丹参酮ⅡA对人胃癌MKN-45细胞整合素β1、基质金属蛋白酶-7表达影响

目的：通过观察丹参酮ⅡA对胃癌MKN-45细胞的增殖抑制及对整合素β1、基质金属蛋白酶-7（MMP-7）表达的影响,探讨其抗肿瘤机制。方法：MTT法检测不同浓度的丹参酮IIA对体外培养的人胃癌MKN-45细胞增殖的影响 RT-PCR法测丹参酮IIA作用后人胃癌MKN-45细胞整合素β1、MMP-7的表达。结果：与阴性对照组相比,丹参酮ⅡA各浓度组（4μg/mL、8μg/mL、16μg/mL、32μg/mL、64μg/mL）对肿瘤细胞增殖的抑制率有显著差异（P〈0.05）,其24h、48h、72h半数抑制浓度分别为42.5μg/mL、19.4μg/mL和7.4μg/mL。PCR半定量分析表明丹参酮ⅡA作用后整合素β1和MMP-7mRNA的表达受到抑制,抑制程度随着药物浓度的增加而增加。结论：丹参酮ⅡA能有效抑制人胃癌MKN-45细胞的生长,并具有明显的时间和剂量依赖性。丹参酮ⅡA可能通过降低人胃癌MKN-45细胞整合素β1和MMP-7mRNA的表达,而抑制肿瘤细胞增殖。     

血管紧张素Ⅱ通过ROS-EGFR-JNK-AP-1信号通路诱导肾小球系膜细胞增殖

目的 探讨血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）是否通过活性氧-表皮生长因子受体-c-Jun氨基末端激酶-活化蛋白1（ROS-EGFR-JNK-AP-1）信号通路诱导肾小球系膜细胞增殖。 方法 体外培养人肾小球系膜细胞，用AngⅡ（100 nmol/L）、葡萄糖氧化酶（GO）（1 U/L）、血管紧张素受体拮抗剂洛沙坦（10 μmol/L）、乙酰半胱氨酸（NAC，10 μmol/L）、NADPH氧化酶抑制剂apocynin（10 μmol/L）、硫酸二亚苯基碘（DPI，10 μmol/L）、EGFR阻断剂AG1478（10 μmol/L）处理细胞。以未处理细胞为阴性对照。应用3H-胸腺嘧啶（3H-TdR）掺入法和细胞计数测定系膜细胞增殖；荧光探针2,7-二氯二氢荧光素乙酰乙酸（DCFDA）检测细胞内ROS 的产生；Western 印迹检测EGFR 和JNK 活化。 结果 AngⅡ（100 nmol/L） 可显著促进肾小球系膜细胞ROS 产生，AngⅡ 刺激60 min，系膜细胞产生ROS是对照组2.26 倍。AngⅡ可呈时间和剂量依赖性诱导系膜细胞EGFR 磷酸化，AngⅡ刺激5 min，EGFR 活化明显增加，至30 min 达到高峰，随AngⅡ刺激剂量增加，EGFR活化亦显著增强，AngⅡ（100 nmol/L） 刺激30 min，EGFR 磷酸化是对照组的3.96 倍。洛沙坦、NAC以及apocynin和 DPI 显著抑制AngⅡ诱导的EGFR 磷酸化，同时AG1478 几乎完全阻断AngⅡ诱导的系膜细胞增殖；洛沙坦、NAC、apocynin、DPI 和AG1478 显著抑制AngⅡ诱导的JNK 活化。 结论 ROS-EGFR-JNK-AP-1信号通路参与AngⅡ诱导的肾小球系膜细胞增殖。NADPH 氧化酶抑制剂和EGFR 受体拮抗剂能显著抑制AngⅡ诱导的系膜细胞增殖，可能是一种新的治疗途径。     

