自制抗肿瘤珊瑚羟基磷灰石人工骨的制备及性能评价

[摘要] 目的 研制复合抗肿瘤自制珊瑚羟基磷灰石人工骨并评价其理化性能。方法 通过水热反应制备珊瑚羟基磷灰石人工骨,通过真空冷冻干燥等处理将顺铂载入形成复合抗肿瘤自制珊瑚羟基磷灰石人工骨 (composite coralline hydroxyapatite,CCHA),扫描电镜及能谱分析等分析复合人工骨断面的孔隙、顺铂的含量及分布情况,将复合人工骨浸入模拟体液取得不同时间浸提液及植入大鼠肌袋内,利用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)检测不同时期的体外缓释试验浸提液、体内缓释试验肌肉组织及血液中顺铂的浓度。结果 CCHA的孔隙结构未改变,孔隙内顺铂分布均匀,利用高效液相色谱法检测体外浸提液、动物静脉血及组织匀浆液中的顺铂浓度结果示顺铂和内标液的保留时间分别为4.6 min和7.5 min,两者分离效果良好。体外缓释液中前2周顺铂出现快速释放,体外浸提液中顺铂的浓度极高(2周时浓度为753.01±64.89?g/mL);至12周其顺铂浓度仍达到(134.54±9.88)?g/mL。动物植入CCHA后局部较长时间内可维持较高顺铂浓度,随着时间的延长及与人工骨的距离增加局部的顺铂浓度呈下降趋势。结论 CCHA具有良好的缓释效能,可在局部维持一定时间高药物浓度。     

体外培养骨髓基质细胞在珊瑚羟磷灰石上生长的表面形态观察

目的 观察体外培养的骨髓基质细胞与珊瑚羟基磷灰石复合后的生长特性,论证珊瑚羟磷灰石作为骨组织工程学载体材料的可行性.方法 分离纯化的狗骨髓基质细胞与珊瑚羟基磷灰石复合体体外培养,分别在相差显微镜下、扫描电镜下观察细胞的表面形态结构.结果 骨髓基质细胞在珊瑚羟基磷灰石上贴附生长良好,功能正常.结论 骨髓基质细胞在珊瑚羟基磷灰石上生长增殖良好,珊瑚羟磷灰石是骨组织工程载体材料的可靠选择.     

磷酸钙骨水泥/顺铂复合体体外药物缓释及体内抑瘤和修复骨缺损的实验研究

目的:寻找磷酸钙骨水泥/顺铂复合体修复肿瘤性骨缺损的最佳质量构成比。方法:通过原子吸收分光光度法对通过混合－模压法制备的不同质量比构成的磷酸钙骨水泥/顺铂复合体体外缓释液中顺铂浓度进行测定,寻找最合适的磷酸钙骨水泥、顺铂质量构成比,在此基础上制备骨缺损和移植肿瘤动物模型和动物体内进行骨缺损的修复实验和体内抑瘤实验。结果:含0.1%~0.2%顺铂的磷酸钙骨水泥能够修复兔骨缺损,同时又能对肿瘤细胞产生抑制杀伤作用。结论:含0.1%~0.2%顺铂的磷酸钙骨水泥能够消灭残存肿瘤细胞,且最终不影响骨修复的进程。     

T引导下经皮穿刺缓释顺铂瘤体内植入治疗非小细胞肺癌

目的 :观察和评价缓释顺铂瘤体内植入治疗非小细胞肺癌 (NSCLC )的耐受性、安全性和疗效 .方法 :非小细胞肺癌患者 13例 ,CT引导下经皮穿刺瘤体内植入缓释顺铂 .结果 :病灶明显缩小 3例 ,稳定 8例 ,进展 3例 .结论 :缓释顺铂瘤体内植入治疗期非小细胞肺癌有较好的耐受性、安全性和疗效 .     

CT引导下经皮穿刺缓释顺铂瘤体内植入治疗非小细胞肺癌

目的:观察和评价缓释顺铂瘤体内植入治疗非小细胞肺癌(NSCLC )的耐受性、安全性和疗效. 方法:非小细胞肺癌患者13例,CT引导下经皮穿刺瘤体内植入缓释顺铂. 结果:病灶明显缩小3例,稳定8例,进展3例. 结论:缓释顺铂瘤体内植入治疗期非小细胞肺癌有较好的耐受性、安全性和疗效.     

