谷氨酰胺诱导大鼠热休克蛋白70mRNA的表达

热休克蛋白(heat shock protein,HSP)是感染或非感染(如创伤、休克)等致病因素作用于机体后,诱发机体细胞合成的一组高度保守的蛋白质,谷氨酰胺(Glu-tam ine,Gln)作为体液中最丰富的氨基酸之一,对机体多个脏器有保护作用。一些研究表明,Gln在体外可促进果蝇Kc细胞HSP的表达[1];Gln诱导的HSP表达对肠道上皮细胞有保护[2]。但Gln是否能在动物的各个脏器引起HSP的表达及时间和量效关系如何,尚未见明确报道。本研究对此进行了实验观察,拟为临床应用提供理论依据。1材料和方法1.1主要试剂力太(批号J20020081,Fresennius Kabi公司,德国),…     

大鼠脊髓损伤后一氧化氮合酶基因表达的变化

目的　探讨大鼠脊髓损伤后3种类型一氧化氮合酶（NOS）mRNA表达的变化规律。方法　成年SD大鼠36只,随机分为种类6组,每组6只大鼠。建立大鼠脊髓压迫伤模型,以逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法测定伤段脊髓组织神经型（nNOS）、诱导型（iNOS）及内皮型（eNOS）一氧化氮合酶的mRNA表达情况。结果　脊髓压迫伤后nNOSmRNA及NOSRNA表达增强,伤后6h达到高峰0.633±0.012、1.236±0.207;iNOSmRNA表达亦增高,但在伤后24h才达到高峰1.043±0.049。结论　脊髓损伤后NOSmRNA的表达增强,但不同类型的NOSmRNA变化规律不同,增强或抑制不同NOSmRNA的表达可能减轻脊髓继发性损伤。     

大鼠心肌组织中热休克蛋白70水平与NO、NO合酶表达以及心肌细胞凋亡的关系

目的 探讨离体大鼠心肌组织中热休克蛋白70(HSP70)水平与NO、NO合酶(NOS)表达以及心肌细胞凋亡的关系.方法 将Wistar大鼠分为2组,实验组腹腔注射重酒石酸去甲肾上腺素,24 h后取离体心脏,灌注Histidine-trytophan-ketoglurate(HTK)液,置于4℃HTK液中保存3 h,然后以Krebs-Henseleit(K-H)液行Langendorff灌流2 h;对照组腹腔注射蒸馏水0.5 ml,24 h后取离体心脏,冷保存和Langendorff灌流同实验组.灌流结束后,取心肌组织,测定其HSP70、NO和NOS的含量以及心肌细胞凋亡指数.结果 实验组心肌组织中HSP70、NO和NOS的含量分别为(17.8±1.8)%、(8.7±1.7)μmol/g组织和(0.91±0.18)IU/mg组织,均明显高于对照组(P<0.01),而心肌细胞凋亡指数为(5.6±1.0)%,明显低于对照组(P<0.01).HSP70含量与细胞凋亡指数呈负相关(r=-0.946,P<0.01),与NO含量(r=0.087,P<0.01)和NOS含量(r=0.953,P<0.01)呈正相关.结论 心肌组织中HSP70与NO和NOS的表达呈正相关,而与心肌细胞的凋亡呈负相关,促进HSP70的表达可能有利于抑制心肌细胞凋亡.     

诱生型一氧化氮合酶在胆道感染大鼠肝细胞中的表达

目的　了解诱生型一氧化氮合酶 (induciblenitricoxidesynthase ,iNOS)在胆道感染大鼠肝细胞中表达的情况及其规律。方法　制作大鼠胆道感染模型 ,采用还原型辅酶Ⅱ黄递酶组织化学法检测大鼠肝细胞中iNOS的表达。结果　大鼠胆道感染 2h后肝细胞即有iNOS的表达切片积分光度(13 5 8± 0 6 4) ,与对照组切片积分光度 (3 5 9± 0 2 8)相比 ,P <0 0 1。 8h达到峰值切片积分光度(2 9 2 7± 0 90 ) ,2 4h至 48h仍有较高表达切片积分光度分别为 (19 47± 0 6 5 )和 (19 96± 0 78)。结论　胆道感染时肝细胞可持续高效地表达iNOS ,提示胆道感染时肝脏是合成NO的重要器官 ,并可能对胆道感染的转归具有重要影响     

