Xpert艰难梭菌检测系统的临床应用评价

目的评估Xpert艰难梭菌检测系统的临床应用价值。方法选取43份腹泻粪便标本,采用厌氧培养法、VIDAS检测A/B毒素法和Xpert艰难梭菌检测系统检测艰难梭菌,以产毒培养法作为金标准对检测方法进行评价,并比较不同检测方法对临床标本检测结果的一致性。通过自配027型标准菌株模拟粪便标本,验证Xpert艰难梭菌检测系统筛选027型流行株的能力。结果以产毒培养法为金标准,Xpert艰难梭菌检测系统的敏感性和特异性分别为90.9%和93.8%,阳性和阴性预测值分别为83.3%和96.8%。与产毒培养法结果一致性检验Kappa值为0.822(P0.05),与VIDAS检测A/B毒素法结果一致性检验Kappa值为0.419(P0.05);027型标准菌株模拟粪便标本检测结果阳性并报告为027型。结论 Xpert艰难梭菌检测系统能够快速准确地检测粪便标本中的艰难梭菌相关基因,且能准确报告027型高产毒力菌株。     

GeneXpert实时荧光定量PCR快速检测艰难梭菌的临床评估

目的对GeneXpert实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)在快速检测临床粪便标本中艰难梭菌的应用进行评估。方法采用双拭子蘸取临床未成形粪便标本,一支拭子用于GeneXpert实时荧光定量PCR检测艰难梭菌毒素基因tcdB,另一支用于常规厌氧菌培养检测;对GeneXpert实时荧光定量PCR检测结果与常规厌氧菌培养结果的一致性进行统计学分析,并计算GeneXpert实时荧光定量PCR的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值等参数。结果临床收集到141例未成形粪便标本,GeneXpert实时荧光定量PCR检出艰难梭菌毒素基因tcdB阳性42例,其中常规厌氧菌培养阳性34例,两者一致性较好(Kappa=0.775 0,P0.01),GeneXpert实时荧光定量PCR的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为87.2%、92.2%、81.0%和94.9%。结论 GeneXpert实时荧光定量PCR直接检测粪便标本中的艰难梭菌具有检测快速、操作简便等优点,有重要的临床应用价值。     

GeneXpert实时荧光定量PCR在诊断艰难梭菌感染中的临床应用

目的评价Gene Xpert实时荧光定量PCR法在诊断艰难梭菌感染中的应用价值。方法收集住院腹泻患者非重复粪便标本296份,同时进行Gene Xpert试验和产毒素培养(toxigenic culture,TC)。TC包括厌氧培养、菌株基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)鉴定、PCR扩增艰难梭菌毒素基因。以TC结果为参考,评价Gene Xpert试验的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值,并评价Gene Xpert试验和TC 2种方法结果的一致性。结果 Gene Xpert试验的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为98.5%、92.6%、91.7%和98.7%。Gene Xpert试验与TC一致性好(Kappa=0.905)。Gene Xpert试验报告2株RT027型高毒力菌株,经核糖体分型确证为RT027型艰难梭菌。结论 Gene Xpert实时荧光定量PCR可快速、准确检测粪便标本中的艰难梭菌毒素基因,且可报告高毒力RT027型菌株,具有重要的临床应用价值。     

实时荧光定量PCR直接检测粪便标本艰难梭菌tcdB基因

目的建立艰难梭菌实时荧光定量PCR检测方法,直接检测粪便标本艰难梭菌tcd B基因,并探讨其应用价值。方法根据艰难梭菌基因组设计tcd B基因特异性引物及探针,用ATCC 43255标准株评价其敏感性,选取艰难梭菌生物学特征相近的临床菌株验证其特异性;收集2015年10-12月临床腹泻患者稀便标本115份,提取基因组总DNA后进行tcd B基因检测,并以产毒培养法为参考方法,探讨该方法的临床诊断价值。结果荧光定量PCR法最低检测限为1×10-3ng,并且仅特异性地扩增产毒艰难梭菌;临床样本评价荧光定量PCR的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为75.0%、99.1%、85.7%和98.1%。结论实时荧光定量PCR直接检测稀便标本中的艰难梭菌tcd B基因可用于艰难梭菌相关腹泻的快速诊断。     

