类风湿关节炎患者外周血miR-146a、miR-16的表达水平及临床指标与中医证型的关系探讨

目的研究类风湿关节炎（RA）患者外周血miR-146a、miR-16的表达及ESR、CRP、RF、抗CCP抗体与中医证型的关系,为RA辨证分型提供客观依据。方法根据《中药新药临床研究指导原则》有关RA的中医证候诊断标准,主要分为两个证型：风湿夹瘀型（n=20）和肝肾亏损型（n=16）;16名健康体检者作为健康对照组。Real-timePCR检测RA患者及健康对照组miR-146a、miR-16的表达,记录ESR、CRP、RF、抗CCP抗体等临床指标。结果风湿夹瘀型miR-146a、miR-16的表达水平高于肝肾亏损型和对照组（P均〈0.05）,肝肾亏损型miR-146a、miR-16的表达水平与健康对照组相比差异无统计学意义（P均〉0.05）,风湿夹瘀型RA患者ESR及CRP高于肝肾亏损型（P〈0.01和P〈0.05）,RF低于肝肾亏损型（P〈0.05）,抗CCP抗体在两种证型之间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 miR-146a、miR-16的表达水平和ESR、CRP、RF等临床指标可能为RA风湿夹瘀及肝肾亏损型的辨证分型提供参考。     

Pre-miR-146a基因rs2910164位点单核苷酸基因多态性及miR-146a表达与类风湿关节炎相关性研究

目的 探讨pre-miR-146a基因rs2910164位点单核苷酸基因多态性及miR-146a表达与类风湿关节炎相关性.方法 采用聚合酶链反应-连接酶检测反应检测123例类风湿关节炎(RA)患者和220例健康对照者pre-miR-146a rs2910164位点基因多态性,应用实时荧光定量聚合酶链反应检测68例RA患者、10例骨关节炎(OA)患者及20例健康对照外周血单个核细胞中miR-146a的表达水平,并选取10例RA疾病活动患者行激素加免疫抑制剂正规治疗3个月后miR-146a表达水平的测定.收集并计算RA患者临床参数:发病年龄、性别、类风湿因子(RF)和抗环瓜氨酸肽(抗-CCP)抗体、RA疾病活动(DAS28≥3.2)、骨破坏(X＞Ⅰ期).统计学处理采用X2检验、方差分析、t检验和Pearson相关分析.结果 RA组pre-miR-146a rs2910164位点的基因型频率和等位基因频率与健康对照组比较,差异无统计学意义(P均＞0.05).RA患者pre-miR-146ars2910164位点基因型与发病年龄、性别、RF和抗-CCP抗体阳性率、RA疾病活动、骨破坏阳性率及miR-146a表达量均无相关性(P均＞0.05).RA患者组miR-146a的表达量高于健康对照组和OA组(P均＜0.01),后两组miR-146a的表达量无统计学差异(P＞0.05).RA疾病活动组miR-146a表达高于非活动组和对照组(P均＜0.01),后两组miR-146a的表达量无统计学差异(P＞0.05).RA疾病活动患者治疗后miR-146a表达下降(P＜0.05),DAS28评分降低(P＜0.01).RA患者组miR-146a的表达与红细胞沉降率(ESR,即血沉)、C反应蛋白(CRP)及DAS28评分之间呈正相关(P均＜0.01),与RF、抗-CCP抗体滴度无相关性(P均＞0.05).结论 我国汉族人群中,pre-miR-146a rs2910164位点多态性与RA的易感性、临床参数及miR-146a的表达无相关性,RA患者外周血单个核细胞miR-146a表达上调,其表达水平与RA病情活动有关,miR-146a的检测可能是RA病情活动的一个有用的判断指标.     

