重楼醇提物与多西紫杉醇对胃癌细胞的体外交互作用研究

目的：探讨重楼醇提物与多西紫杉醇对胃癌细胞的体外交互作用及可能的机理。方法：MTT法检测细胞增殖能力;基于中位效应原则的联合指数法评估重楼醇提物与多西紫杉醇对胃癌细胞系SGC-7901和BGC-823的交互作用;Annexin-Ⅴ-FITC和PI双染色法检测细胞凋亡率;荧光定量RT-PCR法测定化疗相关基因表达水平。结果：重楼醇提物与多西紫杉醇联合使用在两株细胞中均产生了较好的协同抗肿瘤作用,在小于60%抑制率范围内,联合指数（CI）均小于1。凋亡分析提示,联合用药组细胞凋亡率显著高于各单药组;重楼醇提物作用于SGC-7901细胞24 h后,紫杉类药物相关基因β-tublinⅢ和Tau mRNA表达水平分别降至用药前的（0.34±0.09）和（0.52±0.04）倍。结论：重楼醇提物与多西紫杉醇联合使用有较好的协同抗肿瘤作用,可能与两药协同诱导肿瘤细胞凋亡以及重楼醇提物可下调化疗相关基因表达水平有关。     

汉防己甲素逆转肺癌化疗耐药和凋亡抗性的实验研究

目的：研究中药汉防己提取的生物碱汉防己甲素逆转肺癌化疗耐药产生与凋亡发生的机理。方法：实验分对照组（只加培养基）和阿霉素组（ADR组）、汉防己甲素合阿霉素组（Tet／ADR组），后2组采用不同浓度汉防己甲素和阿霉素作用于人肺癌敏感株GLC-82和阿霉素耐药株GLC-82／ADR细胞，通过MTT法检测抗肿瘤药物的细胞毒作用，流武细胞仪检测多药耐药相关蛋白（MRP）表达，碘化丙啶（PI）染色检测细胞凋亡。结果：GLC-82／ADR耐药肺癌细胞株耐药指数（RF）为5．43，说明耐药株肺癌细胞对阿霉素明显耐药；汉防己甲素作用耐药肺癌细胞后其RF降至1．89，说明汉防己甲素可毗逆转GLC-82／ADR耐药肺癌细胞对阿霉素的耐药。化疗耐药肺癌细胞MRP蛋白表达在12h、24h、36h、48h，ADR组与Tet／ADR组比较，差异有非常显著性意义（P〈0．01），说明汉防己甲素可以下调化疗耐药肺癌细胞MRP蛋白表达。化疗耐药肺癌细胞凋亡在6h、12h、18h、24h，Tet／ADR组与ADR组、对照组比较，差异有非常显著性意义（P〈0．01），说明汉防己甲素协同阿霉素增强对化疗耐药肺癌细胞凋亡作用。结论：汉防己甲素可以逆转GLC-82／ADR耐药肺癌细胞对阿霉素的耐药，下调化疗耐药肺癌细胞MRP蛋白表达，协同阿霉素增强对化疗耐药肺癌细胞凋亡作用。     

土鳖虫提取液对人胃低分化腺癌细胞BGC-823的抑制作用

目的研究土鳖虫体外对人胃低分化腺癌BGC-823细胞抗肿瘤活性。方法采用MTT法测定了土鳖虫水提物和醇提物对人胃低分化腺癌BGC-823细胞增殖的抑制作用,采用生长曲线测定法检测土鳖虫醇提物对体外培养肿瘤细胞的细胞毒作用。结果土鳖虫水提物不能抑制体外培养的肿瘤细胞,而醇提物能显著抑制人胃低分化腺癌BGC-823细胞增殖,药物作用48h时抑制率最高,并有较好的剂量依赖关系。结论体外土鳖虫水提物没有抗肿瘤活性,醇提物有较强的抗肿瘤作用,值得进一步研究其抑制机理。     