检测艰难梭菌感染的五种方法比较

目的 比较分析用于美国医院临床微生物实验室的5种艰难梭菌感染检测方法 ,从中选择1种适于早期诊断艰难梭菌感染的灵敏、特异、简单、快速及经济的实验方案.方法 对174份临床送检的腹泻患者粪便标本同时用TGC、Premier Toxin A&B EIA(A/B-EIA)、C.Diff Quick Chek Complete(D-EIA)、BD GeneOhm Cdiff assay(BD-PCR)和实验室发展的PCR(LD-PCR)方法 进行艰难梭菌的检测.以金标准TGC法作为参比标准,评价各种检测方法 的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值.结果 TGC法检测174份腹泻患者大便标本,艰难梭菌感染的阳性率为13.8%(24/174).与TGC法比较,4种检测方法 的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为:A/B-EIA 62.5%、99.3%、93.8%、94.3%;D-EIA 66.7%、98.7%、88.9%、94.9%;BD-PCR 83.3%、98.7%、90.9%、97.4%;LD-PCR 79.2%、93.3%、65.5%、96.6%.所有标本中,至少1种方法 检测为阳性的标本共计34份,其中15份标本5种方法 检测结果 均为阳性.D-EIA法检测结果 中,18份标本GDH及毒素A/B均为阳性,23份仅GDH阳性,133份GDH及毒素A/B均为阴性.18份D-EIA检测阳性标本全部与BD-PCR检测结果 一致,16份与TGC法检测结果 一致.24份TGC阳性标本中,有22份包括在41份GDH抗原呈阳性的标本中.D-EIA检测为假阴性的8份标本中,4份BD-PCR检测为阳性.根据本实验结果 ,D-EIA与BD-PCR相结合的二步法检测方案灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为83.3%、98.7%、90.9%、97.4%.结论 从技术角度评价,以BD-PCR法为最优.结合D-EIA与BD-PCR的二步法检测方案,是对临床送检标本进行艰难梭菌感染检测的灵敏、特异、简便、快速、经济的检测方案.     

临床分离艰难梭菌毒素携带特征研究

目的对医院细菌室送检粪便标本中分离出的艰难梭菌,进行毒素基因以及耐药基因的初步分析。方法将细菌室收集到的112份粪便标本,经选择性厌氧培养,谷氨酸脱氢酶（GDH）以及API 20A 生化条鉴定后,分离出12株艰难梭菌,分别采用PCR的方法检测ItcdA/I和ItcdB/I基因、二元毒素基因,克林霉素抗性基因（IermB/I）。结果12株艰难梭菌中8株为毒素基因阳性,其中ItcdA/Isup+/supItcdB/Isup+/sup为5株,占62.5%;ItcdA/Isup-/supItcdB/Isup+/sup为3株,占37.5%;二元毒素基因均为阴性;耐药基因IermB/I阳性为4株,占50%。结论艰难梭菌ItcdA/Isup-/supItcdB/Isup+/sup毒株所占比例增加,临床单独检测A毒素易造成漏检;艰难梭菌耐药现象值得关注。     

