葛根粗提物及葛根素对乙醇所致海马细胞HSP70表达的影响

目的 研究葛根粗提物和葛根素对乙醇引起的胎鼠海马细胞氧化损伤是否具有相同的保护作用。方法 海马细胞的培养取材于孕18d的ICR胎鼠,采用RT－PCR和Western印迹方法观察不同剂量的葛根粗提物及葛根素对乙醇引起的胎鼠海马细胞HSP70 mRNA及蛋白质表达的变化。结果 15mg／L葛根粗提物和10mg／L葛根素均可部分拮抗50-350mmol／L不同浓度乙醇引起的胎鼠海马细胞HSP70表达量的升高。结论 葛根粗提物和葛根素均可降低乙醇所致海马细胞HSP70表达量的升高,证实两者具有相同的抗氧化作用。     

流体切应力对内皮细胞的作用

与血流有关的机械作用力在对血管健康状况的准确控制、动脉结构的调节和重建、动脉粥样硬化发生的部位等方面都起到很重要的作用.而这些作用主要都是通过血液流动过程中产生的切应力对内皮的作用而发生的.通过内皮对血液动力的转导和传递导致内皮细胞对流体切应力(Fluid Shear Stress:FSS)发生生物物理的、生化的和基因调控水平的反应.     

HSP27和HSP70mRNA在大肠癌中表达的临床意义

目的：探讨HSP27和HSP70mRNA在大肠癌中表达的临床意义。方法：取大肠癌标本77例，采用免疫组织化学方法检测HSP27的表达状况，从中选取36例手术标本．采用核酸原位杂交技术（ISH）检测HSP70mRNA的表达。结果：HSP27和HSP70mRNA在大肠癌中的阳性率分别为40．3％和66．9％．HSP27和HSP70mRNA均与大肠癌的分化程度相关．与发生部位、浸润深度及淋巴结转移无明显相关性。结论：检测HSP27和HSP70mRNA可作为大肠癌患者预后的一个重要指标。     

HSP70 siRNA对宫颈癌HeLa细胞HSP70表达及细胞增殖与凋亡的影响

目的通过体外实验观察HSP70的小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对宫颈癌HeLa细胞株增殖及凋亡的影响,探讨HSP70在HeLa细胞增殖和凋亡中的功能。方法针对HSP70基因设计siRNA序列,克隆到空载体pTZU6+1中,转化DH5α菌株,提取质粒,进行酶切鉴定和测序分析。在脂质体2000的介导下转染HeLa细胞,同时转染空载体为阴性对照及不加任何试剂的空白对照。转染48h后,应用半定量RT-PCR,Westernblot检测HeLa细胞HSP70mRNA及蛋白的表达情况;MTT法检测HeLa细胞的生长抑制率;AO/EB染色法观察HeLa细胞形态学变化;流式细胞术检测HeLa细胞的凋亡率和细胞周期分布情况。结果与对照组相比,转染pHSP70-siRNA组HSP70的mRNA及蛋白表达均明显下降(P<0.01),表明Phsp70-siRNA质粒转染能有效降低HSP70的表达;细胞生长抑制率明显增高(P<0.05),且在48h时细胞抑制率达到最大;在荧光显微镜下观察到HeLa细胞出现凋亡形态;流式细胞术结果显示pHSP70-siRNA组细胞凋亡率显著高于对照组,且G0/...     

HSP70基因静脉注射对严重烧伤大鼠肠粘膜保护作用的实验研究

目的 为严重烧伤后肠粘膜损伤的防治提供可行性的基因治疗途径。方法 大鼠静脉注射含HSP70基因的重组腺病毒载体，通过严重烧伤后肠粘膜病理形态学改变、损伤指数统计及血清中乳酸脱氢酶含量的变化观察基因转染后保护效应。结果 静脉转染HSP70基因的大鼠烧伤后肠粘膜组织病理改变较单纯烧伤组减轻，损伤指数明显降低，血清中乳酸脱氢酶含量明显下降。结论 大鼠静脉注射含HSP70基因的重组腺病毒载体可保护严重烧伤后肠粘膜的缺血缺氧性损伤。为严重烧伤早期缺血缺氧性损伤的防治提供可行性的基因治疗途径。     