常用14种抗肿瘤中药体外抑瘤效果比较

目的:比较14种常用抗肿瘤中药的体外抑瘤效果。方法:采用四甲基偶氮唑兰(MTT)法分别测定了14种常用抗肿瘤中药的水提液、醇提液对人胃癌细胞株AGS、人胃癌细胞株BGC-823体外增殖反应的影响。结果:该14种中药中有10味体外对人胃癌细胞株AGS、人胃癌细胞株BGC-823体外增殖均有阳性抑制作用;且该10味中药醇提液体外对人胃癌细胞株AGS、人胃癌细胞株BGC-823体外增殖抑制作用优于水提液;有2味中药醇提浸膏对人胃癌细胞株AGS、人胃癌细胞株BGC-823体外增殖抑制作用均为强阳性;而其余2味中药对2株细胞抑制率为阴性。结论:14种中药中10味体外对胃癌细胞抑制率大于50%,但提取工艺对抑瘤效果存在较大影响,应尽量采用醇提工艺提取。     

三种贯叶连翘组药用植物醇提物对小鼠的抗抑郁作用

目的：对贯叶连翘组药用植物的抗抑郁作用进行研究，为筛选新的药用品种以及对其品质评价提供药效学依据。方法：采用小鼠尾悬挂试验，小鼠强迫游泳试验抑郁模型对三种贯叶连翘组药用植物醇提物的抗抑郁作用进行研究。结果：在小鼠尾悬挂试验，小鼠强迫游泳试验中，元宝草和扬子小连翘醇提物物与贯叶连翘一样，可以对抗小鼠的失望行为，使实验动物的绝望时间（不动时间）缩短，具有抗抑郁作用，但是贯叶连翘醇提物的抗抑郁作用明显强于扬子小连翘。结论：三种川产贯叶连翘组药用植物醇提物在行为绝望动物模型上有明显的抗抑郁作用。     

解毒宣透汤水提物和醇提物化学指标及药效的比较研究

目的：评价复方中药解毒宣透汤水提和醇提对化学成分指标含量以及对抗炎和抑菌实验结果的影响，考察化学成分指标与药效的相关性，探讨复方有效组分。方法：分别采用水提和醇提工艺制备解毒宣透汤提取物，用RP-LPLC法测定连翘苷、绿原酸和黄芩苷含量，并考察提取的抗炎和抑菌作用。结果：水提物和醇提物均具有抗炎和抑菌作用，且水提物的作用略强于醇提物，而水提物中连翘苷和黄芩苷含量低于醇提物，与复方的抗炎和抑菌作用呈非正性相关。结论：解毒宣透汤以水提为佳，复方的提取工艺筛选以药效为指标较妥。     

汉防己甲素联合紫杉醇逆转脑胶质瘤C6/MDR细胞耐药及其机制研究

目的评价汉防己甲素联合紫杉醇(paclitaxel,PTX)逆转耐药型脑胶质瘤(C6/MDR)细胞多药耐药的可行性,并探讨可能的耐药逆转机制。方法通过非耐药型脑胶质瘤C6和耐药型脑胶质瘤C6/MDR细胞系作对比,以体外细胞毒性为指标,采用MTT法分别考察PTX、汉防己甲素、PTX+汉防己甲素抑制C6和C6/MDR细胞增殖作用差异;以细胞摄取能力为指标,借助HPLC和流式细胞仪技术分别测定PTX和荧光探针罗丹明123(R123)在2种细胞内的含量,评价汉防己甲素促C6/MDR细胞摄取PTX和R123的能力;以细胞凋亡率为指标,采用Annexin V-PE/7-AAD一步染色法定量PTX、汉防己甲素、PTX+汉防己甲素干预后的2种细胞凋亡率;采用P-糖蛋白(P-gp)抗体结合试剂盒和Pgp-Glo TM分析系统分别考察汉防己甲素对C6/MDR细胞P-gp表达以及P-gp ATP酶活性的影响。结果汉防己甲素+PTX对C6/MDR细胞的半数抑制浓度(IC50,以PTX浓度计)为(5.88±0.43)nmol/L;在10μmol/L汉防己甲素的干预下,C6/MDR细胞内的PTX和R123累积量相比PTX组分别提高9.4倍和12.3倍,凋亡率相应提高了2.3倍;这种汉防己甲素介导的耐药逆转机制可能与降低C6/MDR细胞P-gp表达、刺激细胞内P-gp ATP酶活性有关。结论汉防己甲素联合紫杉醇在体外具有逆转C6/MDR细胞耐药的潜力。     

