尿酸对人脐静脉内皮细胞增殖及PAI-1分泌的影响

目的探讨尿酸（UA）对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）增殖及纤溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）分泌的影响,以阐明其在动脉粥样硬化发生中的作用。方法用MTT比色法观察不同浓度UA（0、2、4、8、16mg／dL）作用24h对HUVECs增殖的影响;用ELISA方法评价不同浓度UA（0、2、4、8、16mg／dL）作用HUVECs 24h及8mg／da UA作用HUVECs 1、3、6、12、24h对细胞培养液中PAI-1的影响。结果UA呈剂量依赖性抑制内皮细胞增殖,8、16mg／dL UA组与对照组（0mg／dLUA）比较均有统计学意义（P〈0．01）。UA诱导HUVECs分泌PAI-1呈浓度依赖性增加,8、16mg／dL UA组与对照组比较均有统计学意义（P〈0．01）;UA诱导HUVECs分泌PAI-1亦呈时间依赖性,与1h比较,3、6、12、24h均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。结论UA抑制HUVECs增殖,诱导HUVECs分泌PAI-1,这可能与高尿酸血症致动脉粥样硬化作用机制有关。     

切应力对内皮细胞一氧化氮合酶及细胞凋亡的影响

目的探讨切应力作用对体外培养的牛胸主动脉内皮细胞一氧化氮合酶(eNOS)蛋白表达和细胞凋亡的影响。方法体外培养牛胸主动脉内皮细胞，采用平行平板流动腔装置模拟体内血流切应力(5dynes／cm^2和25dynes/cm^2)作用于内皮细胞12h，采用Western blot分析和DNA片段凝胶电泳，观察不同切应力对体外培养的血管内皮细胞eNOS蛋白表达和细胞凋亡的影响。结果静息状态下，体外培养的牛胸主动脉内皮细胞呈多角形“铺路石”状排列，形态大小均匀。不同切应力(5，25dyne／cm^2)作用12h后，血管内皮细胞形态学未见明显改变。但与静止状态细胞的基础水平相比，Western blot分析发现，牛胸主动脉血管内皮细胞eNOS蛋白表达在低切应力时降低；低切应力还可诱导血管内皮细胞发生凋亡，凝胶电泳检测出现明显的DNA梯形带；但在高切应力(25dynes／cm^2)作用下，内皮细胞eNOS表达水平与未处理组接近，而且DNA片段凝胶电泳也未见明显凋亡现象。结论低切应力可降低内皮细胞eNOS蛋白表达和诱导内皮细胞凋亡，提示低切应力可能是导致血管内皮细胞eNOS表达降低和细胞凋亡的重要因素。     

血必净注射液对创伤后内皮细胞合成血管生成素2及血管内皮钙黏蛋白的影响

【目的】观察细胞外热休克蛋白70(e HSP70)模拟创伤刺激内皮细胞后血管生成素2(Ang-2)及血管内皮钙黏蛋白(VEcadherin)的变化,探讨血必净注射液对血管内皮的保护作用。【方法】培养人脐静脉内皮细胞,检测e HSP70刺激0、2、4、8、16、32 h后细胞Ang-2、VE-cadherin的m RNA和蛋白表达量,找出最佳刺激时间,然后设空白对照组、e HSP70组(终浓度为0.1μg/m L)、血必净组(终浓度为50 mg/m L)、血必净+e HSP70组共4个实验组,检测最佳时间点各组上述指标改变。【结果】e HSP70刺激后Ang-2的m RNA及蛋白表达量增加并于4 h达到高峰,而VE-cadherin的m RNA和蛋白表达量经e HSP70刺激后降低,并于4 h达到最低值。各实验组干预4 h后,e HSP70组与血必净+e HSP70组细胞Ang-2的m RNA及蛋白表达量较空白对照组显著增高(P0.05),而血必净+e HSP70组的表达量较e HSP70组显著下降(P0.05);与空白对照组相比较,e HSP70组VE-cadherin的m RNA及蛋白的表达量显著降低(P0.05),而血必净+e HSP70组及血必净组上述指标表达量均显著上升(P0.05),其中尤以血必净组的表达增高最为显著(P0.05)。【结论】血必净注射液通过调控e HSP70对Ang-2与VE-cadherin的表达影响,对创伤刺激的血管内皮细胞具有一定的保护作用。     