TRPC1通道参与调节肾小球系膜细胞的收缩

目的探讨离体和在体情况下TRPC1通道是否参与肾小球系膜细胞的收缩。方法通过计算细胞表面积来观察肾小球系膜细胞的收缩情况。分别利用荧光标记的菊粉和对氨基马尿酸（PAH）的血浆清除率计算大鼠肾小球滤过率（GFR）和肾血浆流量。结果在肾小球系膜细胞的培养液中加入血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）10min后，细胞表面积减少（37．2％±4．0％），系膜细胞的收缩反应可因TRPC1基因敲除而受到显著抑制（20．1％±3．0％）。给大鼠注射AngⅡ（1．7ng·min^-1·100g^-1BW）可引起GFR下降，注射TRPC1抗体（300μg／L）显著抑制AngⅡ引起GFR下降（P〈0．05）。但与TRPC1抗体相同浓度的免疫球蛋白，不能抑制AngⅡ引起的GFR下降。另外，TRPC1抗体不影响AngⅡ引起的血压改变和肾血流量的下降。结论本实验表明TRPC1通道在调节肾小球系膜细胞收缩功能方面发挥了重要的作用。     

丹参酮ⅡA抑制人胆管癌细胞的生长及诱导其凋亡的实验研究

目的体外实验研究丹参酮ⅡA对人肝内胆管癌细胞株HCCC-9810的生长抑制及诱导凋亡作用。方法分别采用（0～10μg／ml）的丹参酮ⅡA作用人肝内胆管癌细胞72h后,通过MTT比色法观察其细胞毒性,荧光显微镜、投射电镜检测细胞凋亡;流式细胞术（FCM）定量检测5μg／ml丹参酮ⅡA作用不同时间后的细胞凋亡率。结果丹参酮ⅡA以剂量依赖的方式抑制胆管癌细胞的生长。1～10μg／ml丹参酮ⅡA作用72h后,胆管癌细胞出现细胞皱缩、核染色质浓缩、核碎裂以及凋亡小体出现等特征性的形态学改变。5μg／ml浓度作用12、24、36、48、72h后的细胞凋亡率分别为（2．31±0．15）％、（3．02±0．36）％、（3．86±0．44）％,（6．75±0．60）％和（20．62±1．76）％与对照组（1．08±0．14）％比较均具有显著差异。结论在体外丹参酮ⅡA能够诱导人肝内胆管癌细胞株HCCC-9810凋亡,这可能是丹参酮ⅡA抑制其生长的机制。     

转化生长因子β1对肾小管上皮细胞中结缔组织生长因子基因启动子活性的影响

目的探讨转化生长因子[β1（TCF-β1）对人近端肾小管上皮细胞系HK-2中结缔组织生长因子（CTGF）基因启动子活性的调控作用，以及丝裂原激活蛋白激酶（MAPK）途径对该生长因子作用的影响。方法构建含有人类CTGF基因启动子的报告基因pCTGF-luc，将其瞬时转染HK-2细胞。通过检测荧光素酶的活性观察TGF-β1和MAPK途径抑制剂对CTGF基因启动子活性的影响。结果TGF-β1以剂量和时间依赖方式上调HK-2中CTGF基因启动子的活性。最佳刺激浓度是5ng／ml，最佳刺激时间为12h，荧光素酶相对活性分别为对照组的1．82倍和2．10倍（P〈0．05）。应用PD98059、SB203580和SP600125分别特异性抑制MAPK途径的胞外信号调节蛋白激酶（ERK）、蛋白激酶p38（p38MAPK）和c-Jun-氨基末端激酶（JNK）通路，对TGF-β1上调CTGF启动子活性的作用有不同影响。PD98059显著增加HK-2中pCTGF-luc的基础活性．并在一定浓度范围内（0．5～10μmol／L）促进TGF-β1的上调作用。SB203580对pCTGF-luc基础活性无影响，但以剂量依赖方式显著抑制TGF-β1的激活效应。而SP600125对基础状态和TGF-β1刺激下CTGF基因启动子活性无影响。结论TGF-β1以剂量和时间依赖方式上调HK-2中CTGF基因启动子活性，在转录水平调节CTGF表达。MAPK途径的ERK和p38MAPK通路可影响TGF-β1的这一调控作用。     