一种用于艰难梭菌分离培养的新型显色培养基的性能评价

目的评价自主研发的艰难梭菌显色培养基(CDCA)性能。方法选用艰难梭菌及其他细菌的标准株进行CDCA显色的特异性评价;将艰难梭菌标准菌株梯度稀释后测定BD公司CDSA、生物梅里埃公司CDIF和CDCA的灵敏度。收集临床120份粪便样本分别采用3种培养基进行艰难梭菌分离培养,并对生长菌落进行质谱鉴定和tpi基因检测,以3种平板中任1种能培养出艰难梭菌的样本定义为真阳性。结果在CDCA平板上除了梭形梭菌、双酶梭菌、第三梭菌、脆弱拟杆菌等菌种能够少量生长并显色外,对其他实验菌种均有抑制作用。CDSA、CDIF和CDCA检测艰难梭菌的灵敏度分别为2.0×10~5 CFU/mL、8.0×10~1 CFU/mL和4.0×10~2 CFU/mL。120份标本中检出艰难梭菌31份(25.8%),CDSA、CDIF和CDCA培养阳性标本分别为25份(20.8%)、28份(23.3%)和26份(21.7%),3种显色培养基对临床腹泻标本检测阳性率差异无统计学意义(χ~2=0.418,P=0.811)。3种显色培养基的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为:CDCA 83.8%、100%、100%、94.7%;CDIF 90.3%、98.9%、96.6%、96.7%;CDSA 80.6%、100%、100%、93.7%。结论本实验室研发的CDCA的特异性和灵敏度较高,可用于临床艰难梭菌的初步分离。     

2种艰难梭菌感染检测方法的比较与分析

目的比较酶联免疫荧光分析(ELFA)与实时荧光定量PCR(PCR)2种艰难梭菌感染(Clostridium difficile infection,CDI)检测方法的检验性能,从中选择灵敏度高、特异性好且操作简便的CDI检验方法开展临床检验。方法对来自重症监护病房(ICU)、消化内科及感染科等临床科室的126份粪便标本进行艰难梭菌毒素或基因检测。以产毒培养试验(toxigenic culture,TGC)结果作为参考标准,评价ELFA与PCR方法的性能,同时分析我院及各科室的CDI流行情况。结果 TGC检测126份腹泻患者的粪便标本,阳性率为19.0%(24/126),其中ICU、消化内科感染率较高。ELFA和PCR方法的检测敏感性分别为66.7%和91.7%,差异有统计学意义(χ2=4.55,P0.05);特异性、阳性预测值、阴性预测值与准确度差异无统计学意义。结论我院CDI形势较为严峻,以ICU和消化内科最为突出。PCR与ELFA均能够提供更为准确、可靠的检测结果,但前者敏感性较好。     

艰难梭菌在腹泻患者中感染情况的调查

目的:通过检测腹泻患者粪便中的艰难梭菌A&B毒素(CDAB),了解某院腹泻患者艰难梭菌的感染情况。方法:收集该院2013年7-12月腹泻患者粪便标本137份。首先筛查最常见的腹泻病原菌——沙门菌,再检测CDAB,然后再对CDAB阳性患者的流行病学信息进行分析,同时利用改良的方法进行厌氧培养。结果:排除7例检出沙门菌的标本,对剩余的130例粪便标本利用酶联荧光免疫分析技术检测CDAB,共检出8例阳性,阳性率为6.15%。按科室分布分析,2例来自消化科,2例血液科,2例来自儿科门诊,1例来自肾内科,1例来自器官移植科。按年龄段分布分析,3例来自儿童,3例中青年,2例老年人。厌氧培养结果显示8例毒素阳性的标本中有6例培养出艰难梭菌,2例未检测到艰难梭菌。结论 :艰难梭菌感染易感人群正在发生变化,酶联免疫荧光技术检测CDAB素简单、快速,适合对腹泻患者进行艰难梭菌感染的筛查。     

艰难梭菌毒素基因检测及分子流行病学分析

目的了解腹泻患者艰难梭菌感染现状,并分析分离菌株的核糖体分型情况。方法收集161例住院腹泻患者粪便标本进行艰难梭菌毒素基因PCR检测,同时进行产毒培养法,并比较2种方法的一致性;对分离的艰难梭菌进行核糖体分型。结果艰难梭菌产毒培养法阳性率为9.94%(16/161),粪便艰难梭菌毒素基因阳性率为9.94%(16/161),2种方法结果差异无统计学(P0.05),一致性较好(Kappa0.75)。培养所得18株艰难梭菌中A、B毒素基因均阴性的2株(11.11%),tcdA~+tcdB~+产毒株15株(83.33%),tcdA~-tcdB~+1株(5.56%)。18株艰难梭菌核糖体分型分为16种型别(GS1～GS16),未发现核糖体分型027型菌株。结论艰难梭菌粪便毒素基因PCR检测可用于临床诊断,未发现本院艰难梭菌暴发流行。     