注射式复合纳米人工骨的生物相容性和降解性能的实验研究

目的:观察新型可注射式纳米羟基磷灰石(n-HA)/半水硫酸钙(CSH)人工骨体外细胞毒性和家兔体内埋植后组织反应以及降解性能,并探讨其可能的生物降解机制.方法:对纯CSH、纯n-HA、10%n-HA CSH、20%n-HA CSH和40%n-HA CSH复合材料共5种材料进行体外MTT细胞毒性试验.将20%n-HA CSH人工骨植入家兔肌肉和右侧股骨钻孔缺损内,分别在术后5 d及2、3、4、5、6、8、12周观察埋植后家兔的一般情况、复合材料的改变情况、肌肉组织病理和透射电镜表现以及骨组织病理和影像学变化.结果:培养细胞在5种材料浸提液中各自的平均细胞增殖率均在77%以上,细胞毒性均为0～1级.20%n-HA CSH复合材料在动物体内埋植后无全身反应,体质量均稳步增加.埋植区肌肉组织大体观察发现,术后5 d至8周复合材料从表面-主体-核心以分层方式降解,术后8周时复合材料基本降解,肌肉未出现纤维化、钙化或异位骨化.H-E染色可见降解过程初期散乱的人工骨材料为大量炎性细胞浸润、包绕,逐渐被分解为碎片,成纤维细胞逐渐转化为纤维细胞并包绕吞噬前期分解的材料碎片.电镜显示该降解由组织细胞吞噬反应介导,而且吞噬细胞并未出现胞膜损害和细胞器异常.右侧股骨骨组织影像学和病理学检查发现术后6周见缺损处松质骨内明显新生骨形成,8～12周人工骨完全降解,缺损处已具有正常骨小梁形态.结论:20%n-HA CSH复合材料人工骨无明显体外细胞毒性,生物相容性良好;动物体内降解可能是由组织细胞吞噬反应介导以分层方式降解,骨内8～12周完全降解,速度符合骨再生需要,具备很好的成骨活性.     

大鼠脂肪间充质干细胞复合羟基磷灰石成骨分化的实验研究

目的 脂肪间充质干细胞可与羟基磷灰石复合向成骨细胞分化,检测两种羟基磷灰石复合细胞成骨能力的差别.方法 通过扫描电镜观察脂肪间充质干细胞与普通羟基磷灰石和纳米级羟基磷灰石复合情况.检测细胞与载体复合后,表达碱性磷酸酶和骨钙素的情况.结果 在将AMSCs细胞种植于两种羟基磷灰石载体表面,向成骨方向诱导4周后,通过扫描电镜观察,羟基磷灰石载体表面有细胞存在.在两种不同的羟基磷灰石(HA)ALP的表达差异有显著性.骨钙素的检测发现,在纳米级羟基磷灰石上的表达要高于普通级羟基磷灰石.结论 ①脂肪间充质干细胞(AMSCs)可在裁体上复合生长.②AMSCs与HA载体复合后,可表达成骨细胞的特征.③诱导成骨后,在纳米级羟基磷灰石上复合表达碱性磷酸酶的量高于普通级羟基磷灰石.     

纳米羟基磷灰石根管充填材料的基础研究

目的：通过对纳米羟基磷灰石根管充填材料与传统根管充填材料（充填用复方麝香草酚散甲醛甲酚复合制剂）进行细胞毒性、根管密合性的对比研究,评价纳米羟基磷灰石材料的细胞毒性、根管壁密合度．方法：①细胞毒性实验：体外培养成骨细胞,添加纳米羟基磷灰石材料浸提液,并以培养液为阴性对照组,充填用复方麝香草酚散甲醛甲酚复合糊剂为阳性对照组．根据ISO标准,采用MTT法进行体外细胞毒实验,测试不同浸提时间的材料浸提液与成骨细胞接触1,3,5,7d的A值,以评价其细胞毒性．②根管密合性实验：将10颗新鲜拔除的单根牙随机分成两组,每组牙齿按常规方法进行根管预备．实验组为400g/L纳米羟基磷灰石糊剂充填,对照组为充填用复方麝香草酚散甲醛甲酚复合糊剂充填．拍X线片以保证各组中实验离体牙牙根均完善充填,充分硬固后,进行微渗漏试验．改良葡萄糖检测微渗漏分析装置进行根管密合度实验,30d后结果由葡萄糖定量分析仪测定．结果：①细胞毒性实验：实验组与阴性对照组无统计学差异,实验组与阳性对照组有统计学差异（P〈0．05）．②根管密合性试验：对照组葡萄糖浓度明显高于实验组,有统计学差异（P〈0．05）．结论：纳米羟基磷灰石根管充填材料体外细胞毒性实验阴性,有良好的生物相容性．纳米羟基磷灰石根管充填材料根管壁密合度明显优于充填用复方麝香草酚散甲醛甲酚复合糊剂．     

