大黄素对大鼠近端结肠平滑肌细胞电压依赖性钾通道的影响

目的研究大黄素对大鼠近端结肠电压依赖性钾离子通道的影响，以探讨其增强结肠运动的机制。方法 采用全细胞膜片钳技术测定电压依赖性钾离子通道快速激活型钾电流及延迟整流型钾电流。结果大黄素(1～30 μmol·L^-1)浓度依赖性地阻断延迟整流性钾通道，加快电流失活，其阻断作用不需要钾通道的开放。30 μmol·L^-1大黄素可抑制快速激活型钾电流。5 μmol·L^-1大黄素对钾通道的激活动力学及失活动力学没有影响，但30 μmol·L^-1大黄素使其激活动力学曲线明显右移，斜率常数由(13.0±0.6)上升至(19.6±2.5) mV，同时也使失活动力学曲线明显右移。结论大黄素可阻断延迟整流型钾通道及快速激活型钾通道，其阻断作用不是开放阻断。     

东莨菪碱致记忆障碍大鼠中枢电压依赖性钾通道亚型的表达

目的研究东莨菪碱致记忆障碍大鼠模型中枢电压依赖性钾通道亚型mRNA表达的差异。方法Morris水迷宫实验检验大鼠空间学习记忆能力,用RT-PCR方法检测大脑皮层和海马中5种电压依赖性钾通道Kv1.4,Kv1.5,Kv2.1,Kv4.2及Kv4.3 mRNA的表达。结果注射东莨菪碱大鼠的学习记忆能力明显下降,大脑皮层中Kv4.2的表达比对照组降低28.8%;海马中Kv1.4的表达升高111.7%,Kv2.1的表达升高64.3%,而Kv4.2的表达降低33.9%。其它电压依赖性钾通道表达的变化不大。结论东莨菪碱致大鼠学习记忆障碍的同时可诱发中枢电压依赖性钾通道亚型的表达改变。     

山奈酚对急性短暂缺氧时大鼠海马CA1神经元电压依赖性钾通道的作用

目的研究山奈酚对正常和急性短暂缺氧时大鼠海马CA1锥体神经元电压依赖性钾通道的作用.方法急性分离大鼠海马CA1区锥体神经元,采用全细胞记录,用含有氰化钾(KCN)60μmol·L-1的标准外液灌流模拟细胞缺氧,观察山奈酚对正常和缺氧时海马CA1区神经元电压依赖性钾通道的作用.结果山奈酚对正常和缺氧时海马CA1神经元电压依赖性K 电流有明显的抑制作用,可同时抑制瞬时外向型钾电流(IA)和延迟整流性钾电流(Ik),具有浓度依赖和电压依赖性;山奈酚对IA的半数抑制浓度(IC50)约为50μmol·L-1,对IK的IC50约为80μmol·L-1.结论山奈酚对正常和缺氧时大鼠海马CA1神经元电压依赖性钾通道有抑制作用,其对钾通道的抑制作用可能参与脑缺血保护.     

西地那非通过上调电压依赖性钾通道抗低氧刺激的人肺动脉平滑肌细胞增殖

目的探讨西地那非抗低氧刺激的人肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)增殖的机制与电压依赖性钾通道(voltage-dependent potassium channels,Kv)及环鸟甘酸依赖性蛋白激酶(cGMP-dependent protein kinase,PKG)的关系。方法采用MTT法及细胞免疫荧光法等检测细胞增殖情况;应用膜片钳技术记录低氧刺激PASMCs前后及西地那非或KT-5823干预前后的Kv通道电流,运用Kv1.5抗体透析细胞后的Kv通道电流;应用siRNA干扰技术沉默Kv1.5基因。结果低氧下西地那非组的细胞增殖水平较低氧对照组明显降低;西地那非反转了低氧对细胞K +通道电流,尤其Kv1.5通道电流的降低作用;siRNA组的Kv1.5蛋白表达明显减低,沉默Kv1.5通道基因逆转了西地那非抗低氧刺激的细胞增殖作用;PKG抑制剂KT-5823阻断了西地那非抗低氧刺激的细胞增殖作用,并且反转了西地那非对低氧下的Kv通道电流的上调作用。 结论 西地那非可通过上调Kv通道亚型主要是Kv1.5通道,抑制低氧刺激的人PASMCs增殖,且可能与PKG有关。     