丹参注射液对血管紧张素Ⅱ诱导系膜细胞PAI-1表达和ROS含量的影响

目的观察丹参注射液对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导系膜细胞纤溶酶原激活物抑制物1（PM-1）表达和活性氧（ROS）含量的影响,探讨丹参注射液抗肾小球硬化的机制。方法将培养的大鼠系膜细胞分为未干预组（N组）、AngⅡ-Ⅲ激组（A组,AnglI浓度为100nmol／L）、AngⅡ＋丹参干预组（按照丹参注射液浓度分为S1、S2和S3组,丹参注射液浓度分别为37．5g／L、75g／L和150g／L）以及单独丹参干预组（S组,丹参注射液浓度为150g／L）。S1、S2和岛组加入丹参注射液作用1h后,再加入AngⅡ（浓度为100nmol／L）共孵育24h。观察各组系膜细胞PAI-1mRNA和蛋白表达以及细胞ROS含量的变化。结果与N组相比,A组PAI-1mRNA和蛋白表达升高（P〈0．01）,S组PAI-1 mRNA和蛋白表达无差异（P〉0．05）;与A组相比,S1、S2、S3组PAI-1mRNA和蛋白表达降低（P〈0．01）。与N组相比,A组细胞R0s含量升高（P〈0．01）,S组细胞ROS含量无差异（P〉0．05）;与A组相比,S1组细胞ROS含量无差异（P〉0．05）,S2、s3组细胞ROS含量降低（P〈0．01）。结论AngⅡ通过刺激系膜细胞产生致肾纤维化因子,丹参注射液能抑制这些因子的产生。     

PPARα激动剂非诺贝特在高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖中的作用

目的研究过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPARα）激动剂非诺贝特在高糖诱导的肾小球系膜细胞中的作用,探讨其对糖尿病肾脏疾病的可能保护作用。方法将。肾小球系膜细胞分为6组：正常对照组（5mmol／L葡萄糖）、高糖组（40mmol／L葡萄糖）和高糖＋不同浓度PPARα激动剂组（FN,40mmol／L葡萄糖加1、10、50、100μmol／L非诺贝特）。应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Westernblot检测各组肾小球系膜细胞PPARα的表达;通过转染含PPAR反应元件的p4XPPRE-luc重组质粒,双荧光素酶分析法检测体外不同组细胞PPARα活性的改变;MTT法检测细胞增殖;Westernblot检测α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和Ⅳ型胶原蛋白的表达情况。结果高糖刺激组系膜细胞PPARα mRNA及蛋白表达均上调;非诺贝特组上述表达水平则显著升高,且呈浓度依耐性;正常。肾小球系膜细胞弱表达PPARα受体,高糖组PPARα活性无显著升高,而合适浓度的非诺贝特干预后PPARα受体活性明显增加;高糖组Q-SMA及Ⅳ型胶原蛋白表达明显上调,非诺贝特干预后上述指标明显下调。结论非诺贝特可通过抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质蛋白的表达而对糖尿病肾脏疾病起保护作用     

斯伐他汀对佛波酯诱导的人肾小球系膜细胞A型清道夫受体表达的作用

目的观察斯伐他汀（Simv）对佛波酯（PMA）诱导的人肾小球系膜细胞（HMC）A型清道夫受体（SR．A）表达的作用。方法激光共聚焦显微镜检测HMC对荧光Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白（Ac-LDL）的摄取。RT-PCR法检测HMC SR-A mRNA表达。瞬时转染带有SR-A启动子片段的荧光素报告质粒，观察斯伐他汀对HMC SR-A启动子活性的影响。结果（1）斯伐他汀（10μmol／L）明显抑制PMA（16．2nmol／L）诱导的HMC对Dil-ac-LDL的摄取，100μmol／L甲羟戊酸（Mev）基本阻断斯伐他汀的抑制作用。（2）斯伐他汀作用48h，剂量依赖性（1—10μmol／L）抑制PMA诱导的HMC SR-A mRNA表达。10μmol／L组HMC SR-A mRNA表达量为对照组的54．7％；Mev可部分逆转斯伐他汀对SR-A mRNA的作用。（3）斯伐他汀抑制PMA诱导的HMC SR-A启动子活性，处理组与对照组荧光素酶活性相比，差异具有统计学意义（P〈0．01）；斯伐他汀加甲羟戊酸组荧光酶活性与对照组相比，无显著性差异。（4）斯伐他汀直接抑制转染SR-A cDNA的人肾小球系膜细胞系SR-A mRNA表达。结论（1）斯伐他汀抑制HMC SR-A基因表达和活性可能为其延缓慢性肾小球疾病进展的机制之一；（2）斯伐他汀通过抑制甲羟戊酸代谢途径而抑制HMC SR-A的表达。     

