不同浓度葡萄糖对MG63细胞株护骨素和护骨素配体及其相关因子表达的影响

目的：观察不同葡萄糖浓度环境下人成骨肉瘤MG63细胞株护骨素（OPG）、护骨素配体（OPGL）及其相关因子如肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）、巨噬细胞集落刺激因子（M—CSF）、转化生长因子β（TGF-β）的表达。方法：用RT—PCR法检测基因表达情况。结果：高糖能下调MG63细胞中OPG及TGF—β的表达，上调OPGL、M—CSF和TRAIL的表达。结论：高糖环境可能导致成骨细胞中OPG及TGF—β的表达减少，OPGL、M-CSF和TRAIL等细胞因子的表达增多，使破骨细胞的数目和活性增加，骨吸收增强和骨量丢失，这可能是糖尿病骨质疏松症的一个重要的发病机制。     

葡萄糖对MG63细胞株护骨素、护骨素配体及其相关因子表达的影响

目的:观察不同葡萄糖浓度对人成骨肉瘤MG63细胞株护骨素(OPG)、护骨素配体(OPGL)及肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、转化生长因子-β(TGF-β)表达的影响.方法:MG63细胞经不同浓度(5.5、16.7、33.3 mmol/L)葡萄糖处理后,用RT-PCR法检测上述基因表达情况.结果:高糖能下调MG63细胞中OPG及TGF-β的表达(P＜0.05),上调OPGL、M-CSF和TRAIL的表达(P＜0.05). 结论:高糖环境可能导致成骨细胞中OPG及TGF-β的表达减少, OPGL、M-CSF和TRAIL等细胞因子的表达增多,使破骨细胞的数目和活性增加,骨吸收增强和骨量丢失,这可能是糖尿病骨质疏松症的一个重要的发病机制.     

骨保护素及其配体在牙正畸中作用的研究进展

骨保护素(OPG)是生理性的抑制破骨细胞性骨吸收的因子,而骨保护素配体(OPGL)是能直接诱导破骨细胞分化发育并参与破骨细胞功能调节的细胞因子。牙周膜细胞可表达OPG和OPGL,揭示了在正畸牙移动中,牙周膜细胞可能是通过OPG/OPGL系统来调节牙槽骨代谢的。OPG和OPGL在多种骨病和牙正畸的治疗中具有很大潜力,具有良好的临床应用前景。     

护骨素与骨质疏松研究进展

护骨素(osteoprotegerin,OPG)又称骨保护蛋白,是肿瘤坏死因子受体家族的新成员.它与NF-κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor κB ligand,RANKL)和NF-κB受体活化因子(receptor activator of nuclear factor κB,RANK)是偶联成骨细胞、基质细胞和破骨细胞分化、活化与生物活性的主要细胞因子,对骨形成和骨吸收起重要的调节作用.它对骨质疏松的发病机制和治疗有着重要的影响,现将OPG与骨质疏松的研究进展进行综述.     

骨灵片通过p38 MAPK信号通路影响成骨细胞功能的机制

目的 探讨骨灵片促进成骨细胞增殖、矿化以及基因表达的细胞信号通路.方法 用含有骨灵片的大鼠血清、p38MAPK抑制剂SB203580作用人成骨细胞MG-63,测定各组成骨细胞增殖率、矿化结节数量.采用Western-blotting及Real time RT-PCR方法观察各组成骨细胞护骨素(OPG)、护骨素配体(RANKL)以及巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)基因表达和磷酸化p38含量.结果 经含骨灵片药液的大鼠血清作用后,MG-63细胞的增殖和矿化结节形成数明显增加,OPG基因表达增加,RANKL基因表达减少,OPG/RANKL比值显著增加,M-CSF有下降趋势,但没有显著性差异,同时刺激p38磷酸化.结论 骨灵片可能通过p38MAPK通路促进成骨细胞增殖以及矿化结节形成,调控OPG、RANKL以及M-CSF的表达,达到治疗骨质疏松症的作用.     

