过量氟对大鼠下切牙釉原蛋白表达的影响

目的研究过量氟对大鼠下切牙釉原蛋白表达的影响,探讨氟斑牙的发病机制。方法选择6只Wistar大鼠,随机分成实验组和对照组。实验组每日饲以F-质量浓度为100mg/L的氟化水,对照组饲以蒸馏水,两组均用常规饲料喂养8周。饲养8周后处死大鼠,利用实时定量聚合酶链反应(PCR)观察过量氟对大鼠下切牙釉原蛋白表达的影响。结果实验组大鼠下切牙釉原蛋白的表达低于对照组(P<0.05)。结论过量氟可能通过抑制釉原蛋白的表达来影响釉质发育。     

过量氟对大鼠切牙骨涎蛋白表达的影响

目的:研究过量氟对牙硬组织发育过程中骨涎蛋白(bonesialoprotein,BSP)时空表达的影响,从蛋白水平上探讨氟牙症的发病机制。方法:20只Wistar大鼠随机分为对照组(饮用蒸馏水)和实验组(100mg/LF-)2组。饲养8周后处死动物,通过免疫组织化学染色观察并比较BSP在对照组与实验组大鼠牙胚上皮中的表达,采用计算机图像分析系统对免疫组化染色阳性结果进行计算机图像分析,采用SASv6.12统计软件对2组图像分析结果进行t检验。结果:对照组,各期成釉细胞排列均匀整齐,细胞形态正常,成熟的成釉细胞、成牙本质细胞、成牙骨质细胞中BSP表达为阳性;实验组,大鼠切牙成釉细胞由原有的高柱状变矮,细胞排列成多层,釉基质形成混乱,大鼠牙胚上皮中BSP表达显著低于对照组,P<0.01。结论:氟化物能抑制大鼠牙胚上皮BSP的表达,提示氟可能通过抑制BSP在牙胚发育过程中的表达,从而抑制牙胚上皮细胞(成釉细胞、成牙本质细胞、成牙骨质细胞)的增殖分化及随后的基质合成与分泌,导致氟斑牙的形成。     

过量氟对大鼠切牙釉丛蛋白表达的影响

目的研究过量氟对大鼠切牙发育过程中釉丛蛋白表达的影响,探讨氟斑牙的发病机制。方法选择20只Wistar大鼠,随机分成两组:对照组(蒸馏水组)和实验组(100mg/LF-)。复制大鼠氟斑牙模型。饲养8周处死动物,利用免疫组化和实时荧光定量PCR(Real-TimePCR)方法观察过量氟对大鼠切牙中釉丛蛋白表达的影响。结果免疫组化结果显示釉丛蛋白在分泌前期和分泌期的成釉细胞中呈阳性表达。实验组釉丛蛋白的表达明显弱于对照组,存在显著性差异(P<0.01)。Real-TimePCR结果显示釉丛蛋白mRNA在对照组表达明显高于在实验组表达水平(P<0.01)。结论过量氟可能通过抑制釉丛蛋白的表达,从而影响釉质的矿化,导致釉质发育障碍。     

过量氟诱导成釉细胞钙超载及细胞凋亡的实验研究

目的 研究过量氟对体外培养大鼠成釉细胞内钙超载及细胞凋亡的影响。方法 取大鼠成釉细胞系HAT-7细胞,分别加入不同浓度（0、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4 mmol·L^-1）的氟化钠培养液,培养48 h后,采用Cell Counting Kit 8（CCK-8）试剂盒检测各组细胞的活性,流式细胞术分析氟对细胞凋亡的影响,激光扫描共聚焦显微镜、Western blot试验和实时荧光定量聚合酶链反应技术检测过量氟诱导大鼠成釉细胞内Ca²⁺浓度和钙网蛋白表达的变化。结果 氟化钠浓度高于1.6 mmol·L^-1时,可抑制成釉细胞的活性,成釉细胞内Ca²⁺浓度升高,钙网蛋白表达上调,细胞早期凋亡数量增加,并且随着浓度的增加,细胞凋亡的数量也随之增加。结论 过量氟可引起成釉细胞内钙超载,诱导成釉细胞凋亡。     

过量氟对大鼠切牙发育过程中Smad3表达的影响

目的：研究过量氟对大鼠切牙发育过程中Smad3表达的影响，探讨氟斑牙的发病机制。方法：选择20只Wistar大鼠，随机分成2组：Ⅰ组（蒸馏水组）和Ⅱ组（0．1g／L F^-）。饲养8周处死动物，利用免疫组化染色的方法观察过量氟对大鼠成釉细胞及成牙本质细胞中Smad3表达的影响。结果：免疫组化结果经图像分析显示实验组大鼠切牙成釉细胞及成牙本质细胞中Smad3的表达均低于对照组（P〈0．01），存在显著性差异。结论：过量氟可能通过抑制Smad3的表达来干扰上皮和间充质之间正常的信号转导，进而使釉质的分化发育受到影响。这有可能是氟牙症发生的细胞内机制之一。     

