新型嘧啶类EGFR~(T790M)抑制剂的合成、体外抗肿瘤活性及分子对接研究

目的设计合成新型嘧啶类EGFRT790M抑制剂,并评价其抗肿瘤活性,初步探讨活性化合物与靶蛋白的结合模式。方法以2,4,5-三氯嘧啶为原料,经亲核取代反应、还原反应和偶联反应,运用分步合成法完成嘧啶类新化合物的合成,采用ELISA法测定目标化合物体外抗肿瘤活性,利用Autodock软件完成计算机辅助分子对接研究。结果与结论合成了10个未见文献报道的新化合物;体外抗肿瘤活性评价结果表明,化合物8a和8f对EGFRT790M激酶具有强烈的抑制活性;分子对接实验表明化合物8f的喹唑啉基团与Gln-791残基形成了氢键作用力。     

丹参液在体外对血小板活化的抑制作用研究

目的：探讨丹参液在体外对血小板活化的抑制作用。方法：用流式细胞仪三色分析测定丹参液在体外对血小板活化膜表面纤维蛋白原受体(FIB-R)和P-选择素(CD42P)的表达。结果：丹参液有保护血小板FIB-R和CD42P被活化，同时部份抑制ADP活化血小板。结论：丹参液是一种较强的抗血小板活化药物，在血栓性疾病的防治中有积极作用。     

丹参多酚酸盐体外抗肿瘤作用研究

目的:研究丹参多酚酸盐体外抗肿瘤的作用,探讨其可能机制。方法:采用MTT比色法测定注射用丹参多酚酸盐体外对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞、人肺腺癌细胞株SPC-A-1细胞、B淋巴瘤细胞株Raji细胞和急性粒细胞白血病细胞株HL-60细胞4种肿瘤细胞株增殖的影响;采用流式细胞仪检测细胞周期的改变及细胞凋亡情况;采用吉姆萨染色及吖啶橙荧光染色观察细胞形态变化。结果:注射用丹参多酚酸盐对SMMC-7721、SPC-A-1、Raji、HL-60细胞增殖均有显著的抑制作用,且呈时间和剂量依赖关系;可诱导SMMC-7721细胞阻滞于S期继而发生细胞凋亡;可观察到细胞逐渐凋亡形态。结论:注射用丹参多酚酸盐有较强的体外抗肿瘤作用,可能是通过作用于细胞周期、诱导肿瘤细胞凋亡来发挥的。     

表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂BPI-2009的抗肿瘤作用及其机制的研究

目的:探讨一种口服的表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactorreceptor ,EGFR)酪氨酸激酶抑制剂(BPI 2 0 0 9)的抗肿瘤作用及其机制。方法:Westernblot方法检测BPI 2 0 0 9对酪氨酸激酶和EGFR自动磷酸化的抑制作用,MTT法检测BPI 2 0 0 9对多种肿瘤细胞的生长抑制作用,使用A4 31肿瘤模型的荷瘤裸鼠进行体内的肿瘤抑制试验。结果:通过对EGFR激酶抑制剂化学文库的筛选,发现BPI 2 0 0 9是一个有效的EGFR激酶抑制剂。BPI 2 0 0 9对EGFR激酶的半数抑制浓度(IC50 )为5nmol·L- 1,当其浓度达到6 2 .5nmol·L- 1的时候可以完全抑制EGFR激酶的活性,但在10 0nmol·L- 1时对Abl、Abl相关基因(Abl relatedgenes ,Arg)以及c- Src酪氨酸激酶都没有明显的抑制作用。BPI 2 0 0 9可以阻断EGFR介导的细胞内蛋白酪氨酸的磷酸化,IC50 为4 5nmol·L- 1。在肿瘤细胞生长抑制试验中,BPI 2 0 0 9对于肿瘤细胞的生长抑制作用与EGFR在细胞中的表达密切相关。人类肿瘤细胞A4 31移植瘤抑制试验的研究表明BPI 2 0 0 9经口给药每天1次在10 0mg·kg- 1,肿瘤抑制率达6 4% ,有明显的剂量效应关系,并没有发现明显的病态和体重下降。结论:BPI 2 0 0 9是一种有效的高选择性的以EGFR酪氨酸激酶为靶点的抗肿瘤药物。     