金雀异黄素通过雌激素受体β增加人成骨细胞护骨素与破骨细胞分化因子表达比值

目的 探讨植物雌激素——金雀异黄素（genistein）对人成骨细胞（HOB）作用的分子机制。方法 采用细胞培养结合Western blot方法，观察不同浓度金雀异黄素对HOB细胞的护骨素（OPG）、破骨细胞分化因子（RANKL）、雌激素受体（ER-α，ER-β）蛋白质的影响。结果 ①中、大剂量金雀异黄素明显上调HOB细胞OPG蛋白质的表达、下调RANKL蛋白质的表达；雌激素受体拮抗剂ICI 182．780（10^-8mol／L）拮抗金雀异黄素（10^-8mol／L）的上述作用。②大剂量金雀异黄素刺激HOB细胞ER-β蛋白质的表达；各组ER-α蛋白质的表达量与对照组比较，差异无显著性意义（均P〉0．05）。③OPG／RANKL比值与金雀异黄素剂量成正相关关系（r=0．694，P〈0．05）。结论 金雀异黄素通过ER-β上调HOB细胞OPG表达、下调RANKL表达，该雌激素样效应可能是其抗骨质疏松作用的分子机制之一。     

不同浓度葡萄糖对MG63细胞株TRAIL表达的影响

目的: 观察不同浓度葡萄糖环境下人成骨肉瘤MG63细胞株肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及其护骨素(OPG)、护骨素配体(OPGL)的表达,探讨糖尿病骨质疏松症的发病机制. 方法: 用不同浓度葡萄糖(5.5, 16.7, 33.3 mmol/L)分别刺激培养的MG63细胞24 h, RT-PCR法检测TRAIL, OPG, OPGL mRNA的表达,免疫组织化学法检测MG63细胞中TRAIL的表达及分布. 结果: 葡萄糖对MG63细胞中TRAIL, OPGL mRNA的表达,均按照对照组、5.5 mmol/L组、16.7 mmol/L组、33.3 mmol/L组顺序递增(P＜0.05),OPG mRNA的表达按照此顺序递减(P＜0.05). 33.3 mmol/L组TRAIL mRNA的水平明显高于对照组[(1.004±0.070) vs (0.740±0.023), P＜0.05], TRAIL免疫反应阳性物质密度也明显高于对照组. 结论: 高糖环境可能导致成骨细胞中TRAIL和OPGL表达增多,OPG的表达减少,这可能是糖尿病骨质疏松症的重要发病机制之一.     

葡萄糖对MG63细胞株TRAIL表达的影响

目的:观察在不同浓度葡萄糖环境下人成骨肉瘤MG63细胞株肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及其护骨素(OPG)、护骨素配体(OPGL)的表达,探讨糖尿病骨质疏松症的发病机制. 方法:用不同浓度葡萄糖(5.5、16.7、33.3 mmol/L)分别刺激培养的MG63细胞24 h,采用RT-PCR法检测TRAIL、OPG、OPGL mRNA的表达,以免疫组织化学法检测MG63细胞中TRAIL的表达及分布.结果:不同浓度葡萄糖环境的MG63细胞中TRAIL、OPGL mRNA的表达,均按照对照组、5.5 mmol/L组、16.7 mmol/L组、33.3 mmol/L组的顺序递增(P＜0.05),OPG mRNA的表达按照此顺序递减(P＜0.05).33.3 mmol/L组TRAIL mRNA的水平明显高于对照组[(1.004±0.070) vs (0.740±0.023),P＜0.05],TRAIL免疫反应阳性物质密度也明显高于对照组.结论:高糖环境可能导致成骨细胞中TRAIL和OPGL表达增多,OPG表达减少.这可能是糖尿病骨质疏松症的重要发病机制之一.     