不同条件对大鼠脑胶质瘤C6细胞HSP70表达的诱导

目的　探索和建立 SD大鼠胶质瘤细胞 (C6 ) HSP70蛋白表达最佳诱导条件。　方法　用 MTT法观察不同热休克条件和 /或药物诱导下 C6细胞生存率 ;用 FCM法检测 C6细胞膜 HSP70蛋白的表达。　结果　 (1) C6细胞在 4 2 ,4 3℃热休克 0～ 12 h的过程中 ,其生存率无明显影响。各种实验用药物 ,只要加上热休克 4 3℃ 2 h,对C6细胞的生存率的影响较单种药物同浓度要明显。 (2 ) C6细胞经 4 3℃热休克 1,2 ,4 ,6 ,8,10 ,12 ,14 ,16 ,2 0 ,2 4 h后 ,其胞膜 HSP70蛋白表达率均较对照组 (平均 4 .72 % )显著增高 (P<0 .0 5 ) ,其中 12 h表达率 (89.15 % )为最高 ,榄香烯 +热休克组又较其他各组高。　结论　一定条件下的热休克及某些药物可诱导 C6细胞膜 HSP70蛋白的表达 ,其中单因素以 4 3℃热休克 12 h表达率为最高 ,多因素以榄香烯 +43℃热休克 2 h表达率为最高     

血清中HSP70定量检测方法的建立

目的　建立一种定量检测血清中 HSP70的酶联免疫吸附法 .方法　通过双夹心 EL ISA法对人重组 HSP70倍比稀释液进行检测 ,建立标准曲线 .将待测样品的吸光度 (A)值与标准曲线比较 ,通过换算可估计样品中 HSP70的含量 .结果　 HSP70在 0～ 2 0 mg· L- 1范围内呈良好反应曲线 ,当HSP70的含量低于 8mg· L- 1 ,变异系数可在 8%以下 .该法检测限理论上可达 30μg· L- 1 .结论　该法较为简便和准确 ,可作为血清或其它体液中 HSP70定量检测的一种方法 .     

杏丁注射液对血管内皮细胞HSP 72表达的影响

目的:观察杏丁注射液对紫外线照射后血管内皮细胞热休克蛋白72(heat shock protein 72,HSP 72)表达的影响.方法:采用体外培养的猪主动脉血管内皮细胞,以含浓度分别为0.1、0.5、1.0、5.0、10 mg/ml的杏丁注射液的培养基培养72 h后,用紫外线分别照射细胞30 min,以Western-blot方法检测内皮细胞中的HSP 72表达.结果:正常情况下检测不到HSP 72表达,紫外线照射后血管内皮细胞HSP 72有较强表达,杏丁注射液在0.1 mg/ml浓度即有很明显的促进HSP 72表达的作用,1.0 mg/ml浓度时其作用达到高峰,再增加浓度并不能增加HSP 72表达.结论:杏丁注射液能通过促进HSP 72表达而保护血管内皮细胞在应激状态下免受损伤,这可能是其防治心脑血管疾病的重要机制之一.     

肾综合征出血热患者外周血循环内皮细胞数量变化及HSP70的表达

目的探讨肾综合征出血热(HFRS)患者外周血循环内皮细胞(CEC)的数量变化及热休克蛋白70（HSP70）表达的意义。方法54例HFRS患者按病情分为轻型20例,中型20例,重型及危重型14例,另取20例健康者作为对照。每例均按病期采血,采用Percoll密度梯度离心法分离内皮细胞后,应用流式细胞技术检测CEC数量及CEC中HSP70的表达;分析不同病期、不同临床类型HFRS患者CEC、HSP70变化的规律。结果在不同病期的HFRS患者中,CEC计数及HSP70的表达在发热期已升高,在低血压期和少尿期持续高水平,至多尿期及恢复期逐渐降低;在不同临床类型的HFRS患者中,随病情加重,CEC数量及HSP70的表达亦相应增高,在重型和危重型患者中达到高峰。与健康对照组相比,不同病期、不同临床类型的HFRS患者CEC数量及HSP70表达差异有统计学意义(P＜0.05)。结论HFRS患者血CEC数量和CEC中HSP70表达均增高,其增高的程度与病期和临床类型有关。     

