金钗石斛多糖的分离纯化及其抗衰老活性研究

目的:分离纯化得到金钗石斛多糖,考察其对过氧化氢(H2O2)诱导肝癌细胞株(Hep G2)细胞损伤模型的抗衰老活性。方法:以金钗石斛为原料,经脱脂、提取、浓缩、乙醇沉淀和真空干燥后,得到金钗石斛多糖,然后经二乙氨乙基(DEAE-52)纤维素柱水洗纯化获纯化金钗石斛多糖DNPL。检测金钗石斛多糖DNPL的中性糖含量,应用高效凝胶渗透色谱(HPGPC)对其相对分子质量进行分析,同时研究了金钗石斛多糖对H2O2诱导Hep G2细胞损伤模型的抗衰老活性。结果:金钗石斛粗多糖的中性糖含量为68. 58%,相对分子质量为2. 8×104Da,金钗石斛多糖(DNPL)对H2O2诱导的肝癌细胞有明显的保护作用,随浓度的升高抗氧化作用增强,并且在浓度高于500μg·m L-1后强于阳性参照CAPE的抗氧化作用。结论:选用H2O2诱导Hep G2细胞损伤模型,结果显示金钗石斛多糖具有较显著的抗细胞衰老作用。     

金钗石斛水溶性多糖与碱溶性多糖对Hela细胞增殖的影响

目的比较金钗石斛的水溶性多糖和碱溶性多糖成分对Hela细胞增殖的抑制作用。方法应用总SOD活性检测试剂盒(WST法)对纯化金钗石斛水溶性多糖和碱溶性多糖进行测定。结果金钗石斛水溶性多糖在质量浓度较高(≥0.40mg·mL-1)时,对Hela细胞的生长有抑制作用,此作用随着质量浓度的增高而增强。而碱溶性多糖在质量浓度较低(≤0.70mg·mL-1)时,对Hela细胞的生长有抑制作用,此作用在质量浓度为0.10mg·mL-1时达到最大。结论金钗石斛水溶性多糖和碱溶性多糖在体外对Hela细胞有一定的抑制作用,而两种多糖的最强抑制质量浓度不同。     

金钗石斛多糖提取工艺的优化及对小鼠脾细胞增殖的影响

目的:优化金钗多糖的提取工艺,并研究其对小鼠脾细胞增殖的影响。方法:采用单因素试验和L9(34)正交试验法考察了提取时间、提取温度和料液比对金钗石斛多糖得率的影响,并用MTS/PMS法测定其对小鼠脾细胞增殖的影响。结果:金钗石斛多糖的最佳提取工艺条件为液料比45∶1,提取温度90℃,提取时间2.5 h;金钗石斛精制多糖、金钗石斛粗制多糖能直接促进脾细胞的增殖,且两者能显著增强刀豆蛋白A(ConA)诱导的T淋巴细胞和脂多糖(LPS)诱导的B淋巴细胞的增殖,在此最佳工艺条件下金钗石斛粗多糖得率为2.80%。结论:金钗石斛多糖能有效的促进脾淋巴细胞的增殖,并与Con A,LPS对T,B淋巴细胞的增殖有协同刺激作用。     

金钗石斛多糖调控炎性小体NLRP3对非酒精性脂肪肝大鼠的保护作用

目的:研究金钗石斛多糖对NAFLD大鼠的干预作用,并从NLRP3信号通路分析作用机制。方法:将72只SD大鼠分为正常、模型、金钗石斛多糖高、中、低剂量和多烯磷脂酰胆碱干预组,除正常组外,NAFLD模型构建成功治疗4周后处死,取出肝脏检测肝脏病理学和NLRP3、Caspase-1蛋白及mRNA表达,收集血液检测谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)含量。结果:正常组肝小叶清晰,细胞核分布均匀,模型组有明显脂肪空泡和炎症反应浸润,金钗石斛多糖与多烯磷脂酰胆碱组明显改善;与正常组比较,模型组AST、ALT、TG、TC、HDL-C、LDL-C、IL-1β、IL-18、Caspase-1和NLRP3蛋白及mRNA均升高(P<0.05),与模型组比较,金钗石斛多糖组和多烯磷脂酰胆碱组上述指标均降低(P<0.05),此外金钗石斛多糖组与多烯磷脂酰胆碱组AST、ALT和HDL-C没有差异,高剂量组TG、TC和LDL-C低于多烯磷脂酰胆碱组(P<0.05),中和高剂量组IL-1β、IL-18、Caspase-1和NLRP3蛋白及mRNA明显低于多烯磷脂酰胆碱组(P<0.05)。结论:金钗石斛多糖可明显改善高脂高糖饮食诱导的NAFLD大鼠肝功能和血脂,这与其可调节炎性小体NLRP3,进而降低炎症反应有关。     

