干蟾皮醇提物对A549和NCI-H460肺癌细胞活性的影响

目的:观察干蟾皮醇提物抗肺癌细胞生长和促凋亡的作用。方法:将A549、NCI-H460肺癌细胞悬液分别接种于96孔培养板中,细胞贴壁后依次加入不同浓度的含干蟾皮醇提物培养液干预,并设RPMI-1640培养液空白对照组。实验结束,用MTT法测定药物对细胞增殖的影响,Hoechst荧光染色法检测对细胞凋亡的影响。结果:与空白对照组比较,干蟾皮醇提物在不同浓度下对A549和NCI-H460细胞的生长均有抑制作用(P0.05~0.001),且呈浓度依赖性;对两种细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为15μg/ml和1.5μg/ml。不同浓度的干蟾皮醇提物作用于A549、NCI-H460细胞后,随着药物浓度梯度的增加,凋亡细胞数目明显增加,伴随出现细胞的坏死,细胞轮廓不清,甚至细胞解体。结论:干蟾皮醇提物可显著降低A549和NCI-H460细胞的活性及促进其凋亡,且呈剂量依赖性。     

白及须根醇提物诱导肺腺癌细胞A549凋亡研究

目的研究白及须根醇提物（Alcohol extract of fibrous root part of Bletilla striata,AEFB）诱导肺腺癌细胞A549凋亡及相关作用机制。方法运用MTs、hoechst-PI双染及流式细胞术检测白及须根醇提物对A549细胞的增殖及凋亡影响;二维水平的细胞迁移检测白及须根醇提物对A549细胞转移的影响;RT-PCR法检测白及须根醇提物对肺腺癌细胞凋亡和转移相关基因bcl-2、bax、ICAM-1 mRNA的影响。结果白及须根醇提物能够抑制肺腺癌细胞的增殖,并且有浓度效应,随着药物浓度的提高,bcl-2、ICAM-1 mRNA表达下调,bax mRNA表达上调。结论白及须根醇提物能够明显的抑制肺腺癌细胞的生长作用,具有明显的促进肿瘤细胞凋亡作用和抑制肿瘤细胞的转移作用,其机制可能是通过下调bcl-2、ICAM-1及上调bax的表达相关。     

β-榄香烯对肺腺癌A549和H460细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨β-榄香烯对肺腺癌A549和H460细胞增殖和凋亡的影响。方法:应用不同浓度的β-榄香烯干预A549和H460细胞后,台盼蓝拒染试验和MTT试验检测肿瘤细胞的增殖,流式细胞术检测A549细胞凋亡率,Western Blot法检测凋亡相关蛋白的表达。结果:不同浓度β-榄香烯能抑制肺腺癌A549和H460细胞的增殖,且呈剂量与时间依赖性,β-榄香烯干预后的A549细胞凋亡率明显升高,其相关抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-xl表达下调。结论:β-榄香烯可抑制肺腺癌A549和H460细胞的增殖及诱导其凋亡,其作用机制可能与下调Bcl-2和Bcl-xl有关。     

大分子灵芝多糖对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的抑制作用

目的:探讨超滤管截留得到的大分子量灵芝多糖(ultrafiltered macromolecular Ganoderma lucidum polysaccharide,UM-GLP)对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的抑制作用。方法:以非小细胞肺癌细胞A549和NCI-H1299作为研究对象,并以空白培养基和紫杉醇(PTX)处理分别作为空白对照和阳性对照。采用MTT法检测UM-GLP对A549和NCI-H1299细胞增殖的抑制作用,划痕实验检测UM-GLP对A549和NCIH1299细胞迁移能力的抑制作用,Transwell实验检测UM-GLP对A549和NCI-H1299细胞侵袭能力的抑制作用。结果:MTT实验结果显示,随着UM-GLP和PTX药物浓度的增加,细胞增殖抑制率明显增加,UM-GLP浓度在0.5~2.0 mg/ml时,与PTX浓度在25~100 nmol/L的抑制效果相仿。A549和NCI-H1299细胞划痕实验结果显示,与空白对照组比较,UM-GLP组和PTX组的迁移距离均明显缩短(P0.05)。Transwell实验结果显示,UM-GLP(2 mg/ml)处理后,非小细胞肺癌细胞侵袭数量显著低于空白对照组(P0.05);并且UM-GLP对A549细胞侵袭能力的抑制作用与紫杉醇组(0.1μmol/L)相当,对NCI-H1299细胞侵袭能力的抑制作用小于紫杉醇组(0.1μmol/L)(P0.05)。结论:大分子量灵芝多糖可有效抑制非小细胞肺癌细胞A549和NCI-H1299的增殖、迁移和侵袭能力。     

