HDL对3T3-L1细胞葡萄糖转运的影响及其机制研究

目的探讨HDL对3T3-L1细胞葡萄糖转运的影响及其机制。方法通过对3T3-L1成纤维细胞的分化,培养符合实验要求的3T3-L1脂肪细胞。通过葡萄糖消耗实验和~3H标记的2-脱氧葡萄糖的摄取实验,研究HDL对葡萄糖转运的影响,应用RT-PCR和Western blot探讨其机制。结果 HDL可以促进3T3-L1脂肪细胞对葡萄糖的转运和摄取。3T3-L1脂肪细胞对葡萄糖的转运和摄取过程中,蛋白在RNA转录水平上没有增加,而是发生了AKT、AMPK蛋白的磷酸化。结论 HDL促进3T3-L1脂肪细胞对葡萄糖的摄取是通过AKT和AMPK两种途径来实现的。     

三黄汤对3T3-L1脂肪细胞糖脂代谢的影响

目的研究三黄汤(SHD)对胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞糖脂代谢的作用及可能的调控机制。方法高糖高胰岛素(含地塞米松)诱导3T3-L1脂肪细胞发生胰岛素抵抗,给予对照药物罗格列酮(Ros)或不同浓度SHD干预24 h,检测培养上清中葡萄糖减少(消耗)量、甘油和游离脂肪酸(NEFA)浓度以及细胞内甘油三酯(TG)含量;以2-脱氧-[3H]-葡萄糖摄入法观察脂肪细胞对葡萄糖的转运率;应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测葡萄糖转运体4(GLUT-4)的mRNA表达水平,以Western blot检测GLUT-4蛋白的表达水平。结果与对照组相比,SHD的中高剂量(5、10、20、40 g·L~(-1))能使胰岛素抵抗脂肪细胞的葡萄糖消耗量和葡萄糖的转运率增加(P<0.01)、脂肪细胞内TG降低(P<0.01),细胞上清液中甘油的浓度不同程度增加(P<0.01),并明显减少NEFA的溢出,以上变化在三黄汤5~20g·L~(-1)范围内呈现量效关系;同时,Ros增加葡萄糖消耗、葡萄糖的转运率和细胞内TG积累(P<0.01),对培养上清中甘油、NEFA无明显影响(P>0.05)。SHD中、高剂量与Ros都能不同程度明显上调GLUT-4的mRNA和蛋白表达水平(P<0.01)。结论 SHD能明显增加3T3-L1脂肪细胞的葡萄糖摄取和消耗,促进细胞内TG分解,并减少NEFA溢出,通过调节糖代谢和脂代谢改善胰岛素抵抗。     

促甲状腺激素对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖转运蛋白4表达的影响

目的 探讨促甲状腺激素(TSH)对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)表达的影响.方法 体外诱导3T3-L1前脂肪细胞为成熟脂肪细胞.以不同浓度牛TSH(0.01 IU/L、0.1 IU/L、1 IU/L)刺激成熟脂肪细胞,蛋白质印迹法分别检测48 h后成熟脂肪细胞GLUT4蛋白表达水平,ELISA方法检测细胞培养液中自细胞介素6(IL-6)水平.结果 与空白对照组相比,以不同浓度(0.01、0.1、1 IU/L)牛TSH刺激成熟脂肪细胞48 h后GLUT4蛋白表达呈下降趋势,分别下降约23%、44%、74%(均P<0.05),细胞培养液中IL-6水平明显增加[(101.9300±6.8396)、(104.1533±5.9619)、(129.0167±6.4232)比/L比(93.2500±2.6695)μg/L,P<0.05].结论 TSH可下调3T3-L1脂肪细胞GLUT4蛋白的表达.

Abstract：

Objective To test if thyroid-stimulating hormone(TSH) can suppress expression of glucose transporter 4(GLUT4)in 3T3-L1 adipocytes. Methods 3T3-L1 preadipocytes were induced to differentiate into adipocytes. These adipocytes were treated with 0 to 1.0 IU/L TSH for up to 48 hours. Protein levels of total GLUT4 were quantified by western blotting. Culture medium interleukin-6 level was assessed by enzyme-linked immunosor-bent assay(ELI(S)A). Results The GLUT4 protein level after 48 hours induced with different dose(0. 01 IU/L, 0.1 IU/L, 1 IU/L) of TSH presented a significant 23% , 44% , 74% ( all P < 0.05 ) reduction compared with control group. While the interleukin-6 level of culture medium increased significantly [( 101. 9300 ± 6. 8396), (104.1533 ±5.9619), (129.0167 ±6.4232) μg/L vs (93.2500 ±2.6695)μg/L, P<0.05]. Conclusion In 3T3-L1 adipocytes, TSH can decrease expression of GLUT43.     