不同切肝量对大鼠肝脏HSP 70表达的影响

目的探讨大鼠肝脏HSP70在评价手术创伤程度中的意义。方法建立不同肝切量的大鼠创伤模型,160只健康雄性SD大鼠随机分成正常对照组及轻度、中度、重度创伤组,采用western blotting方法,动态观察各创伤组术后2、8、12、24、48 h肝组织中HSP70的表达情况。结果各创伤组伤后HSP70的表达迅速增加,8 h达到峰值后逐渐下降,48 h降至正常水平,随着肝切量的增多这种变化更加明显。结论手术创伤后肝组织HSP70表达升高,于8 h达到峰值,提示HSP70可能是创伤后早期参与肝细胞损伤机制启动的一个重要因素。随着肝切量的增加,HSP70的表达增高,提示HSP70的表达可作为判断肝脏手术创伤程度的一个指标。     

流体切应力作用于间充质干细胞对其内皮分化后细胞间黏附因子1表达的影响

目的探讨流体切应力作用于成体骨髓间充质干细胞（mesenchymalstemcells,MSCs）后,其定向内皮诱导所得细胞的细胞间黏附因子1（intercellularadhesionmolecule-1,ICAM-1）的表达变化。方法体外培养大鼠骨髓MSCs,于流室系统中加载不同强度的流体切应力后,将其向内皮细胞系诱导,以荧光实时定量RT-PCR检测所得细胞ICAM-1的mRNA表达水平,以流式细胞仪检测ICAM-1蛋白表达水平,并进一步观察细胞传代后ICAM-1mRNA及蛋白表达水平变化。结果大鼠MSCs经过流动加载后,定向内皮诱导所得细胞的ICAM-1mRNA及蛋白表达水平均较静态对照组有所升高（P〈0.05）,但当细胞传代后,ICAM-1蛋白水平回落至对照组水平（P〉0.05）,而mRNA表达水平继续升高。结论流体切应力能增加MSCs来源的内皮细胞黏附因子的表达,证实了血流动力学因素在动脉粥样硬化发病机制中所起的重要作用。     

层流切应力通过miRNAs抑制内皮细胞增殖

血管内皮细胞功能与心血管疾病发生及发展关系密切,血管内层流剪切应力由于血流层流与血管壁摩擦产生,可减少内皮细胞炎症发生及抑制内皮细胞增殖。微RNA(miRNA)是一系列高度保守非编码家族性小RNA,可在基因转录后水平调节目标信使RNA(mRNA)基因表达,参与调控血管内皮细胞功能。目前认为剪切应力可通过调控miRNA表达,从而发挥对血管内皮细胞功能调节作用。其中层流切应力可上调miR-19A、miR-101等发挥影响细胞周期进而抑制内皮细胞增殖已得到证实。     

HSP70、HSP90在肾细胞癌中的表达及其临床意义

目的 分析HSPT0、HSP90在肾细胞癌组织中表达的意义.方法 用免疫组化S-P法检测32例肾细胞癌组织标本中HSP70、HSP90的表达情况.结果 肾细胞癌组织中HSP70、HSP90表达阳性率分别为90.6%(29/32)、84.4%(27/32),明显高于正常肾组织,差异有统计学意义(P<0.05);但其表达程度与肾细胞癌临床分期及细胞类型无明显相关性(P>0.05).结论 HSPT0、HSP90高表达在肾细胞癌的发生、发展中具有促进作用.     

不同流动剪切力调节大鼠成骨样细胞增殖的体外研究

目的　从细胞水平探索机械应力刺激调节骨改建的机制 ,并探讨促进骨改建的最适生理应力值。方法　对体外培养的大鼠成骨样细胞施加一系列不同大小的流动剪切力 ,利用流式细胞技术衡量其细胞的分裂增殖能力。结果　大鼠成骨样细胞受到流动剪切力后 ,细胞与流动方向一致的长轴被拉长 ,细胞沿流动方向排列。随着剪切力的增加 ,成骨样细胞的增殖指数 (PI)不断增加 ,当剪切力为 12 dyn/cm2 时 ,PI值与对照组相比有显著性差异 (P<0 .0 5 )。随剪切力的继续增加 ,PI值开始下降 ,当剪切力大于 14dyn/cm2 时 ,PI值与对照组相比显著下降 (P <0 .0 1)。结论　机械应力对骨改建的调节作用与成骨细胞受到应力诱导产生的流动剪切力的刺激有关 ,低剪切力对细胞的增殖影响不大 ,中等大小的剪切力 (12 dyn/cm2 )明显刺激细胞的增殖 ,高剪切力将抑制细胞的增殖。     