紫苏醇对肺癌细胞的体外药效作用及毒理学评价

目的研究紫苏醇对肺癌细胞的体外药效作用,及其对小鼠的毒理学评价。方法以质量浓度为0.637-6.829 mg.L-1的紫苏醇对肺鳞癌细胞NCI-H1299和肺腺癌细胞A549作用24 h后,用噻唑蓝（MTT）比色法、Hoechst 33258荧光染色法检测凋亡率和细胞毒性。取随机分组的小鼠,将紫苏醇以灌胃方式给药,剂量范围为5.736-1.912 g.kg-1,观察小鼠中毒症状,按照改良寇氏法计算紫苏醇的半数致死量（LD50）以及95%平均可信限。结果紫苏醇呈浓度依赖性抑制NCI-H1299和A549细胞生长,质量浓度为1.707 mg.L-1时,对NCI-H1299和A549细胞的抑制率分别为93.97%和95.45%,Hoechst33258荧光染色观察到两株细胞均出现细胞核浓缩变亮,呈分叶状、数量显著减少等凋亡特征变化。小鼠给药后出现中毒症状,其程度与紫苏醇呈剂量依赖性,测得紫苏醇LD50和95%可信限为（3.696±0.504）g.kg-1.结论紫苏醇体外对NCI-H1299和A549细胞的生长有显著抑制作用,口服紫苏醇有相对高的LD50和治疗指数。     

齐墩果酸诱导人肺腺癌细胞A549凋亡及其与细胞内钙离子的关系

目的通过检测齐墩果酸（oleanolic acid,OA）干预后的A549细胞的凋亡和其内钙离子浓度,探索OA对A549细胞的作用及其可能的机制。方法体外培养人肺腺癌细胞系A549。设0、10、20、40μg/ml的OA浓度干预组。选择对数生长期的细胞,在不同浓度OA干预24 h,采用Annexin V/PI流式细胞术（flowcytometry,FCM）检测各实验组细胞的凋亡情况,测定细胞的荧光强度值并计算出细胞内钙离子浓度;以曲线拟合描述细胞凋亡率与钙离子荧光强度之间的相关性。结果FCM检测显示10、20、40μg/ml OA可诱导A549细胞凋亡,凋亡率呈现浓度-效应关系;20、40μg/ml OA干预24 h,A549细胞凋亡率明显增加,与0μg/ml组比较,差异有显著性（P〈0.01）;10、20、40μg/mlOA组干预24 h,各药物干预组A549细胞内钙离子荧光强度均明显高于0μg/ml组,荧光强度随OA浓度的提高呈现增加趋势,差异有显著统计学意义（P〈0.01）;曲线拟合显示细胞凋亡率和细胞内钙离子浓度之间有明显相关性（R=0.981,P〈0.01）。结论OA具有浓度依赖地诱导人肺腺癌细胞凋亡的作用;OA诱导细胞凋亡可能与其导致细胞内钙超载有关。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对肺癌细胞的杀伤作用研究

目的研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体(TRAILR)在肺癌细胞株A549中的表达及TRAIL对肺癌细胞的杀伤作用,探讨TRAIL治疗肺癌的可行性。方法采用RTPCR检测非小细胞肺癌细胞株A549TRAILR的表达。采用不同浓度TRAIL处理A549,MTT法检测药物处理前后肿瘤细胞的凋亡发生率。采用不同浓度TRAIL与不同浓度的化疗药物、中药联合作用于A549,观察其疗效。结果肺癌细胞株A549中有DR5、DR4、DcR2的表达,但DcR1表达缺失。经TRAIL(100μg/L)处理48h,肺癌细胞凋亡发生率约5%。TRAIL联合化疗药物、中药可显著增强A549的凋亡率。结论A549中存在TRAILR类型的表达差异。TRAIL可诱导A549凋亡,联合化疗药物、中药可显著增强A549的凋亡率。     