重楼抗瘤方与奥沙利铂或多西紫杉醇对胃癌细胞的体外交互作用研究

目的：探讨重楼抗瘤方与奥沙利铂或多西紫杉醇对胃癌细胞的体外交互作用及其对化疗相关基因表达和细胞凋亡的影响。方法：MTT法检测细胞增殖能力;基于中位效应原则的联合指数法评估重楼抗瘤方与各化疗药物对胃癌细胞系SGC-7901和BGC-823的交互作用;Annexin-Ⅴ-FITC和PI双染色法检测细胞凋亡率;荧光定量RT-PCR法测定化疗相关基因表达水平。结果：重楼抗瘤方与各化疗药联合使用对胃癌细胞的增殖抑制作用优于各单药组。低浓度范围内,联合用药组产生较好的协同抗肿瘤作用,联合指数〈1。凋亡分析显示联合用药组细胞凋亡率显著高于各单药组。重楼抗瘤方作用24h后,SGC-7901和BGC-823细胞中化疗药物相关基因ERCC1（Excision repair cross-complementation1）、β-tublinⅢ和Tau mRNA表达水平均显著下调。结论：重楼抗瘤方与奥沙利铂或多西紫杉醇在低浓度范围内有较好的体外协同抗肿瘤作用,可能与该复方与两化疗药协同诱导肿瘤细胞凋亡以及下调化疗相关基因表达水平有关。     

复方芸香片的体外抑菌作用实验研究

目的：实验研究复方芸香片的体外抑菌作用。方法：采用抑菌实验,观察复方芸香片及其组成的水提物、醇提物对所选用的8种细菌的最低抑菌浓度和相对抑菌浓度作用程度。结果：醇提的复方芸香片对化脓性链球菌、藤黄入叠球菌、金黄色葡萄球菌、B群链球菌、肺炎链球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌和沙门氏菌,均有同等的较弱的抑菌作用。复方芸香药材醇提物对上述细菌的抑菌作用大为增强,其中最强的是前两种,其次是金黄色葡萄球菌和B群链球菌。芸香醇提物对前4种菌的抑菌作用也较强。H对上述细菌也有一定抑制作用。结论：复方芸香片对一般细菌有抑菌作用。     

蜂毒素与化疗药物的协同作用及其可能机制的实验研究

目的分别观察蜂毒素联合5-氟尿嘧啶（5．Fu）、顺铂（DDP）、多西紫杉醇（TXT）抗人胃癌细胞株BGC-823增殖的效果,并初步探讨其作用机制。方法运用中效原理进行统计分析,绘制5-Fu、DDP和TXT单药及分别与蜂毒素联合用药对该肿瘤细胞生长的剂量一效应曲线,确定联合用药时对肿瘤细胞的效应（FA）与合用指数（CI）的关系,判定药物间的相互作用。运用实时荧光定量PCR法检测蜂毒素分别联合5．Fu、DDP和TXT作用人胃癌细胞株BGC．823后对化疗药物相关基因表达的改变。结果（1）在一定的浓度范围内蜂毒素单药与3种化疗药物单药均对BGC-823细胞显示出了明显的生长抑制效果。（2）蜂毒素联合5-Fu作用于BGC-823细胞时,FA在0．35～0．75时,CI〈1。蜂毒素联合DDP作用于BGC-823细胞时,FA在O．55左右,CI=1;FA〈0．55,CI〈1。蜂毒素联合TXT作用于BGC-823细胞时,整个区间内均可见CI〈1。（3）蜂毒素分别与3种化疗药物联合作用于细胞后,化疗药物相关基因胸苷酸合成酶（thymidylatesynthetase,TS）、切除修复交叉互补基因1（excisionrepaircross—complementinggene1,ERCCl）、乳腺癌易感基因1（breastcancersusceptibilitygene1,BRCAl）、β微管蛋白Ⅲ（β—tubu-nⅢ,TUBB3）和微管相关蛋白tau（rrlicrotubule—associatedproteintau,MAPT）的表达明显低于空白对照组（P〈0．01）。结论蜂毒素具有增强5．Fu、DDP、T）（T对胃癌细胞BGC-823生长抑制效果的协同作用,其作用机制可能与下调化疗相关基因的表达有关。     