载银珊瑚羟基磷灰石的载银量及其细胞相容性的实验研究

目的测定载银珊瑚羟基磷灰石(Ag+-CHA)人工骨材料的载银量并观察其与成骨细胞的相容性。方法将自制的珊瑚羟基磷灰石浸泡于相应浓度硝酸银溶液中制得不同浓度的载银人工骨材料,用等离子体质谱分析方法检测各载银材料的载银量;并将小鼠胚胎成骨细胞株(MC3T3-E1)种植于人工骨材料上,用MTT法、倒置相差显微镜、激光共聚焦等观察细胞在材料中的生长情况及其生物相容性。结果 10-2、10-3、5×10-4、10-4、8×10-5、5×10-5 mol/L浓度载银珊瑚羟基磷灰石材料的载银量分别为(4127.67±47.35)、(167.90±11.00)、(83.42±4.51)、(30.20±2.32)、(22.39±4.09)、(15.11±0.55)μg/g;MTT结果表明8×10-5、10-5 mol/LAg+-CHA及其他非载银材料对细胞无明显毒性,可诱导细胞迅速增长。镜下观察发现上述材料上的细胞形态正常,贴壁生长良好。结论低浓度载银珊瑚羟基磷灰石在诱导MC3T3-E1细胞的增殖方面性能优越,有良好的生物相容性,可作为抗感染骨替代材料。     

羟基磷灰石/聚合物支架修复骨缺损研究进展

羟基磷灰石/聚合物复合支架具有良好的机械性能、降解性、成骨活性、缓释功能，将其作为细胞生长因子、细胞和药物载体用于骨修复成为了骨组织工程的研究热点之一。文章主要就近几年羟基磷灰石/聚合物支架负载生长因子、细胞和药物在骨损伤或骨缺损治疗中的研究进展进行综述。     

成人成骨细胞与珊瑚羟基磷灰石的体外生物相容性

目的：研究成人骨髓成骨细胞与珊瑚羟基磷灰石（carolline hydroxyapatite,CHA)在体外培养条件下的生物相容性。方法：抽取健康成人骨髓组织，置于含体积分数为10％胎牛血清的DMEM培养基中培养，传代后改用含地塞米松、β-甘油磷酸钠和维生素C的条件培养基培养，分为CHA复合细胞组和单纯细胞组，不同时间用倒置相关显微镜，HE染色光镜及扫描电镜观察，MTT法进行细胞增殖测定，并进行细胞微量蛋白含量和碱性磷酸酶的定量检测，结果：成人骨髓成骨细胞体外培养时复合或不复合CHA均生长良好，表现出典型成骨细胞的形态特征和生物学特性，CHA利于细胞的贴附，生长与增殖，并对细胞的功能无不良影响，结论：CHA是较理想的骨组织工程支架材料，成骨细胞复合CHA用于骨缺损的修复，具有广阔的临床应用前景。     

野生型p53基因对胰腺癌细胞的抑制作用

目的：观察人类野生型p53（wtp53）基因对人胰腺癌细胞的抑制作用。方法：用逆转录病毒为载体将外源性wtp53基因导入人胰腺癌细胞系PC－2，通过体外及小鼠体内实验研究转入基因的表达及对肿瘤的抑制作用，结果：p53在转染细胞PC－2／p53中表达水平提高，外源性wtp53基因的导入和表达能使PC－2细胞的生长速率减低，软琼脂集落形成能力下降，G0＋G1期细胞比例增加，凋亡指数升高，裸鼠体内成瘤能力明显下降，结论：逆转录病毒载体介导的外源性野生型P53能抑制人胰腺癌细胞生长。     

