉴别能力略高于API NH系统,但差异无统计学意义(P0.05);VITEK MS系统对HI菌株的鉴别能力显著高于M-H琼脂药敏试验(P0.05)。相比传统的API NH系统及M-H琼脂药敏试验,VITEK MS系统的优势为自动判读结果、检测时间短、操作简便及成本低。结论 VITEK MS系统能够准确、快速地对HI进行鉴定,且操作简便,在临床上对HI的鉴定具有一定的参考及指导价值。     

API电脑鉴定临床细菌系统应用浅谈

自1997底参加江西省微生物新技术学习班后,1998年初我院检验科细菌室引进法国生物－梅里埃公司生产的API电脑鉴定微生物系统及其相配套的各种微生物生化反应试验条和双相培养基。经二年的临床应用,取得了理想的效果,现浅淡如下： 一、API电脑鉴定系统提高了我院细菌室鉴定的准确性和培养的阳性率。 致人类感染的病原微生物的种、属不断增加,我们过去用的单个试验和简单的生化编码已不能适应。而API鉴定系统设计了不同的项目与底物组合而进行电脑化数值鉴定分析,且具有多种类型的鉴定系统、多位的编码和分析鉴定系统。二年来,我室…     

细菌自动鉴定仪3例布鲁氏菌误鉴定及文献复习

目的探讨VITEK2 Compact微生物自动鉴定仪对布鲁氏菌误鉴定的原因及局限性。方法 2例无明显诱因发热患者血培养分离菌株,1例左胫骨病变患者骨髓培养分离株。采用VITEK2 Compact细菌鉴定系统、形态学、传统手工生化方法对分离株进行鉴定。采用PCR扩增16S rRNA基因并测序,对所测得的核酸序列进行同源性比对分析。结果 3株缓慢生长的革兰阴性短小杆菌,使用VITEK2 Compact鉴定仪GN鉴定卡首次鉴定为支气管败血鲍特菌(1例)及人苍白杆菌(2例)。基于16S rRNA基因序列分析表明,菌株与马耳他布鲁菌或人苍白杆菌核酸匹配度高达100%,完全排除支气管败血鲍特菌的可能,结合动力试验阴性,排除人苍白杆菌的可能。将保存的菌株用VITEK2 Compact鉴定仪GN鉴定卡复检,结果为马耳他布鲁氏菌。复习文献,发现使用一些商业的细菌鉴定系统产生布鲁氏菌被错误鉴定的案例时有发生。布鲁氏菌可被误鉴定为苯丙酮酸莫拉菌(以前为苯丙酮酸冷杆菌)或解脲寡源杆菌(API20NE系统,法国生物梅里埃,Marcy-I′Etoile,France,人苍白杆菌(API20NE系统,快速NF Plus系统,Innovative Diagnostic Systems Inc.,Atlanta,USA),流感嗜血杆菌生物IV型,莫拉菌属(MicroScan panels Siemens Healthcare Diagnostics Inc.,West Sacramento,CA,USA),动物溃疡伯格菌(MicroScan Walk-Away system using MicroScan NegCombo Type44panel)。结论 16SrRNA基因序分析是鉴定临床缓慢生长的革兰阴性杆菌的有效手段,微生物自动鉴定仪鉴定缓慢生长细菌(如布鲁氏菌)有明显局限性,对布鲁氏菌病等传染病的临床治疗及流行病学调查可产生误导。建议细菌鉴定系统生产厂家应该完善其数据库中专家系统,当细菌鉴定系统报告为人苍白杆菌、解脲寡源杆菌、苯丙酮酸莫拉菌、支气管败血鲍特菌、动物溃疡伯格菌、莫拉菌属或流感嗜血杆菌生物IV型等少见菌种时,应该在鉴定仪器专家系统中提示需与布鲁氏菌鉴别,有效预防布鲁氏菌引起的实验室获得性感染。有关上述非常见菌感染的文章中若仅有常规细菌鉴定而无分子生物学鉴定的案例,建议慎重报道。     

细菌微量快速生化鉴定方法学研究

目的建立细菌微量快速生化鉴定系统,用于临床实验室细菌学的快速诊断。方法应用所研制的27种微量快速生化反应试剂与传统试管方法检测208株临床分离菌及8种质控菌株生化反应符合率,依据杭州24 h的JY Z-15E及JY Z-11E肠杆菌生化编码鉴定管的项目要求组合了该法的肠杆菌15种(RE 15n)及肠杆菌11种(RE 11n)生化鉴定试验条,用208株临床分离菌及8种质控菌菌株进行鉴定试验。结果27种细菌微量快速生化反应试剂与传统试管法生化反应总符合率为93.5%~100%。对208株临床分离菌及8株质控菌的菌种鉴定,其完全符合率15种(RE 15n)为99.9%,11种(RE 11n)为100%。8种质控菌株鉴定完全正确。结论用细菌微量快速生化反应系统鉴定细菌,具有简单、快速的特点,无需特殊设备,成本低廉,所得结果准确、可靠,能够满足临床需要。     

MicroScan AS-4自动微生物分析仪鉴定139株常见病原菌结果分析

为探讨自动微生物分析仪对临床常见病原菌鉴定结果的准确性,我们用MicroScan AS-4微生物分析仪对临床分离的139株病原菌进行鉴定并与API鉴定系统的结果进行比较,以传统手工法作参考标准.     

