儿茶酚胺对人前脂肪细胞增殖与分化的作用

目的 研究去甲肾上腺素、肾上腺素和异丙肾上腺素这三种儿茶酚胺对人前脂肪细胞增殖与分化的作用。方法 培养人皮下脂肪的前脂肪细胞，在其增殖与分化的不同阶段分别加入肾上腺素、去甲肾上腺素和异丙肾上腺素这三种儿茶酚胺，观察其对人前脂肪细胞的增殖，分化过程中的磷酸甘油脱氢酶(GPDH)和细胞内脂肪积聚的作用，并探讨α受体和β受体阻断剂对这个过程的影响。结果:肾上腺素和异丙。肾上腺素对人前脂肪细胞的增殖有促进作用，对分化过程中的GPDH的升高有抑制作用；而对于分化过程中的脂肪积聚三者均有促进分解的作用；均通过前脂肪细胞的β受体完成。结论 人前脂肪细胞对儿茶酚胺的反应与成熟脂肪细胞相比有其特点，可望应用于脂肪分解药物的研究。     

bFGF对前脂肪细胞增殖和分化的作用

目的:探讨bFGF对体外培养前脂肪细胞增殖和分化活性的影响。方法:无菌条件下抽吸的脂肪组织进行前脂肪细胞的原代培养,加入生长因子bFGF 10ng/ml,用MTT法观察人前脂肪细胞生长状态,测定前脂肪细胞合成甘油三酯的总量。结果:bFGF有明显的促增殖作用,与对照组比较第1、2天差异不明显,随时间的推移,第6～7天到达高峰;到分化6天和9天时,甘油三酯总量明显升高,与对照组相比差异均有显著性(P<0.05)。结论:重组人bFGF可促进前脂肪细胞的增殖和分化。     

瘦素对人前脂肪细胞增殖及分化的影响

目的 观察瘦索在体外对人前脂肪细胞增殖和分化的影响,探讨瘦素调节肥胖发生的可能机制.方法 分离并体外培养人腹部皮下前脂肪细胞.采用3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）比色法、细胞计数法、油红O染色提取法及逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）方法 分析不同浓度（0～1 000 ng/ml）瘦素对人前脂肪细胞增殖、脂质积聚及分化转录因子γ2过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR-γ）、CCAAT增强子α结合蛋白（C/EBP-α）mRNA表达的影响.结果 高浓度（1 000 ng/ml）瘦素能够促进人前脂肪细胞的增殖、脂质积聚以及PPAR-γ2、C/EBP-α mRNA表达（P〈0.05）.低浓度（10 ng/ml）和中浓度（100 ng/ml）瘦素对人前脂肪细胞的增殖及脂质积聚没有明显的促进作用（P〉0.05）.结论 在体外超生理浓度的瘦素能够促进前脂肪细胞的增殖和分化,提示瘦素抵抗、血清高瘦素浓度等病理状态时,瘦素可能促进前脂肪细胞的增殖及分化,影响肥胖发生.     

表皮生长因子和维生素A对高浓度葡萄糖抑制腹膜间皮细胞增殖和分化的影响

目的　研究表皮生长因子（ Ｅ Ｇ Ｆ） 和维生素 Ａ（ Ｖｉｔ Ａ） 对高浓度葡萄糖抑制腹膜间皮细胞增殖和分化的影响，以探讨 Ｅ Ｇ Ｆ和 Ｖｉｔ Ａ 在腹膜修复中的作用。方法　采用胰蛋白酶消化法，从人腹膜组织中分离间皮细胞，并建立体外人腹膜间皮细胞（ Ｈ Ｐ Ｍ Ｃ） 培养模型；以３ Ｈ胸腺嘧啶核苷（３ Ｈ Ｔｄ Ｒ） 掺入法测定细胞内 Ｄ Ｎ Ａ 含量示细胞增殖程度；以免疫组织化学染色法，用图像分析仪测细胞表面角蛋白和波形蛋白（ｖｉｍｅｎｔｉｎ） 表达量示细胞分化程度。结果　随着葡萄糖浓度增高和培养时间的延长， Ｈ Ｐ Ｍ Ｃ３ Ｈ Ｔｄ Ｒ 掺入降低； Ｅ Ｇ Ｆ 和 Ｖｉｔ Ａ 可增加 Ｈ Ｐ Ｍ Ｃ 对３ Ｈ Ｔｄ Ｒ 的掺入，但两者ｃｐｍ 值比较无显著性差异（ Ｐ＞ ００５） ；在含高浓度葡萄糖的培养液中分别加入 Ｅ Ｇ Ｆ或 Ｖｉｔ Ａ 后， Ｅ Ｇ Ｆ 可明显促进 Ｈ Ｐ Ｍ Ｃ 的增殖，其３ Ｈ Ｔｄ Ｒ 掺入量明显增加，与 Ｖｉｔ Ａ 组比较有显著性差异（ Ｐ＜ ００５） 。 Ｅ Ｇ Ｆ 和 Ｖｉｔ Ａ 不影响细胞表面角蛋白和波形蛋白的表达。结论　 Ｅ Ｇ Ｆ和 Ｖｉｔ Ａ 对腹膜间皮细胞的分化未显示出明显作用，但两者均可刺激细胞的增殖，特别是 Ｅ Ｇ Ｆ可改善     