不同切肝量的大鼠血清HSP70变化及其意义

目的 探讨大鼠血清HSP70在评价手术创伤程度中的意义.方法 建立大鼠不同切肝量的手术创伤模型,310只雄性SD大鼠随机分为正常组、轻度切肝创伤组、中度切肝创伤组、重度切肝创伤组及谷氨酰胺干预组,并予术后2、8、12、24和48 h检测大鼠血清中HSP70、皮质醇的浓度和肝功能的变化.结果 手术创伤后2 h血清HSP70表达开始增加,12 h达到高峰,48 h仍高于正常水平.血清皮质醇于术后2 h迅速增加,8 h达到高峰,24 h仍有较高浓度,48 h略高于正常.谷氨酰胺干预后,HSP70在各时相点均增高,皮质醇浓度均有所下降.中、重度切肝手术创伤组术后的ALT、TB均出现异常,经谷氨酰胺干预后两指标均有所改善.结论 手术创伤可以引起血清HSP70和皮质醇浓度的明显升高,随着创伤程度的增加而显著升高.血清中检测HSP70的表达可以作为判断手术创伤程度的指标.术前诱导HSP70的高表达有利于增强时机体的保护作用.     

层流低切应力刺激对人脐静脉血管内皮细胞Toll样受体mRNA表达的影响

目的用RT-PCR和Northern杂交技术,评价层流低切应力刺激对人脐静脉血管内皮细胞Toll样受体(TLR-4)信号受体表达的影响。方法用未刺激和经42μN/cm2处理1 h的脐静脉血管内皮细胞提取总RNA,采用RT-PCR和Northern杂交技术观察切应力刺激1 h人脐静脉血管内皮细胞TLR-2和TLR-4 mRNA的表达情况。结果RT-PCR和Northern杂交均显示,层流低切应力刺激1 h后血管内皮细胞TLR-4表达增强,TLR-2几乎无变化。结论层流低切应力可引起人脐静脉内皮细胞TLR-4mRNA表达增加,提示炎症信号受体TLR-4可能介导层流切应力诱导的血管内皮细胞某些效应基因的表达。     

HSP70在内毒素休克大鼠胰腺的表达及其意义

目的:观察内毒素休克大鼠胰腺的病理改变及HSP70的表达情况.方法:33只健康Wistar大鼠随机分为对照组、内毒素小刑量组(5 mg/kg)及大剂量组(10 mg/kg),于处理后1 h及处死时采血测血糖及血清淀粉酶,处死后取胰腺免疫组化法测定HSP70及INs的表达.结果:内毒素休克大鼠血糖及血清淀粉酶正常(P＞0.05);胰腺组织HSP70表达增强,处理组与对照组比较强阳性表达率明显增高(P＜0.01);小剂量组的强阳性率又较大剂量组显著增强(P＜0.01).3组的Ins表达率无显著差异(P＞0.05).结论:内毒素可诱导胰腺HSP70的表达增强,从而使胰腺产生内毒素耐受.     

杏丁注射液对血管内皮细胞HSP 72表达的影响

目的:观察杏丁注射液对紫外线照射后血管内皮细胞热休克蛋白72(heat shock protein 72,HSP 72)表达的影响.方法:采用体外培养的猪主动脉血管内皮细胞,以含浓度分别为0.1、0.5、1.0、5.0、10 mg/ml的杏丁注射液的培养基培养72 h后,用紫外线分别照射细胞30 min,以Western-blot方法检测内皮细胞中的HSP 72表达.结果:正常情况下检测不到HSP 72表达,紫外线照射后血管内皮细胞HSP 72有较强表达,杏丁注射液在0.1 mg/ml浓度即有很明显的促进HSP 72表达的作用,1.0 mg/ml浓度时其作用达到高峰,再增加浓度并不能增加HSP 72表达.结论:杏丁注射液能通过促进HSP 72表达而保护血管内皮细胞在应激状态下免受损伤,这可能是其防治心脑血管疾病的重要机制之一.     

