荧光定量PCR检测结核分枝杆菌DNA的流行病学特点

目的了解结核分枝杆菌DNA定量检测的流行病学特点。方法用荧光定量聚合酶链反应技术对438例结核疑似患者进行结核分枝杆菌DNA检测,比较不同标本类型、不同年份、不同性别的感染情况。结果结核分枝杆菌总阳性率为10.27%,晨尿和痰液阳性率较高,分别为20.72%、15.79%;男性和女性阳性率分别为10.39%和8.70%;>31岁年龄组人群结核分枝杆菌感染者所占比例最高,为71.10%;2009、2010年阳性检出率分别为10.81%和10.00%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论结核分枝杆菌DNA在银川地区男女两性间的流行特点相同,2009年和2010年感染率较为稳定。     

荧光定量PCR检测技术在结核分枝杆菌耐药性检测中的应用价值

目的 分析荧光定量PCR检测技术在结核分枝杆菌耐药性检测中的应用价值.方法 选取2018年1月至2020年1月在漯河市第七人民医院肺科门诊或住院部结核患者1100例,所有患者均进行荧光定量PCR检测,与传统的罗氏药敏比例法对比,评价两种检测方法检测结核分枝杆菌耐药性的结果.结果 荧光定量PCR检测链霉素耐药的敏感度、特...     

实时荧光定量PCR检测血浆结核分枝杆菌DNA的初步临床应用

目的 评价实时荧光定量PCR技术检测血浆（或血清）结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）DNA的技术。方法 建立实时荧光定期量PCR方法测定血浆MTB DNA,分别检测临床确诊的55例结核病患者血清43份,血浆25份以及非结核肺部疾病患者血清18份,健康体检血清18份和健康体检者血浆11份的MTB DNA含量。结果 18例非结板肺疾病患者血清、18例健康体检者血清以及11例健康体检者血浆MTB DNA全部阴性。55例初诊结核患者中10例（18．2％）治疗前血浆（或血清）MTB DNA阳性。在痰涂片阴性的18例结核患者中,血浆（或血清）MTB DNA阳性检出率为27．8％（5／18）,其特异性达100％。结论 本研究证实了结核患者血浆（或血清）循环MTB DNA的存在,其定量检测对痰涂片阴性及无痰患者的结核病诊断有重要参考价值。     

结核分枝杆菌DNA实时定量PCR技术在临床病理诊断中的应用

目的探讨实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,FQ-PCR)检测结核分枝杆菌(Mycobaeterium tuberculosis,MTB)在临床组织病理学诊断中的应用价值。方法收集我院2013年5月-2015年2月临床确诊的144例结核病(tuberculosis,TB)患者,对其石蜡包埋组织标本行组织病理学检查,并同时采用组织切片抗酸染色及FQ-PCR技术检测MTB-DNA,并对这三种方法的阳性检出率进行比较。结果在144例临床诊断TB患者的石蜡包埋组织中,FQ-PCR法检测MTB阳性68例,阳性率为47.22%,抗酸染色法检测阳性22例,阳性率为15.28%,组织病理学法检测阳性74例,阳性率为51.39%,三者阳性率比较差异有统计学意义(P0.01)。FQ-PCR法对肺活检标本、肺叶切除标本和胸膜活检标本MTB的阳性检出率均高于组织病理学法和抗酸染色法;对淋巴结活检标本和其他组织标本的阳性检出率高于抗酸染色法,但低于组织病理学法。结论 FQ-PCR技术简便、快捷,敏感性明显好于传统抗酸染色法,可作为TB分子病理诊断的重要检测方法,为组织病理学诊断提供可靠的依据,具有较高的临床应用价值。     