HB-EGF对系膜细胞增殖及转化生长因子-β1表达的影响

目的：观察肝素结合性表皮生长因子样生长因子（HB-EGF）对肾小球系膜细胞（GMC）增殖及转化生长因子-β1（TGF-β1）表达的作用。方法：以原代培养大鼠肾小球系膜细胞为细胞模型,采用MTT、ELISA、RT-PCR等方法观察外源性HB-EGF对系膜细胞增殖及TGF-β1表达的影响。结果：（1）不同浓度HB-EGF对系膜细胞增殖有不同影响,10ng/ml时无刺激GMC增殖作用（P〉0.05）,100、1000ng/ml均能刺激GMC增殖（P〈0.01）,100ng/ml作用最明显。（2）HB-EGF（10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml）能刺激系膜细胞TGF-β1的表达（P〈0.01）,100ng/ml时作用最强。（3）100ng/mlHB-EGF刺激GMC24h、36h、48h,系膜细胞TGF-β1的表达均增加,随作用时间而变化,刺激36h和48h比24h作用更明显（P〈0.05）。结论：一定浓度范围内HB-EGF刺激GMC增殖,促进系膜细胞TGF-β1的表达,且具有一定的时间及浓度依赖性。     

百令胶囊对大鼠肾小球系膜细胞增殖、Ⅳ型胶原及TGF-β1 mRNA表达的影响

目的：观察百令胶囊对高糖刺激后系膜细胞增殖、Ⅳ型胶原（typeⅣCollagen,ⅣC）、转化生长因子-β1（TGF-β1）mRNA表达的影响。方法：培养正常SD大鼠系膜细胞,高浓度葡萄糖刺激系膜细胞,加入百令胶囊、苯那普利含药血清后,用四甲基偶氮唑盐（MTT）光吸收法观察肾小球系膜细胞增殖;酶联免疫吸附法（ELISA）测量培养细胞上清液中ⅣC的含量;实时荧光逆转录聚合酶链反应（real-time RT-PCR）测定TGF-β1mRNA的表达。结果：百令胶囊、苯那普利含药血清在24 h可抑制高糖对大鼠肾小球系膜细胞的促增殖作用,72 h最为明显（P〈0.01）;高糖刺激后ⅣC、TGF-β1mRNA在肾小球系膜细胞内表达增多（P〈0.01）,百令胶囊、苯那普利含药血清能明显抑制肾小球系膜细胞增殖（P〈0.01）、ⅣC分泌及TGF-β1mRNA的高表达（P〈0.05）。百令胶囊与苯那普利组之间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：百令胶囊可降低高糖致系膜细胞增殖,抑制高糖所致ⅣC分泌,抑制高糖引起的TGF-β1mRNA过度表达,这可能是其防治糖尿病肾病的作用机制。     