茶多糖对高糖诱导下HK-2细胞氧化应激损伤的保护作用及TGF-β_1、α-SMA表达的影响

目的:研究茶多糖(TPS)对高糖诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)的氧化应激损伤的保护作用及其机制,探讨茶多糖对高糖诱导下HK-2细胞转化生长因子β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响。方法:DCFH-DA(组织活性氧荧光定量)法检测茶多糖对高糖刺激下HK-2细胞内活性氧(ROS)水平的影响。RTPCR检测TGF-β1、α-SMA m RNA的表达。Western-blot检测核因子NF-E2相关因子(Nrf2)、血红素氧合酶1(HO-1)、TGF-β1、α-SMA蛋白的表达。结果:与正常对照组比较,高糖组ROS水平显著升高,经茶多糖干预后,ROS水平显著降低,其作用呈浓度依赖性;与正常对照组比较,高糖组Nrf2、HO-1蛋白表达均显著升高,经茶多糖干预后,与高糖组比较,Nrf2、HO-1蛋白表达均显著升高;与正常对照组比较,高糖组TGF-β1、α-SMA m RNA和蛋白表达均显著升高,经茶多糖干预后,TGF-β1、α-SMA m RNA和蛋白表达均显著降低。结论:茶多糖能减少高糖诱导的氧化应激损伤,其机制与激活Nrf2/ARE途径有关。茶多糖能降低TGF-β1和α-SMA的表达,减少高糖诱导下HK-2细胞EMT的发生。     

秦皮甲素对高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖及纤维连接蛋白表达的影响

目的探讨秦皮甲素对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)增殖及纤维连接蛋白(FN)表达的影响。方法采用CCK-8法检测不同浓度秦皮甲素(10、30、90μmol·L-1)对正常培养条件(含糖5.6 mmol·L-1)和高糖培养条件(含糖25 mmol·L-1)下的HBZY-1细胞增殖的影响;以PI3K抑制剂Wortmannin(1μmol·L-1)干预为对照,采用Western Blot法检测秦皮甲素对高糖培养条件下HBZY-1细胞FN蛋白表达及PI3K/Akt蛋白磷酸化水平变化的影响。结果在正常培养条件下,与正常组比较,秦皮甲素给药组(10、30、90μmol·L-1)的HBZY-1细胞增殖均无明显变化(P>0.05)。在高糖培养条件下,与正常组比较,高糖组的细胞活力明显增加(P<0.05),HBZY-1细胞FN蛋白表达和PI3K/Akt磷酸化水平明显升高(P<0.05);与高糖组比较,90μmol·L-1秦皮甲素给药组的HBZY-1细胞活力明显降低(P<0.05),FN蛋白表达和PI3K/Akt磷酸化水平亦显著下调(P<0.05)。结论秦皮甲素能够抑制高糖诱导的HBZY-1细胞增殖,下调FN蛋白表达,可能与其抑制PI3K/Akt信号通路激活密切相关。     

铁皮石斛多糖通过抑制TGF-β_(1)/Smad2/3通路对抗二氧化硅致肺损伤作用北大核心

目的:明确铁皮石斛多糖对二氧化硅(SiO_(2))致矽肺的保护作用及对TGF-β_(1)/Smad2/3通路的影响。方法:采用SiO_(2)致人肺细胞A549损伤模型,铁皮石斛多糖干预后,MTT法检测细胞活力,荧光探针法检测细胞内活性氧(ROS)水平;采用滴鼻法给予SiO_(2)复制致小鼠肺组织损伤模型,分别设正常对照组、模型组、铁皮石斛多糖高(500 mg/kg)、低(250 mg/kg)剂量组,HE染色和天狼星红染色观察小鼠肺组织病理学变化;试剂盒检测小鼠血清SOD、MDA水平和肺组织中羟脯氨酸(HYP)水平;蛋白免疫印迹法检测细胞和肺组织中TGF-β_(1/2)、p-Smad蛋白表达。结果:铁皮石斛多糖(200μg/mL)可显著降低SiO_(2)对细胞增殖的抑制作用,降低细胞内ROS水平(P<0.05或P<0.01)。铁皮石斛多糖各剂量组小鼠肺组织炎症细胞和胶原分布均较模型组明显减少。铁皮石斛多糖可有效逆转SiO_(2)引起的血清SOD活性降低及血清MDA和肺组织中HYP含量升高,抑制细胞和肺组织内TGF-β_(1/2)蛋白表达和Smad蛋白磷酸化水平(P<0.05或P<0.01)。结论:铁皮石斛多糖可减轻SiO_(2)诱导人肺泡细胞损伤,改善矽肺小鼠肺纤维化,其作用机制可能与抑制TGF-β_(1)/Smad2/3信号通路有关。     