Kv42钾通道mRNA在大鼠血管平滑肌中的表达

自 8 0年代末Ｌｉｌｙ实验组和Ｐｏｎｇｓ实验组第一次发现ＳｈａｋｅｒＫｖ钾通道以来 ,目前已发现 9大类Ｋｖ钾通道。Ｋｖ4 2亚型可编码瞬间外向钾电流 (Ｉｔｏ) ,此电流是动作电位负极化早期外向电流的主要成分 ,主要调节静息膜兴奋性 ,减慢去极化速度 ,延缓动作电位的产生 ,且该通道亚型广泛存在于心脏和中枢神经系统中 ,Ｋｖ 4 2是否存在于血管平滑肌中目前国内外未见报道 ,因此有必要在血管平滑肌中进行研究。本文应用ＲＮａｓｅ保护实验 (ＲＮａｓｅＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎＡｓｓａｙ ,ＲＰＡ)研究大鼠主动脉平滑肌中Ｋｖ 4 2钾通道的…     

哮喘大鼠肺泡巨噬细胞IL-6及TNF-α的表达水平及其意义

目的调查哮喘大鼠肺泡巨噬细胞IL-6和TNF-αmRNA表达水平的变化及其在哮喘发病中的作用。方法利用卵蛋白(ovialbumin,OVA)致敏并激发大鼠建立哮喘模型,对照组则用生理盐水代替;收集支气管肺泡灌洗液(bronchusalveolar lavage fluid,BALF)并用RMPI1640培养AM。各组细胞在利用LPS(5μg.ml-1)处理12小时前后,通过RT-PCR技术检测肺泡巨噬细胞中IL-6和TNF-αmRNA的表达水平。结果病理学检测发现哮喘模型组(n=7)炎症细胞浸润明显增加,支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞总数显著增高,与对照组(n=7)比较差异显著(P<0.01)。两组肺泡巨噬细胞经LPS处理后,IL-6和TNF-αmRNA的表达水平明显增高(n=7,P<0.01)。无论LPS处理与否,哮喘组肺泡巨噬细胞IL-6的表达水平与对照组相比明显增高(n=7,P<0.01);TNF-α的表达水平变化情况与IL-6相似,但其显著性不及IL-6高(n=7,P<0.05)。结论哮喘大鼠肺泡巨噬细胞IL-6和TNF-αmRNA的表达水平与对照组相比明显增高。由此可见,哮喘大鼠的肺泡巨噬细胞被激活并且产生IL-6和TNF-α从而参与哮喘的发生发展。     

红霉素对哮喘患者肺泡巨噬细胞介质释放功能的影响

探讨红霉素的抗哮喘的气道炎症作用。方法：对２６例发作期过敏性哮喘患者肺泡巨噬细胞进行体外分别加红霉素、地塞米松，生理盐水培养，测定培养上清液中血栓素Ｂ２、肿瘤坏死因子－α、白介素－８水平。     

血管平滑肌ATP敏感性钾通道研究进展

ATP敏感性钾通道 (KATP)广泛存在于各类细胞和组织中 ,是药物作用的重要靶点。KATP是由内向整流钾通道Kir和磺酰脲类受体SUR亚基组成。与血管舒缩特性密切相关的是SUR2B/Kir6 1,电导值小 ,对ATP的抑制作用不敏感 ,需要有NDP才能被开放 ,故这类血管平滑肌KATP又被称为NDP依赖性钾通道。内源性和外源性的很多因子引起的血管舒缩反应与血管平滑肌上的KATP有关 ,此信号途径与PKA、PKC等磷酸化激酶有密切联系。不同血管对钾通道开放剂(potassiumchannelopeners,KCO)的反应有差异 ,KCO对血管的选择性作用机制仍不明确。本文就血管平滑肌KATP的分子结构、电生理、药理学特征、信号转导途径和KCO对血管的选择性作用进行综述     

