TSA对肺腺癌细胞株A549细胞凋亡的影响

目的：探讨组蛋白脱乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A（trichostatin A，TSA）对A549肺腺癌细胞凋亡的影响。方法：Annexin V和Hoechst染色法检测细胞凋亡；流式细胞仪分析细胞周期；Western blot检测凋亡信号通路中caspas-8、caspase-9活化及多聚ADP核糖聚合酶（PARP）裂解情况。结果：TSA可诱导细胞凋亡，主要使细胞积聚在G2／M期，且呈浓度依赖性。Western blot检测表明TSA诱导了A549肺腺癌细胞caspase-8、caspase-9裂解活化及PARP裂解，且随TSA作用时间延长而逐步升高。结论：TSA诱导A549细胞凋亡中caspase-8、caspase-9介导caspas-3的活化，TSA通过caspase级联反应诱导A549细胞凋亡。     

低氧对人肺腺癌A549细胞迁移和黏附的影响

目的：探讨低氧对人肺腺癌A549细胞迁移以及与血管内皮细胞黏附的影响。方法：细胞划痕实验和Transwell实验检测低氧对A549细胞迁移和浸润的影响；细胞黏附实验检测低氧对A549细胞与血管内皮细胞黏附的影响；免疫荧光法观察低氧对A549细胞中E-cadherin、β-catenin、纤维状肌动蛋白（F-actin）分布的影响；荧光素酶报告基因检测低氧对A549细胞中依赖于缺氧诱导因子-1（hypoxia-inducible factor-1，HIF-1）的转录活性的影响。结果：低氧可以促进A549细胞的迁移、浸润和与血管内皮细胞的黏附，影响A549细胞中E-cadherin和β-catenin的分布及F-actin细胞骨架的重排，上调A549细胞中依赖于HIF-1的报告基因的表达。结论：低氧促进A549细胞的迁移、浸润和与血管内皮细胞的黏附可能是通过调控A549细胞中依赖于HIF-1基因的表达，进而影响细胞中E-cadherin和β-catenin分布和F-actin细胞骨架的重排。     

Cox-2抑制剂对人肺腺癌A549细胞VEGF和Angs基因表达的影响

目的 :探讨环氧化酶 -2 (Cox 2 )抑制剂Nimesulide(NIM )对人肺腺癌A 5 49细胞血管内皮生长因子 (VEGF)及血管生成素(Angs)基因表达的影响及意义。方法 :不同浓度 ( 2 5、5 0、10 0、2 0 0 μmol/L)NIM处理人肺腺癌A 5 49细胞 2 4、48、72h后 ,放射免疫法测定细胞培养上清液PGE2 水平 ,半定量RT PCR检测NIM处理人肺腺癌A 5 49细胞后48h其VEGF及Ang 1、Ang 2mRNA的表达水平。结果 :NIM处理A 5 49细胞后 ,细胞培养上清液PGE2 水平下降 ,呈浓度和时间依赖性 ;NIM处理A 5 49细胞后 48h ,VEGF、Ang 2mRNA水平下降 ,呈浓度依赖性 ;Ang 1mRNA水平则无显著改变。结论 :NIM可抑制Cox 2活性及下调VEGF、Ang 2基因表达 ,该作用可能是Cox 2抑制剂抑制肿瘤血管生成的机制之一     

KIF14对肺腺癌A549细胞生物学功能的影响

目的:探讨驱动蛋白超家族蛋白14(KIF14)在肺腺癌(LUAD)中的表达情况及对LUAD细胞生物学功能的影响。方法:通过TCGA、GEO数据库分析KIF14 mRNA在LUAD中表达情况,采用Kaplan-Meier法分析KIF14表达与患者预后的关系。利用单样本基因集富集分析(ssGSEA)和TIMER数据库探索KIF14表达水平与肿瘤免疫浸润的关系。通过功能富集分析注释KIF14在肺腺癌中的生物学功能。进一步进行体外实验和免疫组织化学验证。通过实时荧光定量PCR(qPCR)和Western blot检测KIF14在LUAD细胞系中表达情况;构建KIF14干扰序列并将其转染入A549细胞中,将其分为NC组(转染KIF14阴性对照序列)、siKIF14组(转染靶向KIF14的siRNA序列)。Western blot检测细胞中KIF14沉默效果;CCK-8、平板克隆形成实验检测siKIF14对LUAD细胞增殖能力的影响;TUNEL凋亡实验检测siKIF14对LUAD细胞凋亡能力的影响;Transwell和划痕实验检测siKIF14对LUAD细胞侵袭和迁移能力的影响。结果:生物信息数据...     