荧光定量PCR检测抗酸染色涂片刮削物中结核分枝杆菌DNA的可行性

目的:分析荧光定量PCR技术检测抗酸染色涂片刮削物中结核分枝杆菌DNA的检测能力.方法:应用结核分枝杆菌(TB)核酸检测试剂(PCR-荧光探针法)检测80例阴性、25例1-9条/300视野、95例1+、40例2+、21例3+、20例4+抗酸染色显微镜检查结果的涂片刮削物结核分枝杆菌DNA,分析不同阳性等级涂片的靶DNA检出情况,并应用Spearman等级相关分析阳性等级与检出基因拷贝数的相关性.结果:在1-9条/300视野、1+、2+、3+、4+的涂片刮削物中,分别有7、48、31、19、20例结核分枝杆菌DNA检测阳性,阳性检出率分别为28.00％、50.53％、77.50％、90.48％和100.00％,总检出率为62.19％,阳性等级与靶基因拷贝数检测结果呈正相关(r=0.684,P＜0.001);80例阴性涂片刮削物检测结果均呈阴性.结论:荧光定量PCR技术对2+以上的抗酸染色涂片刮削物中的结核分枝杆菌DNA具有较好的检测效能,但对本属于荧光定量PCR技术检测灵敏度范围的1+涂片的低阳性检出率则需更进一步的研究.     

荧光定量PCR技术检测结核分支杆菌DNA的应用价值

目的评价荧光定量PCR技术检测临床标本中结核分支杆菌的应用价值。方法应用荧光定量PCR法及抗酸染色、结核杆菌培养法,对179例活动性肺结核患者晨痰、123例活动性肺结核患者外周血、34例结核性胸膜炎患者胸水、20例非结核性呼吸系统疾病患者的晨痰标本进行检测。结果179例活动性肺结核患者晨痰、123例活动性肺结核患者外周血、34例结核性胸膜炎患者胸水,涂片抗酸染色阳性率分别为20．67％（37／179）、0．00％、0．00％;细菌培养阳性率分别为41．34％（74／179）、0．00％、2．94％（1／34）;荧光定量PCR技术阳性率分别为64．25％（115／179）、38．21％（47／123）、44．12％（15／34）。3种标本荧光定量PCR技术阳性率高于抗酸染色和结核杆菌培养,经统计学处理发现,差异有统计学意义。用荧光定量PCR技术检测临床标本特异性为95．00％。结论荧光定量PCR技术将PCR扩增、荧光探针杂交及检测一体化,在单一管内完成,具有简便、快速、防污染、敏感性及特异性高等优点,是结核病诊断的有效方法之一。     

实时荧光定量PCR在肺炎支原体DNA检测中的应用

支原体（Mycoplasma）是1898年Nocard等发现的一种类似细菌但不具胞壁的原核微生物。支原体种类繁多,对人致病的有肺炎支原体、人型支原体、解脲脲原体等。肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae, MP）引起的主要疾病有原发性非典型肺炎、咽炎和气管支气管炎。MP是儿科患者呼吸道感染的常见病原体之一。     

实时荧光定量PCR在EB病毒DNA检测中的应用

目的探讨实时荧光定量PCR技术在检测患者外周血单个核细胞(PBMC)中EB病毒(EBV)DNA定量的临床应用,比较实时荧光定量PCR在检测血浆和PBMC中EBV DNA含量的差别,并研究EBV阳性患者的病种分布特点。方法应用罗氏Light Cycler荧光定量PCR仪检测375例患者PBMC中EBV DNA含量,所有阳性患者均用血浆进行复查,比较其差别,并回顾性分析患者临床特点。结果检测PBMC中EB阳性标本35例,阳性率为9.3%。阳性患者中鼻炎13例,鼻咽癌4例,鼻息肉4例,肺炎7例,急性淋巴细胞性白血病1例,传染性单核细胞增多症6例。取阳性标本检测其血浆游离EB DNA,33例阳性,其拷贝数低于相应标本中PBMC中的拷贝数。结论实时荧光定量PCR技术检测PBMC和血浆中EB DNA准确,快速,在确诊EBV感染相关性疾病中具有重要的作用,且检测PBMC中EB DNA可能更优于检测血浆中EB DNA。     

实时荧光定量PCR在人血液循环DNA检测中的应用

循环DNA主要存在于人血浆和血清等体液中，在多种人类疾病中含量升高，具有临床诊断意义和预后判断价值。本研究以人工重组质粒DNA为内参照物，建立双重实时荧光定量PCR检测方法，对健康人血浆和血清DNA含量进行定量测定。[第一段]     