苯乙酸钠对肺癌A549细胞生长的影响

目的:研究抗肿瘤药物苯乙酸钠(NaPA)对体外培养的人肺腺癌细胞株A549抑制率、细胞周期和凋亡的影响。方法:应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色、流式细胞仪等方法,观察不同浓度NaPA对人肺腺癌A549细胞株生长、细胞周期和凋亡的影响。结果:NaPA对A549有明显的生长抑制作用,且呈剂量时间依赖性,最大抑制率可达79%。NaPA可阻滞A549细胞的细胞周期,使G1/G0期细胞增多,S期细胞减少,同时诱导A549细胞的凋亡,凋亡率最高可达30.5%。结论:苯乙酸钠抑制A549细胞生长,其抑制作用可能是通过NaPA使细胞周期抑制于G1/G0期和诱导细胞凋亡而实现。     

Cyclopamine对人肺癌细胞系NCI-H460生长和增殖的影响

目的研究Hedgehog信号通路特异性抑制剂Cyclopamine对人肺癌细胞NCI-H460生长和增殖的影响。方法培养NCI-H460细胞,加入不同浓度Cyclopamine,作用不同时间,倒置显微镜下观察细胞形态变化,CCK-8法检测Cyclopamine对肺癌细胞生长和增殖的影响,同时用流式细胞仪检测Cyclopamine对NCI-H460细胞周期的影响。结果与空白对照组和Tomatidine对照组相比,2-40μmol/L的Cyclopamine作用于NCI-H460细胞后,倒置显微镜下观察,细胞立体感消失,皱缩成圆形,细胞间隙增大。CCK-8比色法显示,Cyclopamine对NCI-H460细胞增殖的抑制作用呈剂量依赖性,20μmol/L的Cyclopamine使NCI-H460细胞生长曲线下移,并可将NCI-H460细胞阻滞在G1期,明显减少其S期细胞数量,引起细胞凋亡。结论Cyclopamine对人肺癌细胞系NCI-H460生长和增殖有比较明显的抑制作用,提示大细胞肺癌的发生和发展与Shh信号转导通路的异常激活有关。     

重楼水提物对肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响

目的 探讨重楼水提物对人肝癌HepG2细胞株增殖和凋亡的影响.方法 以体外培养的肝癌HepG2细胞为研究对象,MTT法检测重楼对肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪Annexin V/PI 双染法检测重楼对其凋亡的影响,ELISA法检测Bcl-2、Bax 蛋白表达的情况.结果 不同浓度重楼水提物能有效抑制HepG2细胞的增殖,且呈时间及浓度依赖性,作用效果在12 μg/ml时抑制效果最好（P〈0.01）.12 μg/ml重楼水提物作用HepG2细胞24 h、48 h后,结果表明HepG2随着重楼水提物作用时间的延长,细胞凋亡率增加,与阴性对照组相比,差异有统计学意义（P〈0.01）.12 μg/ml重楼水提物作用HepG2 细胞24 h后,Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达增加,与阴性对照组相比,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 重楼水提物能抑制HepG2细胞的体外增殖,抑制作用表现出时效关系,其机制可能与促进细胞凋亡、降低Bcl-2蛋白表达、增加Bax蛋白表达有关.     

漂洗技术对血液中肿瘤细胞去除作用的研究

目的　观察血液回收机漂洗技术能否将血液中的肿瘤细胞去除。方法　选择繁殖能力强 ,不易受损的细胞系肠肿瘤细胞LOVO和胃肿瘤细胞SGC ,计数后分别混入浓缩的红细胞中。采用血液回收机将其过滤、离心、漂洗。在漂洗后的浓缩红细胞中分离肿瘤细胞 ,台盼蓝染色计数存活的肿瘤细胞。将分离出的肿瘤细胞培养 1 4d ,进行克隆形成实验及DNA代谢物测定 ,观察肿瘤细胞的活性。结果　经血液回收机漂洗后仍然存在肿瘤细胞 ,但活性受到显著抑制 ;细胞培养 7d时 ,未发现肿瘤细胞有克隆形成 ;培养 1 4d后 ,肿瘤细胞有克隆形成。免疫组化实验显示 ,漂洗后肿瘤细胞DNA合成能力与对照组无显著性差异。结论　单纯采用血液回收机漂洗技术可显著减少血液中的肿瘤细胞 ,但不能完全去除血液中的肿瘤细胞     