L-葡萄糖氟苷的合成

目的 对L-葡萄糖氟苷进行合成研究,以通过化学手段解决稀有L-葡萄糖类化合物的来源问题。方法 利用“首尾翻转”策略,经异头位的相转移催化反应、羟甲基氧化、脱羧氟代等关键反应步骤,完成目标化合物的合成。结果 以商业可得的全苄基保护的D-葡萄糖半缩醛为原料,通过在异头位引入丙二腈基团发展了一种合成L-葡萄糖氟苷的新方法。经9步以9%的总收率合成了L-葡萄糖氟苷,为L-葡萄糖氟苷糖基供体的合成提供了方法学基础。     

大黄素激活AMPK、PPARγ对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取的影响

目的研究大黄素对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取的影响,并探讨其作用机制。方法诱导分化成熟的3T3-L1脂肪细胞经LPS干预后分为Control组、大黄素给药组(1、10、50μmol·L~(-1)),检测6-NBDG摄取情况及GLUT4、PPARγ、AMPKα1/2、p-AMPKα1/2、IRS-1、p-IRS-1、Adiponectin、chREBP-α和chREBP-β的表达。用AMPK和PPARγ抑制剂分别干预后,检测6-NBDG的摄取情况。同时,以STZ诱导大鼠2型糖尿病模型,分为Control组和大黄素给药组,检测大鼠内脏脂肪组织的Adiponectin的mRNA表达及GLUT4、AMPKα1/2、p-AMPKα1/2蛋白表达。结果与Control组相比,大黄素可促进GLUT4、Adiponectin、chREBP-α、chREBP-β的mRNA表达及GLUT4、PPARγ、IRS-1、p-IRS-1、AMPKα1/2和p-AMPKα1/2的蛋白表达(P<0.05),可提高3T3-L1脂肪细胞对6-NBDG的摄取,经AMPK及PPARγ抑制剂分别干预后,大黄素对6-NBDG的摄取降低(P<0.05)。同时,大黄素可促进T2DM大鼠内脏脂肪组织Adiponectin的mRNA表达及GLUT4、AMPKα1/2和p-AMPKα1/2的蛋白表达(P<0.05)。结论大黄素可促进3T3-L1脂肪细胞的葡萄糖摄取功能,其作用机制与激活Adiponectin及IRS-1,进而激活AMPK和PPARγ的信号通路有关。     

白芍总苷对胶原性关节炎大鼠血糖和葡萄糖转运体的影响

目的研究白芍总苷( TGP)对胶原性关节炎大鼠血糖和葡萄糖转运体的调控作用。方法将 30只大鼠采用随机数字表法分为正常组、模型组、 TGP组和甲氨蝶呤( MTX)组。采用在大鼠右后足跖和尾根部皮下注射弗氏完全佐剂和鸡 Ⅱ型胶原诱导胶原性关节炎。大鼠致炎后第 14天( D14)TGP组大鼠按照每天 50 mg/kg,MTX组按照每 3天 0.5 mg/kg,正常组和模型组给予等量溶媒,各组连续灌胃给药 16 d。在大鼠致,炎前和致炎后的不同时间点( D14-D30)观察大鼠足爪肿胀;大鼠致炎前和致炎后的 D14和 D30测量大鼠血糖浓度。末次给药( D30)结束后,酶联免疫吸附法检测血液中胰岛素水平和糖化血红蛋白水平,后处死大鼠,观察踝关节病理,蛋白质印迹法检测大鼠肝组织葡萄糖转运体 -2(GLUT-2)和肌肉组织 GLUT-4水平。结果与正常组相比,模型组大鼠足爪明显肿胀( P<0.01)模型组大鼠踝关节病理评分明显增高( P<0.01);与模型组相比, TGP组关节肿胀水平明显低于模型组,从 D22起差异有统计学,意义( P<0.01)而 MTX组从 D18起差异有统计学意义, TGP组与 MTX组大鼠踝关节病理评分均低于模型组( P<0.01)。与正常组相比较,模型组,大鼠空腹血糖水平明显升高( P<0.01),经 TGP给药后,关节炎大鼠血糖水平降为( 9.97±1.13)mmol/L,差异有统计学意义( P<0.01)。与正常组相比较,模型组大鼠空腹胰岛素水平与糖化血红蛋白所占总蛋白比例明显升高(P<0.01)经 TGP给药后,关节炎大鼠胰岛素水平降为(16.7±1.87)μg/L,糖化血红蛋白比例降为( 0.63±0.07)%,差异有统计学意义( P<0.0,1)。与正常组相比,模型组大鼠空腹肌糖原与肝糖原水平明显降低( P<     