TRAIL和OPG在MG63细胞中的表达及葡萄糖和雌二醇对其表达的影响

目的 护骨素(osteoprotegerin,OPG)和护骨素配体(osteoprotegerin ligand,OPGL)是新发现的肿瘤坏死因子家族成员,与肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)同为破骨细胞形成和活化的关键性调节因子.文中观察在不同浓度葡萄糖、雌二醇环境下人成骨肉瘤MG63细胞株中TRAIL及OPG、OPGL的表达,探讨绝经后糖尿病女性骨质疏松症的发病机制. 方法 用不同浓度葡萄糖(5.5、16.7、33.3mmol/L)和雌二醇(17β-estradiol2,17β-E2)分别刺激培养的MG63细胞24h,用MTT比色分析法测定细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,RT-PCR法检测TRAIL、OPG、OPGLmRNA的表达. 结果 葡萄糖以浓度依赖方式抑制MG63细胞的增殖,并将细胞阻滞于G1期,葡萄糖对MG63细胞中TRAIL和OPGLmRNA表达的作用均依照对照组、葡萄糖5.5mmol/L组、16.7mmol/L组、33.3mmol/L组顺序递增(P＜0.05),而OPGmRNA的表达按照此顺序递减(P＜0.05).33.3mmol/L组的TRAILmRNA水平明显高于对照组,分别为(1.004±0.070)和(0.740±0.023,P＜0.05).17β-E2可增加OPGmRNA的表达,减少TRAIL和OPGLmRNA的表达. 结论 高浓度葡萄糖可抑制成骨细胞的增殖,可能导致成骨细胞中TRAIL和OPGL表达增多,OPG的表达减少,导致骨质疏松.而雌激素可对高浓度葡萄糖环境下MG63细胞中TRAIL、OPG、OPGL的表达产生一定对抗效应,这可能是绝经后女性糖尿病患者合并骨质疏松症者施行雌激素替代治疗的依据之一.     

骨宝含药血清对成骨细胞碱性磷酸酶活性及护骨素mRNA表达的影响

目的：观察骨宝含药血清对SD大鼠成骨细胞（OB）中护骨素（OPG）mRNA表达的影响。方法：①将20只10月龄SD雌性大鼠随机分为2组,每组10只,分别为骨宝组和生理盐水对照组,制备含药血清和空白血清,MTT法确定最佳添加剂量;②取1d龄SD大鼠颅骨分离培养OB,分为骨宝含药血清组和对照组,磷酸对硝基苯酯法（PNPP法）检测OB碱性磷酸酶（ALP）活性,荧光定量聚合酶链式反应（FQ-PCR）检测OB中OPG mRNA的表达。结果：①15%浓度的骨宝含药血清对OB的增殖具有明显的促进作用（P〈0.05）;②骨宝含药血清组中OB的ALP活性2.527±0.185高于对照组1.839±0.040（P〈0.05）,骨宝含药血清组中OB的OPG mRNA表达量1.457±0.031高于对照组0.852±0.090（P〈0.05）。结论：骨宝含药血清能上调OB中OPGmRNA的表达,增强OB的ALP活性,可能是骨宝防治骨质疏松症的作用机制之一。     

雌激素对去卵巢大鼠骨组织中骨保护素、破骨细胞分化因子和巨噬细胞集落刺激因子mRNA表达的影响

目的观察雌激素对去卵巢大鼠骨组织中骨保护素(OPG)、破骨细胞分化因子(ODF)和巨噬细胞集落刺激因子 (M-CSF)mRNA表达的影响,探讨雌激素预防和治疗绝经后骨质疏松(PMO)的可能细胞因子途径。方法健康3月龄雌性SD大鼠30只,随机等分为假手术组,去卵巢组和雌激素组(已烯雌酚片,0．0225 mg·kg-1·d-1,灌胃)。假手术组仅牵动卵巢,其余两组均行卵巢切除术。12周后取第3-6腰椎做骨密度检查。取股骨提总RNA。实时定量PCR法检测上述因子mRNA的表达情况。结果 (1)相对于去卵巢组,雌激素组大鼠腰椎骨密度增高,差异有统计学意义。(2)相对于去卵巢组,雌激素组大鼠骨组织OPG的mRNA表达增高,M-CSF的mRNA表达下降,ODF／OPG值下降。结论雌激素治疗绝经后骨质疏松的效应可能与其调控OPG,M-CSF的表达和ODF／OPG值有关。     

