支气管哮喘BALB/c小鼠肺组织及肺T细胞中Notchl的表达

目的研究支气管哮喘模型小鼠肺组织及其T细胞中Notch1基因的表达,探讨其与支气管哮喘发病的关系。方法卵清蛋白腹腔注射及雾化吸入建立BALB/c小鼠支气管哮喘模型(n=10)。于建模后24 h麻醉下放血处死动物,右肺组织分离T细胞并进行纯度鉴定,运用免疫组化染色观察左肺组织Notch1蛋白表达;半定量RT-PCR法检测左肺组织和右肺分离获得T细胞中Notch1 mRNA的表达。以腹腔注射和雾化吸入生理盐水的BALB/c小鼠作为对照(n=10)。结果免疫组化染色发现,哮喘模型组小鼠肺组织Notch1阳性染色程度明显强于对照组。半定量RT-PCR分析显示,哮喘模型组和对照组小鼠Notch1mRNA表达在肺组织分别为0.83±0.60和0.33±0.31,在肺T细胞中分别为0.36±0.20和0.11±0.21;组间比较均有显著差异(P<0.05)。结论Notch1在支气管哮喘发病环节中表现为促进作用,为研究支气管哮喘的发病机制提供了新途径。     

支气管哮喘BALB/c小鼠肺组织及肺T细胞中Notchl的表达

目的 研究支气管哮喘模型小鼠肺组织及其T细胞中Notchl基因的表达,探讨其与支气管哮喘发病的关系.方法 卵清蛋白腹腔注射及雾化吸入建立BALB/c小鼠支气管哮喘模型(n=10).于建模后24 h麻醉下放血处死动物,右肺组织分离T细胞并进行纯度鉴定,运用免疫组化染色观察左肺组织Notchl蛋白表达;半定量RT-PCR法检测左肺组织和右肺分离获得T细胞中Notchl mRNA的表达.以腹腔注射和雾化吸入生理盐水的BALB/c小鼠作为对照(n=10).结果 免疫组化染色发现,哮喘模型组小鼠肺组织Notchl阳性染色程度明显强于对照组.半定量RT-PCR分析显示,哮喘模型组和对照组小鼠Notchl mRNA表达在肺组织分别为0.83±0.60和0.33±0.31,在肺T细胞中分别为0.36±0.20和0.11±0.21;组间比较均有显著差异(P＜0.05).结论 Notchl在支气管哮喘发病环节中表现为促进作用,为研究支气管哮喘的发病机制提供了新途径.     

白三烯受体拮抗剂对哮喘小鼠气道重塑及细胞周期蛋白D1的表达影响

目的：研究应用白三烯受体拈抗剂（孟鲁司特钠）对哮喘小鼠肺组织中细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）的表达影响及对支气管哮喘气道重塑的作用，探讨白三烯受体拮抗剂在哮喘治疗中的作用。方法：将30只BALB／c小鼠随机分为正常对照组、哮喘组、孟鲁司特钠组3组，每组10只；卵蛋白致敏和激发建立哮喘小鼠模型；HE染色观察各组气道炎症发生及气道结构改变情况；免疫组化观察肺组织中Cyclin D1的表达及定位；RT-PCR及Western-blot测定各组小鼠肺组织中Cyclin D1的mRNA和蛋白表达变化。结果：HE染色提示哮喘组与对照组相比出现嗜酸性粒细胞浸润增多、纤毛脱失、平滑肌细胞层增厚等改变．而治疗组上述改变较哮喘组为轻；免疫组化显示Cyclin D1在哮喘小鼠气道平滑肌细胞、内皮细胞、成纤维细胞中皆有表达而在对照组中表达减弱（P〈0．05），而治疗组表达量较哮喘组低（P〈0．05）；RT-PCR及Western blot检测发现Cyclin D1在哮喘组表达较对照组为高（P〈0．01），而治疗组表达量低于哮喘组（P〈0．01）。结论：哮喘小鼠肺组织中Cyclin D1表达量较正常组为高；白三烯受体拮抗剂能够抑制Cyclin D1表达，减轻气道炎症反应、延缓气道重塑进程。     

