miR-581 对结直肠癌SW620 细胞增殖能力的影响

目的:探讨miR-581 对结直肠癌SW620 细胞增殖能力的影响。方法:分别用携带miR-581 基因的慢病毒颗粒(LV-miR-581-GFP)和miR-581 mimics(miR-581)转染人结肠癌细胞株SW620 作为实验组;用对照组病毒颗粒(LV-GFP)和对照组mimics (Vector)转染SW620 细胞株作为阴性对照组。用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞中miR-581 的mRNA 表达水平;CCK8 和克隆形成实验检测细胞增殖能力和克隆形成能力的变化。结果:实验组SW620 细胞中miR-581 表达较对照组明显增高(P<0.05);CCK8 和克隆形成实验显示过表达实验组细胞的增殖及克隆形成能力较对照组明显增强(P<0.05)。结论:miR-581 对结直肠癌SW620 细胞的增殖具有促进作用。     

circUBE2D2 靶向 miR-376a-3p 调控结直肠癌 SW620 细胞的增殖、迁移及侵袭

目的 探讨 circUBE2D2 对结直肠癌 SW620 细胞增殖、 迁移及侵袭的影响及其可能作用机制。 方法 收集 2020 年 1 月至 2020 年 5 月大连大学附属新华医院肛肠外科收治的 45 例结直肠癌患者的癌组织及 其相应癌旁组织标本, 采用 qRT-PCR 法检测 circUBE2D2、 miR-376a-3p 的表达量; 以人结直肠癌细胞 SW620 为研究对象, 随机分为 si-NC 组、 si-circUBE2D2 组、 miR-NC 组、 miR-376a-3p 组、 si-circUBE2D2 + anti-miR-NC 组和 si-circUBE2D2 + anti-miR-376a-3p 组; CCK-8 法、 平板克隆形成实验、 划痕实验与 Transwell 实验分别检测细胞增殖、 克隆形成、 迁移及侵袭; 双荧光素酶报告实验检测 miR-376a-3p 过表达对野 生型载体 WT-circUBE2D2 的荧光素酶活性; Western 印迹法检测上皮型钙黏蛋白 (E-cadherin)、 神经型钙 黏蛋白 (N-cadherin) 蛋白表达量。 结果 与癌旁组织比较, 结直肠癌组织中 circUBE2D2 的表达量升高 (P< 0. 05), miR-376a-3p 的表达量降低 (P< 0. 05); 与 si-NC 组比较, si-circUBE2D2 组细胞活力、 划痕愈 合率和 N-cadherin 蛋白水平降低 (P< 0. 05), 细胞克隆形成数和侵袭细胞数减少 (P< 0. 05), E-cadherin 蛋 白水平升高 (P< 0. 05); 与 miR-NC 组比较, miR-376a-3p 组细胞活力、 划痕愈合率和 N-cadherin 蛋白水平 降低 (P< 0. 05), 细胞克隆形成数和侵袭细胞数减少 (P< 0. 05), E-cadherin 蛋白水平升高 (P< 0. 05); miR-376a-3p 过表达可抑制野生型载体 WT-circUBE2D2 的荧光素酶活性 (P< 0. 05); 与 si-circUBE2D2 + anti-miR-NC 组比较, si-circUBE2D2 + anti-miR-376a-3p 组细胞活力、 划痕愈合率和 N-cadherin 蛋白水平升高 (P< 0. 05), 细胞克隆形成数和侵袭细胞数增多 (P< 0. 05), E-cadherin 蛋白水平降低 (P< 0. 05)。 结论 干扰 circUBE2D2 表达可通过靶向调控 miR-376a-3p 表达而降低结直肠癌细胞增殖、 克隆形成、 迁移及侵袭 能力。     

APRIL调节基质金属蛋白酶的表达对结直肠癌细胞转移侵袭能力的影响

目的 研究增殖诱导配体(a proliferation-inducing ligand,APRIL)对结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞转移侵袭能力和基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)表达的影响,以进一步明确APRIL在CRC转移中的作用.方法 APRIL基因的小干扰RNA质粒载体(siRNAAPRIL)转染人CRC细胞SW480,APRIL重组蛋白(rhAPRIL)刺激CRC细胞HCT-116,Transwell小室转移及侵袭试验分析APRIL对CRC细胞转移及侵袭能力的影响;RT-PCR、ELISA检测MMPs的表达变化.结果 siRNA-APRIL转染的SW480细胞Transwell小室试验转移及侵袭细胞数显著减少(P＜0.05),rhAPRIL刺激的HCT-116细胞Transwell小室试验转移及侵袭细胞数显著增多(P＜0.05);MMP-2、MMP-9及TIMP-1 mRNA,分泌型的MMP-2、MMP-9蛋白表达在转染或刺激前后差别均有统计学意义(P＜0.05);MMP的抑制剂GM6001处理后,SW480对照组和rhAPRIL刺激后的HCT-116细胞Transwell小室侵袭细胞数显著减少(P＜0.05).结论 APRIL通过调节MMPs的表达促进结直肠癌的侵袭和转移,可为结直肠癌转移的干预及治疗提供新的靶点.     