过量氟对大鼠切牙成釉细胞Cbfα1表达的影响

目的:了解过量氟对大鼠切牙核心结合因子(Cbfα1)蛋白表达的影响,从蛋白水平探讨氟斑牙的发病机制.方法:20只Wistar大鼠,随机分为实验组(饮用100mg/L氟化水)和对照组(饮用蒸馏水),饲养8周后,处死大鼠,获取切牙标本,通过免疫组化染色进行观察,比较Cbfα1在2组大鼠切牙成釉细胞中的表达情况,采用Axioplan 2imaging显微图像分析系统和SPSS10.0软件包分别进行图像和数据统计分析.结果:免疫组化结果显示,Cbfα1在分泌期的成釉细胞胞核中明显表达,实验组阳性率(35.28±1.20)%显著高于对照组(14.41±4.07)%,差异有显著性(P＜0.01).结论:过量氟有可能引起Cbfα1蛋白在分泌期成釉细胞中的表达增多,从而在某种程度上影响釉质的矿化和发育,导致釉质发育障碍.     

过量氟对大鼠HAT-7细胞系自噬的影响

目的:研究过量氟对大鼠HAT-7细胞系自噬的影响.方法:取大鼠HAT-7细胞,分别加入不同浓度的氟化钠培养液,培养48 h后,透射电子显微镜检测过量氟对大鼠成釉细胞自噬泡的影响,Western免疫印迹和定量反转录聚合酶链反应技术检测过量氟诱导大鼠成釉细胞内微管相关蛋白轻链(LC3)和Beclin 1表达的变化.选择40只Wistar大鼠,随机分为A、B、C、D 4组,进行免疫组织化学实验,检测饮水氟对大鼠自噬分子表达的影响.采用SPSS 13.0软件包对数据进行统计学分析.结果:实验组自噬泡明显增多;Western免疫印迹及定量反转录聚合酶链反应结果显示,随着氟浓度的增加,HAT-7细胞自噬相关基因LC3和Beclin 1表达增加.回归分析结果显示,氟化钠与LC3及Beclin 1的表达有线性关系;大鼠体内免疫组织化学染色结果显示,实验组LC3以及Beclin 1为棕褐色,呈阳性表达.结论:过量氟诱导大鼠HAT-7细胞系自噬.     

肝素对大鼠下切牙釉原蛋白水平及细胞凋亡的影响

目的建立肝素诱导骨质疏松大鼠模型,观察肝素的应用对大鼠下切牙釉原蛋白水平及其细胞凋亡的影响。方法取24只4周龄清洁级Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为两组,实验组每日于腹部皮下注射肝素1U/g,对照组于相同部位注射等体积0.9%氯化钠溶液。4周后取大鼠右侧股骨测骨密度值。同时取下颌骨,沿正中联合分为两份,一侧颌骨及下切牙脱钙后制作石蜡切片,行釉原蛋白免疫荧光染色;另一侧脱钙后制作石蜡切片,行原位末端标记(TUNEL)染色,观察下切牙细胞的凋亡情况。实验数据采用SPSS17.0统计软件包进行统计学分析。结果实验组大鼠股骨的骨密度值为(0.185±0.006)g/cm2,低于对照组的(0.196±0.011)g/cm2;实验组下切牙釉原蛋白免疫荧光染色强度为(0.0432±0.0043),低于对照组的(0.0570±0.0096);两组骨密度及荧光强度差异均具有统计学意义(P<0.05)。实验组未见细胞凋亡发生,对照组可见个别成牙本质细胞及中间层细胞凋亡阳性着色。结论肝素可诱导大鼠骨质疏松,降低下切牙釉原蛋白表达及抑制细胞凋亡的发生。     

硼氟联合作用对大鼠切牙釉蛋白表达的影响

目的通过观察过量氟、硼以及氟硼联合作用对大鼠切牙釉蛋白表达的影响,初步探讨硼在预防氟斑牙中的作用。方法选择32只Wistar大鼠,随机分为4组。Ⅰ组常规饮用蒸馏水;Ⅱ组饮用含氟化钠质量浓度为220 mg/L的氟化水;Ⅲ组饮用含硼质量浓度为382 mg/L的水;Ⅳ组饮用含氟、硼质量浓度分别为220 mg/L、382 mg/L的水。8周后处死动物,获取切牙标本,利用免疫组织化学法和HE染色观察大鼠切牙成釉细胞和釉蛋白的表达。结果Ⅱ组釉蛋白的表达明显弱于Ⅰ组（P<0.01）,Ⅲ组与Ⅰ组表达差异无统计学意义,Ⅳ组与Ⅰ组表达差异无统计学意义,Ⅳ组与Ⅱ组表达差异有统计学意义（P<0.01）。结论过量氟可抑制釉蛋白的表达,而经硼与氟的联合作用后,釉蛋白表达所受影响降低。硼可降低氟对牙齿的危害性。     

bFGF在氟中毒大鼠切牙牙髓中的表达和意义

目的研究过量氟对大鼠牙髓细胞表达bFGF的影响。方法选择20只Wistar大鼠,随机分为2组I组(对照组)和II组(实验组)。8周后处死动物,利用磨片、HE染色、免疫组化染色技术观察过量氟对大鼠切牙形态及bFGF表达的影响。结果实验组大鼠切牙釉质、牙本质生长线明显,牙本质可见钙质小球,牙髓细胞及髓腔内侧牙本质bFGF表达明显弱于对照组,差异有显著性(P<0.01)。结论过量氟可抑制牙髓细胞表达bFGF,影响牙体硬组织的结构。     