影响前脂肪细胞增殖与分化的若干因素

在脂肪组织工程中，前脂肪细胞是被公认的种子细胞，它是一类具有增殖分化能力的特异化前体细胞，其作用持续于人的一生，与脂肪移植成活率有密切关系。脂肪细胞的增殖分化能力对体外构建脂肪组织起着非常重要的作用，获取足够多的组织并使获得的细胞有较强的增殖能力，是众多研究者期待解决的问题。本文拟就影响脂肪细胞增殖分化的若干因素结合文献综述如下。     

超声波对猪前脂肪细胞增殖与分化的影响

目的 观察超声波对脂肪抽吸部位前脂肪细胞的影响，探讨超声吸脂术对局部脂肪重新积聚的影响。方法 将实验组经过超声波作用后（8min，3W／cm^2）的猪前脂肪细胞进行体外培养，测定细胞活力，并每隔2d测定其细胞数量及用油红O测定其脂质含量，观察其细胞增殖速率及脂质含量的变化，并测定其分化率，与未经过超声波处理的正常对照组相比较。结果 实验组细胞活力为（70±6．8）％，细胞倍增时间约72h，脂滴出现时间为培养后6d，脂质测定时其吸光度峰值为0．32±0．1，细胞分化率为（45±12）％；而正常对照组各项对应指标分别为（91±4．3）％、36h、4d、0．68±0．12、（80±8）％。表明经超声波处理的猪前脂肪细胞体外培养有细胞活力下降、细胞增殖速率减缓、脂质含量减少、分化率下降等改变。结论 超声波对前脂肪细胞的体外增殖分化有明显的抑制，提示超声吸脂术可能对局部脂肪重新积聚有一定的抑制作用。     

酒精对骨髓基质细胞增殖及分化的影响

目的 观察酒精对骨髓基质细胞增殖及分化的作用．探讨骨质疏松的病理学机理。方法 以0.09mol/L酒精加入骨髓基质细胞培养物中，测定增殖的骨髓基质细胞数及培养液中骨钙素含量。通过苏丹Ⅲ脂肪细胞染色计数观察酒精作用时间对脂肪细胞分化的影响。结果 实验组骨髓基质细胞数及培养液中骨钙素含量明显低于对照组，脂肪细胞的数量随酒精作用时间延长而增多。结论 酒精抑制骨髓基质细胞增殖及向成骨方向分化，促进其向脂肪细胞分化，这可能与酒精中毒引起继发性骨质疏松时骨量减少、髓内脂肪组织增多有关。     

维甲酸对人骨肉瘤细胞抑制增殖和诱导分化的影响

目的探讨维甲酸对人骨肉瘤（HOS）细胞抑制增殖和诱导分化的影响。方法不同浓度的维甲酸作用HOS细胞,采用噻唑蓝法、倒置相差显微镜观察药物对细胞生长的影响并绘制细胞生长曲线;软琼脂集落形成实验观察细胞生长和侵袭能力的变化;流式细胞仪测定细胞周期变化。结果维甲酸可明显抑制HOS细胞增殖,并呈现剂量和时间的依赖性;细胞形态呈明显的良性分化,瘤细胞的软琼脂集落形成率明显降低;维甲酸能够延缓细胞周期G1～S进程,阻滞细胞于G1期。细胞周期测定结果显示：未经诱导物处理的对照组细胞处于G0/G1期的细胞比例为31.19%;经维甲酸处理之后,实验组细胞G0/G1期的细胞比例上升为57.94%。结论维甲酸对HOS细胞有明显的抑制增殖和诱导分化作用。     

