镇肝熄风汤对自发性高血压大鼠MAPK影响的研究

目的:研究不同剂量的镇肝熄风汤对自发性高血压大鼠(SHR)血压影响,以及对心血管MAPK/ERK通路中的丝裂原激活蛋白激酶(MAPK,Mitogen-activated protein kinase)蛋白和MAPK mRNA表达的影响。方法:24周龄自发性高血压大鼠(SHR),雄性,50只,模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、复方罗布麻组,每组10只,同源雄性WKY大鼠10只作为对照组,灌胃给药5周后,测量大鼠尾部血压,Western Blot方法测定心血管MAPK p38蛋白表达,用Real-Time RT-PCR(Real-Time Quantitative RT-PCR)方法测定大鼠MAPK mRNA基因表达。结果:镇肝熄风汤中药中剂量、高剂量组和复方罗布麻组与模型组比较,血压明显下降(P0.01);镇肝熄风汤中药中剂量、高剂量组与对照组比较,MAPK p38蛋白表达无明显变化(P0.05);镇肝熄风汤高剂量组与对照组比较,MAPK mRNA表达无明显变化(P0.05)。结论:镇肝熄风汤有明显降压的作用,镇肝熄风汤中剂量组、高剂量组中的MAPK 38p蛋白表达和MAPK mRNA表达明显升高,促进血管内皮细胞的活性。     

镇肝熄风汤对自发性高血压大鼠PPARγ2 mRNA和蛋白表达的影响

目的:研究不同剂量的镇肝熄风汤对自发性高血压大鼠(SHR)脂肪组织PPARγ2蛋白和PPARγ2mRNA表达的影响。方法:24周龄自发性高血压大鼠(SHR),雄性,50只,模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、复方罗布麻组,每组10只,同源雄性WKY大鼠10只作为对照组,灌胃给药5周后,Western Blot方法测定脂肪组织PPARγ2蛋白表达,用Real-Time RT-PCR(Real-Time Quantitative RT-PCR)方法测定大鼠PPARγ2 mRNA基因表达。结果:各组与模型组比较,PPARγ2蛋白表达明显降低(P<0.01);各组与模型组比较,PPARγ2 mRNA表达明显降低(P<0.05);结论:镇肝熄风汤能减少脂肪组织PPARγ2蛋白表达和PPARγ2mRNA表达,从而减少成脂和保护心肌细胞功能。     

镇肝熄风汤对自发性高血压大鼠JAK2mRNA和蛋白表达的影响

目的:研究不同剂量的镇肝熄风汤对自发性高血压大鼠(SHR)腹主动脉血管组织JAK2蛋白和JAK2 mRNA表达的影响。方法:方法:将24周龄60只SHR大鼠随机分为:模型组、镇肝熄风汤中药低剂量组、中剂量组、高剂量组和复方罗布麻组,每组12只,正常对照组为:雄性12只,同源魏-凯二氏大鼠(WKY)。连续灌胃给药45天后,Western Blot测定腹主动脉血管组织中JAK2蛋白表达,实时聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定大鼠JAK2 mRNA基因表达。结果:与模型组比较,镇肝熄风汤中药中剂量和高剂量组JAK2蛋白表达和JAK2 mRNA表达明显降低(F=74. 745,sig=0. 000,P 0. 05)。结论:镇肝熄风汤可以抑制腹主动脉血管组织中JAK2蛋白和JAK2 mRNA表达,减少血管细胞增生,起到降血压的作用。     

镇肝熄风汤对SHR大鼠AngⅡ 2型受体蛋白和mRNA表达的影响

目的:研究不同剂量镇肝熄风汤对自发性高血压大鼠(SHR)腹主动脉血管组织中AT2R蛋白、AT2R mRNA表达的影响。方法:将24周龄60只SHR大鼠随机分为:模型组、镇肝熄风汤中药低剂量组、中剂量组、高剂量组和复方罗布麻组,每组12只,正常对照组为:雄性12只,同源魏-凯二氏大鼠(WKY)。连续灌胃给药45天后,用Western Blot方法检测腹主动脉血管组织中AT2R蛋白表达,实时逆转录聚合酶链反应方法(RT-PCR)检测大鼠腹主动脉血管组织中AT2R mRNA基因表达。结果:镇肝熄风汤中药中剂量和高剂量组与模型组比较,腹主动脉血管组织中AT2R蛋白表达、AT2R mRNA表达明显升高(F=46.329,sig=0.000,P0.01)。结论:镇肝熄风汤可以促进腹主动脉血管组织中AT2R蛋白和AT2R mRNA表达,起到扩张血管降血压的作用。     