三子养亲汤对哮喘小鼠血清CysLT1 mRNA表达及肺组织HE染色切片的影响

目的:探讨三子养亲汤对哮喘小鼠血清Cys LT1mRNA表达及肺组织HE染色切片的影响。方法:将180只C57BL小鼠随机分为三子养亲汤低、中、高剂量组,孟鲁司特组,哮喘组,正常组6组,除正常组外所有小鼠建立哮喘模型。药物组依次灌入浓度为0.54 g/m L、1.08 g/m L、2.16 g/m L的三子养亲汤煎剂2 m L,0.004 g·kg-1·d-1孟鲁司特2 m L,疗程14 d。采用RT-PCR法检测小鼠血清CysLT1mRNA的表达,并观察肺组织HE染色切片。结果:SZ-M组、SZ-H组可明显减少Cys LT1mRNA的表达,SZ-H组还能有效减轻哮喘模型肺组织的病理改变。结论:三子养亲汤可有效减少哮喘模型CysLT1mRNA表达,也能改善小鼠肺组织HE染色切片的结果。     

应用白细胞介素12阻断GATA-3表达治疗小鼠支气管哮喘

目的:观察T细胞特异转录因子GATA-3在支气管哮喘(哮喘)小鼠肺部的表达,探讨应用白细胞介素12(IL-12)阻断GATA-3表达治疗支气管哮喘的可能性.方法:30只C57BL/6小鼠随机均分为正常对照组(A组)、哮喘组(B组)、IL-12治疗组(C组).B组和C组建立哮喘模型,于第1、3、7、9、25、26、27、28天,分别1次腹腔注射生理盐水(0.1 ml)和IL-1 2(1μg).第31天收取各组6只小鼠的支气管肺泡灌洗液(BALF)测细胞成分,各组剩余小鼠H-E染色切片观察小鼠气管、肺组织病理变化,免疫组化测定肺组织中GATA-3表达.结果:对照组无症状,哮喘组哮喘症状重,治疗组哮喘症状轻.在BALF中嗜酸粒细胞百分比对照组为0,哮喘组为(20.0±4.0)%,治疗组为(0.2±0.1)%.在同一视野对照组支气管黏膜下未见炎性细胞,哮喘组可见大量炎性细胞浸润,治疗组炎性细胞较哮喘组明显减少.免疫组化染色对照组无GATA-3表达,哮喘组GATA-3表达强,治疗组GATA-3无表达.结论:哮喘小鼠肺部存在GATA-3高表达,IL-12对小鼠支气管哮喘气道和肺部炎症浸润有抑制作用,其机制可能与IL-12阻断哮喘GATA-3的表达有关.     

薄荷醇下调肺组织P物质改善哮喘气道炎症及气道高反应性的研究

目的 探讨雾化吸入薄荷醇对哮喘小鼠气道炎症及气道高反应性的作用及其对肺组织P物质(substance P,SP)含量的影响.方法 按随机数字表法将30只6～8周龄BALB/c雌鼠分为对照组、哮喘组及薄荷醇治疗组,哮喘组和薄荷醇治疗组用鸡卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏激发建立哮喘模型,薄荷醇治疗组于每次雾化激发前给予1.6％薄荷醇溶液5 mL雾化吸人30 min,连续10 d,对照组用PBS替代.于末次雾化24 h内行肺功能检测小鼠气道高反应性;48 h内灌取支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)计数细胞总数及细胞分类;肺组织HE染色观察肺部病理改变;ELISA检测血清总免疫球蛋白E(IgE)水平及肺匀浆SP含量;免疫组化染色检测肺组织SP的表达.结果 哮喘组气道高反应性明显高于对照组(P＜0.05),而薄荷醇治疗组较哮喘组显著降低(P＜0.05);哮喘组BALF细胞总数及嗜酸性粒细胞绝对计数均较对照组明显增加(P＜0.01),薄荷醇治疗组较哮喘组显著减少(P＜0.01);HE染色显示,哮喘组支气管和血管周围炎症细胞浸润明显,薄荷醇治疗组较哮喘组明显减轻;ELISA结果显示,哮喘组血清总IgE水平及肺匀浆SP含量均较对照组升高(P＜0.01),薄荷醇治疗组较哮喘组减轻(P＜0.05);免疫组化染色结果显示,哮喘组肺组织SP在气道上皮细胞及血管周围强阳性表达,薄荷醇治疗组中度阳性表达.结论 雾化吸入薄荷醇能减轻哮喘小鼠气道炎症及降低气道高反应性,可能与减少SP含量进而减轻肺部神经源性炎症相关.     