热休克蛋白70在百草枯诱导的肺部炎性反应中的表达

目的 探讨百草枯中毒致急性肺损伤中热休克蛋白70(HSP70)的表达.方法 72只健康Wistar大鼠随机平均分成3组,分别腹腔注射生理盐水(A组)、20 mg/kg百草枯(B组)和40 mg/kg百草枯(C组).分别于1,2,3,6,12和24 h留取标本,应用免疫组织化学染色、Western blot方法测定肺组织中HSP70的蛋白表达.结果 B组和C组大鼠肺组织发生急性肺损伤.B组大鼠2 h后HSP70表达与A组相比开始增强,6 h为表达高峰,12 h表达减少,24 h表达水平与A组相当.C组1 h后HSP70表达与A组相比明显增强,3 h达到高峰,24 h后与A组水平一致.结论 百草枯诱导的急性肺损伤可引起支气管、细支气管和肺泡上皮细胞HSP70应激性表达,提示HSP70对肺损伤起保护作用.     

葛根粗提物及葛根素对乙醇所致海马细胞HSP70表达的影响

目的 研究葛根粗提物和葛根素对乙醇引起的胎鼠海马细胞氧化损伤是否具有相同的保护作用。方法 海马细胞的培养取材于孕18d的ICR胎鼠,采用RT－PCR和Western印迹方法观察不同剂量的葛根粗提物及葛根素对乙醇引起的胎鼠海马细胞HSP70 mRNA及蛋白质表达的变化。结果 15mg／L葛根粗提物和10mg／L葛根素均可部分拮抗50-350mmol／L不同浓度乙醇引起的胎鼠海马细胞HSP70表达量的升高。结论 葛根粗提物和葛根素均可降低乙醇所致海马细胞HSP70表达量的升高,证实两者具有相同的抗氧化作用。     

缺血预处理诱导心肌缺血再灌注中HSP70mRNA表达的研究

目的探讨缺血预处理(IPC)对心肌缺血再灌注过程中心肌细胞HSP70mRNA表达的影响。方法钳夹犬的左冠状动脉前降支，造成心肌缺血再灌注模型，应用核酸分子杂交技术观察IPC组与对照组子缺血前及缺血1h后行再灌注达1、2、4h的HSP70mRNA表达水平。并在透射电镜下观察两组中再灌注1h心肌组织超微结构的变化。结果缺血前IPC组HSP70mRNA水平较对照组明显升高(P＜0.05)；缺血再灌注达1h、2h时，两组HSP70mRNA水平有继续增高的趋势，但IPC组较对照组有显著性差异(P＜0.05)；再灌注达4h时，两组HSP70mRNA水平均下降，并接近对照组缺血前水平(P＞0.05)。电镜观察显示，IPC组心肌细胞损伤较对照组明显减轻。IPC能够诱导心肌细胞中HSP70mRNA早期迅速表达，并在缺血再灌注的一定时间内呈表达增高的趋势。结论HSP70可能作为IPC发挥心肌保护作用的一种介质，为进一步开发和利用IPC的心肌保护作用提供理论依据。     

梯度切应力对血管内皮细胞增殖、迁移及Connexin43表达的影响

目的:研究流体切应力空间梯度和均匀切应力对血管内皮细胞(Ecs)增殖、迁移和对Connexin43表达的影响,为阐明切应力诱导支架内再狭窄分子机制提供一些实验依据。方法:将脐静脉内皮细胞置于平行平板流动腔系统,分别施加11dyn/cm2的均匀切应力(矩形组)和15～6.6dyn/cm2范围、梯度分别为1.5 dyn/cm3和3 dyn/cm3的切应力,加载时间为6 h、12 h、24 h,以静态条件下培养的Ecs为对照组(静止组)。检测梯度切应力对Ecs增殖、迁移能力的影响及免疫印迹法(Western Blotting)检测6 h、12 h和24 h的定量表达情况。结果:①梯度切应力受力组的EC在受力6 h后进入S期与G2+M期的细胞明显多于静止组与矩形受力组(P<0.05)。②同静止组和矩形受力组相比,切应力梯度组ECs 24 h的迁移(68±15vs35±4vs33±7,P<0.01,n=9)能力显著提高。③免疫印迹结果显示:同矩形受力和静止组相比,Ecs受切应力梯度作用受力6 h开始Connexin43表达水平就显著增高(P<0.01,P<0.05),且这种较高的表达水平延续至24 h。结论:切应力通过上调Con-nexin43表达促进了Ecs增殖、迁移,提示connexin信号通路参与了切应力条件下Ecs增殖、迁移过程的信号转导。     