三七总皂甙对大鼠脊髓损伤后一氧化氮合酶表达的影响

近来研究表明 ,一氧化氮 (ｎｉｔｒｉｃｏｘ ｉｄｅ,ＮＯ)在有关中枢神经系统损伤中起重要作用。本实验通过对脊髓损伤过程的研究 ,探讨三七总皂甙是否影响ＮＯ而对脊髓起保护作用 ,为临床应用提供实验依据。材料与方法　健康成年Ｗｉｓｔａｒ大鼠 6 5只 ,体重 2 30～ 2 5 0ｇ ,雌雄不限。随机分为空白组 (不给药 ,不造模 )、假手术组 (只咬除Ｔ13椎板 ,不造模 )、溶媒对照组和三七总皂甙 (ＰＮＳ)组 ,其中后 3组又各分为 2、6、12、2 4ｈ四个时相点组 ,共 13小组 ,每组 5只。试剂 :四唑氮蓝(ＮＢＴ ,上海东风产 ) ;ＮＡＤＰＨ (Ｓｉｇｍａ…     

奥曲肽抑制重症急性胰腺炎大鼠诱生型一氧化氮合酶

一般认为奥曲肽（善宁）治疗急性胰腺炎的显著疗效常与抑制胰酶、消化液分泌有关，重症急性胰腺炎（ＳＡＰ）急性期常伴有急剧的全身病理生理改变，细胞因子和炎症介质的过度表达可引起急性胰腺炎组织损伤，诱生型一氧化氮的过量产生可明显引起细胞毒性作用以及脏器血供的低灌注。本研究探讨奥曲肽缓解急性胰腺炎的病情，是否还通过抑制过量产生的一氧化氮（ＮＯ）。     

内毒素血症大鼠肺主动脉中一氧化氮合酶蛋白表达

一氧化氮合酶（NOS）作为NO生长的限速因素，是影响内毒素体克发病过程的重要中介物质，现已发现的NOS按产生是否需要外界刺激分为结构型（cNOS)和诱导型，按分布位置又将前者分为神经型（eNOS).在动物实验和临床观察中应用NOS和（或）iNOS抑制剂抑制NOS的基因和蛋白表达变化可使肺间质水肿和低血压得到改善，但是内毒素休克的死亡率仍然居高不下。且肺循环和体循环对吸入DO存在不同的反应，本实验拟在大鼠内毒素血症模型的肺动脉和胸主动脉中观察3种NOS蛋白表达的时间依从性变化及肺动脉和胸主动脉中NOS蛋白表达的差异，以了解内毒素休克时肺循环和体循环中3种NOS的蛋白表达的变化规律。     

热休克蛋白70在大鼠急性打击损伤脊髓中的表达

目的观察急性打击损伤大鼠脊髓组织中热休克蛋白70（heat shock protein70，HSP 70）的表达。方法65只大鼠随机分为3组：正常对照组5只、手术对照组和脊髓损伤组各30只，采用改良Allen法建立脊髓损伤动物模型。手术对照组和脊髓损伤组分别于处置后的2h、6h、12h、24h、48h、72h这6个时间点各采集5只大鼠的脊髓。应用免疫组织化学染色方法观察不同时点各组脊髓中热休克蛋白的表达变化。结果在大鼠正常胸段脊髓中没有基础性HSP70的表达。打击造成急性脊髓损伤后2h，脊髓组织内出现HSP70的表达，损伤后24～48h脊髓组织中HSP70染色达到高峰，并维持至损伤后72h。结论在遭遇损伤性刺激后，脊髓组织在随后的2～72h内HSP70的表达明显增加；HSP70可能在阻止脊髓的继发性损伤方面发挥一定的作用。     

重复电针预处理对脑缺血再灌注大鼠脑皮层热休克蛋白70表达的影响

目的 探讨重复电针刺激百会穴预处理对脑缺血再灌注大鼠脑皮质热休克蛋白70表达的影响。方法 20只雄性SD大鼠,随机分为对照组(n=10)和电针组(n=10)。对照组未行任何预处理;电针组予电针刺激百会穴,30 min·d-1,连续5d。最后一次预处理后24 h时,两组均采用颈内动脉尼龙线线栓法致大脑中动脉阻闭(120 min)。缺血再灌注后24 h将大鼠灌注固定,取脑组织行病理学观察及免疫组织化学染色,并按照McCarthy等的方法对免疫组化染色结果进行半定量分析。结果 半定量分析结果,电针组皮层HSP70表达(1.9±0.6)明显强于对照组(0.9±0.4)(P<0.05)。电针组组织病理学损害轻于对照组。结论 重复电针刺激百会穴预处理减轻脑缺血再灌注损伤与皮层HSP70表达增强有关。     