重楼总皂苷提取分离及其对人胃癌细胞BGC823的抑制作用

目的：初步探索重楼总皂苷的提取分离方法,并通过比较重楼总皂苷与重楼醇提物、重楼皂苷Ⅰ对人胃癌细胞BGC823生长抑制作用评价重楼总皂苷提取分离工艺和临床应用价值。方法：采用热回流提取法得到重楼醇提物,再经大孔吸附树脂分离得到重楼总皂苷。采用噻唑蓝染色法（MTT法）和集落形成实验,比较重楼总皂苷与重楼醇提物、重楼皂苷Ⅰ对人胃癌BGC823细胞增殖和集落形成的影响。结果：重楼总皂苷、重楼醇提物、重楼皂苷Ⅰ作用于人胃癌BGC823细胞48h的半数抑制浓度（IC50）分别为（8.63±0.30）、（2.61±0.03）、（1.97±0.01）μg/mL。在3.13、6.25、12.5μg/mL浓度下重楼醇提物组集落形成抑制率为30.84%、53.27%、100%,而重楼总皂苷组在各浓度范围内均无集落形成。结论：重楼总皂苷对人胃癌BGC823细胞生长抑制作用显著优于重楼醇提物,稍弱于重楼皂苷Ⅰ,但二者IC50数值接近且均较低,从而肯定重楼总皂苷提取分离工艺和临床应用潜能。     

花生壳醇提物镇咳、祛痰及平喘作用研究

对花生壳醇提物和木犀草素进行镇咳、祛痰及平喘作用的比较研究。方法:浓氨水引咳法、小鼠酚红祛痰法、豚鼠离体气管条法,观察花生壳醇提物和木犀草素的镇咳、祛痰及平喘作用。结果:花生壳醇提物能延长小鼠咳嗽潜伏期和减少咳嗽次数,而木犀草素无明显作用;花生壳醇提物及木犀草素能明显增加小鼠呼吸道酚红的排泌量;花生壳醇提物对乙酰胆碱及磷酸组胺致痉的豚鼠离体气管平滑肌有明显的解痉作用,且作用优于木犀草素。结论:花生壳醇提物有明显的镇咳、祛痰及平喘作用。     

五指毛桃不同提取物补益作用的实验研究

目的:比较五指毛桃水提取物和醇提物的补益作用.方法:通过抗应激、免疫功能及贫血实验观察五指毛桃不同提取物的补益作用;通过抗疲劳实验、耐常压缺氧实验、耐脑缺血缺氧实验考察对抗应激作用的影响;通过对巨噬细胞吞噬功能、血清溶血素水平和皮肤迟发性过敏实验观察五指毛桃不同提取物对免疫调节功能的影响;通过失血性贫血和环磷酰胺致贫血实验观察对补血作用的影响.结果:五指毛桃水提物和醇提物均可以延长小鼠负重游泳、耐常压缺氧及耐脑缺血缺氧的时间;提高巨噬细胞吞噬功能、血清溶血素水平;增强皮肤迟发型过敏反应;改善贫血小鼠的红细胞和血红蛋白水平,但五指毛桃醇提物各方面补益作用均优于水提物.结论:五指毛桃醇提物具有有较好的补益作用.     