体内荧光活体成像观察miR-581 对结直肠癌细胞SW620 转移能力的影响

目的:采用动物活体荧光成像技术体内动态观察miR-581对结直肠癌(CRC)细胞SW620转移能力的影响。方法:构建并筛选出荧光素酶标记的SW620稳转株(miR-581-NC-Luc、miR-581-UP-Luc),分组尾静脉注射于裸鼠体内,实时荧光成像系统动态观察其在体内成瘤大小和转移部位情况。切取裸鼠转移器官组织行HE染色、免疫荧光等检测。结果:成功构建稳定表达荧光素酶的CRC SW620细胞,建立了裸鼠CRC异位转移瘤模型;从实验组和对照组裸鼠的总转移率、转移灶个数、转移区域内荧光表达量等多方面对比得出,与阴性对照组相比,miR-581过表达组SW620细胞在裸鼠内肺转移能力显著下降(P0.05)。结论:本研究通过活体成像系统间接反映肿瘤在体内的生长情况,使在不触及肿瘤的情况下对动物移植瘤模型的研究成为可能,为深入研究miR-581对CRC肿瘤细胞转移能力的影响提供体内证据。     

整合素/黏着斑激酶信号转导通路与结直肠癌的侵袭和转移

结直肠癌是一种常见的恶性肿瘤 ,近年来其发病率有逐年上升的趋势。随着肿瘤分子生物学的进展 ,对结直肠癌分子水平的认识逐步深入。最近 ,细胞内信号转导已成为普遍关注的生物学问题。它调节着多细胞生物的生长、发育、分裂及死亡等生物学行为 ,并且与结直肠癌等恶性肿瘤的发生发展密切相关。整合素 (integrin)是一类重要的细胞表面受体 ,它主要介导细胞与胞外基质的黏附 ,有的还可介导细胞间的黏附。除此之外 ,近年来的研究表明 ,整合素还可作为介导信号传递的膜分子 ,通过独特的途径转导信号 ,参与细胞多种生理功能和病理变化 ,如细胞分…     

周期蛋白E促进结直肠癌SW1116细胞增殖和侵袭

目的 探究周期蛋白E高表达对结直肠癌SW1116细胞增殖和侵袭的影响。方法 将SW116细胞分为周期蛋白E-过表达组、对照组与空载体组,免疫组化法检测各组细胞周期蛋白E的表达;实时定量PCR法检测周期蛋白E mRNA的表达;四甲基偶氮唑盐实验法(MTT)观察细胞增殖能力;流式细胞仪检测细胞周期;Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果 与对照组与空载体组相比,周期蛋白E过表达组SW116细胞的周期蛋白E mRNA表达明显升高;在24h和48h时的细胞存活率明显升高;G₀/G₁期细胞比例明显升高,G₂/M期细胞比例明显降低;穿膜细胞数明显增加。结论 周期蛋白E促进结直肠癌SW1116细胞的增殖与侵袭。     

结直肠癌nm23基因表达、突变与侵袭、转移的相关性

目的　探讨nm2 3基因异常表达及突变与结直肠癌侵袭、转移之间的关系。方法　应用免疫组化LDP法、流式细胞术、PCR SSCP法对 1 5 0例结直肠癌标本及正常黏膜组织和 1 6例大肠腺瘤分 3组进行nm2 3蛋白检测和基因突变的筛查。结果　①免疫组化发现 73例结直肠癌中nm2 3 H1蛋白表达水平低于正常黏膜组织和良性腺瘤 (P <0 0 0 1 ,P <0 0 0 1 ) ,转移癌表达低于原发癌 (P <0 0 0 1 ) ,结直肠癌nm2 3 H1蛋白表达与组织分化、肠壁浸润、Dukes分期、转移均密切相关 (P <0 0 0 1 ) ,低表达组术后预后差于高表达组 (P <0 0 0 1 ) ;②流式细胞术研究表明 ,nm2 3 H1蛋白在癌组织表达低于癌旁组织 ;在结直肠癌伴有转移 (3/ 1 4 )时其表达低于未发生转移者 (1 1 / 1 4 ) ;③nm2 3 H1基因第 2～ 5位外显子在 6 3例结直肠癌组织中未发现异常突变。结论　结直肠癌中nm2 3基因突变可能是小概率事件 ,在结直肠癌的侵袭、转移中不发挥主要作用 ,而nm2 3 H1蛋白表达降低则与结直肠癌的侵袭、转移有关 ,提示检测nm2 3蛋白表达是判断结直肠癌预后有价值的指标之一。     