镇肝熄风汤对自发性高血压大鼠c-Src mRNA和蛋白表达的影响

目的:研究不同剂量的镇肝熄风汤对自发性高血压大鼠(Spontaneously Hypertensive Rats,SHR)腹主动脉血管组织c-Src蛋白和c-Src mRNA表达的影响。方法:将60只24周龄SHR大鼠随机分为模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、复方罗布麻组,每组12只,同源雄性魏-凯二氏大鼠(WKY) 12只作为正常对照组。灌胃给药45 d后,Western Blot测定腹主动脉血管组织中c-Src蛋白表达,实时聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定大鼠c-Src mRNA基因表达。结果:与模型组比较,正常组、镇肝熄风汤中药高剂量组和复方罗布麻组c-Src蛋白表达和c-Src mRNA表达明显降低(F=90. 637,sig=0. 000,P 0. 01)。结论:镇肝熄风汤可以抑制腹主动脉血管组织中c-Src蛋白和c-Src mRNA表达,可能通过减少对血管氧化损伤和血管细胞增殖的作用,来降低血管重构,从而起到降低血压的作用。     

镇肝熄风汤对自发性高血压大鼠胆囊收缩素mRNA及蛋白表达的影响

目的:探讨镇肝熄风汤对自发性高血压大鼠(SHR)胆囊收缩素(CCK) mRNA及其蛋白的影响。方法:14周龄雄性SHR 75只随机分为模型组、贝那普利0. 0009g/kg组、镇肝熄风汤15、30、60 g/kg组,以Wistar Kyoto大鼠(WKY)作为正常对照,模型组及正常对照组每日灌服同体积的蒸馏水,干预8周后,应用酶联免疫法检测血清中CCK的含量;采用RT-PCR法检测十二指肠中CCK mRNA表达;采用Western blot法检测十二指肠和脑中CCK蛋白表达。结果:干预8周后,与正常对照组比较,模型组十二指肠中CCK mRNA和蛋白表达、脑中CCK蛋白表达均显著降低,但血清CCK无变化;与模型组比较,贝那普利组、镇肝熄风汤15g/kg组十二指肠中CCK mRNA和蛋白表达显著升高,30g/kg组蛋白亦显著增高;各给药组脑中CCK蛋白表达显著升高;与贝那普利组比较,镇肝熄风汤15g/kg组十二指肠CCK mRNA及镇肝熄风汤60g/kg组蛋白表达显著升高,镇肝熄风汤30g/kg组脑中CCK蛋白表达显著升高。结论:SHR十二指肠和脑组织中CCK调节失衡,贝那普利和镇肝熄风汤的降压作用可能通过调节CCK的表达而达到降压目的,而镇肝熄风汤的调节作用更为明显。     

镇肝熄风汤对自发性高血压大鼠视网膜细胞保护作用机制的研究

目的:探索镇肝熄风汤对自发性高血压大鼠视网膜细胞的保护作用机制。方法:将48只SHR随机分为4组:模型组(B)、贝那普利对照组(C)、镇肝熄风汤低剂量观察组(D)、镇肝熄风汤高剂量观察组(E);每组各12只。正常空白组WKY(A)12只。镇肝熄风汤低剂量组灌服镇肝熄风汤15g·kg~(-1)·d~(-1)(药物浓度1.5g/m L);镇肝熄风汤高剂量组灌服镇肝熄风汤30g·kg~(-1)·d~(-1)(药物浓度3.0g/m L);贝那普利组灌服贝那普利0.90mg·kg~(-1)·d~(-1)。模型组(B)及WKY组每日灌服同体积的蒸馏水。共8周。检测干预前后大鼠血压,免疫组织化学法检测Bcl-2、Bax的表达。结果:干预前与空白组(WKY大鼠)比较,其他各组(SHR大鼠)收缩压、舒张压和平均血压明显高于同周龄的WKY大鼠(P0.05);各组大鼠干预8周后再次进行血压测定,与模型组比较,各治疗组收缩压、舒张压和平均血压显著降低(P0.05);镇肝熄风汤减轻了SHR的Bax表达(P0.01),增加了Bcl-2的表达,其中中药高剂量组达到WKY水平(P0.05)。结论:镇肝熄风汤不仅有明显的降压作用,而且在高血压病程中可抑制视网膜毛细血管的细胞凋亡。     