转化生长因子β1对大鼠原代肾小球系膜细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的：探讨原代培养的大鼠肾小球系膜细胞血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的表达及转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）对其表达的影响。方法：采用RT-PCR和Westernblot方法检测大鼠原代培养的肾小球系膜细胞VEGF表达及不同浓度、不同时间的TGF-β1刺激对VEGF表达的作用。结果：原代培养的大鼠肾小球系膜细胞表达VEGF164、120mRNA，TGF-β1呈时间依赖性增加其表达，在12h表达最高，分别为刺激前3．17、2．925倍，有统计学差异（P〈0．001）。在剂量反应曲线上，2ng／ml TGF-β1刺激作用最强，VEGF164、120mRNA表达分别为未刺激组的2．82、2．45倍，有统计学差异（P〈0．001）。与VEGF mRNA表达一致，大鼠原代肾小球系膜细胞仅见VEGF164蛋白表达，2ng／ml TGF-β1呈时间依赖性的增加VEGF 164蛋白表达，24h达高峰，为刺激前的2．37倍。结论：促进肾小球系膜细胞VEGF表达可能是TGF-β1介导肾脏损害发生、发展的机制之一。     

丹参酮ⅡA与隐丹参酮混合物基于TGF-β1抑制人皮肤成纤维细胞的研究

目的：研究丹参酮ⅡA与隐丹参酮混合物对转化生长因子-β₁(Transforming growth factor-β₁,TGF-β₁)诱导人皮肤成纤维细胞(Humanskinfibroblasts,HSF)抑制瘢痕形成的影响及分子机制。方法：配制丹参酮ⅡA与隐丹参酮混合物(丹参酮ⅡA与隐丹参酮标准品按照1∶1的比例配置)溶液，采用TGF-β₁诱导HSF细胞增殖构建增生性瘢痕体外细胞模型；采用MTT法测定丹参酮ⅡA与隐丹参酮对HSF细胞增殖的影响；采用WesternBlot法检测HSF细胞中TGF-β₁/Smad信号通路下游信号分子p-Smad2、Smad3蛋白以及Survivin蛋白表达水平变化。结果：丹参酮ⅡA与隐丹参酮能剂量依赖地抑制HSF细胞的增殖，降低p-Smad2、Smad3蛋白和Survivin蛋白表达水平。结论：丹参酮ⅡA与隐丹参酮混合物可能通过下调p-Smad2、3和Survivin蛋白的水平，抑制HSF细胞的增殖，发挥抑制瘢痕的作用。     

雷帕霉素对肾小球系膜细胞增殖及凋亡的影响

目的 观察不同浓度雷帕霉素对大鼠肾小球系膜细胞增殖及凋亡的影响,探讨其可能的作用机制。 方法 使用不同浓度雷帕霉素（1 μg/L、2 μg/L、4 μg/L、8 μg/L、16 μg/L）处理大鼠肾小球系膜细胞,并设正常对照组。MTT法测不同浓度雷帕霉素干预24 h、48 h、72 h后对细胞增殖的影响,并描记生长曲线。干预72 h后,采用RT-PCR和Western印迹法分别检测各浓度雷帕霉素组细胞周期负调蛋白p27和p53的mRNA和蛋白表达变化;用流式细胞计量术检测各浓度雷帕霉素组细胞周期及凋亡率。 结果 小剂量雷帕霉素（1 μg/L）对系膜细胞增殖即具有明显的抑制作用,停滞于G1期的细胞数明显增加,但对系膜细胞凋亡无明显影响。较大剂量雷帕霉素(8~16 μg/L)能够明显增加肾小球系膜细胞凋亡。雷帕霉素能够增加肾小球系膜细胞p27、p53 mRNA和蛋白表达,且呈剂量依赖性。 结论 雷帕霉素可能通过增加p27、p53表达抑制肾小球系膜细胞增殖和促进系膜细胞凋亡。     

益肾胶囊对大鼠肾小球系膜细胞增殖和凋亡及TGF-β_1 mRNA表达的影响

目的：观察益肾胶囊对大鼠肾小球系膜细胞（glomerular mesangial cell,GMC）增殖、凋亡及TGF-β1 mRNA表达的影响。方法：以体外培养肾小球系膜细胞为研究对象,应用血清药理学方法,分别采用甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）比色法、荧光倒置显微镜及RT-PCR技术检测系膜细胞增殖、凋亡及TGF-β1 mRNA表达情况。结果：与正常对照组比较,其他各组MC均有不同程度的增殖、凋亡及TGF-β1 mRNA表达上调（P〈0.05或P〈0.01）;与脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）组比较,益肾胶囊可明显抑制MC增殖及TGF-β1 mRNA表达,并诱导MC凋亡（P〈0.01）。结论：益肾胶囊抑制MC增殖并诱导其凋亡可能与下调TGF-β1 mRNA表达有关。     