基因沉默PRDX1 表达对人结直肠癌SW480 细胞侵袭迁移的影响

目的:探讨RNA 干扰过氧化还原酶1(Peroxiredoxin 1,PRDX1)表达对人结直肠癌SW480 细胞侵袭转移能力的影响。方法:筛选RNA 干扰PRDX1 的慢病毒质粒,与阴性对照慢病毒质粒分组转染结直肠癌SW480 细胞,转染后的SW480 细胞可分为PRDX1 基因沉默组(si-PRDX1)和阴性对照组(Vector)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和免疫印迹法(Western blot)分别检测两组细胞中PRDX1 mRNA 和蛋白表达;采用Transwell 侵袭和迁移实验检测基因沉默PRDX1 表达对结直肠癌细胞侵袭及迁移能力的影响;通过Western blot 检测两组细胞中基质金属蛋白酶(MMP)家族部分蛋白表达水平。结果:基因沉默PRDX1 表达可有效抑制结直肠癌SW480 细胞中PRDX1 mRNA 和蛋白水平的表达,与阴性对照组相比(Vector),差异均具有统计学意义(P<0.01),说明基因沉默PRDX1 的SW480 细胞系构建成功;Transwell 侵袭和迁移实验显示si-PRDX1组细胞的侵袭及迁移能力较对照组均明显降低(P<0.01);Western blot 结果显示,与Vector 组相比,si-PRDX1 组细胞中组织基质金属蛋白酶抑制剂2(TIMP-2)的表达明显增加,而MMP-2 及MMP-9 的表达显著下降,且差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:基因沉默人结直肠癌SW480 细胞的PRDX1 表达可有效抑制细胞的侵袭、迁移及转移能力,其机制可能会通过调控TIMP-2、MMP-2 及MMP-9 的表达介导。     

miR-27a对结肠癌SW480细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响及可能机制

目的 探讨miR-27a对结肠癌SW480细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响及可能机制。方法 qRT-PCR方法检测人结肠癌细胞株SW480与人正常结肠黏膜上皮细胞NCM460中miR-27a的表达水平。体外培养SW480细胞,将SW480细胞随机分为空白对照组(不进行任何处理)、miR-27a抑制剂组（转染miR-27a inhibitor）与阴性对照组（转染miR-27a inhibitor NC）,采用脂质体法进行转染,实时荧光定量PCR方法验证转染效率。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测SW480细胞增殖;Transwell实验检测SW480细胞侵袭与迁移;流式细胞术检测SW480细胞凋亡;Western blot法检测转染后叉头框蛋白O1(FOXO1)、组织金属蛋白酶抑制剂2(TIMP-2)、泛素连接酶FBW7的表达。结果 miR-27a在SW480细胞中的表达水平显著高于NCM460细胞（P<0.01）。转染miR-27a抑制剂后,SW480细胞中miR-27a的表达水平明显降低,转染成功。抑制miR-27a表达后,SW480细胞的增殖、迁移与侵袭能力显著降低,凋亡率显...     

miR-95对结肠癌细胞系SW620侵袭和迁移的影响及机制

目的探讨小分子非编码RNA-95(miR-95)表达对结肠癌细胞系SW620侵袭、迁移能力的影响及其机制。方法将miR-95干扰慢病毒转入结肠癌细胞系SW620,用qRT-PCR检测细胞中miR-95表达,用Transwell小室和划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力;MTT法检测细胞同种、异种细胞黏附能力;用Western印迹检测3组细胞的EMP1,VEGFC和MMP2蛋白表达。结果 SW620转染miR-95干扰慢病毒72 h后,转染率较高;与空病毒组和对照组比较,转染组miR-95的表达降低(P0.05);侵袭和迁移能力减弱(P0.05);同种黏附能力增强(P0.05);异种黏附能力减弱(P0.05);同时转染组EMP1蛋白表达明显增高,VEGFC、MMP2蛋白表达明显降低(P0.05)。结论 miR-95能够促进SW620细胞侵袭和迁移能力,可能是通过EMP1、VEGFC和MMP2实现的。     