miRNA-26a在支气管哮喘患儿及哮喘小鼠模型中高表达

目的:探讨miRNA-26a在支气管哮喘患儿及支气管哮喘小鼠模型中的表达?方法:应用real-time PCR法检测支气管哮喘患儿外周血淋巴细胞中miRNA-26a与正常儿童的表达差异?采用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)诱导支气管哮喘小鼠模型,通过检测肺泡灌洗液(BALF)中细胞数及组织病理验证模型建立?应用real-time PCR法检测支气管哮喘小鼠模型肺组织miRNA-26a与对照组的表达差异?采用Western blot 法检测小鼠肺组织GSK-3β的表达差异?结果:支气管哮喘患儿外周血淋巴细胞miRNA-26a显著高于正常对照组?OVA诱导的支气管哮喘小鼠模型组BALF中细胞总数及嗜酸性粒细胞数显著高于正常对照组?组织病理显示支气管哮喘模型组炎症细胞浸润明显高于正常对照组?支气管哮喘小鼠模型组肺组织miRNA-26a显著高于正常对照,GSK-3β蛋白水平明显低于正常对照组?结论:miRNA-26a在支气管哮喘患儿及支气管哮喘小鼠模型中高表达?     

地塞米松对支气管哮喘大鼠肺组织粘附分子的影响

目的 研究地塞米松对抗原致敏哮喘大鼠肺组织ICAM-1、CD44分子的表达的影响,探讨其抗哮喘作用机制.方法 采用卵白蛋白致敏的方法制备哮喘模型,进行支气管肺泡灌洗液(BALF)和外周血白细胞分类计数,HE染色检测肺组织病理形态学改变,并通过免疫组织化学染色的方法检测肺组织支气管上ICAM-1、CD44分子的表达. 结果 (1)地塞米松治疗组BALF和外周血白细胞分类计数中嗜酸性粒细胞数目均明显低于哮喘模型组(P<0.01);(2) HE染色显示,地塞米松治疗组肺组织炎症反应明显轻于哮喘模型组;(3) 地塞米松治疗组大鼠肺组织支气管上ICAM-1、CD44分子表达明显低于哮喘模型组. 结论 地塞米松可以减轻哮喘大鼠气道炎症,具有明显的抗哮喘作用,其机制可能是通过降低哮喘大鼠肺组织支气管上ICAM-1、CD44分子的表达而实现的.     