丹参对体外高糖环境中大鼠系膜细胞活性氧抑制作用的研究

目的：观察丹参对高糖环境中系膜细胞所产生的活性氧（ROS）及转化生长因子β1（TGF—β1）的抑制作用。方法：将细胞分为以下6组：对照组（C组,普通MEM培养基,含5．6mmol·L^-1葡萄糖）;高糖组（H组,30mmol·L^-1高糖MEM培养基）;小剂量丹参干预组（S1组,H组＋37．5mg·ml^-1丹参）;中剂量丹参干预组（S2组,H组＋75mg·ml^-1丹参）;大剂量丹参干预组（S3组,H组＋150mg·ml^-1丹参）;单纯丹参组（S组,C组＋150mg·ml^-1丹参）。分别采用激光共聚焦和ELISA法检测ROS及TGF—β1水平。结果：H组ROS水平较C组明显增高,分别采用不同浓度丹参干预后,ROS水平均显著降低,并呈剂量依赖性;与H组相比,不同剂量丹参干预组TGF-β1表达均降低,但仅S3组TGF—β1的下降具有统计学意义。与对照组相比,单纯丹参干预组中ROS和TGF—β1水平无明显变化。结论：丹参可减少高糖环境中系膜细胞ROS及TGF—β1的产生,而这可能是丹参发挥肾脏保护作用机制之一。     

sFGFR3的原核表达及其对乳腺癌细胞增殖的抑制作用

成纤维细胞生长因子(FGFs)是一类高效的细胞分裂、成形促进剂,以及血管生成的诱导物。FGF信号通路是与癌症的发生和发展紧密相关的。可溶性成纤维细胞生长因子受体(sFGFRs)能够与FGFs相结合,从而阻断它们的信号。为了研究sFGFR3对乳腺癌细胞增殖的抑制作用,作者利用从人类胎盘组织中提取的总RNA,通过逆转录聚合酶链式反应技术(RT-PCR),扩增了FGFR3IIIc的胞外域(sFGFR3)。克隆了sFGFR3片段并将其插入到pET3c载体中,然后在大肠杆菌BL21(DE3)中以包涵体的形式进行表达。通过凝胶层析和肝素亲和层析,分离和纯化了成功重折叠的蛋白。sFGFR3的重折叠率为10.2%,纯化后的蛋白其纯度高达95%。3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)处理后的细胞扩增分析结果显示,sFGFR3能够有效抑制乳腺癌细胞BT549的增殖,且其抑制不具有剂量依赖性。     

丹参饮促进胃溃疡愈合作用及其机理研究

目的:观察丹参饮对大鼠乙酸性胃溃疡的影响并探讨其作用机制。方法:应用大鼠乙酸性胃溃疡模型,给予丹参饮治疗14 d后,观察胃粘膜损伤程度(UI),检测血清NO含量和血浆PGE2水平,测定胃壁结合粘液的含量、溃疡边缘粘膜细胞凋亡(AI)、凋亡相关基因Bcl-2以及表皮生长因子受体(EGFR)的表达。结果:与模型组相比,丹参饮可明显促进大鼠溃疡愈合(P<0.01),提高血清NO、血浆PGE2和胃壁结合粘液含量(P<0.05),并显著抑制胃溃疡边缘粘膜细胞凋亡(P<0.01),同时促进EGFR和凋亡抑制基因Bcl-2的表达,其中7、3.5g.kg-1剂量组作用更为显著(P<0.01)。结论:通过胃粘膜防御因子及抑制凋亡途径来促进溃疡愈合可能是丹参饮治疗胃溃疡的作用机制之一。     