酶联荧光免疫分析技术检测粪便中艰难梭菌毒素A/B

目的应用酶联荧光免疫分析(ELFIA)技术及PCR联合检测粪便标本中艰难梭菌毒素A/B(CDAB),分析不同临床表现的住院患者粪便标本中CDAB的检出情况。方法收集北京大学第一医院2010年8月～11月242位住院患者粪便标本,用ELFIA法检测CDAB,对检测结果为可疑的标本用PCR复测。将患者分为非抗生素相关腹泻组和抗生素相关腹泻组,对两组的CDAB阳性率进行χ2检验,并分析检测结果与临床表现的相关性。结果 242位患者中,22例ELFIA法CDAB检测为阳性,12例检测结果为可疑。12例可疑标本有10例进行了PCR复测,8例(80.0%)CDAB基因阳性。两法联合检测共计30例为CDAB阳性,阳性率为12.4%。抗生素相关腹泻组CDAB阳性率(24.0%)显著高于非抗生素相关腹泻组(6.9%)(χ2=14.21,P<0.01)。CDAB阳性组的年龄(68.2±23.6)岁高于CDAB阴性组(58.7±23.9)岁(P<0.05)。结论 ELFIA法检测CDAB,有商品试剂盒,方法简便可靠。可疑阳性标本用PCR法检测tcdA/tcdB基因,可进一步提高阳性率。艰难梭菌毒素在抗生素相关腹泻患者检出率较高,与临床表现具有较好的相关性。     

住院患者艰难梭菌无症状感染的危险因素分析

目的 分析住院患者无症状感染艰难梭菌的毒力特征及危险因素,为艰难梭菌感染(CDI)性腹泻的防治提供理论依据。方法 收集住院患者的粪便标本。将其中的CDI患者分为CDI有腹泻组和CDI无腹泻组,将无腹泻症状且艰难梭菌培养阴性患者设为对照组。收集患者临床资料,将粪便标本进行艰难梭菌分离培养并进行艰难梭菌毒素检测,对临床资料及检测结果进行统计学分析。结果 CDI有腹泻组毒素蛋白阳性率高于CDI无腹泻组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示：使用抑酸剂、2个月内使用头孢菌素类抗菌药物、住院时间>2周是艰难梭菌无症状感染的独立危险因素(P<0.05)。结论 艰难梭菌产毒素量是导致临床是否出现腹泻症状的重要因素;住院时间>2周、使用抑酸剂、2个月内使用头孢菌素类抗菌药物均是艰难梭菌无症状感染的独立危险因素。     

快速检测粪便中艰难梭菌的方法研究

目的建立可用于粪便中艰难梭菌快速检测的环介导恒温扩增(LAMP)方法。方法针对艰难梭菌毒素A基因,设计引物。采用LAMP对艰难梭菌和其他腹泻干扰菌及不同浓度艰难梭菌的扩增检测,对其特异性和灵敏度进行评价。同时采用LAMP和荧光定量PCR对100例疑似艰难梭菌感染的临床腹泻患者粪便进行检测,对两种方法进行比较。结果 LAMP对艰难梭菌及6种腹泻干扰菌的检测,只针对艰难梭菌有扩增,显示了较好的特异性。LAMP最低检测限为10CFU/mL,灵敏度较高。对100例临床粪便标本LAMP检测结果与荧光定量PCR比较差异无统计学意义(P>0.05,χ2=0.1429)。结论本研究建立的粪便中艰难梭菌的LAMP快速检测方法特异性好、灵敏度较高、操作简便,适用于艰难梭菌的临床快速检测及现场检测。     