三氧化二砷对实验性小鼠支气管哮喘气道重塑及TGF-β1、VEGF表达的影响

目的探讨三氧化二砷(As2O3)对支气管哮喘气道重塑的影响。方法将实验BALB/c小鼠40只随机分为正常对照组、模型组、地塞米松治疗组和As2O3治疗组,模型组通过腹腔注射卵白蛋白(OVA)致敏及反复雾化OVA吸入激发8周,建立支气管哮喘气道重塑动物模型,地塞米松和As2O3治疗组每次雾化吸入前分别给予地塞米松2 mg/kg和As2O34 mg/kg腹腔内注射。应用HE染色,观察支气管、肺组织的病理形态改变,应用图像分析系统测定气道重塑指标,应用免疫组化法检测各组小鼠肺组织中的转化生长因子β1(TGF-β1)、血管内皮生长因子(VEGF)的蛋白表达,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组肺组织中的TGF-β1和VEGF mRNA表达水平。结果模型组小鼠经过8周过敏原激发后,肺组织病理学发生了较典型的哮喘样改变;地塞米松组和As2O3组小鼠的肺部组织病理学改变较模型组为轻,两组之间无显著差异。模型组小鼠肺组织中TGF-β1、VEGF的蛋白和mRNA表达均增强;与模型组相比,地塞米松组和As2O3组肺组织中TGF-β1、VEGF的蛋白和mRNA的表达均较弱,但仍强于正常对照组。结论致敏后给予8周过敏原激发可成功建立小鼠哮喘气道重塑模型;地塞米松和As2O3治疗均可抑制哮喘的气道重塑过程,其作用机制可能与抑制TGF-β1、VEGF的表达有关。     

含鼠白细胞介素12基因腺病毒载体对小鼠支气管哮喘模型肺组织GATA-3表达的影响

目的：探讨含鼠白细胞介素12（IL-12）基因的腺病毒载体（AdCMVIL-12）对小鼠支气管哮喘模型GATA-3表达的影响。方法：BALB/c小鼠30只,随机分为正常对照组（A组）、哮喘模型组（B组）和AdCMVIL-12实验组（C组），B和C组建立哮喘模型，并于第20天分别鼻内吸入50 μL生理盐水和5×10⁸ PFU AdCMVIL-12。第28天收集各组小鼠的支气管肺泡灌洗液（BALF），比较细胞总数及细胞分类的变化，HE染色观察小鼠支气管及肺组织的病理变化，免疫组化及RT-PCR方法检测各实验组肺组织中GATA-3的表达情况。结果：哮喘模型组与对照组及AdCMVIL-12实验组比较，小鼠肺组织有大量炎症细胞浸润，以嗜酸性粒细胞为主。免疫组织化学及RT-PCR结果显示，哮喘模型组小鼠肺组织GATA-3表达（0.48 ±0.06）明显高于实验组（0.16±0.07）及对照组（0.18±0.04 ）(P<0.01)。结论：AdCMVIL-12对小鼠支气管哮喘的气道及肺组织炎症有明显的抑制作用，其机制可能与AdCMVIL-12阻断GATA-3的表达,调节Th₁/Th₂细胞因子的平衡有关。     

小青龙汤对哮喘模型小鼠气道上皮细胞表达TSLP的影响研究

目的 探讨小青龙汤对哮喘模型小鼠气道上皮细胞表达胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)的影响.方法 将30只健康雌性BALB/C小鼠分为空白对照组、哮喘模型组、小青龙汤组,每组10只.各组采取相应干预措施后取支气管、肺组织,免疫荧光检测支气管TSLP的表达水平,qRT-PCR和Western blot分别检测肺组织TSLP mRNA和蛋白表达水平.结果 小鼠支气管上皮细胞膜上TSLP荧光染色在哮喘模型组呈强阳性,小青龙汤组呈弱阳性,空白对照组呈阴性.小青龙汤组与空白对照组小鼠肺组织 TSLP mRNA表达水平较哮喘模型组降低(P<0.05),小青龙汤组略高于空白对照组,但组间差异无统计学意义(P>0.05).小青龙汤组与空白对照组小鼠肺组织TSLP蛋白表达水平均低于哮喘模型组(P<0.05),小青龙汤组较空白对照组略高,但组间差异无统计学意义(P>0.05).结论 小青龙汤对哮喘模型小鼠气道上皮细胞表达TSLP有明显抑制作用.     