一种新型含硒化合物诱导PC-3前列腺癌细胞凋亡及其体内抑瘤作用的研究

目的　探讨新型含硒化合物BBSKE(1,2 [二 (1,2 苯并异硒唑 3(2H) 酮 ) ]乙烷 )对PC 3前列腺癌细胞的增殖及凋亡的影响 ,观察其对小鼠前列腺癌的体内抑瘤作用。方法　培养PC 3前列腺癌细胞 ,用MTT法检测了不同浓度的BBSKE对其增殖的影响 ,用荧光显微镜、DNA电泳和流式细胞仪观察BBSKE对细胞凋亡的诱导作用 ,并检测BBSKE对PC 3细胞bcl 2和bax蛋白表达水平及半胱氨蛋白水解酶 3活性的影响。用TRAMP C2小鼠前列腺癌细胞皮下注射C5 7BL/ 6小鼠 ,建立小鼠前列腺癌模型 ,观察BBSKE在小鼠体内的抗前列腺癌作用。结果　BBSKE可以显著抑制PC 3细胞的体外增殖 ,其 4 8h的IC50 值为 17 90 μmol/L ,而阳性对照组顺铂为 15 0 μmol/L。同时BBSKE可以诱导PC 3细胞凋亡 ,2 0 μmol/L的BBSKE作用PC 3细胞 4 8h凋亡发生率达 2 6 32 % ,显著高于未经处理的对照组的 1 75 % (P <0 0 1)。细胞中bcl 2表达减低 ,bax表达无明显变化 ,半胱氨蛋白水解酶 3活性显著增高。动物实验也表明其对小鼠体内前列腺癌的生长有抑制作用 ,抑瘤率达 4 0 % ,顺铂对照组为 4 8%。结论　新型含硒化合物BBSKE可以抑制PC 3细胞增殖并促进其凋亡 ,其作用可能是通过降低细胞内的bcl 2 ,增加半胱氨蛋白水解酶 3活性而实现的 ;在前列腺癌的动物模     

成人成骨细胞与珊瑚羟基磷灰石的体外生物相容性

目的研究成人骨髓成骨细胞与珊瑚羟基磷灰石(carollinehydroxyapatite,CHA)在体外培养条件下的生物相容性。方法抽取健康成人骨髓组织,置于含体积分数为10%胎牛血清的DMEM培养基中培养,传代后改用含地塞米松β-甘油磷酸钠和维生素C的条件培养基培养,分为CHA复合细胞组和单纯细胞组,不同时间用倒置相差显微镜、HE染色光镜及扫描电镜观察。MTT法进行细胞增殖测定,并进行细胞微量蛋白含量和碱性磷酸酶的定量检测。结果成人骨髓成骨细胞体外培养时复合或不复合CHA均生长良好,表现出典型成骨细胞的形态特征和生物学特性,CHA利于细胞的贴附、生长与增殖,并对细胞的功能无不良影响。结论CHA是较理想的骨组织工程支架材料,成骨细胞复合CHA用于骨缺损的修复,具有广阔的临床应用前景。     

双氢青蒿素对前列腺癌裸鼠种植瘤生长及VEGF表达的影响

目的：研究双氢青蒿素（DHA）对前列腺癌PC-3细胞裸鼠种植瘤的抑制作用及对VEGF表达的影响,并探讨其作用机制.方法：采用人前列腺癌PC-3细胞建立裸鼠种植瘤模型,20只模型鼠随机分为对照组;二甲基亚砜（DMSO）溶剂组（DMSO1mL/kg）;DHA实验1组（DHA100μmol/kg）;DHA实验2组（DHA200μmol/kg）.经13d干预后,计算抑瘤率.采用光镜及电镜观察肿瘤组织形态学变化;采用免疫组织化学法检测VEGF的表达水平;采用体视学分析肿瘤微血管密度（MVD）.结果：DHA实验1,2组抑瘤率分别为63.186%,69.221%.光镜及电镜下观察可见DHA实验1组和实验2组肿瘤组织内凋亡细胞明显增多,出现典型的凋亡小体.免疫组化结果显示VEGF表达DHA实验1组和实验2组均低于对照组及DMSO溶剂组（P〈0.05）,但2个DHA实验组组间相比较差异无统计学意义;DMSO溶剂组与对照组组间相比较差异也无统计学意义.2个DHA实验组MVD均低于对照组（P〈0.05）,但2个DHA实验组之间相比较差异无统计学意义;DMSO溶剂组与对照组组间相比较差异也无统计学意义.结论：DHA具有较强的抗肿瘤作用,其机制与下调凋亡相关基因VEGF有关.     

