柠檬酸盐和EDTA缓冲液对弥漫性大B细胞淋巴瘤Ki-67和bcl-2抗原修复的比较

目的探讨柠檬酸盐和EDTA缓冲液对弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphomas,DLBCL)中Ki-67和bcl-2抗原修复的比较。方法运用高压锅热抗原修复法,选择柠檬酸盐和EDTA两种缓冲液同时进行抗原修复,比较了78例弥漫性大B细胞淋巴瘤Ki-67和43例DLBCL bcl-2的免疫组化染色应用效果。结果免疫组化染色采用EDTA与柠檬酸盐缓冲液相比,Ki-67指数78例中有76例明显提高,两者差异有统计学意义(P<0·01);bcl-2染色43例中有13例表达明显提高,两者差异有统计学意义(P<0·01)。结论在实际免疫组化染色中,EDTA缓冲液较柠檬酸盐缓冲液能极大地提高弥漫性大B细胞淋巴瘤的Ki-67和bcl-2抗原的表达。     

生理盐水作为抗原修复液的可行性

免疫组化技术是临床病理工作中必不可少的辅助诊断技术,而抗原修复则是免疫组化成功与否的决定性因素之一.既往抗原修复液多采用柠檬酸盐缓冲液、EDTA溶液等,但均或多或少存在某些缺点.我们利用生理盐水作为抗原修复液,发现其抗原修复效果满意,方法简单、经济实惠,并经我室6 000余例临床标本验证,现介绍如下.     

免疫组化中高压消毒蒸锅处理修复抗原时间的选择

石蜡切片浸泡于0．01mmol／L柠檬酸缓冲液（pH6．0）中，置高压消毒蒸锅处理（125℃103KPa）4～12min，以恢复组织中因甲醛固定而被封闭的抗原。结果表明：相同温度和压力，但经不同时间处理后，抗原活性部位的暴露情况不同，免疫组化染色的敏感性和效果也不一致．提出了高压消毒蒸锅在处理修复抗原时，需摸索最佳修复时间，以期抗原活性部位充分暴露，从而提高免疫组化的敏感性和显色效果。     

抗原修复方法在Ⅳ型胶原免疫组化染色中的应用

Ⅳ型胶原（collagen Ⅳ）是构成人体各种组织基膜的胶原蛋白家族成员,参与基膜的构成并对维持其结构的完整性起重要作用.要做好collagen Ⅳ免疫组化染色抗原修原是至关重要的步骤,修复方法的不同会直接影响collagen Ⅳ免疫组化染色的质量.为了达到敏感、可操作性和可重复性,我们采用柠檬酸三钠缓冲液热修复加胰蛋白酶消化双重抗原暴露法行collagen Ⅳ免疫组化染色获得较为满意的结果.[第一段]     

四种修复方法对p504s免疫组化染色效果的比较

寻找p504 s免疫组化染色最适合的修复方法,以达到最佳染色效果。收集60例前列腺癌切片,分别对其进行EDTA修复、高压修复、微波修复及胃酶修复,然后进行免疫组化染色,比较何种修复方法修复后免疫组化染色效果最优。经微波修复阳性率（＋＋＋）者为80%,而背景（-）者达95%,综合效果明显优于其他三种方法（P〈0.05）。由此可见,对p504 s免疫组化染色采用微波修复,可达到最佳染色效果。     