越婢加半夏汤降低过敏性哮喘小鼠的血清IgE和升高肺组织中SOD的活力

目的 通过观察不同阶段各实验组小鼠血清中免疫球蛋白(IgE)及肺组织中超氧化物歧化酶(SOD)活力与抑制率的变化,探讨越婢加半夏汤对过敏性哮喘小鼠的作用机制。方法 随机将健康昆明种小白鼠分为正常对照组、哮喘模型组、地塞米松干预组和中药制剂组。采用卵白蛋白(OVA)、氢氧化铝凝胶混悬液腹腔注射致敏和雾化激发的方法建立小鼠哮喘模型,造模成功后,中药制剂组给予越婢加半夏溶液1 mL/100 g。地塞米松组给予腹腔注射地塞米松 1 mg /kg。正常对照组和哮喘模型组小鼠分次给予生理盐水灌胃治疗。给药30 d后处死,检测各组小鼠血清IgE水平和肺组织SOD活力,并进行HE染色观察肺组织的病理学变化。结果 中药制剂组小鼠与哮喘模型组小鼠相比,前者外周血清中IgE含量下降(P<0.05),IgE在2组间差异有统计学意义(P<0.05);前者肺组织匀浆中SOD活力与抑制率升高,SOD活力与抑制率在2组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论 降低过敏性哮喘小鼠血清中IgE含量及升高小鼠肺组织SOD活力与抑制率水平,提高肺组织抗氧化能力,可能为越婢加半夏汤治疗过敏性哮喘的作用机制之一。     

哮喘分期序贯治疗对大鼠气道重构及过敏性气道炎症的影响

目的 研究哮喘分期序贯治疗对大鼠哮喘模型气道重构及过敏性气道炎症的作用。方法 56只SD大鼠随机分成正常组、哮喘组、序贯治疗1组、序贯治疗2组、序贯治疗3组、布地奈德组、孟鲁司特钠组,每组8只,除正常组外,其余各组均以卵蛋白（OVA）辅以氢氧化铝为佐剂于第1、8、15天注射致敏,22d后隔天雾化吸入OVA8周激发哮喘,建立哮喘模型。从实验第8天开始,给药组序贯治疗1组急性期麻杏二陈汤灌胃;序贯治疗2组急性期麻杏二陈汤灌胃,缓解期胃饲金水六君煎加减;序贯治疗3组急性期麻杏二陈汤灌胃,缓解期胃饲金水六君煎加减方,稳定期胃饲六味地黄颗粒;布地奈德组大鼠激发后雾吸沙丁胺醇,缓解期和稳定期雾吸布地奈德;孟鲁司特钠组激发后雾吸沙丁胺醇,缓解期和稳定期胃饲孟鲁司特钠;哮喘模型组以生理盐水胃饲代替,干预7周后观察实验大鼠全血白细胞总数、嗜酸性粒细胞计数,支气管平滑肌层、上皮下胶原、内管壁的厚度,肺组织羟脯氨酸含量。结果 ①大鼠肺支气管病理学观察表明哮喘大鼠支气管平滑肌层、上皮下胶原、内管壁厚度[（27．87±0．81）、（9．11±0．58）、（39．00±3．68）μm]均较正常组[（10．76±0．67）、（3．37±0．42）、（20．40±2．85）μm]明显增厚,肺组织羟脯氨酸含量[（11．50±3．81）mg／g]较正常组[（5．71±0．80）mg／g]明显增高,差异均有统计学意义（P=0．00）,表明哮喘时存在气道重构。②序贯治疗1、2、3组、布地奈德组及孟鲁司特钠组对大鼠支气管平滑肌层、上皮下胶原、内管壁厚度、肺组织羟脯氨酸含量、全血白细胞总数及嗜酸性粒细胞计数均比哮喘模型对照组低,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论 中药分期序贯治疗具有减轻哮喘气道慢性炎症和延缓气道重构的作用。     