荧光PCR熔解曲线法在结核分枝杆菌耐药检测中的临床应用

目的评价荧光PCR熔解曲线法在结核分枝杆菌耐药检出中的临床应用价值。方法以改良罗氏培养法及绝对浓度法作为对比,利用荧光PCR熔解曲线法检测53例肺结核患者对利福平、异烟肼耐药情况。结果两种方法的单耐药率、耐多药率比较差异无统计学意义(P0.05)。同一标本两种方法检测对比显示,与绝对浓度法相比,熔解曲线法检测利福平、异烟肼耐药的敏感度分别为80.0%和81.0%,特异度分别为100.0%和93.8%,准确度分别为92.2%和86.8%,两种方检测法的一致性分析Kappa值分别为0.754和0.710,表明两者一致性佳。结论相对于传统方法,熔解曲线法敏感度、特异度良好且安全、高效,在耐药肺结核治疗中有良好的应用价值。     

荧光定量PCR法检测烟曲霉DNA

目的 建立检测烟曲霉DNA的荧光定量PCR方法,评价其在小鼠侵袭性烟曲霉肺部感染诊断中的意义.方法 根据烟曲霉ITSI区域基因组序列,设计合成引物和荧光标记探针,优化荧光定量PCR条件,从特异性、扩增效率、灵敏度及重复性方面进行评价.建立小鼠烟曲霉肺部感染模型,用荧光定量PCR对36只实验小鼠肺组织及支气管肺泡灌洗液(...     

荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒DNA的应用

乙型肝炎病毒 (hepatitisBvirus ,HBV)是肝癌发生的重要危险因素[2 ] 。我们用基因扩增荧光定量法测定了乙型肝炎病人血清中HBVDNA ,并与酶联免疫吸附测定 (ELISA)乙肝病毒血清标志物关系作一比较。1　材　料1.1　标本来源　 135例乙肝患者均是 2 0 0 3年 1月～ 2 0 0 4年 10月我院肝病中心收治的患者 ,男 95例 ,女 4 0例。年龄 10岁～ 6 8岁 ,按 1995年 (北京 )全国传染病寄生虫病学术会议修订的诊断标准、急肝 5例、慢肝 10 0例 ,另选 38例检体健康人做对照 ,分别留取标本同步检测血清标志物及血清中HBVDNA拷贝数。1.2　仪器与试…     

建立基于gyrB基因检测结核分枝杆菌复合物的荧光定量PCR法

摘要：目的：建立基于gyrB基因扩增检测结核分枝杆菌复合物（MTC）的荧光定量PCR(FQ-PCR)法。方法：根据gyrB基因设计合成引物和探针,建立并评价TaqMan探针FQ-PCR法,并与基于IS6110序列的FQ-PCR法分别检测50例临床标本,比较两种方法的检测结果。结果：建立的FQ-PCR法标准曲线方程为Y=-3.18X+42.84,相关系数（r²）为0.995、扩增效率为106.25%,其检测灵敏度为10²） CFU/mL;MTC中结核分枝杆菌和非洲分枝杆菌阳性,其他分枝杆菌和4株临床其他细菌均为阴性。批内及批间变异系数(CV)均＜2%,重复性良好。本法与基于IS6110序列的FQ-PCR法对50例临床标本的检测结果差异无统计学意义（χ²）=0.06,P>0.05）,一致性好(κ=0.94)。结论:基于gyrB基因扩增的FQ-PCR法灵敏度高、特异性强、重复性好,可用于结核分枝杆菌复合物的早期快速诊断。     

荧光PCR检测尿中结核分枝杆菌的意义

在泌尿系结核中肾结核最为常见、最先发生，以后由肾脏蔓延至整个泌尿系统。因此，肾结核实际上具有代表着泌尿系结核的意义。目前。肾结核的诊断，尤其是早期的非典型性肾结核的诊断，在临床有一定困难。在实验室检测中，结核病患者的细菌学检查，是确定结核病诊断和化疗方案的重要依据。     