MIKRO-LA-TEST系统用于58株葡萄球菌、肠杆菌科细菌鉴定的评价

目的评价MIKRO LA TEST系统对临床常见的葡萄球菌、肠杆菌科细菌的鉴定能力。方法将新鲜培养的细菌经形态学和/或初步生化鉴定后,制备规定浓度的菌液,接种相应板条,置35～37°C孵育24h。按要求加入生化试剂,判读并记录所有反应结果,经电脑分析后得菌株鉴定结果。结果58株细菌全部获得属水平的正确鉴定(占100%),除去无法鉴定到种的19株细菌,其余39株中有36株获得种水平的正确鉴定(占92.3%)。结论与法国生物梅里埃公司VITEK系列、API系统及美国DADE公司MICROSCAN系统相比,MIKRO LA TEST系统具有操作简便、成本低的特点,中小型医院可以用其完成临床常见细菌的鉴定。     

MIKRO-LA-TEST系统用于58株葡萄球菌、肠杆菌科细菌鉴定的评价

目的 评价MIKRO-LA-TEST系统对临床常见的葡萄球菌、肠杆菌科细菌的鉴定能力。方法 将新鲜培养的细菌经形态学和／或初步生化鉴定后,制备规定浓度的菌液,接种相应板条,置35～37℃孵育24h。按要求加入生化试剂,判读并记录所有反应结果,经电脑分析后得菌株鉴定结果。结果 58株细菌全部获得属水平的正确鉴定(占100％),除去无法鉴定到种的19株细菌,其余39株中有36株获得种水平的正确鉴定(占92．3％)。结论 与法国生物梅里埃公司VITEK系列、API系统及美国DADE公司MICROSCAN系统相比,MIKRO-LA-TEST系统具有操作简便、成本低的特点,中小型医院可以用其完成临床常见细菌的鉴定。     

革兰阴性细菌鉴定编码系统（GN—30）对肠杆菌科细菌的鉴定评价

目的 用常规细菌鉴定方法和API20系统两种方法对我们自行设计的革兰阴性细菌鉴定编码系统（GN－30）进行评价。方法 用三种方法对16株质控菌株（14株全国质控菌株,2株省质控菌株）,42株临床菌株进行重新鉴定,分析鉴定结果。结果 GN－30细菌鉴定板与常规鉴定方法符合率为100％,API 20E系统与常规鉴定方法、CN－30系统完全符合者37株,符合率为85．7％,三种方法在统计学上无显著性差异（P＞0．05）。结论 GN－30系统在肠杆菌科细菌鉴定方面使用较为满意,可作为一种适用于各级医院临床常规细菌鉴定的较为可靠的方法。     

不同基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱系统对链球菌鉴定性能的比较

目的了解基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对链球菌属临床菌株的鉴定能力。方法收集2015-2019年同济大学附属东方医院临床分离的链球菌,16SrRNA基因测序确定细菌种类。采用直接涂抹法平行使用Autof MS1000型质谱仪、VITEK MS质谱鉴定系统及Bruker Biotyper系统对菌株进行质谱鉴定。结果134株链球菌属细菌中,3套质谱鉴定系统对无乳链球菌、化脓链球菌、解没食子酸链球菌、戈登链球菌及变异链球菌的准确鉴定率均为100%。Bruker Biotyper和Autof MS1000型质谱仪对21株停乳链球菌及14株星座链球菌未能鉴定到亚种,5株缓症链球菌鉴定为口腔链球菌,肺炎链球菌和咽峡炎链球菌各有1株鉴定错误;Autof MS1000型质谱仪鉴定链球菌种水平置信度高于Bruker Biotyper系统。VITEK MS质谱鉴定系统可鉴定停乳链球菌的部分亚种,但14株星座链球菌未能鉴定到亚种,7株缓症链球菌鉴定为缓症链球菌/口腔链球菌,2株咽峡炎链球菌分别鉴定为星座链球菌和肺炎链球菌。结论3套质谱鉴定系统对链球菌属中临床常见的无乳链球菌、化脓链球菌可准确鉴定、直接报告,但是对一些种类菌株鉴定结果有误或不能鉴别亚种,需要DNA序列分析或结合血清学或其他补充实验来准确鉴定。     

肠杆菌科细菌生化鉴定系统的研制及评价

目的 研制肠杆菌科细菌生化鉴定系统并对其性能进行评价。方法 将自行研究的生化基质置聚苯乙烯条中脱水制干组合成鉴定条，辅以细菌编码技术对13株标准菌株、56株质控菌株和127株临床菌株进行鉴定，并与AP120E和微量生化管方法鉴定结果进行比较。结果该系统鉴定13株标准菌株和56株质控菌株的准确率达98．5％，与AP120E同时鉴定127株临床菌株符合率达96．8％（P〉0．05），与微量生化管方法比较，生化反应结果的符合率达97％（P〉0．05）。结论 该系统能准确、快速、简单、经济地鉴定肠杆菌科细菌。     

纹带棒状杆菌的分离鉴定及方法学评价

棒状杆菌属是革兰阳性菌,除白喉棒状杆菌外,一般是人或动物鼻咽部的正常菌群。近年来,国外一些学者报道这些条件致病菌可致医院内感染,引起人类组织和血行感染。国内仅见个案报道。棒状杆菌的分离鉴定一直是国内外学者研究的热点,不同种的棒状杆菌的耐药性不尽相同,所以有必要将棒状杆菌属鉴定到种水平。为了解全自动微生物鉴定系统检测棒状杆菌的可靠性,我们采用VITEK-32、API系统、传统的生化特性分析鉴定临床分离的20株纹带棒状杆菌。