抗Thy-1肾小球肾炎大鼠抗-MIF对TGF-β1表达的影响

目的观察抗Thy-1肾小球肾炎（ATG）大鼠肾组织转化生长因子β1（TGF-β1）的表达,巨噬细胞移动抑制因子（MIF）及抗-MIF抗体对TGF-β1表达的影响,探讨ATG的发病机制及治疗途径。方法大鼠经尾静脉1次性注射兔抗大鼠胸腺细胞血清（ATS）IgG诱导大鼠ATG模型。大鼠随机分3组：正常对照组、ATG组、抗-MIF组,抗-MIF组给予抗-MIF抗体（10mg／kg）静注。注射ATS后8d处死大鼠。观察血尿、蛋白尿,肾组织光镜、免疫组化,TGF-β1mRNA及蛋白质的表达;系膜细胞与同一浓度MIF培养不同时间及与不同浓度MIF培养同一时间TGF-β1的生成;抗-MIF抗体对肾小球TGF-β1生成的影响。结果ATG组大鼠8d尿红细胞及尿蛋白排泄明显高于对照组及抗-MIF组（P〈0．05,P〈0．01）,肾小球系膜增生,细胞数增多,细胞外基质聚积;TGF-β1mRNA及蛋白质表达亦显著高于对照组及抗-MIF组（P〈0．01）,其中以系膜区TGF-β1蛋白表达最强。抗-MIF组大鼠肾小球TGF-β1mRNA及蛋白质表达明显下降。MIF以剂量、时间依赖性方式促进TGF-β1生成。结论TGF-β1在ATG大鼠表达上调。MIF促进TGF-β1生成,抗-MIF治疗能减轻实验性ATG大鼠肾组织损伤,减少肾组织TGF-β1的表达,阻断MIF诱导TGF-β1生成。     

OX-LDL诱导活化的巨噬细胞对肾小球系膜细胞TGF-β与Fn基因表达的影响及水蛭素的干预作用

目的：研究氧化低密度脂蛋白（OX—LDL）诱导活化的巨噬细胞对肾小球系膜细胞转化生长因子（TGF-β）、纤连蛋白（Fn）基因表达的影响以及水蛭素的干预作用，探讨炎症状态下肾硬化发生的病理机制和水蛭素的有效作用。方法：体外培养大鼠肾小球系膜细胞，将OX—LDL诱导活化的大鼠腹腔巨噬细胞转入细胞培养小室，或采集其条件培养基与肾小球系膜细胞共培养；水蛭素干预组在分层共培养系统的培养有系膜细胞的下层培养液中加入水蛭素。浓度分别为2.5U／ml、5．0U／ml、10U/ml。逆转录-聚合酶链扩增反应（RT—PCR）检测肾小球系膜细胞TGF-β、Fn的基因表达。结果：OX—LDL刺激后，大鼠腹腔巨噬细胞上清液中IL-1浓度明显升高；无论是活化的巨噬细胞还是其奈件培养基均能上调TGF-β和Fn mRNA的表达，但以分层共培养作用最为显著；水蛭素在一定浓度下可显著下调T（再一p和Fn的基因表达。结论：（1）在分层共培养条件下，OX—LDL诱导活化的巨噬细胞与系膜细胞处于一个整体系统中，巨噬细胞不仅可通过分泌细胞因子等病理产物，而且两种细胞还可能通过相互作用增强对系膜细胞增殖和TGF-β和Fn分泌等的促进作用。（2）水蛭素可能通过抑制病理条件下硬化因子和细胞外基质的基因表达起到干预肾硬化的作用。     