丹皮酚协同顺铂对人卵巢癌细胞A2780s的增殖抑制及促凋亡作用

目的:探讨丹皮酚(Pae)单药及联合顺铂(CDDP)对人卵巢癌细胞A2780s的增殖抑制,凋亡诱导作用及对细胞周期分布的影响.方法:以不同浓度的Pae、CDDP和两药联合作用于人卵巢癌细胞A2780s,采用MTT法测定药物对体外培养的人卵巢癌细胞A2780s增殖的抑制作用,应用两药相互作用指数(CDI)进行联合用药分析...     

珊瑚羟基磷灰石结合重组合人胰岛素样生长因子-Ⅰ修复兔骨缺损的实验研究

目的　探讨珊瑚羟基磷灰石 (CHA)结合重组合人胰岛素样生长因子 1(rhIGF I)修复骨缺损的效果 ,为临床、科研应用提供实验依据。方法　以CHA作为rhIGF I的可吸附性载体 ,制备成复合人工骨 ,将其植入兔尺骨中段 10mm骨缺损处 ,以单纯CHA组 ,自体骨移植组和空白组作为对照 ,在术后 2 ,4 ,8,12周 ,进行大体解剖、X线摄片、病理组织切片、生物力学测试等观察 ,研究各组骨愈合 ,血管化情况及力学强度。结果　在 2 ,4 ,8周病理组织切片及X线摄片显示骨缺损修复程度 ,CHA/rhIGF I组明显优于自体移植骨组 ,优于单纯CHA组 ,而空白组骨缺损处被纤维组织及肌组织等填充。生物力学测试显示术后 12周CHA/rhIGF I组抗扭转强度明显优于自体骨移植组。结论　CHA与rhIGF I结合有明显促进骨缺损修复的作用 ,强于自体骨移植及单纯CHA移植。成骨方式包括骨传导、骨诱导 ,二者协同 ,可用于骨缺损修复。     

西妥昔单抗联合铂类化疗对人喉鳞癌Hep-2细胞裸鼠移植瘤COX-2及MMP-7的影响

目的  探讨西妥昔单抗联合铂类化疗对人喉鳞癌Hep-2细胞裸鼠移植瘤环氧化酶-2（COX-2）及基质金属蛋白酶-7（MMP-7）的影响。方法  选择BALB/c裸鼠24只为研究对象,均复制人喉鳞癌Hep-2细胞裸鼠移植瘤模型,随机分为西妥昔单抗组、顺铂组、西妥昔单抗联合顺铂组及对照组,各6只。对照组腹腔注射0.9%氯化钠溶液0.2 ml,西妥昔单抗组腹腔注射1 036 μg/ml西妥昔单抗注射液,顺铂组腹腔注射3μg/ml顺铂注射液,西妥昔单抗联合顺铂组腹腔注射1 036 μg/ml西妥昔单抗注射液和3 μg/ml顺铂注射液,连续4周后,脱颈处理裸鼠。比较瘤体生长情况、COX-2与MMP-7表达及信使核糖核酸（mRNA）表达。结果  西妥昔单抗组、顺铂组、西妥昔单抗联合顺铂组瘤体体积及瘤重均低于对照组（P <0.05）,西妥昔单抗联合顺铂组瘤体体积、瘤重低于西妥昔单抗组与顺铂组,抑瘤率高于西妥昔单抗组及顺铂组（P <0.05）;西妥昔单抗组、顺铂组、西妥昔单抗联合顺铂组裸鼠肿瘤组织COX-2、MMP-7及mRNA表达均低于对照组（P <0.05）,西妥昔单抗联合顺铂组裸鼠肿瘤组织COX-2、MMP-7表达及mRNA表达低于西妥昔单抗组、顺铂组（P <0.05）。结论  西妥昔单抗联合铂类化疗有助于抑制喉鳞癌Hep-2细胞裸鼠移植瘤增殖生长,可能与抑制肿瘤组织COX-2与MMP-7表达有关。

     

黄芪多糖与顺铂联合对人胃癌SGC-7901细胞增殖抑制作用的研究

目的：研究黄芪多糖和顺铂联合应用对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响。方法：采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法观察黄芪多糖和顺铂对胃癌SGC-7901细胞的抑制作用。结果：黄芪多糖能抑制人胃癌SGC-7901细胞株的增殖,并呈浓度及时间依赖性,黄芪多糖和顺铂联合应用应用对胃癌细胞的抑制作用显著高于单用黄芪多糖、顺铂组。结论：黄芪多糖在体外对胃癌细胞株SGC-7901细胞的增殖有明显的抑制作用,黄芪多糖和顺铂联合应用效果强于单独用药组。