EDTA作为抗原修复液用于脑石蜡片NMDA-R2A免疫组织化学检测的方法与效果探讨

石蜡切片进行免疫组织化学染色的优势在于能得到极为清晰美观的组织形态,其中修复待检测物质的抗原性（抗原修复）是一个关键步骤。抗原修复的效果直接影响到最终的染色结果。用pH值6．0的枸橼酸（柠檬酸）缓冲液进行微波修复或高压修复目前使用最广,是国内外绝大多数实验室的首选方法。该方法能有效修复大多数物质的抗原性,得到阳性强、结果美观的图像,重复性好,颇受广大实验工作的欢迎。但经过长期实践和总结发现枸橼酸缓冲液用于抗原修复有一个比较隐蔽的缺陷：它能使某些膜受体的阳性分布区域向细胞质内扩大。比如NMDA-R2A是一种广泛分布于脑内的促离子型谷氨酸受体,免疫电镜显示它应当分布在神经细胞的突触后膜上。但使用枸橼酸缓冲液对大鼠中脑石蜡切片进行抗原修复后,阳性结果分布于神经细胞的整个胞质（图113）;这与NMI）A-R2A的实际分布有明显出入。由于细胞质阳性的图像比较美观,并且这种阳性的成因也有解释的余地,因此常常被实验人员误认为是正常的。我们尝试了其它一些修复方法,综合比较后认为乙二胺四乙酸（EDTA）溶液对于NMDA-R2A这类膜受体的检测是一种更好的抗原修复液,并对其使用方法和效果探讨如下。[第一段]     

柠檬酸抗原热修复时间对免疫组化结果的影响

正抗原修复是免疫组化染色过程中非常关键的步骤,加热抗原修复技术的发明更是被誉为免疫组化的革命性突破。有研究认为~([1]),高温高压热修复法是对大多数抗原最为稳定和有效的方法之一。但是高压加热抗原修复时间控制较为困难,修复时间过长是否会引起非特异性着色仍未有定论。本文着重探讨柠檬酸不同高压加热抗原修复时间对多种常     

不同染色条件对COVID-19 Nucleocapsid抗体免疫组化染色的比较

目的 探讨新型冠状病毒肺炎(coronavirus disease2019,COVID-19)Nucleocapsid抗体在不同平台、不同操作条件下的染色情况,筛选该抗体的最佳染色条件,为COVID-19的病理诊断和临床治疗提供参考。方法 将8例COVID-19尸检肺组织石蜡样本制成切片,分别使用全自动免疫组化染色仪和手工免疫组化进行染色。全自动免疫组化染色仪一抗稀释浓度分别为1:2 000、1:4 000、1:8 000;手工免疫组化修复分别采用EDTA和柠檬酸修复,经37℃孵育1 h和4℃孵育过夜,一抗稀释浓度分别为1:2 000、1:4 000、1:8 000。结果 两种染色结果均显示非特异性着色,与一抗浓度呈正相关;手工免疫组化条件下柠檬酸修复后免疫组化染色特异性较高;且经4℃孵育过夜染色特异性较高,阳性信号明确。结论 采用全自动免疫组化染色仪进行染色时,一抗稀释浓度为1:8 000时染色效果最佳;手工免疫组化染色建议采用柠檬酸修复,一抗稀释浓度为1:4 000,并经4℃孵育过夜染色效果最佳。     

微波炉与高压锅抗原修复对ER、PR及C-erbB-2结果的影响

免疫组化对病理诊断有重要的意义,被广泛应用于病理诊断与鉴别诊断中, ER、PR及C-erbB-2等一些免疫组化指标更是临床药物治疗的风向标,在病理工作中越来越显得重要。稳定而高质量的免疫组化结果,是病理诊断的基础和保证。然而影响免疫组化染色结果的因素很多,如组织固定、抗原修复、抗体质量、显色过程、缓冲液pH值以及技术员的操作水平等,各家医院免疫组化的质量不尽相同,这也是近几年重视对免疫组化质控工作的原因。在2006年5月前浙江省奉化市人民医院病理科的抗原修复一直采用微波炉修复,之后开始采用高压锅,两种方法均采用pH 9.0的EDTA修复液修复,所有试剂均购自福州迈新公司,人员固定。2012年的一项科研项目回顾性研究发现,因抗原修复方法的改变重新制作的乳腺癌中ER、PR及C-erbB-2的检测结果与过去结果一致性不理想,进一步证实微波炉与高压锅修复抗原存在差异,现介绍如下,以提高病理医师的重视。     

EDTA在HE染色中的应用

正苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色是病理技术中最基本的染色方法,染色理想状态是在镜下见细胞核与细胞质蓝红相映,对比明显;核膜及核染色质颗粒清晰可见。实际工作中因组织干涸、固定脱水不足、脱钙等原因会造成切片染色困难,细胞核染色淡或出现局部灰染,给临床病理诊断带来困扰。经过大量实验,本科室对处理不好的组织切片染色前用EDTA抗原修复液进行高压修复,使染色质量得     