大豆异黄酮对去卵巢大鼠骨组织骨保护素及其配体mRNA表达的影响

目的:观察大豆异黄酮(soybean isoflavones,SI)对去卵巢大鼠骨组织中骨保护素(osteoprote-gerin,OPG)和骨保护素配体(osteoprotegerin ligand,OPGL)mRNA表达的影响,探讨SI防治绝经后骨质疏松(postmenopausal osteoporosis,PMO)的作用机制。方法:健康雌性SD大鼠30只,随机分为假手术组、模型组和SI治疗组。假手术组仅牵动卵巢,其余两组均行双侧卵巢切除术。SI治疗组造模后予以SI50 mg.kg-1.d-1灌胃,假手术组和模型组给予等量生理盐水灌胃,1次/d,每周用药6 d,共12周。12周后取大鼠L3~L6脊椎行骨密度检测。取大鼠左侧股骨提取总RNA,采用实时定量聚合酶链反应(real-timequantitative polymerase chain reaction,RTQ-PCR)技术检测OPG和OPGL mRNA的表达水平。结果:SI可以增加去卵巢大鼠的腰椎骨密度,上调去卵巢大鼠骨组织中OPG mRNA的表达水平,使OPGL mRNA/OPG mRNA比值下降,但对OPGL mRNA的表达则无明显影响。结论:SI防治PMO的效应可能与其调控OPG mRNA的表达及OPGL mRNA/OPG mRNA比值相关。     

抗风湿颗粒对胶原诱导关节炎大鼠骨保护素、核因子-κB受体激活因子配体和巨噬细胞集落刺激因子表达的影响

目的:观察抗风湿颗粒(Kangfengshi Granules,KFSG)对胶原诱导关节炎大鼠骨组织中骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、核因子-κB受体激活因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor,M-CSF)mRNA表达的影响,探讨KFSG治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的作用机制。方法:40只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、环孢菌素A(cyclosporine A,CsA)治疗组和KFSG治疗组。除正常对照组外,其余各组大鼠予以皮下注射Ⅱ型胶原诱导关节炎模型。治疗4周后,采用实时定量PCR技术检测各组大鼠骨组织中OPG、RANKL和M-CSF mRNA的表达水平。结果:造模大鼠90%出现关节炎症状。治疗4周后,模型组、CsA治疗组和KFSG治疗组与正常对照组比较,RANKL mRNA和M-CSF mRNA的表达增高,OPGmRNA的表达降低,RANKL mRNA/OPG mRNA比值亦增高,差异均有统计学意义。KFSG治疗组与模型组比较,OPG mRNA的表达水平上调,M-CSF mRNA的表达水平下调,RANKL mRNA/OPG mRNA比值下降,差异均有统计学意义。结论:KFSG治疗RA骨质破坏的分子机制可能与其上调OPG mRNA的表达、下调M-CSF mRNA的表达及降低RANKL mRNA/OPG mRNA比值有关。     

OPGL诱导小鼠外周血单核细胞分化为破骨细胞及其破骨活性

目的 :观察在小鼠外周血单核细胞培养中破骨细胞抑制因子配基 (osteoprotegerinligand ,OPGL)诱导单核细胞分化为破骨细胞的作用 ,以及地塞米松对破骨细胞分化和骨吸收活性的影响 .方法 :将外周血单核细胞分组培养 ,在A组中加入巨噬细胞集落刺激因子和OPGL ,B组中再加入地塞米松 .多核巨细胞形成后行抗酒石酸酸性磷酸酶 (tartratere sistantacidphosphatase,TRAP)及甲苯胺蓝染色 .将象牙骨片上骨吸收面积经计算机图像分析以确定其差异 .结果 :外周血单核细胞培养 7～ 10d ,可以见到大量的多核巨细胞 ,体积巨大 .B组中 ,多核巨细胞出现较A组早 .几乎所有的多核巨细胞表现为TRAP强阳性 ,而多数单核细胞和巨噬细胞为TRAP阴性或弱阳性 .在象牙骨片上有大量的骨吸收陷窝形成 ,A、B两组的骨吸收无明显差异 (P >0 .0 5 ) .结论 :OPGL可以诱导小鼠外周血单核细胞分化为破骨细胞并具有骨吸收活性 .地塞米松可加速OPGL诱导的破骨细胞分化作用 ,但对于破骨细胞的骨吸收活性无影响     