甲状腺乳头状癌患者外周血miR-146a、miR-146b表达水平与预后的关系研究

目的 探讨甲状腺乳头状癌(papillary thyroid cancer,PTC)患者血清miR-146a、miR-146b的表达水平及其与临床病理特征、预后的关系.方法 采用前瞻性研究方法,选取2018年6月至2020年2月本院收治的PTC患者80例为研究对象,50例同期健康人群作为对照组.荧光定量PCR检测外周血...     

类风湿关节炎患者外周血单核细胞miR-24、miR-132表达及临床意义

目的:miR-24、miR-132在类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达及临床意义。方法:收集160例RA患者、65例骨关节炎(OA)患者和65名健康对照者作为研究对象。RA患者按照DAS28评分分为低活动组(n=64)和中高活动组(n=96),Sharp评分分为非骨侵蚀组(n=73)和骨侵蚀组(n=87)。采用实时定量PCR(RT-PCR)法检测各组PBMC中miR-24、miR-132表达水平。应用ROC曲线分析miR-24、miR-132对RA的诊断价值,Pearson相关分析RA患者miR-24、miR-132与DAS28评分、Sharp评分的相关性。结果:RA组PBMC中miR-24(3.62±0.75 vs 0.91±0.18,0.86±0.13)及miR-132(2.48±0.23 vs 1.07±0.14,0.96±0.11)表达水平均明显高于OA组和对照组(P<0.01)。中高活动组PBMC中miR-24(5.86±1.15 vs 1.20±0.41)及miR-132(3.25±0.42 vs 1.14±0.19)表达水平明显高于低活动组...     

miR-146a通过靶向调控TLR4减轻脊髓缺血再灌注大鼠损伤

目的 检测miR-146a在脊髓缺血再灌注(IR)大鼠脊髓组织的表达情况,探索miR-146a对IR大鼠炎症蛋白表达和神经功能影响的潜在机制.方法 SD大鼠通过主动脉弓夹闭14min建立IR模型,通过鞘内注射miR-146a的mimics质粒构建miR-146a过表达模型,随机分为Sham组(假手术组),IR组(缺血组...     

miR-146a在大鼠神经病理性疼痛模型中的表达及其作用机制

目的 研究miR-146a对神经病理性疼痛的调控机制.方法 将大鼠随机分为:1)na(i)vve组(n=12);2)假手术组(n=12):进行大鼠双侧假手术;3)双侧慢性压迫损伤(bCCI)组(n=12):建立大鼠双侧坐骨神经结扎模型.在建模前1d及后第1、3、7和14天监测机械刺激诱发痛、热刺激诱发痛行为学指标;实时定量PCR法检测背根神经节(L4-L6) miR-146a及TNF-α受体相关因子6(TRAF6)、白介素1受体相关激酶(IRAK1)的mRNA表达水平;Western blot法检测TRAF6及IRAK1蛋白表达.结果 bCCI大鼠双足热刺激诱发痛痛阈、机械刺激诱发痛痛阈较na(i)ve组、假手术组显著降低(P＜0.05).术后第14天bCCI组miR-146a表达水平较na(i)ve组显著下降(P＜0.05).bCCI组TRAF6、IRAK1的mRNA表达水平较na(i)ve组升高(P ＜0.05);TRAF6、IRAKI蛋白表达水平较假手术组和na(i)ve组均显著增加(P＜0.05).结论 神经病理性疼痛大鼠背根神经节miR-146a表达水平下调,miR-146a可能通过过度激活其靶基因TRAF6和IRAK1发挥作用.     