TGFβ1和BMP2对培养兔关节软骨细胞增殖和分化的作用

目的：探讨TGFβ1和BMP2对培养兔关节软骨细胞增殖和分化的影响，从而了解其在关节软骨损伤修复及骨关节炎（OA）病理变化中的作用，方法：采用光电镜、免疫细胞化学、液烁计数、流式细胞仪分析细胞周期等方法观察软骨细胞的直微结构和增殖、分化及其特异性的表达。结果：TGFβ1显著增加了原代软骨细胞^3H-TdR的掺入和使其进入S-G2/M期细胞比例增加。而BMP2则对第5代软骨细胞有明显的促增殖作用。结论：TGFβ1能促进原代软骨细胞的增殖，但不能阻止其增殖能力随传代培养而减弱，而BMP2则显著促进了第5代软骨细胞的增殖，这可能与细胞的分化状态和细胞外基质（ECM）、细胞骨架等有关。     

富血小板纤维蛋白对人脂肪干细胞增殖和成脂分化的影响

目的 探讨自体富血小板纤维蛋白(platelet-rich fibrin,PRF)对体外培养人脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)增殖及成脂分化的影响.方法 将自愿捐献由脂肪抽吸术获取的脂肪组织进行分离培养ADSCs并鉴定.将第3代ADSCs分为空白对照组和1个PRF膜片组(1PRFM组)和2个PRF膜片组(2PRFM组).倒置显微镜观察细胞生长情况,培养后1、2、3、4、5、6、7d采用四甲基偶氮噻唑蓝比色法(MTT)法检测细胞增殖活性.在第3、5、7、9、11和14天时采用油红O染色法检测细胞成脂分化情况.结果 随着PRFM剂量的增加,细胞增殖数量和成脂率增加,3组差异具有显著统计学意义.结论 PRF能明显促进ADSCs增殖和成脂分化,可以作为自体材料应用于脂肪组织工程的研究.     

人脂肪组织来源干细胞体外增殖分化中端粒酶的表达

目的 探讨体外培养条件下人脂肪干细胞增殖和分化过程中端粒酶的表达水平,为其作为种子细胞的应用研究提供理论基础.方法 体外分离、培养人脂肪干细胞并传代,行流式细胞表面抗原分析,并用油红O染色及茜素红染色行成骨和成脂诱导分化的鉴定;采用TRAP法分别检测新鲜的不同时间培养的人脂肪干细胞和诱导分化为脂肪细胞的人脂肪干细胞的端粒酶活性.结果 脂肪干细胞具有向脂肪细胞、成骨细胞多向分化的能力,且表达干细胞相关表面标志物.新鲜分离和传代的脂肪干细胞,在体外培养12代内端粒酶活性呈阴性或低水平表达;一旦经过成脂诱导分化,细胞端粒酶活性表达上调,培养3～6 d后端粒酶活性开始出现逐渐降低.结论 用胶原酶消化法从脂肪抽吸术中得到的细胞主要是人脂肪干细胞;在体外培养增殖的过程中,人脂肪干细胞的端粒酶活性未见异常表达;成脂诱导分化早期人脂肪干细胞端粒酶活性增高,其后开始出现下降趋势.     

不同年龄人骨髓间充质干细胞体外增殖及成骨分化的研究

目的 :观测年龄对人骨髓间充质干细胞 (humanmesenchymalstemcells ,hMSCs)体外增殖、成骨分化的影响。方法 :使用密度梯度离心法分离不同年龄人骨髓MSCs进行培养 ,保留贴壁细胞传代 ,观察细胞生长情况 ,检测其增殖活性、碱性磷酸酶活性 (ALP)、诱导后骨钙素定量测定。结果 :低龄hMSCs较高龄hMSCs体外生长快、MTT、ALP及骨钙素浓度高。结论 :hMSCs的增殖和成骨分化的能力和活性随着年龄的增加而降低。     

膝关节滑膜间质干细胞分离、培养及其多向分化潜能特性的研究

目的 探讨晚期骨关节炎患者膝关节滑膜间质干细胞(synovium-derived mesenchymalstem cells,SMSCs)体外分离、培养的可行性及其在体外向脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞定向分化的特性.方法 取膝关节滑膜组织,胶原酶消化获得有核细胞.挑选单细胞克隆,筛选获得SMSCs.流式细胞技术检测细胞表面特异性抗原标志.培养至第三代,分别向脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞诱导分化.油红O染色鉴定向脂肪细胞分化;碱性磷酸酶染色、茜素红染色鉴定向成骨细胞分化;甲苯胺蓝染色鉴定向软骨细胞分化.RT-PCR检测脂肪细胞、成骨细胞标志基因.Ⅱ型胶原免疫组化染色检测软骨细胞Ⅱ型胶原的表达.结果 原代SMSCs体外培养呈葵花样细胞集落,传代后可见圆形巨噬样细胞和纺锤形成纤维样细胞,融合后呈成纤维细胞样生长.CD44、CD90呈阳性,CD34、CD71和CD45呈阴性.向脂肪细胞诱导21d,油红O染色阳性;RT-PCR检测有脂蛋白酶、乙二腈及PPARγ2表达;向成骨细胞诱导7、28 d,ALP,茜素红染色阳性,有ALP、Osteopontin及Osteocalcin表达;向软骨细胞诱导21d,甲苯胺蓝染色阳性,Ⅱ型胶原免疫组化染色阳性.结论 晚期骨关节炎患者膝关节滑膜组织可以分离、培养获得SMSCs. SMSCs具有向脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞发生定向分化的潜能.     