炎症性肠病患者中艰难梭菌感染的分子流行特征

目的初歩研究上海仁济医院炎症性肠病患者中艰难梭菌的分子流行特征,为炎症性肠病患者中艰难梭菌感染的监控提供证据。方法对2014年6月-2015年6月的222份炎症性肠病腹泻患者粪便标本进行艰难梭菌毒素检测和厌氧培养。采用多位点序列分型(MLST)进行分型,传统PCR方法检测其毒素基因,琼脂稀释法检测艰难梭菌体外药物敏感性,同时对炎症性肠病患者所在病房进行环境中艰难梭菌检测。结果222份粪便标本中艰难梭菌的检出率为13.5%(30/222),克罗恩病和溃疡性结肠炎患者中艰难梭菌检出率为15.7%(22/140)和9.8%(8/82),病房环境共检出4株艰难梭菌。MLST分型22株艰难梭菌为14种ST型,主要型别为ST54型。PCR检测毒素基因显示;TaM+raffl+菌株为主(72.7%,16/22),未检出二元毒素。22株艰难梭菌对氯霉素、四环素、氨苄西林、甲硝唑、万古霉素和美罗培南均敏感,对克林霉素耐药率较高,为63.6%,8株对莫西沙星耐药。结论炎症性肠病腹泻患者中艰难梭菌毒素基因以TcdA+TcdB+型为主,菌株克隆以ST54型为主,该型菌株在病房环境中也有检出。应当密切监测炎症性肠病患者中艰难梭菌的感染毒素基因。     

粪便抗原检测诊断儿童幽门螺杆菌感染的临床评估

目的 幽门螺杆菌粪便抗原(HpSA)检测诊断儿童幽门螺杆菌(Hp)感染的准确性,方法 对64例因上消化道症状的患儿进行病理组织学、快速尿素酶试验(RUT),以确定是否感染Hp.结果 以病理组织Giemse染色检查结果作为诊断Hp感染的金标准.粪便抗原检测的敏感性是88.8%,特异性93.3%,准确性90.6%,阳性预测值93.7%,阴性预测值84.8%.结论 粪便抗原检测有较高的敏感性和特异性,是一种测定小儿HP感染可靠易行的非侵入性诊断方法.     

M46CN Campylobacter乳胶凝集试验检测弯曲菌的评价

摘要：目的：评价M46CN Campylobacter乳胶凝集试验检测弯曲菌的性能。 方法：用M46CN Campylobacter乳胶凝集试验对临床373份粪便标本及其48 h培养分离菌进行直接检测和鉴定,以API Campy生化鉴定、革兰染色、氧化酶和动力试验（简称常规鉴定）结果为标准,评价M46CN Campylobacter乳胶凝集试验对标本直接检测和分离菌鉴定结果的性能。 结果：M46CN Campylobacter乳胶凝集试验对373份粪便标本进行直接检测,阳性61例,阴性312例,其检测敏感性为80.8％,特异性为99.3％,阳性预测值为96.7%,阴性预测值为 95.5％,诊断效率为95.7%。与标准方法鉴定结果相比,经Kappa一致性检验,Kappa=0.854 7,u=16.596 1,P<0.01。对373份粪便标本的分离菌进行鉴定,Campylobacter阳性73例,阴性300例,其检测敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值和诊断效率均为100%。 结论：M46CN Campylobacter乳胶凝集试验直接检测粪便标本与标本培养后经标准生化反应鉴定结果具有良好一致性,对培养物中弯曲菌鉴定与标准的生化鉴定结果完全符合,其敏感性和特异性高,适合临床常规鉴定弯曲菌属细菌使用。     