荧光PCR检测尿中结核分枝杆菌的价值

目的:利用荧光PCR技术检测尿中分枝杆菌。方法:用ROCHE公司生产的Light Cycler免疫荧光仪检测我院门诊及住院患者尿液中结核杆菌。结果:25例肾结核尿中TB-PCR均检出阳性,而非结核患者无1例检出尿TB-PCR阳性。结论:荧光PCR技术检测尿中结核杆菌阳性率高、特异性高,对临床肾结核及泌尿系结核的诊断且有无可代替的重要作用。     

实时荧光定量PCR与PCR-ELISA在乙型肝炎病毒DNA定量检测中的应用比较

目的 评价应用国产试剂的实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)在检测乙型肝炎病毒(HBV)DNA中的临床应用。方法 基于TaqMan探针技术的实时荧光定量PCR应用Roche公司Light Cycler仪器和国产达安试剂,PCR-酶联免疫吸附试验(ELISA)应用Roche公司COBAS Amplicor全自动内标法系统,用2种方法检测乙型肝炎患者血清中的HBV DNA,评价其灵敏度、精密度及相关性。结果 实时荧光定量PCR方法的灵敏度略低于PCR-ELISA全自动内标法,两者变异系数(CV)均较低,用2种方法检测临床标本,相关系数为0．890。结论 应用国产试剂配合Light Cycler仪器的实时荧光定量PCR具有较高的灵敏度和较好的重复性,并与PCR-ELISA全自动内标法有良好的相关性。     

实时荧光定量PCR与PCR-ELISA在乙型肝炎病毒DNA定量检测中的应用比较

目的评价应用国产试剂的实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)在检测乙型肝炎病毒(HBV)DNA中的临床应用。方法基于TaqMan探针技术的实时荧光定量PCR应用Roche公司LightCycler仪器和国产达安试剂,PCR酶联免疫吸附试验(ELISA)应用Roche公司COBASAmplicor全自动内标法系统,用2种方法检测乙型肝炎患者血清中的HBVDNA,评价其灵敏度、精密度及相关性。结果实时荧光定量PCR方法的灵敏度略低于PCR ELISA全自动内标法,两者变异系数(CV)均较低,用2种方法检测临床标本,相关系数为0.890。结论应用国产试剂配合LightCycler仪器的实时荧光定量PCR具有较高的灵敏度和较好的重复性,并与PCR ELISA全自动内标法有良好的相关性。     

荧光定量PCR技术在结核杆菌检测中的应用

目的：建立结核病荧光定量PCR快速检测方法。方法：建立检测结核杆菌的荧光定量PCR方法并进行特异性、敏感性、重复性实验，对临床样品进行检测分析。结果：该方法的敏感性达到了1Pg，且特异性高．重复性好。应用荧光定量PCR法及抗酸染色、结核杆菌培养法，对332例活动性肺结核患者晨痰、215例活动性肺结核患者外周血、187例结核性胸膜炎患者胸水进行检测．荧光定量PCR技术阳性率分别为53．0％（176／332）、34．4％（74／215）、36．9％（69／187），经统计学比较分析，3种方法检测率差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：荧光定量PCR技术具有简便、快速、防污染、敏感性与特异性高等优点，是结核病诊断的有效方法之一。[著者文摘]     

荧光定量PCR检测在宫颈癌筛查中的应用

目的探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测宫颈病变人乳头瘤病毒(HPV)13种高危型DNA的可行性,为检测宫颈组织中HPV的感染提供有效的方法。方法选择197例阴道细胞学检测异常的宫颈脱落细胞,使用FQ-PCR方法检测13种高危型HPV DNA,同时取宫颈病变处组织进行组织病理学检查。结果 329例样本中HPV 13种高危型阳性者218例,阳性率为66.26%:CT值范围在13～40之间,平均为(26±2.31);组织病理学检测186例阳性,阳性率为56.53%,经χ~2检验,差异有统计学意义(χ~2=6.566,P=0.0104);阴性标本为Undet。结论 FQ-PCR方法检测宫颈病变中13种高危型HPV DNA感染,具有快速、简便、灵敏度高、特异性强等优点,对宫颈癌的普查和治疗有指导意义。