桦褐孔菌醇提物对几种消化系统恶性肿瘤的影响

目的:研究桦褐孔菌(Inonotus obliquus)醇提物对消化道几种恶性肿瘤增殖的影响,探讨桦褐孔菌醇提物对这几种恶性肿瘤的作用机制。方法:从体内、体外两方面讨论桦褐孔菌(IO)醇提物抑制肿瘤细胞增殖的有效性。体内实验采用鼠系的胃癌细胞接种于Balc小鼠造模,按桦褐孔菌醇提物高、中、低剂量给小鼠灌胃,经过7 d,10 d后,解剖小鼠取肿瘤,测算IO醇提物的抑瘤率。体外实验采用MTT法及免疫荧光观察IO醇提物对胃癌BGC-823,胃癌MGC-803,肝癌Hep G-2,胰腺癌Bxpc-3细胞的增殖和凋亡的影响。结果:体内试验可见,IO醇提物对荷瘤小鼠具有明显的抑制肿瘤增长的作用。体外试验可见,IO醇提物对四种消化系统恶性肿瘤均有抑制作用,对胃癌BGC-823细胞有促凋亡作用。结论:IO醇提物具有明确的抗消化道肿瘤作用,可抑制BGC-823、MGC-803、Hep G-2和Bxpc-3肿瘤细胞的增殖,促进胃癌BGC-823细胞凋亡,且具有一定的时间-浓度依赖性。     

蜂房醇提物逆转铜绿假单胞菌耐药性的研究

目的：探讨蜂房醇提物对耐药铜绿假单胞菌的体外抗菌效果及其逆转细菌耐药的机理。方法：检测蜂房醇提物对耐药铜绿假单胞菌的最小抑菌浓度（MIC）,采用PCR方法分别检测低于一个MIC浓度梯度的蜂房提取物作用前、作用第1、5、10天耐药铜绿假单胞菌耐药基因（TEM、SHV、DHA、CTX-M-1、CTX-M-2、CTX-M-9、OXA-2、OXA-10、oprD2）的表达,同时采用RT-PCR方法检测阳性耐药基因mRNA的表达情况。结果：蜂房醇提物对耐药铜绿假单胞菌的最小抑菌浓度为1：4,耐药铜绿假单胞菌的TEM和OXA-10基因在蜂房作用前后均为阳性,其余耐药基因在蜂房醇提物作用前后均为阴性,蜂房醇提物作用前及作用1天后,耐药铜绿假单胞菌的TEM和OXA-10的mRNA为阳性,而作用5天后,TEM和OXA-10的mRNA检测为阴性。结论：耐药铜绿假单胞菌携带多种耐药基因,蜂房醇提物可逆转耐药铜绿假单胞菌的耐药性,其逆转机理可能与其抑制耐药基因表达有关。     

重楼醇提物对三种神经胶质瘤细胞株的细胞毒性研究

目的:通过重楼醇提物对三种人神经胶质瘤细胞株(U251、U87、T98G)进行细胞毒性检测,观察重楼醇提物的抗肿瘤活性。方法:乙醇冷浸法对重楼饮片进行提取,采用聚酰胺柱层析分离划段获得重楼醇提物的不同部位,通过MTT法对所得部位进行细胞毒性检测。结果:重楼醇提物中有3个分离组分作用于人神经胶质瘤细胞IC50值小于10μg/m L,对神经胶质瘤细胞株表现出明显的细胞毒性作用。结论:重楼醇提物中存在抑制神经胶质瘤细胞株增殖的物质,值得进一步开展相关研究。     

重楼对小鼠急性肝损伤保护作用的研究

目的:探讨重楼醇提物和水提物对四氯化碳(CCl4)所致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法:小鼠随机分为9组,分别每天给予不同剂量的药物:重楼醇提物高、中、低剂量组(3.9、2.6、1.3 g/kg)、水提组的高、中、低剂量组(7.2、4.8、2.4g/kg)和联苯双酯(0.15 g/kg),正常组和模型组给予生理盐水。7d后,除正常对照组外各组小鼠腹腔注射0.1%CCl4制备急性肝损伤模型,16h后取血检测血清ALT、AST活性;测定肝组织匀浆中MDA含量和SOD、GSH的活性及观察肝脏病理学变化。结果:醇提组高剂量(3.9g/kg)和水提物高、中、低剂量(7.2、4.8、2.4g/kg)组均能降低CCl4所致急性肝损伤小鼠血清ALT、AST活性(P<0.01,P<0.05),降低肝脏MDA的含量、增强SOD和GSH活力(P<0.01,P<0.05),并能明显改善肝组织的病理学损伤。结论:重楼水提物对CCl4所致小鼠急性肝损伤具有较好保护作用。     