过量氟对大鼠切牙成釉细胞增殖与凋亡的影响

目的　研究氟牙症的发生机制。方法　选择 2 0只Wistar大鼠 ,随机分为 2组 :Ⅰ组 (对照组 )和Ⅱ组 (5 0mg/LF-)。 8周后处死动物 ,利用磨片、HE染色、核仁形成区嗜银染色 (AgNORs)和原位细胞凋亡检测 (TUNEL)技术观察过量氟对大鼠切牙形态及机能的影响。结果　Ⅱ组大鼠切牙釉质生长线明显 ,分泌期成釉细胞嗜伊红颗粒蓄积 ,分泌前期成釉细胞AgNORs颗粒数低于Ⅰ组 ,差异有显著性 (P <0 0 0 1) ,成釉细胞凋亡增多 ,并伴有凋亡现象向分泌期迁移。结论　过量氟可抑制成釉细胞增生 ,促进成釉细胞凋亡 ,为氟牙症发生的一种机制     

过量氟对大鼠切牙碱性成纤维细胞生长因子表达的影响

目的 研究过量氟对大鼠切牙碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）表达的影响，从分子水平探讨氟牙症的发病机制。方法将20只Wistar大鼠按随机数字表法随机分为两组：对照组（饮用蒸馏水）和实验组（饮用100mg／L氟化水），复制氟牙症动物模型，8周末处死动物，获取切牙标本，免疫组化染色观察bFGF在大鼠切牙的表达定位及其在对照组与实验组切牙表达的变化。结果bFGF在分泌期成釉细胞、成牙本质细胞中均呈阳性表达。实验组bFGF的表达明显弱于对照组，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论过量氟可抑制bFGF的表达，从而影响上皮与间充质之间的相互介导作用，导致釉质发育障碍。     

过量氟对鼠牙釉质发育的影响

为了探讨过量氟对鼠牙釉质发育的影响，本研究以大白鼠为实验动物，观察氟中毒后鼠牙造袖器、造釉细胞和釉质的组织形态学变化，并利用生化方法，检测氟中毒后釉质分泌期和成熟期釉质蛋白含量的变化。结果显示分泌期造釉细胞有空泡形成，釉基质钙化不均。分泌期釉质蛋白含量来见明显改变（P＞005）。成熟期釉质蛋白含量增加（P＜0.01）。表明氟中毒对鼠牙釉质造釉细胞形成过程可产生损害性影响。     

过量氟对大鼠切牙基质金属蛋白酶-20及其组织抑制剂表达的影响

目的 研究过量氟对大鼠切牙生长过程中基质金属蛋白酶-20（MMP-20）和基质金属蛋白酶组织抑制剂-2（TIMP-2）表达的影响,探讨氟斑牙的发病机制。方法 选择20只Wistar大鼠,随机分为对照组和给氟组。8 周后处死动物,获取切牙标本,免疫组化染色观察MMP-20和TIMP-2在大鼠切牙中的表达定位和氟对二者表达的影响。结果 MMP-20和TIMP-2 在分泌期成釉细胞、成牙本质细胞以及成釉器均有阳性表达,给氟组MMP-20的表达明显弱于对照组,差异有统计学意义（P<0.01）;TIMP-2在两组的表达无显著性差异（P>0.05）。结论 过量氟可抑制MMP-20的表达, MMP-20和TIMP-2表达失衡,TIMP-2的抑制作用加强,致使釉基质蛋白清除延迟,导致矿化不全和釉质缺损。     

氟对大鼠切牙成釉细胞TGF-β3的影响

目的: 研究氟对大鼠切牙成釉细胞中TGF-β3表达的影响,探讨氟斑牙的发病机制。方法: 选择20只Wistar大鼠,随机分为Ⅰ组（蒸馏水组）和Ⅱ组（100 mg/L F- ）。饲养8周后处死动物,利用H-E染色和免疫组织化学染色方法观察过量氟对大鼠成釉细胞TGF-β3表达的影响。采用SPSS 12.0软件包对数据进行统计学分析。结果: 免疫组织化学结果经图像分析显示,实验组大鼠切牙成釉细胞中TGF-β3的表达均显著低于对照组（P<0.01）,对照组、加氟组的灰度值分别为85.89±7.90和116.76±8.04。结论: 过量氟可能通过抑制TGF-β3的表达而干扰上皮和间充质之间正常的信号转导,进而使釉质的分化受到影响,可能是氟牙症发生的细胞内机制之一。