电压依赖性阴离子通道在线粒体依赖性细胞凋亡中作用的研究进展

电压依赖性阴离子通道(VDAC)是线粒体外膜上含量极为丰富的孔状蛋白,是细胞内代谢物分子进出线粒体的必经通道,VDAC的功能状态与线粒体的代谢和功能关系十分密切。VDAC的异常通常会引发线粒体功能紊乱,导致ATP水平或转膜电位下降、细胞色素c释放等凋亡程序的启动。VDAC可与许多物质相互作用而发挥诱导细胞凋亡或抑制细胞凋亡的效应,从而在线粒体依赖性细胞凋亡途径中有着十分重要的作用。VDAC对细胞凋亡的影响机制可应用于药物治疗靶点、外源化学物毒性机制的研究,因此,VDAC的作用是近年来外源化学物所致细胞凋亡机制研究领域中的热点问题。     

钾通道阻滞剂四乙基铵敏感性钾电流在肺高压大鼠肺动脉平滑肌细胞中的变化

目的研究大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs)中电压依赖性钾通道(voltagedepending potassium channel,K_V)电流在肺高压(pulmonary hypertension,PH)中的变化,及钾通道阻滞剂四乙基铵(tetraethylammonium,TEA)对K_V电流的影响。方法采用全细胞膜片钳技术记录PASMCs的K_V电流,观察PH大鼠中K_V电流的变化,以及TEA对K_V的影响。结果野百合碱(monocrotaline,MCT)、慢性低氧(chronic hypoxia,CH)明显减小了大鼠PASMCs上记录到的K_V电流密度;TEA干预能够明显降低正常和PH大鼠PASMCs的K_V电流,并且TEA对K_V电流的抑制作用在PH大鼠中明显减小。结论在CH、MCT诱导的两种PH大鼠模型中,PASMCs的K_V开放程度被明显抑制,而且其对应的TEA敏感性K_V电流明显减小。     

积分法:一种药理学中分析电压依赖性瞬时外向钾电流的方法(英文)

目的　评价一种药理学中分析电压依赖性瞬时外向钾电流 (Ito)的积分方法。方法　Ito的失活相可被 2指数或 3指数方程拟合。原始电流曲线下面积 (AUC)可通过指数方程积分获得。以细胞膜电容标准化后的曲线下面积表示除极化时程中钾离子的净通量 ,作为比较指标。钙调磷酸酶过表达转基因鼠心肌细胞表现Ito下调 ,此数据用于验证Ito的积分分析方法的可靠性。结果　AUC可通过 3指数或2指数方程的积分公式获得 :AUC =A1τ1+A2 τ2 +A3τ3+A0 t -A1τ1e-t/τ1-A2 τ2 e-t/τ2 -A3τ3e-t/τ3或AUC =A1τ1+A2 τ2 +A0 t-A1τ1e-t/τ1-A2 τ2 e-t/τ2 。小鼠心室肌 5 0 %和 90 %动作电位时程分别约为 10ms和 30ms。将Ito0～ 10ms (AUC50 )和 0～ 30ms(AUC90 )的曲线下面积以细胞膜电容进行标准化。野生型鼠心肌细胞的AUC50 和AUC90 明显高于钙调磷酸酶过表达转基因鼠 ,此结果与转基因鼠心室肌细胞动作电位时程延长相一致 ,与前期发表结果一致 (钙调磷酸酶过表达转基因鼠心肌细胞Ito各成分下调 )。结论　积分法是药理学中一种简便准确的分析Ito的方法。     