低氧/复氧后星形胶质细胞对永生化神经前体细胞增殖与分化的影响

目的 探讨低氧/复氧后星形胶质细胞对永生化神经前体细胞增殖与分化的影响.方法 24 h内新生SD大鼠,断头处死,分离、培养和传代星形胶质细胞,取本室构建的永生化神经前体细胞,根据培养条件的不同分为3组,每组24孔,对照组永生化神经前体细胞在正常培养条件下培养(O2 17%-CO2 5%-N2 78%);共培养组取第三代星形胶质细胞孵育24 h后接种永生化神经前体细胞,培养条件同对照组;低氧/复氧后共培养组取第三代星形胶质细胞,先置入低氧培养箱(O2 2%-CO25%-N2 93%)中孵育12 h后,恢复正常培养条件12 h,再接种永生化神经前体细胞.3组以相同密度接种永生化神经前体细胞(1×104/cm2),隔天半量置换培养基,培养时间为6 d.共培养6 d后每组取6孔,采用免疫荧光细胞化学法,观察共培养后永生化神经前体细胞的增殖与分化情况,计算其增殖倍数、神经元阳性率和星形胶质细胞阳性率.结果 与对照组和共培养组相比,低氧/复氧后共培养组永生化神经前体细胞增殖倍数升高(P＜0.05),神经元阳性率和星形胶质细胞阳性率差异无统计学意义(P＞0.05).结论 低氧/复氧后星形胶质细胞可促进永生化神经前体细胞增殖,但对其分化无影响.     

血清素对体外培养大鼠成骨细胞增殖分化和矿化功能的影响

目的 探讨不同浓度血清素对体外培养大鼠成骨细胞(OBs)增殖、分化和矿化功能的影响. 方法 在新生SD大鼠颅骨OBs培养液中分别加入不同浓度血清素:0 mol/L组(空白对照组)、10-9 mol/L组、10-8 mol/L组、10-7 mol/L组、10-6 mol/L组、10-5 mol/L组,观察不同浓度血清素对OBs的增殖能力(CCK-8法)、分化能力(Western法检测碱性磷酸酶蛋白水平、pNPP法检测碱性磷酸酶活性和ELISA法检测骨钙素蛋白表达水平)和矿化能力(茜素红染色)的影响.并用荧光定量聚合酶链反应方法检测OBs分化早、晚期血清素受体亚型的mRNA表达水平. 结果 不同浓度血清素均可抑制OBs的增殖、分化和矿化,这种抑制作用在低浓度时具有时间依赖性,而在高浓度时作用减弱,呈现“V”形趋势.5-HT1A、5-HT1B、5-HT1D、5-HT2A、5-HT2B、5-HT2C等受体在OBs上均有表达,其中5-HT2A和5-HT1B受体是表达最多的两种受体亚型. 结论 体外OBs表达血清素受体,血清素可抑制OBs的增殖、分化和矿化,提示血清素能够调节骨代谢.     

超声波对猪前脂肪细胞体外培养与增殖的影响

目的 观察超声波对前脂肪细胞体外培养与增殖的影响。论证超声辅助吸脂术后前脂肪细胞作为脂肪组织工程种子细胞的可行性。方法 将经过超声波作用后（8min，3w／cm^2）的猪前脂肪细胞进行体外培养，并每隔2d测定其细胞数量及脂质含量，观察其细胞增殖速率及脂质含量的变化，与正常对照组相比较。结果 实验组细胞贴壁时间为1～2d，细胞倍增时间为72h，脂滴出现时间为培养后6d，脂质测定时其吸光度峰值为0．32，而正常对照组各项对应指标分别为6～24h、36h、4d，0．68；说明经超声波处理的猪前脂肪细胞体外培养有延迟贴壁、细胞增殖速率减缓、脂质含量减少等改变。结论 超声波对前脂肪细胞的增殖分化有明显的抑制作用，经超声波处理的前脂肪细胞不宜用作种子细胞。