流感嗜血杆菌下气道定植对哮喘小鼠肺组织TH17细胞表达及气道重塑的影响

目的 检测下呼吸道流感嗜血杆菌定植对哮喘小鼠TH17细胞的表达、气道炎症及对气道重塑的影响。方法 用卵清蛋白（ovalbumin,OVA）致敏和激发制备慢性哮喘小鼠模型,同时制作流感嗜血杆菌琼脂糖菌珠,在气道注菌之后的第1、7、21天处理小鼠,观察肺组织病理变化,流式细胞仪检测肺组织TH17细胞表达、测定CD4⁺T细胞TLR4的表达,并进行气道细菌培养和肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid,BALF）细胞计数。结果 与正常组和哮喘非注菌组相比,哮喘注菌组有明显的哮喘症状和感染症状;病理学结果显示哮喘组气道黏膜水肿,管壁增厚,大量的炎性细胞浸润,注菌后炎症加重。哮喘小鼠气道注菌之后,随着时间的延长,气管壁厚度（WAt/Pbm）和平滑肌厚度（WAm/Pbm）均显著高于哮喘非注菌组。细菌学培养结果显示正常组第1、7天气管流感嗜血杆菌培养阳性,第21天阴性;哮喘组注菌后1、7、21天气管流感嗜血杆菌检测均阳性。流式细胞仪检测小鼠肺组织TLR4和TH17在CD4⁺T细胞的表达,哮喘组的TLR4和TH17表达均显著高于正常组,注菌之后二者表达显著增加,观察指标在哮喘注菌组变化更明显,差异有统计学意义（P<0.05）。BALF细胞计数结果显示,哮喘组BALF中细胞数明显高于正常组,注菌后细胞数进一步增多。相关性分析发现,哮喘组小鼠肺组织中CD4⁺T细胞TLR4的表达与BALF细胞总数呈正相关（r=0.746,P<0.05）,TH17表达与CD4⁺T细胞TLR4的表达、气道WAt/Pbm、WAm/Pbm和BALF细胞总数呈正相关（分别r=0.612、0.611、0.537、0.752,P<0.05）。结论 流感嗜血杆菌下呼吸道定植可以通过激活TLR4,增加哮喘小鼠肺组织TH17细胞表达,加重哮喘气道炎症和气道重塑,可能是难治性哮喘预后的重要机制之一。     

组蛋白乙酰化修饰在哮喘小鼠气道内黏蛋白5AC表达中的作用研究

目的 探讨哮喘小鼠体内组蛋白乙酰基转移酶（HAT）活性对气道内黏蛋白5AC（MUC5AC）表达的重要性。方法 复制哮喘小鼠模型,行外周血常规分析,肺泡灌洗液常规瑞氏染色并计数,肺组织HE染色,免疫组织化学法检测肺组织内MUC5AC蛋白表达,酶联免疫吸附试验（ELISA）测定HAT、组蛋白去乙酰基酶（HDAC）活性、MUC5AC水平,进行统计学分析。结果 哮喘组小鼠外周血嗜酸性粒细胞计数（EOS）较曲古抑菌素A（TSA）治疗组、对照组均升高（P <0.05）;哮喘组肺泡灌洗液总细胞计数及EOS均较TSA治疗组、对照组升高（P <0.05）;TSA治疗组与哮喘组比较,可同时降低小鼠体内HAT、HDAC活性,差异有统计学意义（P <0.05）,但以HAT为主;TSA治疗组MUC5AC水平较哮喘组降低（P <0.05）;肺组织HE染色可见哮喘组小鼠气道炎症细胞增多,而TSA治疗后明显改善;免疫组织化学结果示,TSA治疗组较哮喘组能明显减少MUC5AC蛋白含量（P <0.05）。结论 组蛋白乙酰化修饰在哮喘小鼠气道黏液分泌中起重要的调控作用。     