褪黑素改善胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞葡萄糖的摄取

目的研究褪黑素对游离脂肪酸(FFA)诱导的胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取能力的影响。方法 "鸡尾酒"法培养诱导3T3-L1成纤维细胞分化成脂肪细胞,油红O染色鉴定脂肪细胞形态;利用棕榈酸(300μmol/L)诱导脂肪细胞的胰岛素抵抗,采用液体闪烁法检测细胞葡萄糖摄取能力;检测褪黑素对FFA处理的3T3-L1脂肪细胞的葡萄糖摄取能力的影响。结果 3T3-L1细胞经诱导分化成脂肪细胞,油红O染色呈圆形,脂滴呈典型的"戒环样"形态;用FFA处理上述细胞6 h后,细胞的葡萄糖摄取能力明显降低;褪黑素可以促进FFA处理的3T3-L1脂肪细胞胰岛素介导的葡萄糖摄取。结论 FFA可以降低胰岛素诱导的体外培养的脂肪细胞葡萄糖摄取能力,可能是胰岛素抵抗的病因之一。褪黑素可以干预FFA的作用,增加细胞的葡萄糖摄取能力。     

催产素对3T3-L1脂肪细胞糖脂代谢的影响

目的 观察催产素对3T3-L1脂肪细胞糖脂代谢的影响。方法 3T3-L1前脂肪细胞体外培养,并诱导其分化成熟为脂肪细胞。研究催产素对脂肪细胞葡萄糖消耗量以及三酰甘油、游离脂肪酸和甘油的影响。采用实时荧光定量PCR法检测糖脂代谢相关基因GLUT-1、GLUT-4、ATGT、HSL的m RNA表达。结果 与对照组比较,催产素20、50、100μg/m L组葡萄糖消耗量有所增加,且表现出剂量相关。催产素组较对照组的三酰甘油降低,而甘油和游离脂肪酸增高。催产素50μg/m L组中脂代谢相关基因HSL表达明显高于对照组,糖代谢相关基因GLUT-4 m RNA表达水平增加。结论 催产素处理可减少3T3-L1细胞脂质合成、增加脂质分解作用,并可明显改善脂质积聚。     

臭牡丹苯乙醇苷类化合物的分离鉴定

目的研究臭牡丹地上部分的化学成分。方法采用大孔吸附树脂、硅胶、凝胶柱色谱和高效液相色谱进行分离纯化，根据化合物的理化常数和光谱数据进行结构鉴定。结果从臭牡丹地上部分的乙醇提取物中分离得到10个苯乙醇苷类化合物，其化学结构分别确定为clerodendronoside (1), acteoside (2), isoacteoside (3), cistanoside C (4), jionoside C (5), leucosceptoside A (6), cistanoside D (7), campneoside I (8), campneoside II (9), cistanoside F (10)。结论化合物1为新化合物，化合物4～10为首次从该植物中分离得到。     

杜仲中槲皮素、京尼平苷及桃叶珊瑚苷对小鼠成骨样细胞系MC3T3-E1增殖和分化的影响

目的 对杜仲抗骨质疏松的药效成分进行初步筛选。方法 采用小鼠成骨细胞MC3T3-E1体外培养模型, 通过MTT法测定细胞增殖, ELISA方法测定碱性磷酸酶(ALP)活性, 观察杜仲中槲皮素、京尼平苷及桃叶珊瑚苷对成骨细胞增殖和分化的影响。结果 槲皮素促MC3T3-E1细胞增殖的有效浓度为10^-6 mmol/L, 桃叶珊瑚苷则为10^-5 mmol/L;10^-4 μmol/L京尼平苷在干预后4 d, 才逐渐显现出促进MC3T3-E1增殖作用。槲皮素(10^-5、10^-3 mmol/L)、京尼平苷(10^-3 mmol/L)和桃叶珊瑚苷(10^-3 mmol/L)可增加MC3T3-E1 ALP活性。结论 槲皮素、京尼平苷和桃叶珊瑚苷可促进成骨细胞的增殖和分化, 且作用强度具有浓度相关性和时间相关性, 可能为杜仲抗骨质疏松的药效物质基础。     