苯丁酸钠对体外人肺腺癌细胞A549的影响

目的观察苯丁酸钠（PB）对体外人肺腺癌细胞A549的影响。方法采用MTT法观察不同浓度PB对人肺腺癌细胞A549增殖的抑制作用,流式细胞术分析不同浓度PB对生长期人肺腺癌细胞A549的细胞周期及凋亡情况的影响。结果 PB作用后人肺腺癌细胞A549的生长缓慢,细胞阻滞于G0/G1期（P〈0.05）,凋亡增加（P〈0.05）,其抑制作用呈时间和浓度依赖性。结论 PB能抑制人肺腺癌细胞A549的生长,促进其凋亡。     

黄连素对肺腺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:研究黄连素(BBR)对A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响,初步探讨BBR抑制A549细胞转移的机制。方法:用不同浓度的BBR作用于A549细胞,MTT法测定A549细胞增殖水平,流式细胞仪检测A549细胞的凋亡,Transwell实验测定A549细胞的迁移和侵袭能力,Westernblot测定A549细胞中与EMT相关的蛋白E-cadherin、Vimentin、Slug、Snail的表达。结果:BBR以浓度及时间依赖的方式抑制A549细胞的增殖;流式细胞仪检测发现BBR作用于A549细胞后凋亡率呈剂量依赖性增加;Westernblot显示BBR作用A549细胞后,E-cadherin表达升高,Vimentin、Slug、Snail表达降低,Transwell实验显示BBR作用于A549细胞后,能够抑制其迁移和侵袭。结论:BBR能抑制A549细胞增殖,诱导其凋亡,通过促进E-cadherin表达和抑制Vimentin、Slug、Snail的表达来抑制EMT的发生,从而抑制了A549细胞的迁移和侵袭。     

人MT1H 基因对肺腺癌细胞A549 增殖的影响及其机制

 目的 研究外源性人金属硫蛋白1H（MT1H）基因稳定转染对肺腺癌细胞A549生长的影响及其机制。方法 构建MT1H基因真核表达质粒pcDNA3．1（-）-MTIH，以脂质体法转染A549细胞，经G418筛选，获得阳性单克隆细胞。用RT-PCR和Western blot技术检测转染前后MT1H mRNA和蛋白表达，MTT实验检测其增殖能力的变化，流式细胞仪分析细胞周期时相分布。然后RT-PCR检测cy-clinD1的表达。结果 MT1H在A549细胞中获得表达。与未转染组和空质粒转染组比较，pcDNA3．1（一）～MT1H转染组细胞增殖速度明显增快，G0／G1期细胞减少，S期细胞增多，cyclinD1 mRNA水平明显升高。结论 MT1H能够促进肺腺癌细胞A549增殖，可能和上调cyclinD1促使细胞进入S期增多有关。     