硫酸寡糖复合物对人结肠癌SW620细胞迁移与侵袭能力的影响

目的 探讨硫酸寡糖复合物(PI-88)对结肠癌SW620细胞迁移与侵袭的影响及机制。方法 培养人结肠癌SW620细胞,分为对照组、溶媒组和药物组;对照组细胞不做任何处理,药物组细胞给予5 μL的0.5 mol/L的PI-88,溶媒组给予细胞5 μL的磷酸盐缓冲液(PBS)。各组细胞处理后继续培养24 h,采用划痕实验检测结肠癌SW620细胞迁移距离;Transwell小室检测结肠癌SW620细胞迁移数量与侵袭数量;Western blot检测结肠癌SW620细胞中乙酰肝素酶(HPA)、血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)蛋白的表达。结果 划痕实验结果显示,药物组SW620细胞迁移距离(35.49±6.89)μm小于对照组(216.75±21.43)μm、溶媒组(227.52±17.72)μm,差异均有统计学意义(P值均＜0.05)。Transwell小室细胞迁移、侵袭实验结果显示,药物组SW620细胞迁移数目(226±37)个和侵袭数目(89±11)个均少于对照组(875±93、321±28)个和溶媒组(843±116、331±43)个,差异均有统计学意义(P值均＜0.05)。Western blot实验结果显示,药物组PHA、VEGF、bFGF蛋白相对表达量均明显低于对照组和溶媒组,差异均有统计学意义(P值均＜0.05)。结论 PI-88具有抑制结肠癌SW620细胞迁移与侵袭的作用,其作用机制可能与PI-88抑制结肠癌SW620细胞HPA、VEGF、bFGF蛋白的表达有关。     

Methylation status of T-lymphoma invasion and metastasis 1 promoter and its overexpression in colorectal cancer

T-lymphoma invasion and metastasis 1 has been implicated in tumor invasion and metastasis. However, the regulatory mechanisms underlying aberrant T-lymphoma invasion and metastasis 1 expression in human colorectal cancer have not been well defined. To investigate the relationship between methylation status and expression levels of T-lymphoma invasion and metastasis 1 gene, methylation-specific polymerase chain reaction, and immunohistochemistry staining were performed in 232 matched samples of human colorectal cancer tissue and normal colorectal mucosa. Results showed that T-lymphoma invasion and metastasis 1 protein was overexpressed in colorectal cancer, especially in metastatic cases (P < .001). The degree of T-lymphoma invasion and metastasis 1 promoter methylation was a little lower in cancer tissues than in matched normal mucosa (P < .05), and the expression level of T-lymphoma invasion and metastasis 1 was inversely related to the methylation status in cancer tissues (P < .001). Colon cancer cell lines HT29 and LS174T were treated with demethylating agent 5-aza-2'-deoxycytidine, resulting in promoter hypomethylation accompanied by reexpression of T-lymphoma invasion and metastasis 1 mRNA and protein. In contrast, colon cancer cell lines SW620 and LoVo were treated with hypermethylation agent S-adenosylmethionine, resulting in T-lymphoma invasion and metastasis 1 promoter hypermethylation, accompanied by suppression of T-lymphoma invasion and metastasis 1 expression and inhibition of cell growth, plate colony formation, and migration. The present study demonstrates that overexpression of T-lymphoma invasion and metastasis 1 is associated with hypomethylation status of T-lymphoma invasion and metastasis 1 promoter region in colorectal cancer tissues. It suggests that promotor hypomethylation of T-lymphoma invasion and metastasis 1 may play a role in the progression and metastasis of colorectal cancer. Pharmacologic reversal of T-lymphoma invasion and metastasis 1 promoter hypomethylation may inhibit cell proliferation and migration.     

MiR-21在大肠癌中的表达及其对SW480细胞增殖侵袭的影响

目的检测microRNA-21(miR-21)在大肠癌患者中的表达情况,并探讨miR-21对大肠癌SW480细胞增殖和侵袭的影响。方法收集大肠癌患者标本32例,同时收取癌组织及相应的癌旁组织。通过荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测各组织中miR-21的表达水平。以脂质体为载体将miR-21抑制剂转染至SW480细胞,分别用MTT方法与Transwell实验检测转染后SW480细胞的增殖侵袭能力变化,利用qRT-PCR和免疫印迹实验检测第10号染色体同源缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(PTEN)mRNA和蛋白水平的改变。结果 miR-21在32例患者癌组织及正常黏膜组织中的表达量分别为(1.57±0.79)与(0.56±0.32),差异有统计学意义(P0.01)。下调miR-21的表达能够显著抑制SW480细胞的增殖和侵袭能力,PTEN mRNA和蛋白的表达水平均显著升高(P0.01)。结论 microRNA-21在大肠癌中高表达,下调microRNA-21表达抑制大肠癌SW480细胞增殖和侵袭可能与上调PTEN表达相关。     