固本防哮饮对哮喘缓解期小鼠气道杯状细胞增生与黏液分泌相关基因的调控作用

目的?探讨中药复方固本防哮饮对哮喘缓解期小鼠气道杯状细胞增生与黏液分泌相关基因IRE1β、SPDEF、AGR2和mCLCA3的影响。方法?结合前期研究采用卵蛋白(OVA)致敏和OVA-呼吸道合胞病毒(RSV)联合诱导激发BALB/c雌性小鼠,建立哮喘缓解期动物模型,随机分为正常组,模型组,固本防哮饮低、中、高剂量组,孟鲁司特钠组及地塞米松组。qPCR法检测肺组织中IRE1β、SPDEF、AGR2和mCLCA3 mRNA表达水平。结果?模型组小鼠肺组织中IRE1β、SPDEF、AGR2 mRNA表达显著高于正常组(P＜0.05),而mCLCA3 mRNA表达显著低于正常组(P＜0.05);固本防哮饮高、中、低剂量组,孟鲁司特钠组及地塞米松组小鼠肺组织中IRE1β、SPDEF、AGR2 mRNA水平较模型组存在不同程度的下降,而固本防哮饮低剂量组和孟鲁司特钠组小鼠肺组织中mCLCA3 mRNA表达显著高于正常组(P＜0.05)。结论?固本防哮饮防治哮喘抑制气道杯状细胞增生和减少黏液分泌的作用机制可能是通过降低IRE1β、SPDEF、AGR2 mRNA表达所致。      

哮喘大鼠模型支气管肺组织骨桥蛋白表达的变化及其调控机制的初探

目的 研究哮喘大鼠模型支气管肺组织骨桥蛋白(OPN)表达变化及其调控机制;探讨地塞米松(DXM)对哮喘大鼠模型支气管肺OPN表达的影响及其机制.方法 SD大鼠24只,随机分为正常对照组(A组)、哮喘模型组(B组)、DXM治疗组(C组).以卵蛋白(OVA)致敏和激发建立大鼠支气管哮喘模型,肺组织切片用于HE染色以观察支气管组织学变化;用免疫组织化学和免疫印迹法分析三组大鼠支气管肺组织中OPN的表达及ERK、p38的磷酸化水平.结果 B组大鼠支气管肺组织OPN表达较A组增加,DXM对其表达有明显抑制作用(P<0.05);B组支气管肺组织ERK磷酸化水平较A组明显增加,DXM对其磷酸化有明显抑制作用(P<0.05);而支气管肺组织p38磷酸化水平在B组与A组之间无明显变化,但C组p38磷酸化水平明显下降.结论 DXM对OPN表达的增加有抑制作用,其可能的机制是通过ERK信号通路影响OPN的表达.     

越婢加半夏汤对过敏性哮喘小鼠血清IgE及肺组织中SOD影响的研究

目的 通过研究不同阶段各实验组小鼠血清中免疫球蛋白（IgE）及肺组织中超氧化物歧化酶（SOD）活力与抑制率的改变,探索越婢加半夏汤对过敏性哮喘小鼠的作用机制。方法 采用卵白蛋白( OVA)、氢氧化铝凝胶混悬液腹腔注射致敏和雾化激发的方法建立小鼠哮喘模型,各组小鼠治疗完成后处死,采用ELISA法检测各组小鼠血清IgE水平,采用WST-1法测定各组小鼠肺组织匀浆中SOD活力水平,肺组织HE染色,观察其病理变化。结果 中药制剂组小鼠与哮喘模型组小鼠相比,前者外周血清中IgE含量下降(P<0.05),IgE在2组间差异有统计学意义(P<0.05);前者肺组织匀浆中SOD活力与抑制率升高,SOD活力与抑制率在2组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论 降低过敏性哮喘小鼠血清中IgE含量及升高小鼠肺组织SOD活力与抑制率水平,提高肺组织抗氧化能力,可能为越婢加半夏汤治疗过敏性哮喘的作用机制之一。     