镇肝熄风汤对自发性高血压大鼠主动脉弓血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的:研究不同剂量镇肝熄风汤对自发性高血压大鼠(SHR)主动脉弓血管平滑肌细胞凋亡的影响。方法:20周龄自发性高血压大鼠(SHR),雄性,12只,模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、复方罗布麻组,每组12只,同源雄性京都威斯特大(WKY)12只作为对照组。灌胃给药45 d后,采用TUNEL标本制备,检测法测定大鼠主动脉弓血管平滑肌细胞凋亡。结果:模型组中出现大量血管平滑肌细胞凋亡,中药中剂量组、中药高剂量组、复方罗布麻组血管平滑肌细胞凋亡明显减少(P0.01)。结论:镇肝熄风汤可以有效减少高血压对血管平滑肌细胞凋亡的影响,有效的抑制血管平滑肌细胞凋亡,起到良好的降低血压和保护血管平滑肌细胞的作用,减轻主动脉弓血管重构。     

镇肝熄风汤对自发性高血压大鼠血管重塑的影响

目的观察镇肝熄风汤对自发性高血压大鼠(SHR)血管组织形态学改变及血管平滑肌细胞增殖核抗原(PCNA)的表达,探讨镇肝熄风汤对血管重塑的影响。方法将24只14周龄的雄性SHR随机分为SHR组、镇肝熄风汤组、依那普利组,每组各8只,同时以同源雄性京都威斯特大鼠(WKY)8只作为对照组,镇肝熄风汤组灌服镇肝熄风汤15g/(kg.d),依那普利组灌服依那普利0.01g/(kg.d),SHR组及WKY组每日灌服等容积的0.9%氯化钠注射液,每日灌胃2次。灌胃给药8周后,采用苏木色精-伊红(HE)染色法观察胸主动脉病理改变,免疫组化法检测主动脉血管平滑肌细胞PCNA的表达。结果与WKY组相比,SHR组胸主动脉中膜增厚,PCNA表达增强,镇肝熄风汤组和依那普利组可有效抑制PCNA表达增强,改善动脉中膜厚度。结论镇肝熄风汤可能通过抑制血管平滑肌细胞增殖,改善血管重塑。     

镇肝熄风汤对帕金森病肝阳上亢证大鼠脑组织氧化应激的影响

目的探讨镇肝熄风汤抑制帕金森病肝阳上亢证大鼠脑组织氧化应激的可能机制。方法 105只雄性Wistar大鼠随机分为空白对照组、假手术组、模型组、镇肝熄风汤高、中、低剂量组[32,16,8 g/(kg·d)]及司来吉兰[0.9 mg/(kg·d)]组,每组15只。以附子汤灌胃联合6-羟基多巴胺单侧损毁黑质制备帕金森病肝阳上亢模型。镇肝熄风汤组大鼠按体重剂量灌胃,每日1次,共4周。分光光度法检测大鼠中脑组织MDA含量,Western blot检测海马Nrf2和HO-1蛋白表达。结果与假手术组大鼠比较,模型组大鼠中脑组织MDA含量明显升高,HO-1蛋白表达代偿性上调。与模型组比较,镇肝熄风汤显著降低了PD肝阳上亢证大鼠中脑组织MDA含量,上调Nrf2和HO-1蛋白表达。结论镇肝熄风汤对帕金森病肝阳上亢证大鼠中脑组织氧化损伤具有保护作用,其机制可能与镇肝熄风汤活化脑组织Nrf2抗氧化防御体系有关。     