化学法提高细胞通讯对原代肿瘤细胞抑制作用的体外观察

目的 通过增加肿瘤细胞膜的渗透性来提高细胞通讯能力,观察对原代瘤细胞的抑制作用。方法 使用甘油增加细胞膜的渗透性,用MTT法测定不同浓度的甘油对32例原代肿瘤细胞的抑制作用。结果 MTT法显示2%甘油组肿瘤细胞抑制率为(40.19±30.63)%,1%甘油组的抑制率(30.23±27.58)%,两组间抑制率有显著性差异(P<0.01)。结论 化学法提高细胞间的通讯对原代瘤细胞有明显的抑制作用。     

鸡骨草提取物对体外乙型肝炎病毒的抑制作用

目的 观察鸡骨草提取物对体外HBsAg和HBeAg的抑制作用. 方法 将鸡骨草醇提取液与等容量、滴度为1：64的HBsAg和HBeAg阳性血清混合,使混合后鸡骨草的浓度分别为96,48,24,12和6 g&#8226;L^-1,用磷酸缓冲液与1：64的HBsAg和HBeAg阳性血清混合作空白对照. 每组6管, 37 ℃水浴8和16 h后,采用ELISA法测定HBsAg和HBeAg的吸光度（A值）,观察其对HBsAg或HBeAg的抑制作用. 结果 鸡骨草醇提取液对血清中HBsAg和HBeAg均具有明显的抑制作用,其中鸡骨草提取物在浓度为96,48 g&#8226;L^-1时对HBsAg、HBeAg抑制作用最为明显（P＜0.05或P＜0.01）. 结论 鸡骨草提取物在体外有较明显的抗HBsAg和HBeAg作用.     

阿魏酸衍生物的合成及其抗肿瘤活性研究

目的 设计、合成了一系列含有喹唑啉结构的阿魏酸衍生物，并对其抗肿瘤活性进行研究。方法 基于拼接原理，将阿魏酸与喹唑啉进行结合，并对喹唑啉6位进行修饰得到目标化合物，采用CCK-8法测试目标化合物对肺癌细胞A549的抗肿瘤活性，利用分子对接技术对目标化合物与表皮生长因子受体的结合模式进行模拟。结果 目标化合物的结构经HRMS(ESI)、¹H-NMR进行确证；体外抗肿瘤活性结果表明化合物11d、11f、12d和12g的IC₅₀低于阳性药吉非替尼，11c的IC₅₀值与吉非替尼相当。结论 化合物11d(IC₅₀=3.09 μmol·L^-1)对肺癌细胞A549抗肿瘤活性较强，值得深入研究。     

泰素帝对卵巢癌细胞分泌转化生长因子的影响及其与细胞增殖抑制的关系

目的：从细胞水平观察泰素帝对卵巢癌细胞株HO－8910的抑制作用及对分泌转化生长因子α、β的影响。方法：细胞增殖抑制实验检测不同浓度的泰素帝对人卵巢癌细胞株HO－8910增殖的抑制率;放免法测泰素帝作用后TGF－α的变化;ELISA法测泰素帝作用后TGF－β1的变化。结果：泰素帝在一定浓度范围对HO－8910细胞增殖有明显抑制作用;泰素帝作用48小时后,TGF－α水平降低,TGF－β1水平升高;TGF－α与细胞增殖呈正相关,TGF－β1与细胞增殖呈负相关。结论：泰素帝对人卵巢 癌细胞有明显的抑制作用,在一定范围内呈量－效关系;正性生长因子TGF－α及负性生长因子TGF－β1可能参与泰素帝对卵巢癌细胞的作用机制。     

丹参对实验性静脉血栓的抑制作用

目的:观察丹参对实验性静脉血辁的影响.方法:大鼠采用结扎下腔静脉形成静脉血栓模型进行实验,大鼠静脉注射丹参注射液50mg/kg及100mg/kg.结果:大鼠体内实验(iv)表明它具有抑制静脉血栓,阻抑胶原诱导的血小板凝集,促进纤维蛋白溶解活性的作用.当剂量为50mg/kg及100mg/kg时,血栓形成的抑制率分别为41.9%和54.8%(p<0.05).讨论:说明丹参有温和的抗静脉血栓作用,其机理可能与抑制血小板凝集及增加血浆纤维蛋白溶解活性有关.     

