免疫共刺激分子CD40在肿瘤临床治疗中的应用

共刺激分子CD40/TNFRSF5隶属肿瘤坏死因子受体超家族,在机体固有免疫应答及适应性免疫应答中均发挥关键作用.CD40生理性表达于专职性抗原提呈细胞、内皮细胞等细胞表面,是T细胞表面CD40L分子的天然糖蛋白受体.CD40-CD40L信号通路的激活参与T淋巴细胞活化、抗体类别转换、抗原提呈细胞激活等一系列免疫相关生物学过程.除免疫细胞等生理性表达外,CD40在血源性及上皮源性恶性肿瘤细胞表面亦存在表达,并通过直接影响肿瘤细胞或间接干预肿瘤微环境参与肿瘤的发生、发展.大量研究表明,CD40激动型抗体可能通过激活宿主抗肿瘤免疫应答或直接促进CD40肿瘤细胞凋亡等途径正向干预实体肿瘤进展,提示CD40可能作为有效的肿瘤免疫治疗靶点.现对CD40分子在肿瘤发生、发展中的生物学作用及CD40-CD40L通路在肿瘤免疫治疗中的应用进展及存在问题予以综述.     

一株识别CD40分子新位点的单克隆抗体研制及生物学特性鉴定

目的：研制识别CD40分子新位点的单克隆抗体（mAb）。方法：以转人CD40转基因细胞L929-CD40为免疫原，常规免疫6—8周龄的雌性BALB／c小鼠；采用B淋巴细胞融合技术，将免疫小鼠脾脏细胞与Sp2／0融合，以L929-CD40转基因细胞为抗体筛选阳性细胞，经免疫荧光标记分析对杂交瘤进行反复筛选和多次的克隆化培养；采用快速定性试纸法及竞争抑制结合试验分析了该mAb的亚类及抗原识别位点；采用MTT法分析mAb在体外对肿瘤细胞的促增殖效应、ELISA法测定细胞因子分泌以及PI染色分析细胞周期。结果：获得1株持续、稳定分泌鼠抗人CIM0mAb的杂交瘤细胞株（命名为286），该mAb能特异性地识别人CD40分子并较好的识别肿瘤细胞株H08910表达的CD40分子并能够体外促进肿瘤细胞增殖。结论：成功地研制1株识别CD40新位点mAb，该mAb能够很好地识别肿瘤细胞表达的CD40分子并具有体外促进肿瘤细胞生长的作用。     

华支睾吸虫感染鼠TLR2信号对辅助性T细胞分化的作用

目的动态观察TLR2信号通路在华支睾吸虫感染小鼠CD4+T亚群分化中的作用。方法建立华支睾吸虫感染小鼠模型,同时建立尾静脉注射TLR2中和抗体组及对照组,分别在感染不同阶段剖杀小鼠,收集外周血、肝脏和脾脏单核细胞,采用流式细胞术检测小鼠Th1、Th2及Treg细胞亚群分化情况。结果小鼠感染华支睾吸虫56 d和70 d后,与感染组相比,感染并注射TLR2中和抗体组小鼠外周血Th2类细胞亚群比例明显减少;同时,阻断TLR2信号通路后脾脏内Treg细胞比例明显下调。Western blot结果显示,华支睾吸虫感染56 d后,与注射PBS对照组相比,TLR2中和抗体注射组肝脏中TLR2信号通路下游分子MyD88以及Treg特异性转录因子Foxp3的表达水平明显降低。结论阻断TLR2信号通路诱导华支睾吸虫感染小鼠CD4+T细胞中Th2和Treg比例下调,表明TLR2信号通路在调控适应性免疫应答及抗华支睾吸虫感染中发挥重要作用。     

一株识别肿瘤细胞上CD40突变体分子的单克隆抗体的研制及其生物学功能研究

目的:以本科室发现肿瘤细胞上表达的CD40 787AA突变为基础,研制识别肿瘤细胞上CD40突变体分子的单克隆抗体(mAb),并对其生物学特性作初步分析.方法:以转人CD40突变体转基因细胞L929-CD40mu为免疫原,免疫6～8周龄的雌性BALB/c小鼠;采用B淋巴细胞融合技术,将免疫小鼠脾脏细胞与Sp2/0融合,以L929-CD40mu转基因细胞为抗体筛选阳性细胞,免疫荧光标记法对杂交瘤进行反复筛选和多次的克隆化培养;采用快速定性试纸法及竞争抑制结合试验分析该mAb的亚类及抗原识别位点;免疫印迹法对该mAb进行鉴定;采用MTT法分析mAb在体外对肿瘤细胞的抑制增殖效应以及PI-annexin V方法进行细胞凋亡测定.结果:获得1株稳定分泌鼠抗人CD40mu mAb的杂交瘤细胞株(命名为10C5),该mAb能特异性地识别人肿瘤细胞株H08910表达的CD40突变体分子,而不识别正常扁桃体B淋巴细胞及血管内皮细胞表达的CD40分子,并且能够在体外促进肿瘤细胞凋亡.结论:成功地研制出1株特异性识别肿瘤细胞上CD40突变体分子的mAb,该mAb具有体外抑制肿瘤细胞生长并促进其凋亡的作用.     