用于甲醛固定石蜡包埋组织的改良免疫荧光法***

背景：甲醛固定石蜡包埋的标本易于保存,免疫荧光法定位定量能精确支持多种标记物。 目的：建立适合于甲醛固定石蜡包埋组织的改良免疫荧光法。 方法：将取自类风湿性关节炎和无骨性关节炎患者的滑膜血管翕和髋臼增生组织的石蜡切片进行常规脱蜡复水,观察不同的柠檬酸缓冲液热修复时间、血清封闭时间、一抗浓度和荧光标记物在免疫荧光法中显色的差异。 结果与结论：柠檬酸高温修复15 min后滴加抗原修复液比单纯高温修复10~20 min,组织结构保存更为完整,且背景染色无显著区别;选择体积分数10%二抗来源正常血清室温封闭40 min作为最佳的抗原封闭条件,既可以保证良好的封闭效果,同时又不影响一抗和抗原位点结合;较高一抗浓度(10 mg/L)能保证明显的荧光信号、低背景和可接受的成本。进行石蜡切片免疫荧光实验,并用普通荧光显微镜观察,应避免采用FITC等蓝色激发光、呈现绿色荧光信号的标记染料基团。提示柠檬酸高温修复15 min后滴加抗原修复液,选择体积分数10%二抗来源正常血清室温封闭40 min,较高一抗浓度,普通荧光显微镜观察可提高免疫荧光法的检测质量。     

H-E染色切片灰染修复方法的比较

<正>组织切片在常规H-E染色中,有时会出现染色模糊不清(灰染)的现象,这给切片的判读造成困难。这一问题的形成原因及补救方法,有过文献报道但效果各异~([1-3])。本研究采用几种不同的方法对灰染的组织切片进行补救并比较了各自的效果,现介绍如下。1材料和方法1.1材料和试剂收集本系病理外检灰染的组织蜡块和切片10例。10%中性甲醛、Gill苏木精染液、0.5%伊红液由福建医科大学病理学系配制~([4]),柠檬酸修复粉剂、EDTA抗原修复液均购自福州迈新     

微波修复在冰冻切片免疫组化中的应用

微波修复法多用于石蜡切片 ,我们在长期的研究生免疫组化教学过程中 ,实行改良 ,将微波抗原修复法用于冰冻切片 ,取得了满意的效果 ,方法如 :1.常规固定取脑组织冰冻切片。 2 .漂洗后 3%H2 O2 封闭 10分钟 ,蒸馏水洗 2分钟 3次。3.微波抗原修复 :入柠檬酸盐缓冲液 (PH6 .0 ) ,用微波或电炉加热 ,循环 3次后入 1% BSA孵育 15分钟。 4.入一抗 30分钟 ,转入二抗2 0分钟 ,三抗 2 0分钟 ,显色。结果讨论 :1.与对照切片成比 ,阳性细胞染色增强 ,背景变浅 ,阳性检出率提高。由于常规的冰冻切片免疫组化方法所用的固定剂多含甲醛 ,醛基与蛋白质中…     

改良EDTA脱钙液在骨髓活检组织中染色效果观察

正骨髓活检结合免疫组化染色对于血液系统疾病诊断、判断临床预后具有重要意义~([1])。骨髓组织细胞种类多和组织学形态丰富,部分病例需结合免疫组化染色以明确诊断~([2])。骨髓组织质地较硬,需脱钙后才能进行常规制片和免疫组化染色~([3])。其中最常用的酸类脱钙液易造成组织细胞表面抗原破坏或丢失,影响免疫组化染色结果~([4])。EDTA的脱钙作用优于酸性脱钙液~([5]),但脱钙速度慢、脱钙后组织会稍微变硬~([6])。本实验通过比较改良EDTA脱钙液脱钙骨髓与混合酸脱钙液脱钙及不脱钙骨髓的HE染色和免疫组化染色效     

不同冷却方法对免疫组化检测结果的影响

在免疫组化中,组织固定、抗原修复、显色反应是保证免疫组化染色质量的重要步骤。我们用PV6000免疫组化染色法,经过长时间的摸索与实验,发现在严格按照染色步骤要求操作的同时,高温高压抗原修复后用自然冷却法检测比快速冷却法效果好。现在以乳腺癌为例,介绍如下。     