鱼腥草黄酮提取物对肿瘤细胞的抑制作用

目的研究鱼腥草黄酮类提取物在体外对人白血病细胞HL60、小鼠黑色素瘤细胞株B16BL6增殖抑制和凋亡的影响.方法(1)采用纯化水回流提取,大孔树脂分离的方法提取鱼腥草中黄酮类化合物;(2)应用MTT法检测黄酮类化合物对HL60和B16BL6肿瘤细胞株的细胞抑制率;(3)采用FCM法检测其对肿瘤细胞凋亡的影响.结果(1)鱼腥草黄酮提取物有抑制HL60和B16BL6细胞生长的作用,50%增值抑制浓度值分别为0.410,0.122 g·L-1,(2)鱼腥草黄酮提取物能诱导HL60和B16BL6细胞的凋亡.结论鱼腥草黄酮提取物能抑制HL60和B16BL6肿瘤细胞生长,具诱导凋亡的作用,为鱼腥草的抗肿瘤效应提供实验依据.     

丹皮酚在体外对4种肿瘤细胞株的增殖抑制作用

目的探讨丹皮酚在体外对肿瘤细胞增殖的影响.方法采用MTT法检测丹皮酚对体外培养的肿瘤细胞的增殖抑制作用.结果丹皮酚在7.81～250 mg·L-1剂量下对体外培养的人红白血病细胞系K562、乳腺癌基因细胞系T6～17、肝癌细胞系Bel-7404及宫颈癌细胞系HeLa的增殖均有抑制作用.药物浓度越高,抑制作用越强,有明显的剂量效应关系.对不同的细胞系抑制作用不同,其IC50值分别为:30.83(K562)、13.44 (T6～17)、69.89 (Bel-7404)及93.91 mg·L-1(HeLa).以丹皮酚125及250 mg·L-1分别作用于以上细胞,于24、48、72及96 h观察细胞的生长情况,发现丹皮酚对细胞的增殖抑制作用有明显的时间效应关系,作用时间越长,抑制作用越强.结论丹皮酚在体外对多种肿瘤细胞具有增殖抑制作用.     

复方木鸡冲剂对多种肿瘤细胞体外生长抑制作用的观察

目的研究复方木鸡冲剂在体外对不同组织来源肿瘤细胞的生长抑制作用。方法应用MTT法观察复方木鸡冲剂对多种肿瘤细胞的生长抑制作用，倒置显微镜观察细胞形态的变化，流式细胞术分析细胞凋亡。结果复方木鸡冲剂对不同组织来源的多种肿瘤细胞有明显的生长抑制作用，并能使HL-60和HepG2细胞的凋亡率增加。结论复方木鸡冲剂在体外对多种肿瘤细胞的生长有抑制作用，初步认为是通过诱导细胞凋亡实现的。     

山核桃叶提取物体外对HepG2细胞增殖抑制作用研究

目的研究山核桃叶提取物体外对人肝癌细胞株HepG2的抑制作用及其可能机理,为进一步开发利用山核桃奠定基础。方法采用系统溶剂法将山核桃叶70%乙醇浸膏分成五个部位,然后通过MTT法观察其对人肝癌细胞株HepG2的抑制作用,并通过吖啶橙染色法和流式细胞术观察其诱导凋亡作用。结果山核桃叶氯仿层和石油醚层对HepG2细胞均具有较强的增殖抑制作用,氯仿层相对较强,IC50为（49.70±4.42）mg.L-1,并可剂量依赖性诱导HepG2发生细胞凋亡,其中100mg.L-1处理组凋亡率达28.0%。结论山核桃叶氯仿层中和石油醚层含有抗肿瘤活性成分,其中诱导细胞凋亡是氯仿层提取物发挥抗肿瘤活性的作用机理之一,值得进一步深入研究。     