PRF 对下颌骨牵引成骨区骨保护素表达的影响

目的 探讨富血小板纤维蛋白（PRF）对牵引成骨（DO）区骨保护素（OPG）表达的影响。方法 将25 只大耳白兔随机分5 组，分别行双侧下颌骨皮质骨切开术，一侧下颌骨牵引间隙放置PRF 膜，作为实验组，对侧作为对照组，分别于牵引稳定期1、3、7、14 和28 d 各处死一组动物，将下颌骨DO 区骨块制成脱钙石蜡切片，进行苏木精- 伊红染色及OPG 免疫组织化学染色，细胞图像分析仪测量牵引间隙处骨痂OPG 表达情况。结果 下颌骨牵引处形成新生骨，免疫组织化学OPG 染色主要表达在成骨细胞的胞浆中。实验组与对照组在稳定期1、3、7、14 和28 d 的OPG 阳性表达细胞数比较，差异有统计学意义（P <0.05）。结论 PRF 能促进兔下颌骨DO 区新骨的生成，OPG 可能在DO 过程的早期调控组织细胞应力信号传递，发挥成骨作用。     

骨保护素和骨保护素配体在人骨髓基质细胞分化过程中的表达及对破骨细胞形成的影响

摘 要 背景 骨保护素和骨保护素配体在骨代谢过程中具有重要作用。本实验研究骨保护素和骨保护素配体在人骨髓基质细胞向成骨细胞诱导分化过程中的表达情况,及对破骨细胞形成的影响,探讨其在骨代谢过程中的调节作用。 方法 采用梯度离心法获得人骨髓基质细胞,并将骨髓基质细胞向成骨细胞方向诱导分化。通过形态学观察、生化指标检测、细胞染色和矿化结节测定等方法,确定骨髓基质细胞的功能状态和分化程度。采用RT-PCR和Western blot方法,检测骨髓基质细胞向成骨细胞分化过程中骨保护素和骨保护素配体的表达情况。在进一步的实验中采用骨髓法获得破骨细胞前体细胞,与分化中或者未分化的骨髓基质细胞共同培养,并加入OPG和OPGL进行实验,观察抗酒石酸阳性多核的破骨细胞形成情况。 结果 获得的骨髓基质细胞生长状态良好,生化指标稳定。骨髓基质细胞分化后,碱性磷酸酶分泌明显增加,可以产生大量的矿化结节,具有成熟成骨细胞的表型特征。RT-PCR和Western blot检测结果显示,在骨髓基质细胞向成骨细胞分化过程中,骨保护素在mRNA和蛋白质水平的表达明显升高,而骨保护素配体的表达则逐渐下降。细胞中OPG mRNA和蛋白质表达水平在第21天时达到最大,约为未分化时水平的2.5倍左右,而OPGLmRNA和蛋白质表达减少约为未分化时1/2。统计学分析,P<0.01,差异有显著性。实验结果显示破骨前体细胞与未分化骨髓基质细胞共同培养后,可以观察到TRAP阳性的多核破骨细胞形成,而与分化骨髓基质细胞共同培养后,不能检测到TRAP阳性多核破骨细胞的形成。但加入OPGL试剂后可以看到破骨细胞的形成。 结论 在人骨髓基质细胞向成骨细胞分化过程中,骨保护素表达逐渐升高而骨保护素配体表达显著降低,两者比值逐渐增大,骨形成增加,并进一步抑制破骨细胞形成,减少骨吸收,这可能是调节MSC分化,OB和OC形成,使骨代谢周期平衡有序进行的重要机制。     