谷氨酰胺对肺腺癌A549细胞增殖、迁移及TNF-α和NF-κB表达的影响

摘 要：［目的］ 探讨谷氨酰胺（glutamine,Gln）对肺腺癌A549细胞增殖、迁移及TNF-α、NF-κB表达的影响。［方法］ 体外培养肺腺癌A549细胞株,CCK-8法检测不同浓度Gln（2、4、8、16、32、64 mmol/L）对A549细胞的增殖影响,筛选适宜浓度。Transwell 实验检测细胞迁移能力,ELISA法和Western Bolt法分别检测TNF-α、NF-κB p65蛋白表达。［结果］ （1） Gln对A549细胞的作用与干预浓度有关,缺乏Gln时细胞生长受限;低浓度Gln（2、4、8mmol/L）对细胞增殖无明显抑制作用;高浓度Gln（16、32、64mmol/L）作用下抑制作用明显（P<0.01）并呈时间依赖性,且32mmol/L和64mmol/L两组作用无明显差异（P>0.05）。（2）与对照组相比,Gln组明显降低A549细胞迁移数;高浓度Gln组明显降低TNF-α、NF-κB p65蛋白的表达（P<0.01）,但32mmol/L和64mmol/L组之间无统计学差异（TNF-α分别为14.671±0.842pg/ml、14.867±1.21pg/ml,NF-κB p65分别为0.548±0.042、0.474±0.077）（P>0.05）。［结论］ Gln对肺腺癌A549细胞的作用与浓度有关,32mmol/L可能为最适抑制浓度。Gln可能通过下调TNF-α和NF-κB p65蛋白表达并抑制A549细胞的迁移发挥抗肺腺癌作用。     

塞来昔布对肺腺癌A549细胞MMP-2表达的影响

[目的]探讨塞来昔布对肺癌A549细胞MMP-2蛋白表达及分泌的影响。[方法]肺腺癌A549细胞分实验组和对照组,用ELISA法检测塞来昔布的不同浓度（10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L）和20μmol/L的塞来昔布不同作用时间（6h、12h、24h）对A549细胞培养上清液中PGE2及MMP-2的浓度变化,同时用Westernblot法检测A549细胞MMP-2蛋白质表达情况。[结果]上述三种浓度塞来昔布处理A549细胞12h后上清液PGE2浓度（38.63±2.13,15.02±0.95,2.56±0.5pg/ml）,与对照组（45.56±0.93pg/ml）比较差异有显著性;MMP-2浓度（12.48±2.06,3.96±0.08,1.21±0.11pg/ml）,与对照组（25.38±1.034pg/ml）比较差异有显著性。20μmol/L的塞来昔布处理A549细胞经上述不同时间后上清液PGE2浓度（34.69±2.23,12.18±1.36,5.56±0.95pg/ml）,与对照组（45.56±0.93pg/ml）比较差异有显著性;MMP-2浓度（8.31±1.34,4.55±0.86,1.21±0.11pg/ml）与对照组（25.38±1.03pg/ml）比较差异有显著性。塞来昔布浓度的增加和作用时间的延长,A549细胞培养上清液PGE2及MMP-2的浓度均逐渐降低,MMP-2蛋白质表达的条带逐渐减弱。[结论]塞来昔布能以浓度依赖性和时间依赖性方式抑制肺癌A549细胞PGE2、MMP-2的分泌,塞来昔布可能通过PGE2途径抑制肺癌A549细胞MMP-2表达从而抑制细胞侵袭能力。     

Decorin基因表达对人肺腺癌A549细胞生物学行为的影响

目的 探讨Decorin表达降低对人肺腺癌A549细胞的生物学行为的影响。方法 体外化学合成DCN-siRNA特异性序列,在LipofectamineTM2000的介导下转染人肺腺癌A549细胞;分别采用RT-PCR法和Western blot方法检测Decorin基因和蛋白表达情况;CCK-8法检测细胞的增殖能力;流式细胞技术检测细胞凋亡;Transwell小室测定细胞侵袭能力;划痕实验检测肿瘤细胞迁移能力。结果 RT-PCR及Western blot证实靶向Decorin的siRNA干扰明显降低了A549细胞Decorin mRNA和蛋白表达水平。CCK-8检测结果显示与对照组比较,siRNA干扰组A549细胞增殖能力增强,差异具有统计学意义(P＜0.05)。流式细胞技术显示,DCN-siRNA组与对照组比较凋亡率差异无统计学意义(P=0.214)。Transwell侵袭实验显示siRNA干扰后,A549细胞穿膜细胞数明显多于对照组(P＜0.05)。细胞划痕实验显示与空载体组比较,DCN-siRNA组细胞48h、72h细胞生长明显增多,愈合加快。结论 应用siRNA技术在肺腺癌细胞中下调Decorin表达促进了A549细胞的增殖,迁移以及侵袭能力,不影响细胞的凋亡能力。该结果为Decorin在肺癌的作用及功能方面的研究提供了新的证据。     