维生素C对Hela细胞系增殖及细胞周期的影响

目的 探讨维生素C对Hela细胞系增殖及细胞周期的影响。方法 采用MTT测定，观察不同浓度维生素C(1μmol／L～3500μmol／L)对Hela细胞系增殖的抑制作用；运用流式细胞仪检测用药后细胞周期分布及增殖指数的变化。结果 各个浓度的维生素C对Hela细胞系增殖均有抑制作用，并呈剂量依赖性，3500μmol／L时，抑制率为66．15％。维生素C能使Hela细胞系阻滞于G0／G1期，抑制DNA的合成，使细胞增殖指数明显下降。且此作用随用药浓度的增加而增强。结论 维生素C在体外对Hela细胞系有明显的抑制作用，使细胞阻滞于G0／G1期。     

姜黄素对人肝癌Bel7402细胞杀伤动力学及周期时相的影响

目的 研究姜黄素对人肝癌Ｂｅｌ－７４０２细胞杀伤动力学及周期时期的影响，方法 以集落形成法测定药物对增殖期与坪期细胞杀伤的量效关系曲线，以流式细胞仪及ＡＯ／ＥＢ荧光染色法分析药物对Ｂｅｌ７４０２细胞周期时相及凋亡的影响。结果 姜黄素１～１０μｇ／ｍｌ作用２ｈ对不同增殖状态的Ｂｅｌ７４０２细胞均呈单指数型杀伤，但对增殖期细胞敏感，１～１０μｇ／ｍｌ作用２４ｈ，Ｇ０－Ｇ１，期细胞及Ｇ２－Ｍ期细胞的比例     

T细胞疫苗诱导异种胰岛移植免疫耐受的实验研究

目的体外制备供体特异性T细胞疫苗（T cell vaccine）,探讨T细胞疫苗免疫（T cell vaccination）诱导异种胰岛细胞移植免疫耐受的作用。方法腹腔注射链脲佐菌素诱导建立Balb／c小鼠Ⅰ型糖尿病模型,用酶消化法和密度梯度离心法无菌分离纯化Wistar大鼠胰岛细胞。制备Balb／c小鼠针对Wistar大鼠的T细胞疫苗：实验随机分为三组,G1：糖尿病小鼠对照组;G2：胰岛细胞移植组,糖尿病小鼠＋胰岛细胞移植＋1640培养液（对照组）;G3：胰岛细胞移植加T细胞疫苗免疫组,糖尿病小鼠＋胰岛细胞＋T细胞疫苗（实验组）,于d1,d7,d14,d21实验组Balb／c小鼠接种TCV（1×107／mL）,对照组用1640替代。接种前和每次接种后第5d分别进行混合淋巴细胞反应。胰岛细胞移植：将Wistar大鼠的胰岛按1200。1500IEQ／kg经肝门静脉导入小鼠体内,移植后观测血糖和体重变化。结果异种胰岛细胞移植可以诱导I型糖尿病小鼠血糖降至正常水平且维持一段时间,对照组小鼠移植后（5．12±1．36）d即发生排斥,实验组移植物存活时间达（20．25±3．45）d。结论TCV能够有效延长异种胰岛移植物的存活时间,是一种潜在诱导异种胰岛移植免疫耐受的方法。     

抗AIDS药物ZL体外对免疫细胞的激活效应及抗肿瘤作用

用MTF法观察已经用于AIDS治疗的有效中草药ZL体外对免疫细胞的激活效应。结果表明，大剂量ZL对脾细胞有细胞毒效应，ZL25－200μg/ml可激活脾细胞，其激活百分率可达128％。ZL对胸腺细胞无明显激活作用。ZL对脾细胞ConA协同刺激亦无明显作用。ZL体外可有效杀伤S180肿瘤细胞，故而ZL亦可用于肿瘤的治疗。     