水杨酸钠抑制大鼠螺旋神经节神经元电压门控钾通道的研究

目的研究水杨酸钠对大鼠螺旋神经节神经元电压门控钾通道电流(Ik)的影响。方法采用全细胞膜片钳技术分析水杨酸钠对急性分离大鼠SGN电压门控钾通道电流的影响。结果水杨酸钠抑制电压门控钾通道电流幅值,其抑制强度与水杨酸钠浓度呈正相关,1mmol/L水杨酸钠可导致Ik激活曲线向超级化方向移动10.5885mV。结论水杨酸钠对大鼠SGN电压门控钾通道电流具有抑制作用,使其电流峰值减低、激活曲线向超级化方向移动。     

布地奈德对哮喘大鼠肺泡巨噬细胞GITR/GITRL信号系统表达的调控作用

目的：通过观察布地奈德对大鼠肺泡巨噬细胞（Mφ）GITR/GITRL表达的影响,探讨GITR/GITRL信号系统参与哮喘炎症反应的机制。方法：将30只SD大鼠随机分为哮喘组、对照组、布地奈德组,每组10只,卵白蛋白建立哮喘模型。行支气管肺泡灌洗分离提纯肺泡Mφ,分别采用实时荧光定量PCR法和细胞免疫化学法测定肺泡MφGITR/GITRL mRNA和蛋白的表达。结果：哮喘组肺泡MφGITR/GITRL mRNA△CT值（11.05±0.23,9.82±1.24）和蛋白OD值（0.64±0.08,0.71±0.05）表达水平显著高于对照组△CT值（12.79±1.28,11.88±1.37）和蛋白OD值（0.37±0.09,0.39±0.04）（P均〈0.05）;布地奈德组肺泡MφGITR/GITRL mRNA△CT值（12.97±0.97,11.16±1.42）和蛋白OD值（0.40±0.06,0.40±0.07）表达量显著低于哮喘组（P均〈0.05）,但与对照组比较差异无统计学意义（P均〉0.05）。结论：哮喘大鼠肺泡MφGITR/GITRL的表达升高,肺泡Mφ可能通过GITR/GITRL信号系统起到促进哮喘气道炎症的作用,而糖皮质激素布地奈德可能通过抑制肺泡MφGITR/GITRL信号通路在哮喘治疗中起作用。     

灵芝多糖对哮喘大鼠肺泡巨噬细胞GITR/GITRL信号系统表达的影响

目的 通过观察灵芝多糖对哮喘大鼠肺泡巨噬细胞糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(GITR)及其配体(GITRL)表达水平的影响,探讨灵芝多糖治疗哮喘炎症的机制。方法 将40只清洁级SD大鼠随机分为对照组、哮喘组、地塞米松(DXM)干预组和灵芝多糖干预组4组,分离提纯支气管肺泡灌洗液(BALF)中肺泡巨噬细胞,分别采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(QRT-PCR)及免疫细胞化学方法检测GITR/GITRL mRNA及蛋白在肺泡巨噬细胞上的表达。结果 哮喘组BALF中肺泡巨噬细胞GITR/GITRL mRNA和蛋白的表达水平显著高于对照组(P<0.05或P<0.01);灵芝多糖干预组和DXM干预组GITR/GITRL mRNA和蛋白的表达水平显著低于哮喘组(P<0.05或P<0.01);灵芝多糖干预组GITR/GITRL蛋白的表达水平显著高于DXM干预组(P<0.05),而2组间GITR/GITRL mRNA的表达水平差异无统计学意义。灵芝多糖干预组BALF中细胞总数计数显著低于哮喘组(P<0.01),肺组织炎性病理改变较哮喘组显著减轻。GITR/GITRL mRNA及蛋白均显著呈直线正相关(P<0.01)。结论 灵芝多糖能下调肺泡巨噬细胞GITR/GITRL信号系统的表达、降低BALF中细胞总数计数、减轻肺组织炎性病理改变,起到治疗哮喘的作用,但此作用弱于DXM。     

石英对大鼠肺泡巨噬细胞钙稳态的影响

石英对大鼠肺泡巨噬细胞钙稳态的影响刘保连，田琳，姚汝琳，李秋营石英如何引起肺泡巨噬细胞损伤的机制迄今为止并不完全清楚。其中钙稳态失调在石英致巨噬细胞损伤中的意义逐渐被人们重视［１，２］。为了进一步阐明石英损伤肺泡巨噬细胞的机制，研究了肺泡巨噬细胞在石...     