金属颗粒对MG63细胞骨保护素/核因子-κB受体活化因子配体表达影响的研究

目的:探讨金属钴、铬颗粒对人成骨细胞系MG63细胞骨保护素(OPG)及核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)表达水平的影响。方法:将金属钴、铬颗粒与人成骨细胞系MG63细胞共培养,ELISA法检测细胞培养上清中OPG、RANKL水平,采用荧光定量PCR法检测OPG、RANKLmRNA表达水平。结果:培养后24、48h实验组RANKL蛋白与mRNA水平显著增加,与对照组相比差异有统计学意义;但OPG蛋白与mRNA水平虽然增加,但与对照组相比差异没有统计学意义;RANKL/OPG比值显著增加,与正常对照组相比差异有统计学意义。结论:金属钴、铬颗粒可以促进RANKL蛋白及RANKL mRNA表达,使RANKL/OPG比率增高,促进破骨细胞分化,从而使骨吸收增强。     

阿托伐他汀对骨髓来源的成骨细胞中OPG mRNA/RANKL mRNA水平的影响

目的:观察阿托伐他汀对体外培养骨髓基质细胞来源的成骨细胞中OPGmRNA/RANKLmRNA表达的影响。方法:小鼠骨髓基质细胞在成骨条件培养基中传代培养,加入不同浓度的阿托伐他汀。通过半定量RT鄄PCR的方法,比较不同浓度药物影响下OPGmRNA和RANKLmRNA表达的变化,评判阿托伐他汀对这两种蛋白表达的影响作用。结果:半定量RT鄄PCR的观察显示在传代培养7天时各组均有OPGmRNA的转录,随着药物浓度的增加,mRNA转录水平逐渐增加,10-6mol/L组和10-7mol/L组明显高于对照组(P<0.05)。RANKLmRNA水平随着药物浓度的增加呈现出下降的现象,10-6mol/L组和10-7mol/L组明显低于对照组。结论:在小鼠骨髓基质细胞来源的成骨细胞中,阿托伐他汀促进了成骨细胞OPG的表达,同时能抑制细胞RANKL的表达。     

IL-4与骨保护素联合抑制聚乙烯磨损颗粒诱导的溶骨效应

目的运用小鼠植骨气囊模型,研究白介素-4(IL-4)与骨保护素(OPG)联合减少骨破坏吸收防治人工关节松动的效应。方法在小鼠背部注入空气形成气囊,取同源小鼠的颅骨植入气囊内。将已制成的气囊模型小鼠分成3组:对照组(气囊注入聚乙烯颗粒及生理盐水);IL-4组(气囊内注入聚乙烯颗粒及IL-4);联合组(气囊内注入聚乙烯颗粒、IL-4及OPG),3周后取囊壁和植入颅骨组织进行HE染色检测炎症反应情况及炎症细胞渗出量;取组织匀浆液应用ELISA方法检测炎性细胞因子(IL-1、TNF)浓度;抗酒石酸酸性磷酸酶染色观察破骨细胞的分化成熟情况;应用扫描电镜检测骨片吸收情况。结果(1)HE染色检测炎症细胞渗出量IL-4组、联合组明显少于对照组(P<0.05)。(2)ELISA法检测炎性细胞因子(IL-1、TNF)浓度IL-4组与联合组均明显少于对照组(P<0.05)。(3)抗酒石酸酸性磷酸酶染色阳性区域与视野面积的百分比IL-4组与联合组明显少于对照组,且联合组较IL-4组染色面积也有显著减少(P<0.05)。(4)应用扫描电镜检测骨片吸收陷窝面积与视野面积的百分比IL-4组与联合组明显少于对照组;且联合组较IL-4组的骨片吸收面积有显著减少。讨论证实IL-4不仅能明显减轻炎症情况,并且能明显减少破骨细胞的激活、骨破坏吸收情况,抑制聚乙烯磨损颗粒所致的骨吸收效应。IL-4与OPG联合应用于小鼠植骨气囊模型中,其抑制骨吸收效应更加明显。