大鼠肾脏缺血-再灌注后诱导型热休克蛋白70的基因表达

目的：探讨肾脏组织在缺血－再灌注损伤过程中诱导型热休克蛋白70（iHSP70)的基因表达。方法：运用狭缝杂交印迹法，半定量测定Wistar大鼠肾脏在原位缺血－再灌注后皮层部和乳头部组织中iHSP 70 mRNA的水平。结果：在单纯缺血实验中，缺血10、30和60min三组，肾脏皮层部iHSP70基因的表达与正常无缺血对照组差异无显著性；在缺血－再灌注实验中，肾脏皮层部和乳头部肾组织iHSP70基因表达在缺血10min、再灌注2－72h各组与正常对照组比较，均未见明显的变化，而在缺血30和60min后再灌注2－72h各组中，4－48h各组均显著高于对照组；再灌注后72h与对照组差异无显著性。对肾脏皮层部和乳头部的峰值表达分析，乳头部大于皮层部。在再灌注时间为轴线的表达趋势可以看出，缺血30和60min的表达类似。结论：在肾脏缺血再灌注过程中，iHSP70基因呈现快速的一过性表达；一定程度的缺血损伤，是诱导肾脏在再灌注过程中iHSP70基因表达的前提条件，但肾脏缺血损伤的程度并不影响其iHSP70基因表达的强度；在缺血－再灌注损伤中，肾脏不同解部部位诱导iHSP70基因表达的强度不同，乳头部强于皮层部。     

诱导型一氧化氮合成酶在迟发性血管痉挛中的作用

目的　以大鼠迟发性脑血管痉挛模型为基础研究诱导型一氧化氮合成酶 (iNOS)在迟发性血管痉挛发展中的作用。方法　 3 2只雄性SD大鼠随机分为实验组和对照组 ,实验组枕大池二次注血诱导迟发性脑血管痉挛 ,对照组枕大池注射生理盐水。第 8天行脑血管造影 ,枕大池抽取脑脊液测一氧化氮 (NO)浓度。逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR )法和免疫组织化学法测定并评价iNOSmRNA和蛋白质在基底动脉、大脑中动脉和皮质中的表达。结果　颅内动脉血管减影提示对照组颈内动脉颅内段、大脑中动脉 (MCA)明显变细 ,大脑中动脉中段直径 (MD)与镫骨动脉中段直径 (SD)之比衡量大脑中动脉的管径显示实验组MCA管径较对照组MCA管径减少 3 0 %。对照组脑脊液中NO浓度为 (11.70± 2 .62 ) μmol/L ,实验组脑脊液中NO的浓度为(5 5 .67± 12 .84)μmol/L。iNOSmRNA和蛋白质表达于基底动脉、大脑中动脉和皮质 ,其中基底动脉表达最强。 结论　iNOS作为迟发性脑血管痉挛发展中的关键因素参与血管壁的迟发性损伤。     

抗氧化剂抑制内毒素性休克大鼠诱导型一氧化氮合酶基因表达

感染性休克时循环机能障碍的显著特点表现为进行性、顽固性低血压,伴对血管活性药物敏感性降低,以至组织器官灌注不足、重要器官机能代谢障碍,病死率仍高达30％～70％。休克时循环机能障碍所涉及的病理生理机制极其复杂,脂质过氧化物的堆积和NO的爆发生成是其中的关键病理因素之一。我们以往的研究中发现抗氧化剂能部分逆转内毒素休克大鼠的血管低反应性,为了进一步探讨其治疗学机制,本实验对抗氧化剂在内毒素性休克大鼠iNOS mRNA表达中的作用进行了观察。     

大鼠不同体积肝移植早期肺组织内诱导性一氧化氮合成酶的表达

目的探讨大鼠不同体积肝移植早期肺组织内诱导性一氧化氮合成酶(iNOS)的表达及意义。方法建立全肝、50%及30%体积肝移植模型,分别于术后0·5、2、6、24h处死大鼠,同时以假手术组作为对照,RT-PCR和Westernblot法检测肺组织内iNOS的表达,同时进行肺组织病理学检查。结果(1)iNOS表达:假手术组mRNA没有或微弱表达,各肝移植组表达增高,全肝移植组和50%肝移植组的表达水平在移植后6h时点均明显高于30%肝移植组(P<0·05);iNOS蛋白表达与mRNA表达基本一致。(2)病理学检查:假手术组肺组织结构基本正常,肝移植组出现肺间质明显出血充血,肺泡间隔明显增厚,中性粒细胞浸润明显,以移植后2h时点最为明显。结论肝移植早期肺组织内存在iNOS表达升高,可能与肝移植后肺损伤的发生有关,其表达高低可能与移植肝脏体积大小有关。     

