青藤碱对类风湿关节炎患者外周血树突状细胞TLR2和TLR4表达的影响

目的:观察中药单体青藤碱对类风湿关节炎患者外周血树突状细胞toll样受体(toll like receptor,TLR)2和TLR4表达的影响。方法:分离10例类风湿关节炎患者的单核细胞,采用细胞因子刺激分化为树突状细胞。分别采用青藤碱高(5mM)、中(2mM)、低(1mM)剂量和空白对照干预。实时荧光定量PCR检测各组树突状细胞TLR2和TLR4 mRNA的表达,Western-blot检测树突状细胞TLR2和TLR4蛋白的表达。结果:与对照组相比,经青藤碱高(P<0.01)、中剂量(P<0.01)干预后的树突状细胞TLR2和TLR4 mRNA表达明显降低,青藤碱干预后的树突状细胞(DC)中TLR2、TLR4表达均有所有降低。结论:青藤碱可能通过抑制树突状细胞TLR介导的炎症信号转导,而产生治疗类风湿关节炎的作用。     

大黄素抑制人结肠癌RKO、Caco-2细胞体外增殖作用的研究

目的:探讨大黄素对人结肠癌细胞株RKO、Caco-2的体外增殖的抑制作用。方法:MTT比色法检测细胞活力;倒置显微镜显像观察细胞数量变化;FCM检测细胞凋亡率及周期分布;Caspase-3分光光度法检测Caspase-3酶蛋白活性。结果:随着作用时间的延长以及大黄素浓度的升高,大黄素对人结肠癌RKO、Caco-2细胞的体外增殖抑制作用增高;大黄素阻滞两种细胞于S期,使G2/M期细胞比率明显下降,激活Caspase-3酶蛋白;提高细胞凋亡率。结论:大黄素抑制人结肠癌细胞株RKO、Caco-2体外增殖,其作用呈浓度、时间依赖性;大黄素能够阻滞RKO、Caco-2细胞株细胞周期并激活Caspase-3诱导细胞凋亡。     

大黄素对过氧化氢诱导原代大鼠皮层细胞凋亡的保护作用

目的:应用过氧化氢(H2O2)孵育原代大鼠皮层细胞制作细胞损伤模型,研究大黄素对模型细胞凋亡的影响。方法:H2O2和大黄素对皮层细胞进行处理,MTT和LDH法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)水平,倒置显微镜、Hoechst33258染色观察细胞形态变化,Western blot法检测Bcl-2和Bax的表达。结果:与正常对照组比较,经150μmol/LH2O2处理后皮层细胞活性显著降低,ROS聚集增加,Hoechst33258荧光染色出现明亮的凋亡小体,大黄素预处理能改善其损害情况。Western blot法显示与正常对照组比较,H2O2可致Bcl-2表达显著减弱,Bax表达显著增强,而大黄素预处理可使其恢复到正常水平。结论:大黄素可拮抗过氧化氢诱导的皮层神经细胞凋亡,具有一定的神经细胞保护功能。     

大黄素体外抑制人树突状细胞分化及成熟作用的研究

目的 探讨大黄素体外作用树突状细胞（dendritic cell, DC）后对人DC分化、成熟及免疫功能的影响。     

大黄素通过内源性线粒体途径和外源性死亡受体途径诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡的研究

目的:观察大黄素对Hela细胞增殖的抑制作用并探讨其作用机制.方法:倒置显微镜观察细胞形态变化,MTT法检测大黄素对Hela细胞增殖的抑制情况,流式细胞仪检测Hela细胞凋亡,Western blot检测Hela细胞中凋亡相关蛋白Cytochome c、Apaf-1、Fas、FasL、FADD的表达.结果:空白组Hela细胞呈现典型的多边形和鹅卵形细胞,胞体丰满,边缘清晰,而大黄素处理过的Hela细胞边缘变钝,出现很多皱缩和细小的碎片,表明大黄素对Hela细胞的生长具有毒性作用.MTT法检测结果显示大黄素对Hela细胞的增殖具有明显的抑制作用,并呈剂量依赖性.流式细胞仪定量检测Hela细胞的凋亡结果显示,大黄素在0、20、40、80 μM时诱导Hela细胞凋亡率分别为0.8%、8.2%、22.1%、43.7%.Western blot法检测结果显示,在内源性线粒体途径中,大黄素能够浓度依赖性地增加Cytochrome c 和Apaf-1蛋白表达;在外源性死亡受体途径中大黄素能够浓度依赖性地增加Fas、FasL和FADD表达.结论:大黄素通过内源性线粒体途径和外源性死亡受体途径诱导Hela细胞凋亡.     