流场对细胞黏附及其后内皮细胞VE-cadherin表达的影响

目的：探讨不同流场对THP-1单核细胞与ECV304内皮细胞黏附的影响及细胞黏附后内皮细胞VE-cadherin表达及分布。方法：不同流场作用单层内皮细胞及单核细胞6h,观察不同流场下单核细胞与内皮细胞黏附;用W estern蛋白印迹法检测黏附后VE-cadherin的表达,用免疫细胞化学方法在激光共聚焦显微镜下观察VE-cadherin蛋白在内皮细胞中的分布变化。结果：不同流场作用单层内皮细胞及单核细胞6 h,发现低剪切力层流组与高剪切力层流组黏附的单核细胞均数分别为59.8/视野及3/视野,低剪切力紊流组与低剪切力层流组黏附的单核细胞均数分别为125/视野及61/视野,低剪切力紊流下单核细胞黏附数高于低剪切力层流及高剪切力层流,且在低剪切力紊流组中有大量单核细胞成簇黏附于内皮细胞上;单核细胞与内皮细胞共育0、1、2、4 h后,VE-cadherin蛋白的表达量在各组细胞间无差异;0 h组VE-cadherin着色集中于内皮细胞周边即细胞与细胞之间,1h,2h,4h时VE-cadherin着色不再集中于细胞周边而是分散到整个内皮细胞膜。结论：低剪切力紊流环境下,单核细胞与内皮细胞的黏附增加且形成了较多的成簇黏附,细胞黏附后内皮细胞膜上VE-cadherin的分布随之改变。     

拘束冷应激对大鼠肾脏热休克蛋白表达和血清皮质醇含量的动态影响

目的：研究拘束冷应激对大鼠肾脏组织热休克蛋白（heat shock protein 70,HSP70）表达和血清中皮质醇（Cortisol,CORT）含量的动态影响及可能的机制。方法：选取50日龄清洁级大鼠77只,随机分为7组,即0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5和3.0 h。采用拘束冷应激法,应激相应时间后,用免疫组织化学方法观察大鼠肾脏组织HSP70的表达,并检测血清中CORT含量。结果：血清中的CORT浓度在1.5 h呈现最高值,其余各时点变化不明显。光镜下可见HSP70在肾小球毛细血管内皮细胞的胞核及肾小管上皮细胞的胞核和胞浆中均有表达。肾脏中HSP70的表达首先呈增加的趋势,1.5～2.5 h HSP70持续高表达（P〈0.01）,之后下降（P〈0.05）。结论：适当强度的拘束冷应激能诱导肾脏组织中HSP70的合成,并且随着时间的延长而增加,但过度的拘束冷应激则可能降低或阻断肾脏HSP70的表达。     

谷氨酰胺增强氧化应激时肺微血管内皮细胞热休克蛋白70的表达

目的研究谷氨酰胺（Gln）对氧化应激状态下体外培养肺微血管内皮细胞（pulmonary microvascular endothelial cells,PMVEC）热休克蛋白（HSP）70表达的影响。方法采用体外培养Wistar大鼠PMVEC,分为阳性对照组（G组）、生理盐水组（PS组）、谷氨酰胺组（Gln组）、过氧化氢加生理盐水组（H₂O₂+PS组）和过氧化氢加谷氨酰胺组（H₂O₂+Gln组）。Western blotting检测PMVEC HSP70的表达情况,分别记录平均灰度值。结果与PS组（9.05±1.51）相比,Gln组（40.28±10.19）和H₂O₂+PS组（43.89±10.32）PMVEC HSP70表达分别增高4.5倍和5倍（P＜0.01）;与H₂O₂+PS组相比,H₂O₂+Gln组（65.59±14.53）HSP70表达进一步增高,约为PS组的7倍,接近G组（70.56±12.23）表达水平。结论谷氨酰胺可增强氧化应激状态下体外培养肺微血管内皮细胞HSP70表达。     