类风湿性关节炎患者microRNA-146a的表达及与血清学指标的相关性

类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是常见的以关节滑膜慢性炎症为主要特征的自身免疫性疾病,其主要病理改变为关节滑膜明显增厚并有大量炎症细胞浸润,血管翳形成以及软骨组织的侵蚀与破坏[1].microRNA可被分泌释放到细胞外,参与多种炎性和自身免疫性疾病的发病过程[2].Micro-RNAs (miRNAs)是一类短的(大约20 ～ 22个核苷酸)非编码RNA,介导RNA干扰和在翻译水平抑制蛋白表达.miRNAs与自身免疫性疾病进程有关且可能参与RA新的调控机制[2-4].     

miR-146a对小鼠巨噬细胞IL-18表达的影响

目的:探讨miR-146a对小鼠单核-巨噬细胞株RAW264.7以及小鼠原代腹腔巨噬细胞Thl/Th2类细胞因子表达的影响。方法:体外培养的小鼠单核-巨噬细胞系RAW264.7细胞和腹腔新鲜分离的巨噬细胞分别瞬时转染miR-146a mimics、阴性对照mimics(NC mimics)、抑制性miR-146a(miR-146a inhibitor)和抑制性miR-146a阴性对照(NC in-hibitor)。转染后,利用real time PCR定量检测IL-18、IL-5和IL-10的表达情况。结果:RAW264.7细胞和原代腹腔巨噬细胞在转染miR-146a mimics后IL-18的表达水平明显降低(P<0.05),转染miR-146a inhibitor后IL-18的表达水平明显升高(P<0.05),但对IL-5和IL-10的表达,两种转染形式均没有影响。结论:巨噬细胞RAW264.7及原代巨噬细胞表达的miR-146a能够负向调控Thl类细胞因子IL-18的表达,但是不能调控Th2类细胞因子IL-5及IL-10的表达。     

过敏性哮喘患者外周血CD4+T细胞中miR-155的表达及临床意义

目的:探讨过敏性哮喘患者外周血CD4+T细胞中miR-155及其前体基因BIC的表达及临床意义.方法:应用实时荧光定量聚合酶链反应检测不同严重程度哮喘患者50例及健康对照20例外周血CD4+T细胞中BIC及miR-155的表达水平,并且与哮喘患者临床指标进行相关性分析;运用过表达或抑制,探讨miR-155在CD4+T细胞体外分化中的作用.结果:哮喘患者组BIC及miR-155的表达较对照组显著降低(P＜0.01),中、重度哮喘患者的BIC表达均低于对照组(P＜0.05),轻、中、重度哮喘患者的miR-155表达显著低于对照组(P＜0.01);组间比较发现,轻、中、重度哮喘患者的BIC表达无统计学意义,而重度哮喘患者miR-155的表达较轻度哮喘组有明显下降(P ＜0.05);miR-155的表达与用力呼气第1秒量之间呈正相关(P＜0.01);miR-155过表达促进CD4+T细胞向Th1分化,而抑制miR-155的表达则促进CD4+T细胞向Th2分化.结论:过敏性哮喘患者外周血CD4+T细胞中miR-155表达下调,其表达水平与哮喘严重程度相关,提示miR-155调控CD4+T细胞分化在哮喘中发挥重要作用.     

中国广西人群miR-146a、miR-149 基因遗传多态性的研究

目的：研究广西人群miR-146a C>G (rs2910164）、miR-149 T>C（rs2292832）等位基因及基因型频率分布,分析其与不同民族种族间的差异性。方法：采用单碱基延伸技术和DNA测序技术对303例广西人群中miR-146a C>G和miR-149 T>C基因单核苷酸多态性(SNP)位点进行分型检测,并与人类基因组计划 (Hapmap) 数据库中公布的非洲人、欧洲人、日本人和中国北京人群的SNP分型数据比较。结果：miR-146a C>G、miR-149 T>C等位基因和基因型频率在广西男女人群之间分布均无差异性（P均>0.05）。广西人群miR-146a C>G和miR-149 T>C基因型及等位基因频率与非洲人、欧洲人、中国北京人比较有统计学意义（P均<0.05）。结论：广西人群miR-146a C>G和miR-149 T>C存在基因多态性,与其他种族人群比较有差异性,这种差异性对人类遗传病的研究可能会起到重要作用。     