自噬对人肺腺癌A549细胞放疗敏感性的影响

背景与目的放射治疗是肺癌最重要的治疗手段之一,然而却因放疗抵抗极易导致肿瘤的复发和转移。放疗可诱导肿瘤细胞自噬发生,最新研究也报道,自噬可能与DNA损伤修复过程相关。本研究旨在探讨通过雷帕霉素上调A549细胞自噬,能否增加细胞放疗敏感性,其过程是否与DNA损伤修复过程相关。方法以人肺腺癌A549细胞作为实验对象,实验设对照组（N）、单纯放疗组（IR）、雷帕霉素联合放疗组（R+ARPA）。采用Western blot检测γ-H2AX蛋白质、Rad51蛋白质、Ku70/80蛋白质、p62蛋白质、LC3蛋白质表达;电镜检测自噬体形成;细胞克隆形成实验检测细胞存活分数（survival fraction, SF）值。结果与单纯放疗组相比,放疗联合雷帕霉素组自噬活性增加,且Rad51、Ku80蛋白质表达减少,细胞增殖能力下降。结论通过雷帕霉素上调自噬可增加肺癌细胞放疗敏感性,其机制可能与抑制DNA损伤修复过程相关。     

去甲斑蝥素对人肺腺癌A549细胞的抑制作用

目的： 研究去甲斑蝥素(NCTD)对人肺腺癌A549细胞的细胞毒作用,并初步探讨其作用机制。方法：采用四甲基噻唑蓝(MTT)试验检测0~240 μmol/L NCTD在0~72 h内对A549细胞活力的影响;NCTD处理A549细胞24 h后换正常培养基,用MTT方法检测细胞恢复与增殖的情况;采用倒置显微镜观察A549细胞经40、50和60 μmol/L NCTD处理0~72 h后细胞形态学的改变;通过流式细胞术检测40~60 μmol/L NCTD对细胞周期和凋亡的影响。结果：30~240 μmol/L NCTD对A549细胞有明显的生长抑制作用(P<0.05);在30~120 μmol/L浓度范围内,NCTD对A549细胞的生长抑制作用在NCTD撤除24 h后逐渐消失,30~60 μmol/L NCTD作用A549细胞24 h后,A549细胞的活力在恢复培养的第5天完全恢复;40、50和60 μmol/L NCTD作用A549细胞0~72 h,细胞表现为明显的G2~M期阻滞,与对照组相比,NCTD诱导A549细胞凋亡作用不明显(P>0.05)。结论：40~60 μmol/L NCTD主要通过诱导A549细胞G2~M期阻滞而抑制细胞生长。     

美加明对人肺腺癌A549细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨烟碱型胆碱能受体(nicotinic acetylcholine receptor,nAChR)拮抗剂美加明对人肺腺癌A549细胞增殖和迁移的影响。方法:应用磺酰罗丹明B(sulforhodamine B,SRB)法和FCM法检测美加明对人肺腺癌A549细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响;划痕实验检测美加明对细胞迁移能力的影响;激光共聚焦显微镜下观察美加明对A549细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)表达的影响。结果:美加明可抑制A549细胞的增殖,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),并且其抑制作用随着药物浓度的增加而增强。FCM检测结果显示,美加明作用后,G0/G1期细胞比率增多,S期和G2/M期细胞比率下降,而细胞凋亡未发生明显变化。划痕实验结果显示,美加明可降低A549细胞的迁移能力。激光共聚焦显微镜下观察发现,美加明可上调A549细胞E-cad的表达。结论:美加明可能通过阻滞细胞周期于G0/G1期而抑制A549细胞增殖,并通过上调E-cad的表达而降低细胞迁移。     