冬凌草醇提物体外肝肾细胞毒性的MTT法测定

目的用MTT法评价冬凌草醇提物及水提物对HL-7702细胞和HEK-293细胞的毒性。方法采用MTT法进行研究。结果 HL-7702细胞分别经柴胡皂苷d、冬凌草醇提物和水提物处理24,48 h后,柴胡皂苷d的IC50分别为3.42,1.98μg/ml,冬凌草醇提物的IC50分别为295.167,78.349μg/ml,冬凌草水提物的IC50分别为4 357.310,2 134.194μg/ml。HEK-293细胞分别经马兜铃酸I、冬凌草醇提物和水提物处理24,48 h后,测得马兜铃酸I的IC50为34.708,15.274μg/ml,冬凌草醇提物的IC50为224.544,106.292μg/ml,冬凌草水提物的IC50为2 252.899,1 153.267μg/ml。结论冬凌草醇提物和水提物的体外肝肾细胞毒性均不明显。     

钐、钇配合物对人胃癌细胞的作用及其机制研究

 目的 为了深入研究稀土配合物的抗肿瘤活性,将稀土配合物开发成抗癌新药,本实验对钐、钇配合物抑制胃癌细胞 BGC-823 细胞增殖的活性 作用及其机制作了探讨 。 方法 磺酰罗丹明 B （ SRB ）法测定钇、钐配合物及硝酸盐对人胃癌细胞株 BGC-83 增殖的影响;观察稀土配合物诱导 BGC-823 细胞凋亡,采用流式细胞仪检测稀土配合物对 BGC-823 细胞周期的影响,运用彗星微凝胶单细胞电泳观察其对 BGC-823 细胞 DNA 剪切作用。 结果 钇、钐配合物明显抑制 BGC-823 的增殖, 并能诱导 BGC-823 凋亡;经不同浓度钐、钇配合物处理 BGC-823 细胞的细胞周期发生明显变化并 损伤细胞的 DNA 。 结论 稀土配合物的体外抗肿瘤活性可能是在 5-Fu 配体的细胞毒性基础上,稀土离子发挥了协同作用; 钐、钇稀土配合物可能通过将胃癌 BGC-823 细胞阻滞于 G₀/G₁ 期或直接切断肿瘤细胞 DNA 诱导细胞凋亡,从而发挥其抗肿瘤活性作用。     

南赤瓟对Caski细胞的影响以及Survivin与Bcl-2蛋白家族基因表达关系研究

目的:研究南赤瓟醇提物对Caski细胞抑制作用及可能的作用机制。方法:用不同浓度的南赤瓟醇提物(0.0625、0.125、0.25、0.50、1.00、2.00mg/ml)作用Caski细胞24h后,采用MTT法检测不同浓度的南赤瓟醇提物对Caski细胞增殖率的影响;用0.25、0.50和1.00mg/ml的南赤瓟醇提物和紫杉醇4×10-5mg/ml作用Caski细胞24h后,MTT法检测其对细胞活力的影响,流式细胞术和Hoechst 33258染色检测其对细胞凋亡的影响,实时定量PCR和Western blot检测Survivin、Bcl-2、Bax的mRNA和蛋白表达,并计算Bcl-2与Bax的比值。结果:南赤瓟醇提物对Caski细胞的生长抑制作用呈明显的剂量依赖性;南赤瓟醇提物(0.25、0.50和1.00mg/ml)和紫杉醇(4×10-5mg/ml)处理能显著抑制Caski细胞增殖,促进其凋亡;上调Bax mRNA和蛋白表达,下调Survivin、Bcl-2 mRNA和蛋白表达及Bcl-2与Bax的比值。结论:南赤瓟醇提物可显著抑制Caski细胞增殖,促进细胞凋亡,其作用机制可能与其上调Caski细胞Bax mRNA和蛋白表达,下调Survivin、Bcl-2 mRNA和蛋白表达及Bcl-2与Bax的比值有关。