类风湿关节炎患者外周血单个核细胞中TRAIL、c-FLIP 等表达水平及临床意义

目的:分析类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞中肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体TRAIL、c-FLIP、Caspase-8等基因表达情况,探讨其在RA中的临床意义,为RA的临床诊治寻找更有效的途径和方法提供实验基础。方法:采用实时荧光定量PCR的方法检测外周血单个核细胞肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体TRAIL、c-FLIP、caspase-8 mRNA 表达水平;采用蛋白免疫印迹法检测PBMC 中TRAIL、c-FLIP、caspase-8 蛋白表达水平。结果:各组RA 患者PBMC 的TRAIL、c-FLIP、Caspase-8 的mRNA 表达水平:中活动组(M)中TRAIL的mRNA为(3.26±0.78),高于健康对照(N)(1.30±0.20,P=0.028)。低活动组(L)和高活动组(H)(1.56±0.37、1.83±0.26),略高于健康对照(N)(P=0.048、0.043);L、M、H 组c-FLIP mRNA相对表达量分别为1.27±0.28,1.32±.34,1.93±0.40,均高于N组1.08±0.12(P 分别为0.035、0.034、0.030),差异有统计学意义;caspase-8 mRNA L、M、H 组中分别为(2.77±0.97)、(4.52±0.85)、(2.13±0.44),均高于N 组(1.04±0.13,P=0.023,0.012,0.032)。RA 患者PBMC 中TRAIL、c-FLIP、caspase-8 蛋白表达:M 组TRAIL 蛋白表达明显高于N 组(P=0.013 ),H 组稍高于N 组(P=0.043),L组与N组无明显统计学差异(P=0.058),M 组明显高于L、H 组(P=0.011,0.021);c=FLIP 蛋白表达中M组明显高于N 组(P<0.01),而L、H 组与N 组无显著差异(P =0.062,0.053);L 组表达与N 组无显著差异(P>0.05),而M、H组caspase-8 蛋白表达明显高于N 组(P=0.003,0.001)。结论:在RA 的不同活动期中,外周血单个核细胞TRAIL、c-FLIP 和Caspase-8 等表达水平总体趋势增加,可为RA 的临床诊治及后续研究提供实验参考。     

类风湿关节炎患者外周血单个核细胞中PADI4 mRNA的表达及其意义

目的检测类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMCs)肽酰基精氨酸脱亚氨酶4(PADI4)mRNA的表达,分析其与RA患者的临床指标的相关性,探讨PADI4在RA发病机制中的作用及意义。方法实时定量PCR检测RA组(60例)、正常对照组(40例)PBMCs中PADI4 mRNA表达,并分析其与抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体、疾病活动指数DAS28评分、C反应蛋白(CRP)、红细胞沉降率(ESR)、类风湿因子(RF)及病程等指标的关系。结果 RA组PADI4 mRNA相对表达[34.6(16.7,70.8)],明显高于正常对照组[20.6(11.1,51.8)](P<0.05)。RA组中PADl4 mRNA表达与抗CCP抗体、DAS28评分水平、ESR、RF呈正相关(r=0.527,P<0.001;r=0.416,P=0.001;r=0.371,P=0.004;r=0.287,P=0.030),与CRP、病程无相关性(r=0.015,P=0.919;r=0.064,P=0.625)。结论 RA病人外周血PBMCs PADI4 mRNA表达显著增高,并与抗CCP抗体水平、DAS28评分、ESR、RF呈正相关,可能是RA病情活动的一个有用的指标,PADI4可能在RA的发病和病理过程中起重要作用。     