安徽地区临床腹泻患者艰难梭菌感染的临床特征及独立危险因素分析

目的 探讨安徽地区艰难梭菌感染(Clostridium difficile infection, CDI)的临床特征及独立危险因素。方法 收集2017年10月～2019年10月安徽医科大学第二附属医院877例临床腹泻患者粪便标本1 059例,测定艰难梭菌谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase,GDH)抗原及毒素。记录CDI患者临床资料,选取同期非CDI腹泻患者90例为对照组,应用单因素及多因素Logistic回归确定CDI发生的独立危险因素。结果 在877例患者中共检出艰难梭菌GDH抗原205例,阳性率为23.4%(205/877)。其中46例毒素检测阳性,CDI发生率为5.2%(46/877)。与对照组比较,CDI组年龄(69.3±14.1岁 vs 59.5±16.6岁)明显升高,差异有统计学意义(t=3.403, P<0.05),且肺部感染、住院时间及30天内使用广谱抗生素因素上差异有统计学意义(χ²=10.120,10.477,21.080,均P<0.05),而血红蛋白(102.1±29.8 g/L vs 113.3±25.7 g/L)及血清清蛋白(30.3±6.4 g/L vs 34.7±6.8 g/L)水平明显降低,差异有统计学意义(t=-2.285,-3.520,均P<0.05)。高龄和30天内使用广谱抗生素(OR=1.042,29.274,均P<0.05)是CDI发生的独立危险因素。结论 对住院腹泻患者进行艰难梭菌GDH抗原及毒素测定有重要的临床价值,尤其对高龄和使用广谱抗生素的腹泻患者警惕CDI发生。     

ELISA法检测粪便幽门螺杆菌抗原的应用研究

目的 探讨ELISA法在粪便标本中幽门螺杆菌抗原(HPSA)诊断的实用价值。方法 经胃镜组织学法诊断的62例胃病患者,在未经治疗前取其粪便标本,采用ELISA法进行HPSA的检测。结果 以组织学法为金标准,ELISA的敏感性为89.4％,特异性为86.7％,准确性为93.6％,阳性预测值为95.4％,阴性预测值为72.2％。结论 ELISA 法测定HPSA具有较高的敏感性和特异性,方法简便、快速,取材方便,无痛性,尤其适于儿童、老人及体弱者,且对疗效能进行有效的跟踪检测。     

粪便Hp抗原检测对诊断儿童Hp感染的价值

目的探讨粪便Hp抗原检测方法在诊断儿童Hp感染中的价值。方法用ELISA试剂盒对100例有上消化道症状患儿的粪便标本进行Hp抗原检测,同时进行胃粘膜活检标本快速尿素酶试验、组织学染色和血清学试验,3项检查中至少2项阳性作为“金标准”判定为Hp感染。结果“金标准”诊断Hp感染阳性36例,阴性64例,阳性的36例中34例粪便抗原检测阳性,阴性的64例中60例粪便抗原检测阴性。敏感度94．4％,特异度93.8％,准确度94.0％。结论粪便Hp抗原检测简便易行、无创伤性、经济、准确性高,值得推广。     

胶体金免疫法对手足口病分型检测的研究

目的 建立胶体金免疫法(CGIA)对手足口病(HFMD)分型的检测方法.方法 用双抗体夹心检测原理建立CGIA对HFMD分型检测方法,分别检测136例HFMD患儿和30例健康儿童粪便中柯萨奇病毒A16型(CA16)和肠病毒71型(EV71),以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)为金标准,评价CGIA检测性能.结果 CGIA 与RT-PCR检测136例HFMD患儿粪便EV71阳性率分别为27.2%和28.6%;CGIA与RT-PCR检测136例手足口病患儿粪便CA16阳性率分别为33.8%和35.3%;以RT-PCR为金标准,CGIA检测手足口病患儿粪便EV71的敏感性89.7%,特异性89.7%,阳性预测值94.5%,阴性预测值95.9%,准确度95.5%;CGIA检测手足口病患儿粪便CA16的敏感性85.4%,特异性94.3%,阳性预测值89.1%,阴性预测值92.2%,准确度91.1%.结论 CGIA法操作简单、方便、快速,特异性和敏感性好,为HFMD病原学早期分型诊断提供了一个有效的检测手段.