补骨脂乙素诱导HepG2细胞凋亡及对Bcl-2家族表达的影响

目的:观察补骨脂乙素对人肝癌细胞HepG2凋亡及其相关蛋白的影响。方法:用不同浓度补骨脂乙素(3、4、5、6和7mg/ml)处理HepG2细胞24h后,MTT法检测药物对细胞增殖的影响,并用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western印迹法检测凋亡相关蛋白的表达。结果:补骨脂乙素4mg/ml即能抑制HepG2细胞的增殖并诱导其凋亡,7mg/ml时凋亡率可达94.57%,在浓度4～7 mg/ml之间有良好的量效关系。补骨脂乙素浓度为7mg/ml时促凋亡蛋白Bax、Bid表达明显增加、抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少。结论:补骨脂乙素4mg/ml能诱导HepG2细胞凋亡,可能与其影响Bcl-2家族蛋白的表达有关。     

RNA干扰bcl-2基因质粒载体的构建

目的:构建bcl-2基因的RNA干扰(RNAi)表达载体。方法:根据人bcl-2的基因序列设计短双链3条,人工合成后,连接到带增强型绿色荧光蛋白基因的pGenesil-1载体中,构成3个靶向bcl-2的重组质粒,经酶切、DNA序列测定鉴定,转人HepG-2细胞,观察绿色荧光蛋白表达情况,以确定靶向bcl-2重组质粒进行下一步研究。结果:成功构建了3个靶向bcl-2的shRNA表达载体,为下一步研究奠定基础。结论:靶向shRNA表达载体较其它形式的干扰RNA具更强烈的抑制同源基因表达的作用。     

Induction of apoptosis in HepG2 cells by solanine and Bcl-2 protein

The nightshade (Solanum nigrum Linn.) has been widely used in Chinese traditional medicine as a remedy for the treatment of digestive system cancer. The anti-tumor activity of solanine, a steroid alkaloid isolated from the nightshade has been demonstrated. To observe the effect of anti-tumor and mechanism of solanine. The MTT assay was used to evaluate the IC(50) on the three digestive system tumor cell lines. The effect on the morphology was observed with a laser confocal microscopy; the rate of apoptosis and the cell cycle were measured using flow cytometry (FCM); the expression of Bcl-2 protein was measured by Western blot. The results show that the IC(50) for HepG(2), SGC-7901, and LS-174 were 14.47, >50, and >50 microg/ml, respectively; the morphology of cells in the negative control was normal; for the treated groups, typical signs for apoptosis were found. The rate of apoptosis in HepG(2) cells induced by solanine was found to be 6.0, 14.4, 17.3, 18.9, and 32.2%, respectively. Observation of the cell cycle showed that cells in the G(2)/M phases disappeared while the number of cells in the S phase increased significantly for treated groups. Western blot showed that solanine decreased the expression of Bcl-2 protein. Therefore, the target of solanine in inducing apoptosis in HepG(2) cells seems to be mediated by the inhibition in the expression of Bcl-2 protein.     

PTEN和Bcl-2基因在骨肉瘤组织中的表达及意义

目的:探讨PTEN,Bcl-2基因在骨肉瘤组织中表达的意义和和临床价值.方法:用SP免疫组化方法检测PTEN和Bcl-2在62例骨肉瘤及20例骨软骨瘤表达情况结果PTEN的阳性表达率在骨肉瘤中为58.1%(36/62),在骨软骨瘤中为85%(17/20),两者差异显著(P＜0.05);Bcl-2的阳性表达率在骨肉瘤中为51.6%(32/62),在骨软骨瘤中为20%(4/20),两者差异显著(P＜0.05).PTEN的低表达与分化程度无关与肺转移有关,Bcl-2的高表达与分化程度有关.术后生存5年以上者的PTEN蛋白阳性率(66.7%)较生存时间不超过5年者(28.1%)高(P＜0.05).骨肉瘤组织中Bcl-2与PTEN基因的表达未见显著性相关(P＞0.05).结论:骨肉瘤中存在PTEN呈低表达而Bcl-2高表达,PTEN低表达和Bcl-2高表达于骨肉瘤侵袭、转移有关.     