Expression of CD44+/Ki-67- and its significance in colorectal cancer and human colorectal cancer cell lines SW620

目的 探讨结直肠癌及人结肠癌细胞系SW620中CD44+/Ki-67-癌细胞的形态特点、数量及分布特征.方法 利用组织芯片技术、免疫组化染色、免疫组化双重染色和HE染色,连续切片,同部位观察.结果 正常肠黏膜中CD44蛋白不表达,Ki-67蛋白低表达;腺瘤中CD44蛋白低表达,Ki-67蛋白表达率为5.06%,CD44+/Ki-67-细胞数为0.58%.结直肠癌中CD44+/Ki-67-癌细胞数平均为5.82%,主要分布在腺体基膜缘或腺体共壁侧,分布有统计学意义(P<0.05).癌细胞主要有两种形态,一种是大核细胞,另一种细胞核较小,形似淋巴细胞;在SW620中CD44+/Ki-67-主要表达在小圆细胞和单极细胞中,其它细胞中表达少;细胞数比率与组织学相比,差异无显著性(P>0.05)且比值接近;Ki-67-的癌细胞中,CD44+癌细胞占67%,CD44-癌细胞占33%,两者差异有显著性(P<0.05),说明大多CD44+癌细胞处于G0期或静息期,只有少数细胞处于细胞G1、S、G2、M期.结论 CD44+/Ki-67-癌细胞特征和从癌干细胞理论方面考虑,更适合作为癌干细胞的标记,为癌干细胞的分离、靶向治疗和个体化治疗提供可靠的分子生物学指标.     

干细胞相关因子在大肠癌组织及SW620细胞株的表达

背景：肿瘤细胞有多种干细胞标记的表达,深入研究其表达规律有助于揭示肿瘤发病机制、完善肿瘤干细胞理论。 目的：检测大肠癌实体组织中干细胞相关分子标记CD133、CD166、Oct4、Sox2、C-myc、Klf4、Bmi-1与癌旁组织的表达差异,以及CD133免疫磁珠分选阳性与阴性SW620细胞中上述基因的表达差异。 方法：选临床病理诊断清楚的29例大肠癌组织标本提取RNA,RT-PCR检测CD133、CD166、Oct4、Sox2、C-myc、Klf4、Bmi-1在大肠癌组织与癌旁对照组织中的表达。CD133免疫磁珠分选SW620,提取CD133细胞与CD133阴性细胞RNA,RT-PCR检测分选后上述基因的表达差异。 结果与结论：29例标本均诊断为低、中分化腺癌或黏液腺癌,干细胞相关分子标记癌组织与癌旁组织表达灰度相对值癌组织表达均高于癌旁组织(P < 0.05)。RT-PCR检测分选后CD133⁺细胞CD133,CD166,Oct4,Sox2,C-myc,Klf4,Bmi-1表达,结果均高于CD133^-细胞。提示,CD133、CD166、Oct4、Sox2、C-myc、Klf4、Bmi-1相关干细胞标记可作为大肠癌肿瘤干细胞标记并有望用于诊断检测。     

MicroRNA-10b在大肠癌中的表达及其对SW480细胞侵袭转移的影响

目的检测microRNA-10b(miR-10b)在大肠癌患者中的表达情况,并探讨miR-10b对大肠癌SW480细胞侵袭和转移的影响。方法收集大肠癌患者标本32例,同时收取癌组织及相应的癌旁组织。通过荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测各组织中miR-10b的表达水平。以脂质体为载体将miR-10b抑制剂转染至SW480细胞,Transwell实验检测转染后SW480细胞的侵袭和迁移能力变化,利用qRT-PCR和免疫印迹实验检测Kriippel样因子4(KLF4)mRNA和蛋白水平的改变。结果miR-10b在32例患者癌组织及正常黏膜组织中的表达量分别为(0.24±0.09)与(0.67±0.28),差异有统计学意义(P0.01)。下调miR-10b的表达能够显著抑制SW480细胞的侵袭和迁移能力,KLF4 mRNA和蛋白的表达水平均显著升高,P0.01。结论MicroRNA-10b在大肠癌中低表达,并可能通过上调KLF4的表达抑制大肠癌SW480细胞侵袭和转移。