铁皮石斛中性多糖分离纯化及其体内免疫调节作用研究

目的分离鉴定铁皮石斛中的中性多糖,探讨铁皮石斛中性多糖(DOP-1)对环磷酰胺所致免疫功能低下小鼠免疫功能的影响。方法水提醇沉法提取铁皮石斛粗多糖、酶-Sevage法脱蛋白;DEAE-纤维素52离子交换层析法分离纯化粗多糖;红外扫描和柱前衍生化HPLC法分析多糖组分及构型;选用BALB/c雄性小鼠,采用环磷酰胺建立免疫抑制小鼠动物模型,实验设正常组,模型组,左旋咪唑阳性组,DOP-1高、低剂量组,铁皮石斛全茎高、低剂量组。观察比较各小鼠脾脏和胸腺指数、血清中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)和干扰素-γ(IFN-γ)含量及血清溶血素水平。结果铁皮石斛粗多糖经柱层析分离纯化后得到中性多糖(DOP-1),DOP-1主要由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、木糖和阿拉伯糖组成,其摩尔比分别为3.8∶0.25∶1.5∶3.8∶2.1∶1.3。动物实验表明:与模型组比较,DOP-1及全茎可显著增加胸腺指数,显著下调血清中IL-6(P0.05)和IL-10(P0.05)的含量,DOP-1调节作用优于全茎和阳性组;DOP-1高剂量组的IFN-γ水平也有显著性降低(P0.01),并能增强免疫抑制小鼠血清溶血素水平(P0.01)。结论铁皮石斛中性多糖可缓解环磷酰胺对小鼠的免疫抑制作用。     

蓝萼甲素诱导K562细胞毒作用机制的初步研究

目的:探讨活性氧(reactive oxygen species,ROS)在蓝萼甲素(glaucocalyxin A,GLA)诱导的人慢性粒细胞白血病K562细胞毒性中的作用。方法:GLA(0.313,0.625,1.250,2.500,5.000,10.000 mg.L-1)处理K562细胞12,24,48 h后,噻唑蓝(MTT)法观察细胞毒作用;流式细胞术检测GLA(2.5,5.0,10.0 mg.L-1)对K562细胞周期的阻滞作用;流式细胞术检测5.0 mg.L-1 GLA作用后K562中的ROS变化;利用MTT法检测抗氧化剂氮乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)对GLA诱导下K562细胞毒作用的影响;流式细胞术检测NAC对GLA诱导下K562细胞周期的影响。结果:GLA对K562细胞的生长抑制呈明显的剂量和时间依赖关系,12,24,48 h的IC50分别为6.168,2.968,1.086 mg.L-1;GLA对K562细胞周期的阻滞作用主要发生在G0/G1期;5.0 mg.L-1 GLA作用K562细胞2 h后ROS较空白组上升1.3倍;NAC对GLA细胞毒作用有明显的抑制作用,且随NAC浓度上升,抑制作用增强;NAC能减弱GLA对K562的细胞周期阻滞作用。结论:GLA对K562细胞具有细胞毒及细胞周期阻滞作用,且这些作用与ROS有关。     

铁皮石斛茎非多糖与粗多糖体内外抗氧化活性的比较

目的 :明确铁皮石斛茎非多糖成分的抗氧化活性并与粗多糖进行比较,为非多糖成分的开发利用提供理论依据。方法:水提醇沉法制备铁皮石斛茎粗多糖,85%乙醇提取液合并醇沉上清液经制备后得到非多糖。以VC为阳性对照,采用ABTS法、DPPH自由基清除法及PMS-NBT-NADH法分别研究非多糖与粗多糖对ABTS自由基、DPPH自由基及超氧阴离子(O2·-)的清除能力。采用高糖高脂复合饮酒制备氧化损伤大鼠模型,灌胃给予铁皮石斛茎总提取物、非多糖、粗多糖(剂量均为1、2 g/kg,按生药计),6周后测定大鼠血清T-AOC、SOD及MDA。结果:在ABTS自由基、DPPH自由基、O2·-清除能力方面,非多糖优于粗多糖(非多糖的半抑制浓度IC50分别为0.357、1.545、3.535 mg/ml,粗多糖的IC50分别为6.597、2.077、4.916 mg/ml)。铁皮石斛茎总提取物、非多糖、粗多糖均能明显升高模型大鼠血清T-AOC值及SOD活力,降低MDA含量。结论:铁皮石斛茎非多糖成分在体内外均具有较强的抗氧化活性,并在清除ABTS自由基方面优于粗多糖,值得进一步开发并加以利用。     