鼻咽癌放疗残灶中HSP70/HSP27蛋白的表达

目的：分析鼻咽癌原发组织HSP70/HSP27蛋白表达与放疗残灶的相关性,探讨HSP70/HSP27表达对鼻咽癌放疗残灶的预测价值。方法：应用SP免疫组织化学法检测58例鼻咽癌原发组织HSP70/HSP27热休克蛋白表达,其中规范放疗后有残存癌灶的28例鼻咽癌为实验组,随访5年无癌灶复发的30例为对照病例。结果：HSP70和HSP27在实验组阳性表达率分别为92.9％(26/28)和53.6%(15/28),而在对照组的阳性表达率为53.3％(16/30) 和53.3%(16/30),HSP70阳性表达率在两组间比较有统计学差异(P<0.05),而HSP27阳性表达率在两组间比较无统计学差异(P>0.05);HSP70和HSP27在实验组共同阳性表达率为50.0%(14/28),对照组为16.7%(5/30),两者比较有统计学差异(P<0.05);两者共同阴性表达率在实验组和对照组分别为3.6%(1/28) 和10.0%(3/30),两者相比无统计学差异（P>0.05）。结论：HSP70在鼻咽癌抗放射损伤中可能起重要作用,检测鼻咽癌组织HSP70蛋白表达对预测鼻咽癌放射后癌灶残存可能有重要价值。     

HSP70在人卵巢癌HO-8910细胞膜上的表达

目的 检测人卵巢癌HO-8910细胞膜上热休克蛋白70（HSP70）的表达。方法 HO-8910细胞株体外传代培养,应用流式细胞仪、间接免疫荧光法检测细胞膜上HSP70的表达。结果 HO-8910细胞膜上HSP70表达率为6％,平均荧光强度为9．05。结论 HSP70的低表达可能与肿瘤的发生发展有关,为更好地了解HSP70在肿瘤细胞表面的调节活动及对肿瘤细胞内外信号反应的生物学行为奠定了基础,对进一步研究肿瘤的防治有一定的实际意义。     

HSP70与热应激诱导胸腺细胞凋亡关系的研究

目的 :探讨体外热应激诱导胸腺细胞凋亡与细胞表达HSP 70的关系。方法 :用流式细胞术检测体外热应激后再培养的胸腺细胞不同时间的凋亡率及HSP 70表达阳性率。结果 :体外热应激后 ,胸腺细胞的凋亡率在 0h、6h、12h随时间延长而增高 ,但 2 4h后凋亡率不再增高 ;体外热应激胸腺细胞HSP 70表达阳性率比对照组明显增高 ,在 6h阳性率最高 ,12h、2 4h阳性率逐渐下降 ,至 2 4h ,已明显低于 6hHSP 70的阳性率 (P <0 .0 5 )。结论 :HSP 70是调节体外热应激诱导胸腺细胞凋亡的重要分子之一。     

HSP27和HSP70在老年性白内障和透明晶状体中的表达

目的观察热休克蛋白HSP27和HSP70在老年性白内障和透明晶状体中的表达情况。方法WesternBlot法测定HSP27和HSP70在老年性白内障和透明晶状体中的表达情况。结果老年性白内障的晶状体和透明晶状体中均有HSP27和HSP70的表达。经t检验,老年性白内障晶状体中HSP27(1.08±0.33)的表达与正常对照组(0.61±0.13)相比,差异存在统计学意义(P<0.05),老年性白内障晶状体中HSP70(1.41±0.48)的表达与正常对照组(0.67±0.12)相比,差异亦存在统计学意义(P<0.05)。结论老年性白内障晶状体中HSP27和HSP70的表达高于透明晶状体。     

流体剪切力作用下鼠极化破骨细胞的形态变化

目的探讨流体剪切力作用下大鼠极化破骨细胞的形态变化。方法机械分离培养大鼠极化破骨细胞,对破骨细胞鉴定后,采用本课题组白行研制的流体剪切力装置在0．29Pa条件下,观察流体剪切力作用0、15、30、45、60、75、90、105、120min时破骨细胞的形态变化。结果大鼠极化破骨细胞抗泊石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色阳性,吸收试验阳性,细胞形态较大,直径约30μm,形状不规则以类圆形多见,核3～20个,可见空泡,周边大量细胞丝。随流体剪切力作用时间的延长,极化破骨细胞面积、直径均有增大趋势,30min组、105min组与0min组（对照组）间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论在本试验条件下,随流体剪切力作用时间的增加,SD-大鼠极化破骨细胞的形态呈波动性变化,直径和面积均有增大的趋势。