脑出血患者一氧化氮、一氧化氮合酶的变化及临床意义

目的 探讨一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)与脑出血的关系。方法 测定76例脑出血患者及66例健康人血浆NO、NOS含量，分析上述指标在出血后3个时期的变化以及与患者颅内血肿量、是否合并蛛网膜下腔出血和临床预后的关系。结果 与对照组相比，脑出血1～3d组NO、NOS含量明显高于4～7d组、14d组和对照组，NO、NOS变化与颅内血肿量和／或合并蛛网膜下腔出血有一定关系。结论 NO、NOS参与了脑出血病理生理过程，其变化对病情的预后有一定的意义。     

诱导性一氧化氮合酶在大鼠肝缺血再灌注损伤中的作用

目的 探讨诱导性一氧化氮合酶（iNOS）在大鼠部分肝缺血再灌注损伤中的作用.方法 选取雄性Sprague-Dawley大鼠30只,体重225～250 g,随机分成氨基胍（AG）组、脂多糖（LPS）组、对照组.每组均按相同方法建立70%的肝缺血再灌注损伤模型（缺血1 h,再灌注6 h）,取再灌注大鼠肝组织及血清样本.氨基胍（AG）组（n=10）：术前30 min尾静脉注射AG 100 mg/kg（质量浓度10 kg/L）;脂多糖（LPS）组（n=10）：术前30 min尾静脉注射LPS 10 mg/kg（质量浓度1 kg/L）;对照组（n=10）：术前30 min尾静脉注射生理盐水（10 μL/kg）.检测血清谷氨酸转氨酶（ALT）水平,实时荧光定量PCR测定肝组织iNOS mRNA的表达,Western blot测定肝组织iNOS蛋白的表达,考马斯法测定肝组织匀浆丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性,HE染色光镜下组织学观察等.结果 AG组与对照组相比,肝组织中iNOS mRNA表达量明显下降（P〈0.05）,iNOS蛋白表达量明显下降（P〈0.05）;ALT和MDA明显下降（P〈0.05）;SOD明显升高（P〈0.05）;肝细胞水肿较轻,排列相对整齐.LPS组与对照组相比,肝组织中iNOS mRNA表达量明显升高（P〈0.05）,iNOS蛋白表达量明显升高（P〈0.01）;ALT和MDA明显升高（P〈0.05）;SOD则明显降低（P〈0.05）;肝细胞水肿,排列紊乱,并且出现水样变性.结论 iNOS 升高会加重缺血再灌注损伤,这一过程可能通过改变氧化还原状态实现.     

一氧化氮合酶同功异构酶在大鼠睾丸中的表达和定位

目的 :了解一氧化氮 ( NO)在睾丸中的作用。方法 :运用免疫组织化学方法观察 3种一氧化氮合酶 ( NOS)同功异构酶在大鼠生后 4、7、1 4、3 0、60 d睾丸中的分布。结果 :( 1 )生后 4、7、1 4d大鼠睾丸未见 3种 NOS免疫阳性反应 ;( 2 )生后 3 0 d少数精母细胞及生后 60 d生精小管腔面精子和间质细胞呈 NOS1阳性 ;( 3 )生后 3 0 d少数精母细胞、支持细胞和管周类肌细胞呈 NOS2阳性 ,而生后 60 d NOS2阳性反应见于睾丸间质细胞、管周类肌细胞、支持细胞、极少数精母细胞和不成熟精子头部 ;( 4)生后 3 0 d睾丸内少数精母细胞和血管壁呈 NOS3阳性 ,生后 60 d NOS3阳性反应仅见于血管壁。结论 :NO可能参与精子发生、睾酮的分泌过程 ,并调节睾丸内的血流。     

一氧化氮和一氧化氮合酶在急性大面积脑梗死患者中的表达

目的 观察一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS)在急性大面积脑梗死患者去骨瓣术后的表达.方法 急性大面积脑梗死患者16例(脑梗死组),均采用全麻开颅去骨瓣减压手术,手术中切除部分梗死额叶组织;以6例重型颅脑外伤行正常额叶组织内减压为对照组.2组均采用透视电镜观察额叶细胞超微结构,检测NO含量和NOS活性,Western blot法分析内皮型NOS(eNOS)、神经元型NOS(nNOS)和诱导型NOS(iNOS)蛋白表达特点.结果　本组病例16例脑梗死患者术后神志不同程度改善,无死亡病例;NO含量在脑梗死组和对照组分别为85.4U/ml和36.2U/ml,NOS活性在脑梗死组和对照组分别为63.2 μmol/L和37.2 μmol/L,差异均有统计学意义(P＜0.05);与对照组比较,eNOS、nNOS和iNOS在脑梗死组中表达均明显升高,尤其是iNOS表达相对值为0.76,远远超过对照组未见表达,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论　去骨瓣减压是治疗急性大面积脑梗死的有效治疗手段,能够降低患者死亡率;NO和NOS参与并影响了大面积脑梗死后复杂的病理生理过程,去骨瓣减压后局部脑血供得到有效改善,NOS活性减低,尤其iNOS活性明显减少,合成NO减少,神经毒性减低,临床症状好转.