2005年MEDLINE收录的有关针灸论文的总结分析

针灸作为一种安全、有效的治疗方法，愈来愈多地得到了世界医学界的关注、随着对其作用机理的研究，针灸的研究呈现出在研究领域更加广泛，在研究深度更加深入的局面。MEDLINE是美国国立医学图书馆建立的国际性综合生物医学信息书目数据库，是当前国际上最具权威性的生物医学丈献数据库之一。本文通过对MEDLINE在2005年收录的关于针灸的论文进行整理，分别从文章类别、所属国别、分布的期刊杂志、科研方法、研究内容等五个方面进行总结分析，希翼对针灸工作者有所裨益。     

北京市某二级医院住院患者抗菌药物使用情况调查分析

目的:分析我院各科住院患者抗菌药物使用情况,为规范临床抗菌药物合理使用及有效开展药学服务提供可靠依据。方法:选择2013年1—6月全部出院患者中使用抗菌药物病历426份,从抗菌药物的使用比例、临床品种选择、联合用药、用药频度及药物利用指数等各项数据进行调查统计,结合同期住院病原菌分布,综合分析抗菌药使用情况。结果:住院抗菌药物总使用率为58.36%;以单一用药为主,占67.65%,联合用药主要集中在二联;DDDs排序前10位中以头孢菌素类为主,其限制使用品种应用频次最高;多数药物DUI值﹤1.0,基本合理;依据病原学结果临床选药主要为经验用药,针对性较差。结论:我院住院患者抗菌药物使用率符合卫生部要求,但对抗菌药物的适应症、使用原则、不良反应等方面掌握不全面,存在滥用现象,需加强培训、事前干预及用药督导,严控临床经验用药习惯。     

儿茶素类对前列腺癌作用的研究进展

前列腺癌是中老年男性最多见的恶性肿瘤之一。儿茶素在防治前列腺癌中已经表现出令人兴奋的结果,可以抑制前列腺癌细胞增殖,诱导前列腺癌细胞凋亡,对前列腺癌形成中的关键酶进行调控。就儿茶素对前列腺癌的作用机制进行综述,并对前景提出了展望。     

九味麦冬方对Iso致太阴急性心肌缺血太阴小鼠模型气管夹闭心电消失时间、Ⅱ导联心电图ST-T波影响随机平行对照研究

[目的]观察九味麦冬方对Iso致急性心肌缺血太阴小鼠模型气管夹闭心电消失时间、Ⅱ导联心电图ST-T波影响。[方法]使用随机平行对照方法,1气管夹闭心电消失时间影响,将48只昆明种小鼠,编号按随机数字表分为四组:空白组,模型组,九味麦冬方组,丹参组,12只/组。2Ⅱ导联心电图ST-T波影响,将40只昆明种小鼠,编号按随机数字表分为四组:空白组,模型组,九味麦冬方组,丹参组,10只/组。灌胃干预:九味麦冬方组(25.6g生药/kg),丹参组(13.0g生药/kg),模型组(等量蒸馏水);1次/d,连续21d。末次给药45min后,除空白组外,各组均皮下注射0.015g/kg Iso制备小鼠急性心肌缺血模型。观测指标:气管夹闭心电消失时间、Ⅱ导联心电图ST-T波。[结果]气管夹闭心电消失时间九味麦冬方组明显高于丹参组、模型组(P0.01)。Ⅱ导联心电图ST-T波变化率九味麦冬方组优于丹参组。[结论]九味麦冬方具有良好的抗心肌缺血损伤能力。     

Anti-angiogenic effect of furanodiene on HUVECs in vitro and on zebrafish in vivo

Ethnopharmacological relevance

Furanodiene is an active ingredient of the traditional Chinese medicine, Rhizoma Curcumae, commonly used for the treatment of cancer in China.

Aim of the study

To investigate the anti-cancer property of Rhizoma Curcumae, this study describes the anti-angiogenic activities of furanodiene in human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) in vitro and in zebrafish in vivo.