胆红素对烟雾损伤大鼠肺泡巨噬细胞的保护作用

目的:探讨胆红素对烟雾损伤所致肺泡巨噬细胞(AM)的保护作用,寻求防治肺气肿发生、发展的新途径。方法:将健康Wistar大鼠36只,随机分为正常对照组、肺气肿模型组和胆红素干预组。模型组及干预组采用自制大鼠实验性被动吸烟装置熏烟,连续6个月。干预组在熏烟前予以间接胆红素灌胃;模型组和对照组予以生理盐水灌胃。3组动物自由饮食饮水,6个月后处死动物,取材检测;病理形态学检查;采用支气管肺泡灌洗技术收集AM并纯化培养。观察细胞培养液上清中MDA与MO含量。结果:光镜下对照组大鼠肺组织肺泡分布较均匀;模型组大鼠肺组织肺泡普遍扩张,扩张的肺泡融合成较大的囊腔;胆红素干预组肺组织肺泡部分有扩张;模型组与对照比较MDA、MO含量升高(P<0.05);干预组与模型组比较MDA、NO含量降低(P<0.05)。结论:胆红素对于AM有一定的保护作用。     

外源性羟自由基对大鼠肺泡巨噬细胞脂质过氧化的影响

肺泡巨噬细胞(PAM)受损是矽肺发病的始动环节。石英粉尘可通过 OH·O_2~-等中介引起PAM 脂质过氧化(LPO),而 LPO 可通过多种途径导致膜损伤[1],所以 PAM 的 LPO 受到人们极大关注。由于石英粉尘的种类、研磨新鲜程度及     

大脑中动脉栓塞模型大鼠的中枢电压依赖性钾通道mRNA表达的改变

目的观察几种代表性电压依赖性钾通道亚型在脑缺血不同时间大鼠海马和皮层mRNA表达水平的变化。方法采用大脑中动脉栓塞模型致大鼠脑缺血损伤，应用RT-PCR方法检测Kv1.4，Kv1.5，Kv2.1和Kv4.2 mRNA表达水平在海马和皮层中的改变。结果大脑中动脉栓塞模型大鼠出现明显的神经损伤症状。缺血2 h时，海马组织的Kv1.4，Kv2.1和Kv4.2 mRNA表达水平分别增加了50%，67%和90%，在缺血24 h时Kv1.4和Kv4.2 mRNA仍保持高水平表达。大鼠皮层组织在缺血2 h后，Kv1.4，Kv1.5，Kv2.1和Kv4.2 mRNA水平均无明显改变，缺血24 h后，Kv2.1和Kv4.2 mRNA水平分别增加了70%和62%。结论大脑中动脉栓塞模型大鼠的海马和皮层组织中电压依赖性钾通道亚型的mRNA表达发生明显上调。     

红霉素对小鼠海马神经元电压依赖性钾电流的影响

目的:研究红霉素对小鼠海马神经元电压依赖性钾电流的影响。方法:采用分离新生小鼠海马细胞和全细胞膜片钳技术的方法,观察给予红霉素前后海马神经元细胞电压依赖性钾电流的变化和电流-电压曲线的改变。结果:红霉素可抑制小鼠海马细胞电压依赖性钾电流,使电流峰值由(810.67±250.86)pA下降至(529.96±171.83)pA(P<0.05);给予系列去极化脉冲刺激海马神经元,随着刺激电压强度的增强,钾外向电流增加,电压-电流曲线右移,但不改变曲线的形态。结论:红霉素可抑制小鼠海马神经元电压依赖性钾电流,并可能通过中枢机制来影响其调节胃肠运动的效应。