005 可诱导共刺激分子的研究进展

可诱导共刺激分子(Inducible Costimulatory Molecule,ICOS)是新发现的表达于活化T细胞的共刺激分子,属CD28/CTLA-4家族.ICOS的小鼠配体B7RP-1和人类配体B7-H2具有不同的表达形式和条件.人类ICOS通路可被抗原-TCR信号和IL-2激活.该共刺激通路诱导T细胞分化、增殖并分泌IL-4、IL-10、IFN-γ和TNF-γ等细胞因子,对B细胞和CTL细胞免疫应答也有一定的影响.阻断ICOS通路会引起T细胞凋亡.ICOS与CD28通路无功能交叉性,在免疫应答过程中具有重要而且独特的作用.     

可诱导共刺激分子的研究进展

可诱导共刺激分子 (InducibleCostimulatoryMolecule ,ICOS)是新发现的表达于活化T细胞的共刺激分子 ,属CD2 8/CTLA 4家族。ICOS的小鼠配体B7RP 1和人类配体B7 H2具有不同的表达形式和条件。人类ICOS通路可被抗原 TCR信号和IL 2激活。该共刺激通路诱导T细胞分化、增殖并分泌IL 4、IL 10、IFN γ和TNF γ等细胞因子 ,对B细胞和CTL细胞免疫应答也有一定的影响。阻断ICOS通路会引起T细胞凋亡。ICOS与CD2 8通路无功能交叉性 ,在免疫应答过程中具有重要而且独特的作用。     

CD40抗体——一种新型免疫佐剂的机制及应用研究进展

抗体是基础生命科学研究领域不可或缺的工具。CD40信号转导通路参与了抗体的合成与分泌,抗CD40抗体可通过激活CD40信号通路,极大地增强抗原尤其是半抗原的免疫原性,是一种新型、有潜能的免疫佐剂,并且其抗原表达与抗体制备过程相对简单、毒性小,可用于常规免疫和疫苗的生产。本文综述了抗CD40抗体佐剂的特性、作用机理及其影响因素和应用。     

CD40配体对胃癌细胞AGS生长的影响及其作用机制

目的:研究CD40配体激发CD40信号对胃癌细胞AGS生长的影响,并探讨其分子机制,为治疗胃癌的药物研发提供实验依据。方法:以1 mg/L可溶性CD40配体(sCD40L)处理AGS,苔盼兰计数检测CD40激发对细胞增殖的影响;酶联免疫反应检测细胞培养上清中的血管内皮细胞生长因子(VEGF)水平,并用抑制剂阻断VEGF信号通路,用3H-胸腺嘧啶核苷掺入法探讨sCD40L对细胞增殖影响的分子机制。结果:sCD40L处理明显引起AGS细胞增殖;sCD40L激发促进细胞大量分泌VEGF(P0.05),磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂能完全阻断这种效应(P0.05);VEGF受体抑制剂能显著减弱sCD40L对AGS细胞的增殖作用(P0.05),而抗VEGF封闭型抗体则不能(P0.05)。结论:CD40配体激发信号通过激活VEGF受体信号通路而诱导AGS细胞增殖。因此在CD40作为肿瘤治疗的靶分子时,需要慎重考虑它的激发方式。     

共刺激分子在小鼠叶酸性肾病组织中的表达及其免疫病理意义

观察共刺激分子在小鼠叶酸性肾病组织中的动态表达并分析叶酸肾病的免疫病理的可能机制。以小鼠叶酸性肾病为研究对象,采用免疫组织化学方法检测肾脏组织中CD40/CD40L、B7-1/CD28和4-1BB等共刺激分子的表达,免疫荧光标记和流式细胞术分析脾脏T淋巴细胞及其亚群,并行肾功能等常规检测。实验结果表明,病变先后涉及两个时期即急性期和慢性期。在早期,小鼠免疫应答增强,肾脏组织呈现CD40、B7-1、4-1BB的异常表达,CD28、CD40L在浸润淋巴细胞中表达,同时伴有炎症细胞浸润,表现为急性肾功能衰竭;在晚期,表现为慢性肾功能衰竭。同时肾脏组织呈现共刺激分子的异常表达和脾脏T淋巴细胞数量明显下降。这些均表明共刺激分子在小鼠叶酸性肾病不同阶段的发生发展中起着重要的作用。     

CD40-CD40L共刺激途径在体液免疫和细胞免疫中的作用

CD40与CD40配体(CD40L)是体内炎症和免疫反应系统的一对共同刺激分子,参与机体的体液免疫和细胞免疫反应.CD40-CD40L共刺激途径能促进T细胞活化并放大T淋巴细胞依赖的免疫应答,是产生记忆性CD8+T细胞的基础,能够促进CD8+T细胞的扩增和多能性,在CD4+T细胞分化的过程中起重要作用,介导更强的抗肿瘤效应和杀伤靶细胞的能力.CD40-CD40L共刺激途径参与T淋巴细胞依赖的B淋巴细胞应答过程、生发中心的形成、长期记忆性R细胞的产生、抗体的产生及抗体类别转换,并可诱导和扩增CD4+ CD25+ Treg细胞.CD40-CD40L共刺激途径在多种疾病的发生、发展中起作用,有广阔的临床应用前景.