山豆根对Eca-109细胞株细胞周期的作用

应用流式细胞术(FCM)和Feulgen-DNA法显示分裂指数,分析不同浓度山豆根对Eca-109细胞的作用。流式细胞光度术分析结果表明,实验组细胞DNA指数(DI=2)显著低于对照组(DI=2.5),两者相比差异均有极其显著性意义(P<0.01)。细胞DNA组方图G_0/G_1期细胞呈增高趋势,S期细胞均减少,G_2M期细胞均增高,与对照组比差异均有显著性(P<0.01,P<0.05)。Feulgen-DNA染色显示细胞分裂指数与小剂量药物作用时间呈负相关,大剂量药物作用下分裂指数明显下降。这说明山豆根对Eca-109细胞DNA合成有显著的抑制作用。     

番茄红素对人前列腺癌PC-3细胞周期的阻滞作用

目的:研究番茄红素对人前列腺癌PC-3细胞周期的阻滞作用及分子机制.方法 体外培养PC-3细胞,采用MTT、细胞计数法、流式细胞仪和Western blotting方法分析番茄红素对PC-3细胞增殖的抑制作用、对细胞周期分布的影响及细胞周期相关蛋白的表达.结果 不同浓度番茄红素(1.5、3.0、6.0和12.0μmol/L)处理PC-3细胞48 h后,生长抑制率分别为11.34%、19.59%、30.92%、52.58%;常规培养PC-3细胞群体倍增时间为29.04 h,番茄红素浓度由1.5 μmol/L增加到12.0 μmoL/L时,其细胞群体倍增时间由36.58 h延长到88.32 h;流式细胞仪分析显示,番茄红素呈浓度依赖性将PC-3细胞阻滞在G0/G1期;在细胞周期阻滞的同时有P21 WAF1蛋白表达上调.结论 番茄红素对PC-3细胞的抑制增殖作用与G0/G1期阻滞有关,其分子机制可能与调节P21 WAF1表达有关.     

竹红菌甲素对人Hce-8693盲肠癌细胞增殖及细胞凋亡的影响

采用流式细胞技术研究了竹红菌甲素（ＨＡ）对人Ｈｃｅ－８６９３盲肠癌细胞周期、增殖活性的影响及在细胞凋亡中的诱导作用,结果：ＨＡ主要使细胞阻断于Ｇ１期,Ｇ１期峰前出现典型的亚二倍体凋亡峰。提示：ＨＡ具有诱导细胞亡及抑制肿瘤细胞增殖的作用。     

CIK细胞对人肺癌细胞A549凋亡作用的影响

目的观察细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine induced killer cell,CIK）对人肺癌细胞A549凋亡作用的影响,并探讨机制。方法常规方法体外诱导生成CIK细胞,CIK细胞为效应细胞,人肺癌细胞A549为靶细胞,比较观察人肺癌细胞A549的凋亡情况。结果电镜法观察CIK细胞能诱导人肺癌细胞A549出现凋亡的超微结构变化,annexinV／PI流式细胞分析法检测早期凋亡率发现CIK实验组明显高于对照组。结论体外培养的CIK细胞可明显诱导人肺癌细胞A549凋亡。     

褪黑激素对新生大鼠神经干细胞向神经元样细胞分化的影响

【目的】探讨褪黑激素对体外培养新生大鼠神经干细胞分化的影响。【方法】从新生SD大鼠室管膜下区分离依赖碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)和表皮细胞生长因子 (EGF)生存的神经干细胞进行培养 ,原代及子代细胞鉴定后用于实验。实验细胞均在无生长因子而含 10mL/L胎牛血清条件下培养 ,经褪黑激素或Luzindole作用 1周后做免疫组织化学染色 ,比较Map2阳性细胞出现率。【结果】①依赖bFGF和EGF生长的神经干细胞体外呈集落样生长 ,表达抗原蛋白巢蛋白(Nestin) ,无生长因子培养基中可分化形成胶质原纤维酸性蛋白 (GFAP)、S10 0蛋白、微管相关蛋白 (Map2 )阳性细胞。②褪黑激素能够提高Map2阳性细胞生成率 (2 3 4 5 % ,2 1 82 % ) (P <0 0 1)。③褪黑激素膜受体竞争性阻断剂Luzindole可阻断高浓度 (10 0 μmol/L)褪黑激素促神经干细胞分化作用 ,但不能抑制低浓度褪黑激素 (10nmol/L)的作用。【结论】褪黑激素能促进神经干细胞向神经元样细胞分化 ,不同浓度褪黑激素可能存在不同的作用机制。