蛋白激酶CK2β SiRNA对肺腺癌细胞A549增殖的抑制作用

目的:探讨蛋白激酶CK2β特异性小干RNA对肺腺癌细胞系A549生长增殖的影响.方法:构建CK2βsiRNA表达质粒稳定转染A549细胞,RT-PCR、免疫印迹、免疫细胞化学技术检测转染前后CK2β的mRNA和蛋白表达水平,同位素掺入法测定细胞内CK2活性,细胞计数法绘制细胞生长曲线,计算细胞倍增时间,流式细胞术分析细胞周期.结果:与空白组和阴性对照组相比,稳定转染pGPU6-CSNK2B质粒后.A549细胞中Cl(2B的mRNA水平、胞浆蛋白表达水平以及CK2活性均明显下降(P＜0.05),但各组间细胞核中CK2β的蛋白表达水平无明显差异(P＞0.05);A549细胞生长明显受到抑制,倍增时间增加;A549细胞阻滞于G0/G1期.结论:CK2B siRNA可以下调A549细胞中CK2β表达及其激酶活性,并抑制细胞增殖;本研究为CK2特异性siRNA作为抗肿瘤药物的开发和CK2药靶的研究奠定了基础.     

过表达CUL4A对肺腺癌A549细胞生物学功能的影响

目的:探究CUL4A对人肺腺癌细胞株A549生物学行为的影响。方法:通过慢病毒感染的方法,构建CUL4A过表达的A549细胞株,通过体外平板克隆和Transwell实验检测A549细胞株的增殖、迁移和侵袭能力。结果:通过RT-PCR和Western-blotting证实CUL4A过表达的A549细胞株构建成功。 与对照组的细胞相比,上调CUL4A的表达能够促进A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结论:我们的研究结果强调了CUL4A在人肺腺癌细胞株A549中的重要性,并提示CUL4A不仅可能与肺癌的发生和转移有关,而且可能成为肺癌潜在的治疗靶点以及生物标志物。     

西咪替丁对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

摘要：目的研究西咪替丁对其增殖及凋亡的影响并探讨其可能的机制。方法分别以不同浓度的西咪替丁处理A549细胞48 h后,采用MTT法测细胞存活率,流式细胞术测细胞凋亡率,Western blot测Bcl-2和Bax蛋白表达水平情况,观察西咪替丁对A549细胞增殖和凋亡的影响。结果经西咪替丁干预48 h后,A549细胞的增殖受到明显抑制,凋亡增加,且该抑制呈药物浓度依赖性增加。Western blot检测显示随着西咪替丁浓度增加,Bcl-2蛋白的表达减少,而Bax蛋白的表达增加。结论西咪替丁预处理能抑制A549细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与其下调细胞Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达有关。     

2-DG对肺腺癌A549细胞增殖的影响及其相关机制

目的:探讨2-脱氧-D-葡萄糖(2-deoxy-D-glucose,2-DG)对肺腺癌A549细胞增殖的影响及其相关机制.方法:不同浓度的2-DG与抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和过氧化氢酶(catalase,CAT)单独及联合处理A549细胞,CCK-8(cell counting kit-8)法检测细胞生存率;DCFH-DA (2’,7’-dichlorodihydrofluorescein diacetate)染色检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平的变化;比色法检测A549细胞内氧化型谷胱甘肽占总谷胱甘肽含量的百分比;实时荧光定量PCR检测细胞内SOD、CAT和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px) mRNA的转录情况.结果:2-DG可以显著抑制A549细胞的生长,同时伴随着细胞内ROS产生增多和氧化型谷胱甘肽所占的百分比升高.2-DG干预后,细胞内CAT和GSH-Px mRNA表达水平上调,而SOD mRNA的表达水平未出现明显变化.A549细胞经NAC和CAT预处理后,2-DG的抗肿瘤作用明显减弱,而特异性氧自由基清除剂SOD对2-DG的抗肿瘤作用没有明显影响.结论:2-DG能够抑制A549细胞增殖,其机制可能与诱导ROS的生成,尤其是H2O2的生成有关.