Materials and methods

HUVECs were treated with different doses of furanodiene in the presence or absence of vascular endothelial growth factor (VEGF). The anti-proliferative effect of furanodiene was measured using the XTT assay. The anti-migration and anti-invasion activities of this compound were investigated with a wound-healing migration model and a three-dimensional cell invasion model, respectively. The effects of furanodiene on HUVEC differentiation were assessed by in vitro tube formation in Matrigel™. The expression of related proteins was detected by Western blot. Morphological observations of zebrafish were evaluated in transgenic Tg (fli1: EGFP) zebrafish embryos.

Results

Our results showed that furanodiene exposure could significantly inhibit the proliferation of HUVECs in a dose-dependent manner and inhibit VEGF-induced proliferation at a low dose. Relative to the VEGF-induced control, the number of invading and migrating cells was significantly reduced in the furanodiene-treated groups. Furanodiene also dramatically suppressed tube formation and p-Akt (Ser473), p-Erk 1/2 (Thr202/Tyr204), ICAM-1, p-p85 (Ser428) as well as p85 protein expression. Furthermore, exposure to furanodiene inhibited angiogenesis in the zebrafish model.

Conclusions

This study demonstrated that furanodiene exposure exhibits a potential anti-angiogenic effect through suppression of endothelial cell growth, invasion, migration and tube formation via regulation of the PI3K pathway. This potential anti-angiogenic effect of furanodiene may play an important role in the anti-tumor activity of the traditional Chinese medicine, Rhizoma Curcumae.     

《伤寒论》“控水论”之吐法探微

通过探讨《伤寒论》中有关条文,分析其催吐作用、催吐禁忌、止吐功效等内涵。认为催吐和止吐可达到控制体内水液流动的方向和部位,是＂控水论＂思想的一部分,并与汗法和下法相互衔接和呼应。     

骨质疏松症的中医研究进展

骨质疏松症(osteoporosis, OP)是由多种原因引起的一种全身性代谢性骨骼疾病,以单位体积内骨量减少、骨组织显微结构退化为特征,由于骨质脆性增加、强度下降,从而导致骨折危险性增加.临床主要表现为肌肉及骨骼疼痛、身材缩短、脊柱变形、骨折四大主症.目前国际公认的诊断标准是双能X线吸收测定仪测量的骨矿密度指标.本文参考近年来中医药对本病的研究文献百余篇,结合导师钱先主任医师的临床探索,对本病的中医药研究现状作一综述.……     

电针对内毒素引起大鼠肝损伤保护作用的研究

目的：观察电针足三里能否减轻内毒素引起的大鼠肝损伤,并初步探讨其作用机制。方法：雄性Wistar大鼠40只随机分为4组：内毒素组、电针组、正常组和非穴组。尾静脉注射内毒素（5 mg/kg）制作大鼠肝损伤模型,正常组注射等量生理盐水;电针组于造模半小时后给予电针“足三里”治疗（2～100 Hz,2 mA,1.5 h）,非穴组针刺位置为“足三里”旁开5 mm、下5 mm,操作同电针组。结果：尾静脉注射内毒素可显著增加大鼠肝组织TNF-α含量和血浆ALT活性,电针可使两者明显降低（P〈0.01）,非穴组大鼠肝组织TNF-α含量和血浆ALT活性与内毒素组相比差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：电针“足三里”可降低内毒素引起的异常升高的大鼠肝组织TNF-α含量和血浆ALT活性,具有器官保护作用,其机制可能与降低肝组织TNF-α含量有关。     

清纤方抗实验性大鼠肝纤维化的作用研究

目的:探讨清纤方抗肝纤维化的治疗机制。方法:利用CCl₄制备肝纤维化Wistar大鼠模型,分为正常组、模型组、清纤方组、秋水仙碱组。治疗8周后,用HE和Masson染色观察肝纤维化的形成,免疫组化检测Ⅰ、Ⅲ胶原,RT-PCR检测肝组织中转化生长因子β₁(TGF-β₁)mRNA的表达。结果:Ⅰ、Ⅲ胶原和TGF-β₁mRNA的表达在治疗组均明显减少。结论:清纤方能有效减轻肝纤维化大鼠的肝脏损伤及纤维化程度,其机制可能与抑制肝内TGF-β₁的表达有关。     

《伤寒论》“顺势思维”探讨

1　顺势思维的概念顺者 ,顺应 ,顺从也 ,循也 ,因也 ,有趁、乘之意 ;势者 ,势态 ,趋势也。顺势思维指尊重、顺应、利用客观之势态及规律 ,处理事物的思维方法。顺势思维是中国古代重要的哲学思想 ,是“天人合一”思维的具体体现。早在春秋之末 ,范蠡即明确提出 :“因阴阳之恒 ,