腺苷蛋氨酸对L02细胞尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶表达的影响

目的探讨腺苷蛋氨酸(S-adenosyl-L-methionine,SAMe)对尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(Uridine Diphosphate Glucuronsyltrans-ferase,UGT)表达的调节作用。方法体外培养L02细胞加入药物分别处理0～72 h后应用RT-PCR法观察SAMe对UGT mRNA的作用。结果 0.5 mmol/L的SAMe在24～72 h可上调UGTmRNA的表达,0.1～1 mmol/L的SAMe都能上调UGTmRNA的表达,但0.5mmol/L的作用最强,强于苯巴比妥。结论 SAMe可以上调UGTmRNA的表达,从而促进胆红素代谢。     

尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶的研究进展

目的：介绍尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶（UGT）的最近研究进展;方法：查阅了大量相关文献,总结了UGT的功能、诱导、底物及其基因研究等内容;结果：UGT是一种最重要的Ⅱ相代谢酶,对它的研究已经深入到基因水平,且可从分子水平上去解释它的作用机理;结论：人们对UGT有了更深更全面的了解。     

尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶的研究进展

目的:介绍尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGT)的最近研究进展;方法:查阅了大量相关文献,总结了UGT的功能、诱导、底物及其基因研究等内容;结果:UGT是一种最重要的Ⅱ相代谢酶,对它的研究已经深入到基因水平,且可从分子水平上去解释它的作用机理;结论:人们对UGT有了更深更全面的了解。     

葡萄糖和胰岛素对4T1肿瘤细胞分泌VEGF的影响

目的通过模拟糖尿病病程不同阶段患者体内葡萄糖和胰岛素浓度的变化,观察不同浓度的葡萄糖和胰岛素对乳腺癌细胞株4T1肿瘤细胞分泌血管内皮生长因子（VEGF）的影响。方法体外培养4TI肿瘤细胞,根据培养液中加入的葡萄糖和胰岛素浓度的不同,将实验所用细胞分成15组。培trotsh后收集细胞培养上清,ELISA法检测VEGF的浓度。结果B、c、D、E组VEGF的浓度与A组（对照组）比较差异无统计学意义（P〉0．05）。H、I组VEGF的浓度明显高于A组（P．〈0．05）,而F、G、J组VEGF的浓度与A组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。L、M组VEGF的浓度明显高于A组（P〈0．05）,而K、N、O组VEGF的浓度与A组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论高浓度的胰岛素能显著增加4T1肿瘤细胞VEGF的分泌,葡萄糖的浓度对4T1肿瘤细胞分泌VEGF无明显影响。     

川续断皂苷Ⅵ对3T3-L1细胞的增殖和分化影响

目的研究川续断皂苷Ⅵ(asperosaponinⅥ,ASAⅥ)对3T3-L1前脂肪细胞的增殖及成脂分化影响,以进一步了解其药理作用。方法以3T3-L1前脂肪细胞为靶细胞,通过噻唑蓝(MTT)法观察不同浓度川续断皂苷Ⅵ对3T3-L1细胞增殖能力的影响;不同浓度(0、10、25、50μmol·L-1)川续断皂苷Ⅵ干预3T3-L1细胞的成脂诱导分化,油红O染色检测3T3-L1细胞分化程度;试剂盒测定各组培养液中葡萄糖及游离脂肪酸含量;荧光定量PCR(Q-PCR)检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activatedreceptorγ,PPARγ)、CCAAT增强子结合蛋白(CCAAT/enhan-cer-binding proteinα,C/EBPα)mRNA表达水平。结果 MTT法测定表明不同浓度川续断皂苷Ⅵ对3T3-L1细胞增殖能力的影响不同,其中10μmol·L-1浓度组作用24 h后促增殖作用最明显,随着川续断皂苷Ⅵ浓度增加,促增殖效应降低;川续断皂苷Ⅵ能够剂量依赖性的抑制3T3-L1细胞成脂,减少细胞内脂滴聚集,抑制细胞对葡萄糖的吸收利用,减少游离脂肪酸形成,下调成脂过程中PPARγ和C/EBPαmRNA表达。结论川续断皂苷Ⅵ具有促进3T3-L1细胞增殖作用,并通过下调PPARγ和C/EBPα基因抑制3T3-L1细胞成脂分化。     

X H-211对3T3-L1细胞增殖、分化和凋亡的影响

目的：研究异黄酮脂肪酸酯类化合物 XH‐211对前脂肪细胞株3T3‐L1增殖、分化和凋亡的影响。方法体外培养3T3‐L1细胞,加入不同浓度XH‐2111×10‐4、1×10‐5、1×10‐6和1×10‐7 mol／L ;同时另设DMSO空白对照组。采用MTT法和流式细胞术分别检测3T3‐L1细胞增殖和凋亡情况,油红染色法观察3T3‐L1细胞分化过程产脂量的变化。结果与空白对照组相比,XH‐211呈浓度依赖性地抑制3T3‐L1细胞增殖和油脂的产生,诱导3T3‐L1细胞和分化成熟的3T3‐L1细胞凋亡（P＜0．05）。结论 XH‐211通过诱导3T3‐L1细胞凋亡,抑制细胞增殖,减少分化过程中的产脂量,从而减少脂肪堆积,降低血脂。     

尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因多态性对药物代谢影响的研究进展

由尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UDP-glucuronosyltransferase,UGT)催化完成的葡萄糖醛酸结合反应是生物体内重要的Ⅱ相代谢途径,它与毒性或活性物质结合形成葡萄糖醛酸苷,将内源性、外源性化合物通过胆汁或肾脏排出体外。UGT是一个超家族酶,因主要利用UDP-尿苷二磷酸葡糖醛酸为糖基供体而得名。人类UCT广泛分布于体内的各种组织,包括肾、脑、皮肤、肠、脾、胸腺、心脏等,其中以     

白芍总苷胶囊对慢性荨麻疹T细胞免疫平衡的影响

目的:观察白芍总苷胶囊对慢性荨麻疹T细胞免疫平衡的影响。方法:102例慢性荨麻疹患者,随机均分为治疗组和对照组,2组均给予抗过敏治疗,治疗组另给予白芍总苷胶囊0.6g,tid。治疗8周后比较2组患者临床治疗效果及静脉血T细胞亚群的变化。结果:治疗8周后,临床有效率治疗组为96.1%,对照组为86.3%,治疗组显著高于对照组(P<0.05);症状评分治疗组为(0.31±0.19)分,对照组为(1.02±0.20)分,治疗组显著低于对照组(P<0.05);治疗后静脉血Th1、Th2细胞比例及Th1/Th2比值治疗组分别为16.52±3.04、17.29±3.29、0.84±0.23,对照组分别为15.14±2.17、20.06±3.74、0.71±0.20,治疗组Th1细胞比例、Th1/Th2比值高于对照组,Th2细胞比例低于对照组,2组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:白芍总苷胶囊辅助治疗慢性荨麻疹疗效较好,能够调节慢性荨麻疹患者T细胞免疫平衡。     

异叶败酱总苷片对人大肠癌HT-29细胞凋亡的影响

目的：研究异叶败酱总苷片对人大肠癌细胞凋亡的影响及作用机制。方法：建立人大肠癌HT-29裸鼠移植瘤模型，设立异叶败酱总苷片低、中、高剂量组和空白组、5-氟脲嘧啶（5-FU）＋甲酰四氢叶酸钙（CF）对照组，给药8周后处死裸鼠，瘤体称重,末端原位标记染色法（TUEL）检测凋亡指数，分别行半胱天冬氨酸蛋白酶-3（caspase-3），Bax和Bcl-2免疫组化染色，图象分析系统定量检测并比较该3种物质表达情况。结果：异叶败酱总苷片各组瘤重小于空白对照组，而凋亡指数均高于空白对照组和5-FU＋CF组，其中高剂量组与空白对照组和5-FU＋CF组比较差异有极显著性（P＜0．01）。异叶败酱总苷片各组移植瘤caspase-3表达及Bax、Bcl-2表达的相对比率（Bax／Bcl-2）均高于空白对照组。结论：异叶败酱总苷片具有诱导人大肠癌HT-29裸鼠移植瘤细胞凋亡的作用，其机制可能与促进移植瘤caspase-3表达及增大Bax／Bcl-2表达比率有关。     

牡丹苷A诱导人肺癌A549细胞凋亡的作用和机制

目的:研究牡丹苷A对人肺癌A549细胞株的作用以及其诱导人肺癌A549细胞株凋亡机制。方法:本研究采用MTT法检测牡丹苷A对体外人肺癌细胞株A549增殖率的影响。Annexin V/PI双标法检测牡丹苷A对A549凋亡率,蛋白免疫印迹法和细胞免疫细胞化学法分别检测牡丹苷A对A549细胞株PI3K,Akt,NF-κBp65,Bax,Bcl-2的表达,并采用PI3K/Akt/NF-κB通路的激动剂IGF-1和抑制剂wortmannin进一步探讨牡丹苷A对PI3K/Akt/NF-κB信号通路的作用。结果:牡丹苷A能够抑制A549的增殖,上调Bax蛋白的表达量,下调Bcl-2蛋白的表达量,Bcl-2/Bax比值显著降低,同时降低PI3K, NF-κBp65的蛋白表达,抑制Akt磷酸化。结论:牡丹苷A能够阻碍A549增殖,并促进其凋亡,其诱导凋亡的机制可能与抑制PI3K/Akt/NF-κB通路有关。