大黄蒽醌类药物影响大黄素在Caco-2细胞中的摄取吸收行为

目的：通过对大黄素在Caco-2细胞中摄取吸收的定量来考察其他游离大黄蒽醌类药物对大黄素吸收的影响。方法：建立了结合荧光检测器的高效液相色谱法用以检测Caco-2细胞中的大黄素的摄取量并初步探讨大黄素的吸收特性。结果：大黄素的吸收被芦荟大黄素、大黄素甲醚显著地抑制。结论：利用游离大黄总蒽醌中的其他成分与大黄素合理配伍用药或许可以有效的减少大黄中大黄素的毒性，提高中药大黄的安全性和有效性。     

大黄素诱导自噬改善顺铂导致肾小管细胞损伤机制探索

目的：观察大黄素对顺铂所致的肾小管上皮细胞（NRK-52E）损伤的影响,探讨其可能分子调节机制。方法：观察大黄素对顺铂所致NRK-52E细胞形态学改变的影响;采用Western Blot方法检测顺铂单独处理和加入大黄素共同处理细胞后,凋亡相关蛋白Caspase-3和cleaved Caspase-3的表达情况;用大黄素干预细胞不同的时间点,观察微管相关蛋白1轻链3（LC3）II/I的表达和pmRFP-LC3质粒转染细胞后荧光颗粒的变化情况,同时观察雷帕霉素处理细胞不同时间点后LC3-II/I的表达情况及其对顺铂环境下细胞形态学改变的影响,并观察大黄素对自噬上游通路AMPK的活化和mTOR信号的影响。结果：顺铂可以诱导NRK-52E细胞出现形态学改变,大黄素能够改善顺铂导致的变化。另外,大黄素干预可以下调顺铂导致的cleaved Caspase-3蛋白表达的增多;大黄素处理细胞不同时间点LC3-II/LC3-I的比值明显上升,pmRFP-LC3转染观察到大黄素处理细胞后自噬颗粒明显增多。同时雷帕霉素处理细胞后LC3-II/LC3-I的比值明显上升,其与顺铂共同干预能明显改善顺铂诱导的细胞凋亡;大黄素干预时间的延长,p-mTOR蛋白表达明显下调,p-AMPK的表达明显上调。结论：大黄素可以改善顺铂诱导的NRK-52E细胞凋亡,其作用机制可能是通过调节AMPK/mTOR信号通路诱导自噬来发挥肾保护作用。     

大黄素对大鼠肾小球系膜细胞增殖及IL-6的影响

目的:观察大黄素对大鼠肾小球系膜细胞增殖及系膜细胞分泌IL-6的影响。方法:应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定系膜细胞的增殖及ELISA法检测系膜细胞中IL-6的含量,观察大黄素对其的影响。结果:大黄素可明显抑制大鼠系膜细胞的增殖及降低系膜细胞对IL-6的分泌,与模型组比较有显著性差异(P<0.01)。结论:提示大黄素可明显抑制肾小球系膜细胞增生,减少细胞外基质的生成,从而减轻与延缓肾小球硬化,其机制可能与减少肾小球系膜细胞分泌IL-6有关。     

大黄素抑制体内外胰腺癌转移的实验研究

目的:探讨大黄素抑制体内外胰腺癌转移的作用及其机制.方法:不同浓度大黄素(10,20,40μmol·L-1)作用人胰腺癌细胞株SW1990 2 h后,观察大黄素对SW1990细胞迁移和侵袭的作用;不同浓度大黄素(10,20,40 μmol·L-1)作用SW1990细胞48 h后,Western blot印迹检测胰腺癌细胞中NF-kB和MMP-9表达的变化;建立胰腺癌原位移植模型,分成对照组、大黄素低、高剂量组(20,40 mg·kg-1),实验结束后观察大黄素对裸鼠胰腺癌转移的抑制作用;免疫组织化学法检测裸鼠胰腺肿瘤组织中CD34,NF-kB,MMP-9的阳性表达.结果:大黄素可抑制体外人胰腺癌SW1990细胞迁移和侵袭,呈浓度依赖性;大黄素可下调人胰腺癌SW1990细胞中NF-kB和MMP-9的表达水平;与对照组相比较,大黄素低、高剂量均可明显抑制瘤荷裸鼠中胰腺癌转移,并下调CD34,NF-kB和MMP-9在胰腺肿瘤组织中的阳性表达(P＜0.05).结论:大黄素可抑制体内外胰腺癌转移,该作用可能通过下调NF-kB和MMP-9表达而实现.     

大黄素通过激活线粒体caspase-8通路诱导L02细胞凋亡

目的:探讨大黄素对人正常肝细胞L02的毒性作用以及潜在的毒性作用机制。方法:通过Am-Blue法检测大黄素对L02细胞的毒性;使用DCFH-DA和JC-1探针检测细胞内活性氧水平与线粒体膜电位;使用Annexin V/PI双染色试剂,使用流式细胞仪检测凋亡细胞;凋亡相关蛋白caspase-8、caspase-9、caspase-3分别通过Ac-IETD-AFC,Ac-LEHD-AFC,Ac-DEVE-AFC荧光底物检测。结果:大黄素(20、40μmol/L)对L02细胞具有明显的细胞毒性,并且具有剂量依赖性;大黄素(20、40μmol/L)能显著升高细胞内ROS水平,使细胞线粒体膜电位降低。结论:大黄素通过激活线体caspase-8通路诱导L02细胞凋亡。