沙枣提取物对某些肿瘤细胞株及小鼠实体瘤和腹水瘤的抑制作用

目的探讨沙枣提取物对4种肿瘤细胞株及小鼠实体瘤和腹水瘤的抑制作用及机制。方法应用MTT法检测了提取物对4个肿瘤细胞株生长的抑制作用,检测提取物对实体瘤肿瘤生长的抑制率和腹水瘤小鼠的生命延长率,探讨提取物对肿瘤细胞凋亡的影响及机制。结果体外实验中观察到高中低剂量组具有明显抑制4种肿瘤细胞生长作用(P<0.01)。体内实验观察到沙枣提取物高中低剂量均有抑制S180实体瘤小鼠肿瘤生长、延长S180腹水瘤小鼠的生存时间作用。形态学观察发现提取物诱导了4种肿瘤细胞的凋亡,提取物诱导4种肿瘤细胞早期凋亡率在14.1%～24.5%之间,明显高于未处理肿瘤细胞(P<0.05)。提取物处理T24细胞后,bax、caspase-3蛋白表达明显增强,bcl-2表达降低。结论在本试验条件下,沙枣提取物有抑制肿瘤生长作用,其机制可能与下调bcl-2表达和上调bax的表达,高表达caspase-3诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

丹参注射液对体外培养成纤维细胞的增殖和形态的影响

目的研究丹参注射液对体外培养成纤维细胞的增殖和形态的影响。方法用含有浓度为0～200mg/mL丹参注射液的培养液作用于成纤维细胞,培养72h后,MTT检测细胞活性,显微镜下观察细胞形态变化。结果与对照组相比,丹参注射液在体外培养条件下对成纤维细胞的生长具有明显的抑制作用,并且随着药物浓度的增加,抑制作用也逐渐增强。结论丹参注射液对成纤维细胞有抑制作用并且呈剂量依赖性。提示其可能有预防或延缓肺纤维化疾病进程的作用。     

翡翠贻贝多糖的制备及体外对Hela肿瘤细胞生长的抑制作用

目的制备翡翠贻贝多糖（PVPS）,并对其体外抗肿瘤活性进行研究。方法采用热水提取,Sevage-酶联用法除蛋白分离得到翡翠贻贝粗多糖,再经DEAE-Sepharose和Sepharose CL-6B柱层析纯化得到PVPS。MTT法研究其体外抗Hela肿瘤细胞的活性。结果PVPS的得率为0.86%,PVPS在25mg/L、50mg/L、100mg/L浓度时对体外培养的Hela肿瘤细胞有不同程度抑制作用（P〈0.05或P〈0.01）。结论从翡翠贻贝中制备得到的PVPS具有体外抑制肿瘤细胞生长的作用。     

miR-370对肺癌细胞增殖、迁移活力的调节作用及分子机制研究

目的：研究miR-370对肺癌细胞增殖、迁移活力的调节作用及分子机制。方法：培养肺癌A549细胞株并分组,对照组用不含mimic、质粒的DMEM处理,NC mimic组转染NC mimic、miR-370 mimic组转染miR-370 mimic,空白质粒组转染空白质粒,空白质粒+miR-370 mimic组同时转染空白质粒和miR-370 mimic, EGFR质粒+miR-370 mimic组同时转染EGFR质粒和miR-370 mimic。检测细胞增殖活力的OD₄₉₀水平、迁移活力的相对愈合面积、miR-370及表皮生长因子受体(EGFR)的表达量。结果：miR-370 mimic组的OD₄₉₀水平、相对愈合面积、EGFR表达水平均明显低于对照组、NC mimic组(P<0.05);EGFR质粒+miR-370 mimic组的OD₄₉₀水平、相对愈合面积明显高于空白质粒+miR-370 mimic组(P<0.05)。结论：miR-370能够降低肺癌细胞的增殖、迁移活力且抑制EGFR表达是可能的分子机制...