DPX封片胶在牙组织免疫组化染色防脱片中的作用

目的:研究DPX封片胶在牙组织免疫组化染色中的防脱片效果。方法:狗上前牙EDTA脱钙、常规石蜡包埋、切片、脱蜡、水洗、干燥后,用DPX封片胶在组织边缘和玻片上涂抹一圈,37℃烤干DPX封片胶,EnVision技术观察IL-1、基质金属蛋白酶1(MMP-1)、MMP-9的表达。结果:DPX封片胶处理后的切片,经微波抗原修复后,切片上的组织完整没有边缘脱落破损现象。免疫组化染色后,组织形态基本完整,相应分子表达定位准确,染色结果清晰。结论:DPX封片胶在牙齿等含钙组织免疫组化染色中有良好的防脱片作用。     

EDTA缓冲液在微波热修复神经组织糖皮质激素受体免疫组化染色中的应用

目的比较不同修复液对大鼠糖皮质激素受体(GR)在神经染色效果的影响。方法分别采用枸椽酸修复液,pH8.5、9.0、9.5的EDTA修复液对大脑切片进行微波修复,比较不同的修复液显色阳性细胞数和OD值。结果 EDTA修复液显色效果更明显,pH9.0的EDTA修复液显色效果最明显。     

不同脱钙方式对骨组织样本不同病理分析的影响

<正>骨与软组织肿瘤生物学特性复杂，在临床病理工作中有时依据形态学较难做出准确的病理诊断，需行免疫组化、FISH、PCR、Sanger测序及NGS等检测^[1]。骨组织质地坚硬，应使用脱钙液将组织软化后制片。目前，临床使用较多的仍为混合酸性脱钙液，其脱钙速度快，但易对组织抗原及DNA造成不可逆的损伤; EDTA性质温和，对组织抗原及核酸保存较好，但缺点是脱钙时间久且效果差。有研究显示改良EDTA常温处理骨髓样本20～24 h,HE染色佳，免疫组化染色强度适中，定位准确^[2]。     

不同修复方法对免疫组化染色结果的影响

目前,免疫组化染色技术已成为病理学诊断中不可少的重要手段,而进行抗原修复使抗原决定簇暴露则是免疫组化染色成功的关键。本研究中,观察了高压加热法、微波加热法、胰酶消化和胃酶消化4种抗原修复方法对免疫组化染色结果的影响。1材料和方法1.1材料收集乳腺癌、淋巴瘤和大肠癌组织标本各12例,均由唐山市协和医院病理科提供。选用鼠抗人单克隆抗体(mAb)ER、PR、c-erbB-2、CK7、EMA、CEA、CK(pan)、MDR-1、P53、Ki67、GCDFP-15、LCA、CD3、CD20、CD45RO、CD79α及PV9000试剂盒,均购自北京中山生物技术有限公司。1.2方法按…     

用EDTA缓冲液做抗原修复增进ER、PR免疫组化染色

要做好雌、孕激素受体 (ＥＲ、ＰＲ)免疫组化染色 ,抗原修复是一个至关重要的步骤。修复液的选择会直接影响ＥＲ、ＰＲ的免疫组化染色质量。为了达到敏感、价廉、简单、可操作性和可重复性 ,我们采用乙二胺四乙酸 (ＥＤＴＡ)缓冲液0 0 0 1ｍｏｌ/Ｌ(ｐＨ8 0 ) ,作为ＥＲ、ＰＲ抗原修复液 ,行ＥＲ、ＰＲ染色 ,获得了较为满意的结果。1　材料和方法1 1　材料　 5例已知乳腺癌ＥＲ、ＰＲ阳性标本。1 2　修复液　 1 8ｇＥＤＴＡ和 0 9ｇＥＤＴＡ 2Ｎａ(乙二胺四乙酸二钠 ) ,加 10 0 0ｍｌ蒸馏水 ,用 10 %ＮａＯＨ(约 8ｍｌ)调ｐＨ8 0。1 3　操…