AngⅡ对人肾小管上皮细胞TSP1、TGF-β1表达的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ（angiotensin-Ⅱ，AngⅡ）对人肾小管上皮细胞（HK-2）血小板反应蛋白1（TSP1）、转化生长因子β1（TGF-β1）表达的影响及其机制。方法①以AngⅡ零浓度作为空白对照，观察低、中、高浓度（终浓度分别为10^-8、10^-7、10^-6mol／L）的AngⅡ对HK-2 TSP1、TGF-β1 mRNA和蛋白表达的影响；②以0h为空白对照，观察AngⅡ（10^-7mol／L）在0、3、6、12、24h对HK-2 TSP1、TGF-β1 mRNA及蛋白表达的影响；③观察TSP1抑制剂G肽对AngⅡ刺激的HK-2总TGF-β1和活性TGF-β1表达的影响。采用Real Time PCR法检测TSP1和TGF-β1的mRNA表达；采用Western blot检测TSP1和TGF-β1的蛋白表达；采用ELISA法检测各组总TGF-β1、活性TGF-β1表达。结果与对照组比，低、中、高浓度AngⅡ均增加了HK-2细胞TSP1 mRNA表达和TGF-β1 mRNA表达，同时伴有TSP1蛋白和TGF-β1蛋白表达的增加。终浓度为10^-7mol／L的AngⅡ以时间依赖的方式促进HK-2细胞TSP1、TGF-β1 mRNA表达，同时伴TSP1和TGF-β1的蛋白表达增加，其中TSP1的表达峰值在6h，TGF-β1的表达峰值在12h。与对照组比较，10^-7mol／L的AngⅡ上调总TGF-β1、活性TGF-β1表达，10μmol／L的G肽仅下调活性TGF-β1表达，对总TGF-β1表达无影响。结论AngⅡ能促进人肾小管上皮细胞TSP1、TGF-β1表达。TSP1依赖的TGF-β1活化可能是AngⅡ诱导的肾小管上皮细胞TGF-β1活化的重要途径。     

G肽对血管紧张素Ⅱ诱导人肾小管上皮细胞转化生长因子β1活化的影响

目的观察根据血小板反应蛋白1（TSP1）分子WSHW序列人工合成的六肽（GGWSHW，G肽）对由血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的肾小管上皮细胞TGF-β1过度活化的抑制作用。方法体外培养人近端肾小管上皮细胞系（HK-2），以未处理HK-2细胞为正常对照，以AⅡ刺激HK-2细胞（AngⅡ组），选择合成TSP1和TGF-β1最佳刺激浓度和时间。刺激前加入10μmol／LG肽进行干预（G肽组），并以AngⅡ受体阻断剂洛沙坦（losartan）为抑制对照（ losartan组）。分别用RT-PCR和Western印迹检测TSP1和TGF-β1以及细胞外基质纤连蛋白（FN）和纤溶酶原活化物抑制剂-1（PAI-1）mRNA转录和蛋白表达。共聚焦显微镜和流式细胞仪观察TSP1和TGF-β1的表达以及两者共表达。ELISA法检测培养细胞上清液中活性TGF-β1、总TGF-β1、FN和PAI-1的分泌含量。Western印迹检测TGF-β1信号转导蛋白Smad2及磷酸化Smad2（p-Smad2）表达水平。结果AngⅡ以时间和剂量依赖方式促进HK-2细胞合成TSP1和TGF-β1（优化后分别为6h的1μmol／L，12h的0．1μmol／L）。与正常对照组比较，AngⅡ组TSP1与TGF-β1阳性共表达的细胞数上调5．4倍；总TGF-β1和活性TGF-β1水平分别增加1．8和2．0倍；p-Smad2蛋白水平明显上调；FN和PAI-1 mRNA转录水平分别上调3和1．5倍，且细胞上清液中两者含量分别增加2和1．9倍。G肽对TSP1和TGF-β1 mRNA转录和蛋白表达水平均无显著性影响，且对总TGF-β1分泌无明显抑制作用，但可显著抑制活性TGF-β1的水平。此外与losartan组比较，G肽组p-Smad2蛋白表达减少28．9％。FN和PAI-1 mRNA转录水平分别下调34．5％和26％，且细胞上清液中两者含量分别减少11％和8．9％。结论TSP1肽抑制物体外能通过有效竞争抑制TSP1致HK-2细胞的TGF-β1活化作用，并可相应下调FN和PAI-1的合成分泌。     