宫颈癌中PTEN和Bcl-2的表达及意义

目的探讨Bcl-2和PTEN在宫颈癌组织、宫颈上皮内瘤样病变(CIN)和正常宫颈组织中表达情况及意义。方法采用组织芯片技术和免疫组织化学S-P法检测50例宫颈癌、31例CIN和20例正常宫颈组织中PTEN和Bcl-2的表达情况。结果 Bcl-2和PTEN表达定位于细胞浆和细胞核,其在宫颈癌中阳性表达率分别为82%(41/50)和32%(16/50),在CIN中的表达率分别为77%(24/31)和52%(16/31),在正常宫颈组织中表达率分别为0(0/20)和80%(16/20);两者在宫颈癌的表达情况均与淋巴结转移、临床分期及组织学分化程度相关(P均<0.05);在宫颈癌组织中Bcl-2和PTEN表达呈负相关(P<0.05)。结论随着癌前病变的进展及宫颈癌临床分期升高、病理组织学分化程度降低和淋巴结转移,PTEN和Bcl-2表达增强,说明两者与宫颈癌的发生、发展和转移密切相关。     

龙葵碱对HepG2细胞内caspase-3及Bcl-2蛋白含量的影响

目的：观察龙葵碱对HepG2细胞内caspase-3及Bcl-2蛋白含量的影响，阐明龙葵碱诱导肿瘤细胞凋亡的作用机制、方法：采用激光共聚焦扫描显微术和Western blot法检测caspase-3和Bcl-蛋白含量，并对二者在细胞内的位置进行定位．结果：龙葵碱能够显著升高HepG2细胞内caspase-3蛋白含量，降低Bcl-2的含量，并且均具有剂量依赖性，Bcl-2蛋白和caspase-3蛋白均在细胞浆内呈不均匀分布，在细胞核中无分布，龙葵碱对二者的分布没有影响.结论：龙葵碱通过抑制Bcl-2的活性，激活easpase-3蛋白，诱导细胞凋亡的发生.     

PCNA和Bcl-2在骨肉瘤组织中的表达及临床意义

目的:分析PCNA和Bcl-2在骨肉瘤组织中的表达及临床意义。方法:选取64例骨肉瘤标本为实验对象,20例正常骨组织标本作为阴性对照。用S-P免疫组织化学染色检测PCNA和Bcl-2蛋白的表达,并对相关的临床病理参数进行统计分析。结果:PCNA阳性率65.6%(42/64),Bcl-2蛋白阳性表达率为78.1%(50/64)。20例阴性对照标本中未观察到PCNA的阳性表达;Bcl-2阳性表达1例为(+)、1例为(++),阳性率为10.0%(2/20),与骨肉瘤组相比有显著性差异(P<0.05)。PCNA和Bcl-2蛋白的表达均与性别、骨肉瘤分型无关(P>0.05);与分化程度、有无肺转移和生存时间相关(P<0.05)。PCNA和Bcl-2的表达一致性占68.8%,两者表达具显著相关性(P<0.05)。结论:PCNA和Bcl-2蛋白在骨肉瘤中有较高的表达率,并且两者有明显的相关性。分化程度低的骨肉瘤患者PCNA和Bcl-2蛋白的表达强,PCNA和Bcl-2蛋白表达强者,发生肺转移的几率高,同时表达越强,预后越差。     

祛异康对子宫内膜异位症模型大鼠细胞凋亡基因Bcl-2的影响

子宫内膜异位症(endometriosis EMS)[1]是育龄女性的常见多发病, 常引起盆腔和腹部疼痛、痛经、性交痛、月经失调、不孕等, 严重影响妇女健康和生活质量.     

淫羊藿甙诱导视网膜母细胞瘤细胞凋亡及对Bcl-2的影响

目的:研究淫羊藿甙(ICA)抑制视网膜母细胞瘤细胞生长并诱导其凋亡的作用及信号转导机制。方法:应用~3H-胸腺嘧啶掺入分析法观察 ICA 对细胞生长的抑制作用,用流式细胞仪分析 ICA 对 Y79细胞周期的影响,以 DNA 片段凝胶电泳分析细胞凋亡,用 Western blot 分析 BC1-2的磷酸化。结果:ICA 可明显抑制 Y79细胞的生长,200μg/ml ICA 处理36h时,~3H-胸腺嘧啶掺入率下降达38%,此条件下,Y79细胞被阻滞于 G_0/G_1期,并出现 Sub-G_1峰;ICA 可诱导 Y79细胞凋亡。在此过程中,BC1-2被激活,磷酸化、结论:ICA 可抑制 Y79细胞生长并诱导其凋亡,其过程是由磷酸化的 Bcl-2介导。