不同损伤条件下热休克蛋白27在人晶状体上皮细胞中的表达

目的 观察不同损伤条件下热休克蛋白27( HSP27)在人晶状体上皮细胞系SRA01中的表达情况.方法 体外培养人晶状体上皮细胞系SRA01,在添加香烟烟雾凝聚物(CSC,25 mg/mL)或过氧化氢(H202,50 mmol/L)条件下培养30 min后,恢复至正常培养条件.分别于处理0,2,4,6,16,24 h时,采用免疫细胞化学、RT-PCR法检测细胞中HSP27的表达情况.结果 在生理和应激情况下,人晶状体上皮细胞内均有HSP27的表达.应激损伤后4h,HSP27 mRNA和蛋白的表达明显增加,8h达最高峰,24 h仍维持在较高水平.CSC组细胞HSP27的表达较过氧化损伤组弱(P＜0.05).结论 体外培养的人晶状体上皮细胞中存在HSP27的表达.不同损伤应激可诱导HSP27的表达增加,HSP27可能通过对抗应激作用保护晶状体上皮细胞.     

演习人员外周血淋巴细胞热休克蛋白70的表达及相关因素分析

目的观察军事演习与热休克蛋白70表达的关系,并分析影响演习人员热休克蛋白（heat shock protein 70,HSP70）表达的因素。方法某次演习期间,选取参演官兵137人为演习组,观摩演习官兵50名为对照组。问卷调查一般情况和心理应激状况,进行身体测量和血乳酸测定,采用Western blotting法检测外周血淋巴细胞中HSP70的表达水平。组间比较采用t检验,采用多元线性回归分析考察相关影响因素。结果与对照组比较,演习组外周血淋巴细胞HSP70水平显著增加（0.39±0.06vs0.60±0.09）（P〈0.01）,这种表达与年龄、受教育程度、家庭人口、吸烟、血乳酸和心理应激状况自评得分相关（P〈0.05,P〈0.01）,与体质量指数（body mass index,BMI）、收缩压、白细胞计数（WBC）、红细胞计数（RBC）、血红蛋白（HGB）等无明显相关（P均〉0.05）;多元线性回归分析显示血乳酸、心理应激状况和受教育程度是影响演习人员HSP70表达的最显著的因素。结论演习人员外周血淋巴细胞HSP70表达水平升高,这种升高与血乳酸、心理应激状况自评得分和受教育程度等相关。     

七氟醚和缺氧预适应诱导乳鼠心肌细胞HSP—70表达的改变

目的：探讨七氟醚预适应和缺氧预适应对乳鼠心肌细胞热休克蛋白70表达的影响。方法：第2代培养心肌细胞随机分为正常对照组(C组)、缺氧/复氧组(A／R组)、缺氧预适应组(IP组)和七氟醚预适应组(S组)，每组均缺氧2h，复氧48h。分别取复氧0，1，12，24，36和48h的细胞，用免疫组化染色检测HSP70表达并进行图象分析。结果：在各个时间点，S组和IP组间的HSP70表达均显著高于A／R组和C组(P＜0．01)，A／R组的HSP70表达略高于C组，S组和IP组间的HSP70表达差异无显著性(P＞0．05)。随着复氧时间的延长，S组和IP组间的HSP70表达从1h开始增加，24h表达最强，与1h相比差异具有显著性(P＜0．05)。结论：七氟醚预处理和缺氧预处理均可诱导乳鼠心肌细胞HSP70在延迟相呈高表达，提示HSP70参与了七氟醚预适应和缺氧预适应的延迟保护相。