AcSDKP对正常人真皮成纤维细胞表达TGF-β1的影响

目的探讨N-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸（AcSDKP）对真皮成纤维细胞表达TGF—β1的影响。方法对人皮肤成纤维细胞原代培养及鉴定后,给予不同浓度AcSDKP（10^-7mol／L、10^-8mol／L、10^-9mol／L、10^-10mol／L、10^-11mol／L）干预,设立空白对照组。WST-8法检测人皮肤成纤维细胞增殖;RT-PCR技术检测人皮肤成纤维细胞TGF～β1 mRNA表达：酶联免疫法检测培养细胞上清液TGF-β1含量。结果与空白对照组相比,各浓度组对成纤维细胞的增殖都有抑制作用,其中10^-10mol／LAcSDKP抑制成纤维细胞增殖作用最强;10^-7mol／L、10^-8mol／L、10^-9mol／L、10^-10mol／LAcSDKP对TGF-β1 mRNA表达有显著的抑制作用,且各浓度组间的抑制作用无差异;10^-8mol／L、10^-9mol／L、10^-10mol／LAcSDKP可使培养上清液中的TGF—β1显著减少,各浓度组间差异无显著性。结论AcSDKP能够抑制人皮肤成纤维细胞增殖及TGF—β1的生成,有望成为病理性瘢痕防治的新方法。     

血管紧张素Ⅱ1A型受体基因对糖尿病嵌合体小鼠肾脏细胞外基质重塑的影响

目的 探讨血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）IA型（AT1A）受体基因对糖尿病嵌合体（chimeric）小鼠肾脏细胞外基质的影响。方法 嵌合体小鼠全身组织包括肾脏由AngⅡ1A型受体（ATl．）野生型细胞（ATl^＋／＋）和AngⅡ受体AT1A基因敲除细胞（AT1A-／-）两组不同克隆来源的细胞组成。在AT1A嵌合体小鼠腹腔内注射链尿佐菌素（STZ，300mg／kg），诱导糖尿病模型12周后，取肾脏组织作连续冰冻切片。β半乳糖苷酶（LacZ）染色区分不同基因型的肾小球。PAS染色检测其细胞外基质的表达。免疫组化方法检测转化生长因子（TGF）β1、纤溶酶原激活物抑制物（PAI）1、终末糖基化产物（AGE）、硝基酪氨酸（nitrotyrosine）的表达。比较两种基因型肾小球细胞外基质和各细胞因子的表达变化。结果 在糖尿病状态下，AT1A＋／＋和AT1A-／-小鼠肾小球细胞外基质均较对照组明显增多（P〈0．05）。两种基因型相比，AT1A-／-基因型肾小球的表达绝对值显著高于AT1A＋／＋基因型肾小球（P〈0．05）。但从正常状态到糖尿病形成过程中，其升高幅度却显著低于AT1A＋／＋基因型肾小球（P〈0．01）。各种细胞因子在糖尿病状态下的表达均显著增加（P〈0．05），AT1A-／-基因型肾小球的绝对数值显著高于AT1A＋／＋基因型肾小球（P〈0．05），但AT1A-／-基因型肾小球细胞因子表达的变化幅度低于AT1A＋／＋基因型肾小球（P〈0．01）。结论 AT1A基因缺失使得部分肾小球代偿性上调TGF-β1、PAI-1、AGE和nitrotyrosine的表达。AT1A受体在一定程度上影响了TGF-β1、PAI-1、AGE和nitrotyrosine的表达而参与了糖尿病小鼠肾脏细胞外基质的重塑，但并非独立决定因素。