Abstract：

Objective To study the expression of nitric oxide (NO) and nitric oxide synthase (NOS) in patients with acute massive cerebral infarction. Methods Sixteen patients (cerebral infarction group) with acute massive cerebral infarction were subjected to craniotomy decompression craniectomy under the anesthesia, and part of the infarct frontal lobe was removed. The normal frontal lobe from 6 cases of severe brain injury receiving the intracranial decompression served as control group. The ultrastructures of frontal lobe cells were observed under the electron microscopy. Serum NO content and NOS activity were measured. The protein expression patterns of eNOS, nNOS and iNOS were analyzed by Western blotting.Results The consciousness in 16 patients with acute massive cerebral infarction was improved after operation to varying degrees, and there were no deaths. The NO contents and NOS activities in cerebral infarction group and control groups were 85.4 and 36. 2 U/mi, and 63.2 and 37.2 μmol/L ( all P ＜ 0. 05). As compared with control group, the expression of eNOS, nNOS and iNOS in cerebral infarction group was significantly increased, especially the expression of iNOS ( all P ＜ 0. 05). Conclusion Craniotomy decompression craniectomy was the effective treatment to cure the acute massive cerebral infarction. It could reduce mortality. NO and NOS participated in and influenced the complex pathophysiological process of massive cerebral infarction. After craniotomy decompression craniectomy the regional cerebral blood was effectively improved, and NOS activity, especially iNOS, and the synthesis of NO were reduced, resulting in the reduction to neurotoxicity and improvement in clinical symptoms.     

衰老对大鼠阴茎海绵体NOS I的表达和NOS活性的影响

目的 :探讨衰老对大鼠阴茎海绵体一氧化氮合酶Ⅰ (NOSⅠ)mRNA、蛋白的表达和NOS活性的影响。　方法 :30只雄性SD大鼠按不同月龄分为成年组、老年组和衰老组 ,应用Western印迹、RT PCR方法分别检测不同年龄组阴茎海绵体NOSⅠ蛋白及mRNA的表达 ;用紫外分光光度计测定不同年龄组阴茎海绵体NOS的活性。　结果 :成年组NOSⅠ 蛋白的表达量最高 ,老年组和衰老组显著降低 ,分别为成年组的 75 .6 %和 6 1.2 % ;NOSⅠmRNA的表达与蛋白表达的变化一致 ;老年组NOS活性与成年组差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,衰老组NOS活性明显降低 ,是成年组的70 .4 % ,并且差异非常显著 (P <0 .0 1)。　结论 :衰老引起NOSⅠ 蛋白及mRNA的表达降低和NOS活性的显著降低 ,可能是老年性阴茎勃起功能障碍的主要机制之一。     

异丙酚对高血压大鼠胸主动脉内皮型一氧化氮合酶和诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的 评价异丙酚对高血压大鼠胸主动脉内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响.方法 SD大鼠,雌雄各半,体重240～ 280 g,采用皮下注射去氧皮质酮的方法制备高血压模型,采用随机数字表法,将64只造模成功的大鼠随机分为4组(n＝16):高血压组(H组)、小剂量异丙酚组(P1组)、中剂量异丙酚组(P2组)和大剂量异丙酚组(P3组).P1组、P2组和P3组分别静脉输注异丙酚20、30、40 mg·kg-1·h-13 h,H组给予等容量生理盐水.分别于给药前、给药1h、3h时记录平均动脉压(MAP).给药3h时处死大鼠,摘眼球法采集血样,硝酸还原酶法测定血清一氧化氮(N0)浓度,取胸主动脉,采用RT-PCR和Western blot法测定eNOS mRNA、iNOS mRNA及其蛋白表达水平.结果 与H组比较,P1组、P2组和P3组给药3h时MAP降低,血清NO浓度升高,主动脉eNOS mRNA及其蛋白表达上调,主动脉iNOS mRNA及其蛋白表达下调,且呈剂量依赖性(P<0.05或0.01).结论 异丙酚降低高血压大鼠血压的机制与下调iNOS表达,上调血管内皮细胞eNOS表达,促进NO释放有关.