固本防哮饮对哮喘缓解期小鼠气道上皮紧密连接蛋白及CCSP的影响

  目的  研究固本防哮饮对哮喘缓解期小鼠气道上皮紧密连接蛋白及Clara细胞分泌蛋白(CCSP)的影响, 探讨其防治缓解期哮喘的可能机制。  方法  联合使用卵清蛋白(OVA)及呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus, RSV)建立哮喘缓解期小鼠模型, 将36只Balb/c小鼠随机分为正常组、模型组、固本防哮饮低剂量组、固本防哮饮中剂量组、固本防哮饮高剂量组和孟鲁司特钠组, 每组6只。模型建立完成后, 固本防哮饮各剂量组分别予不同剂量(12、24、36 g·kg-1)固本防哮饮, 孟鲁司特钠组予2.6 mg·kg-1孟鲁司特钠,各组均灌胃28 d。末次给药后24 h留取样本。使用苏木精-伊红(HE)染色法观察各组小鼠肺组织病理; Western blot、qPCR及免疫组化检测各组小鼠肺组织中闭锁小带蛋白-1(ZO-1)等气道上皮紧密连接蛋白表达; ELISA法检测肺组织及肺泡灌洗液(BALF)中CCSP的表达。  结果  HE染色结果显示, 与正常组相比, 模型组小鼠肺组织中可见明显的炎性细胞浸润(P < 0.01), 固本防哮饮中、高剂量组小鼠肺组织中炎性细胞浸润减少(P < 0.05,P < 0.01);与正常组相比,模型组中ZO-1、闭合蛋白(Occludin)和桥粒芯胶蛋白(Desmocollin)的蛋白表达水平显著降低(P < 0.05,P < 0.01),免疫组化结果显示上述指标蛋白在模型组中表达减少(P < 0.01, P < 0.001)且排列松散, 固本防哮饮各剂量组对上述蛋白表达有不同程度地回调; 同时,模型组中ZO-1、ZO-2、纽带蛋白(Vinculin)、连环蛋白(Catenin) mRNA的表达水平显著降低(P < 0.05,P < 0.01),固本防哮饮高剂量组ZO-1、ZO-2、Vinculin、Catenin mRNA表达水平显著升高(P < 0.05);与正常组相比, 模型组小鼠肺组织及BALF中CCSP的表达显著下降(P < 0.01), 低、高剂量固本防哮饮显著增加肺组织及BALF中CCSP的表达(P < 0.05, P < 0.01)。  结论  固本防哮饮能够上调气道上皮紧密连接蛋白以及CCSP的表达水平, 修复上皮损伤, 恢复上皮屏障功能, 从而防治哮喘。      

加味四君子汤对小鼠CT26大肠癌移植瘤的抑制作用及肿瘤相关巨噬细胞CD68、CD206蛋白表达的影响

目的:观察加味四君子汤对小鼠CT26大肠癌移植瘤的抑制作用及肿瘤相关巨噬细胞CD68、CD206蛋白表达的影响。方法:取大肠癌CT26细胞体外培养,建立BALB/C小鼠大肠癌皮下移植瘤模型。取造模成功的BALB/C小鼠随机分为模型组和加味四君子汤低、中、高剂量组,每组5只。加味四君子汤各组小鼠分别灌胃给予0.035、0.07、0.14 g/g药液,模型组小鼠灌胃给予等体积0.9%NaCl溶液,连续21 d。末次给药后,剥离瘤体,测量移植瘤体积并计算抑瘤率;免疫组化检测各组小鼠瘤体组织中肿瘤相关巨噬细胞CD68和CD206的蛋白表达。结果:药物干预21 d后,与模型组相比,加味四君子汤中剂量组小鼠的移植瘤体积显著减小(P0.05),肿瘤生长抑制率显著升高(P0.05),且其抑瘤效果明显优于低、高剂量组(P0.05)。免疫组化观察显示,与模型组相比,加味四君子汤中剂量组小鼠瘤体组织内肿瘤相关巨噬细胞CD68和CD206表达显著降低(P0.01);且中剂量组对CD68和CD206表达的抑制作用明显强于低、高剂量组(P0.05,P0.01)。结论:加味四君子汤能有效抑制小鼠CT26大肠癌移植瘤生长,其作用机制可能与下调肿瘤相关巨噬细胞CD68和CD206的表达有关。