类风湿关节炎患者外周血单个核细胞Notch及其配体表达

为研究Notch信号途径在类风湿关节炎(RA)发病机制中的作用,选取活动期RA患者,采用流式细胞术结合细胞表面及细胞内染色技术检测外周血单个核细胞Notch受体及配体表达情况,并与正常对照进行比较。结果发现,活动期RA患者外周血T细胞Notch2、Notch3及Notch4表达较正常人明显增加,Notch1分子表达均较少,二者未见差异。其中表达Notch分子的细胞以CD4+T细胞为主。二者B细胞Notch1、Notch2、Notch3及Notch4的表达均较低,之间未见明显差异。RA患者单核细胞Jagged1分子表达明显增加,而Delta1表达降低。结果提示活动期RA患者外周血单个核细胞中不同群体细胞存在Notch及其配体表达水平的改变。     

慢性血小板减少性紫癜患者microRNA-146a的表达及其意义

目的 研究microRNA-146a(miR-146a)在慢性免疫性血小板减少性紫癜(immune thrombocytopenic purpura,ITP)患者外周血单个核细胞(PBMC)的表达及其临床意义.方法 28例慢性ITP患者和28例健康对照者,荧光定量PCR(fluorescent quantitative PCR,FQ-PCR)检测PBMC中miR-146a的表达,ELISA检测血清中TNF-α、IL-2、IL-lβ和IFN-γ的表达水平;采用电转染技术将miR-146a前体(mimics)/抑制体(inhibitor)转染至ITP患者PBMC中,CCK-8法检测其对血小板诱导的细胞增殖反应的影响.结果 ITP患者PBMC的miR-146a表达较健康对照组显著降低,且与血小板计数呈正相关,与患者血浆TNF-α、IL-2和IFN-γ浓度呈负相关.转染miR-146a前体至ITP患者PBMC可抑制血小板诱导的IL-2合成以及PBMC增殖,转染miR-146a抑制体则可以促进IL-2的合成以及PBMC的增殖.结论 miR-146a参与了慢性ITP的发病机制,调控IL-2的表达,并介导了ITP患者PBMC的增殖,是慢性ITP潜在的治疗靶点.

Abstract：

Objective To investigate the increased expression of microRNA-146a(miR-146a) in peripheral blood mononuclear cells (PBMC) of patients with chronic immune thrombocytopenic purpura (ITP) and its clinical significance. Methods Twenty-eight patients with chronic ITP and 28 healthy controls matched with age and gender were enrolled in this study. Fluorescent quantitative PCR reaction was used to detect the relative expression of miR-146a in their PBMC. The serum concentration of TNF-α, IL-2,IL-1 β and IFN-γ were measured by ELISA. CCK-8 method was used to detect the proliferation ability of PBMC , which transfected with miR-146a mimics or inhibitor and then stimulated with platelet . Results The relative expression of miR-146a in ITP patients was higher than that of healthy controls. The increased expression of miR-146a was negatively correlated with the serum TNF-α, IL-2 and IFN-γ. The PBMC transfected with miR-146a mimics had reduced expression of IL-2 and proliferation when stimulated with platelet.In contrast, the opposite effect was observed with the miR-146a inhibitors transfection. Conclusion MiR146a was involved in the pathogenesis of chronic ITP by controlling IL-2 production and PBMC proliferation.Thus, it may be a potential therapy target for chronic ITP.     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞miR-125b及miR-145的表达及临床意义

目的探讨miR-125b及miR-145在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达水平及其临床意义。方法选取海南省人民医院收治的136例SLE患者,采用SLE病情活动指数(SLEDAI)评分将其分为低活动组(n=75)和高活动组(n=61),另选取60例健康体检者作为对照组。采用实时定量PCR(RT-PCR)法检测各组PBMC中miR-125b及miR-145水平,分析其对SLE患者的诊断价值。Pearson相关分析SLE患者miR-125b及miR-145水平与抗双链DNA(dsDNA)抗体、C3、C4、IgG、血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)及SLEDAI评分的相关性。结果 SLE组、高活动组和低活动组抗dsDNA抗体、ESR、IgG及CRP水平均明显高于对照组(P<0.05),而C3及C4水平均明显低于对照组(P<0.05)。SLE组、高活动组和低活动组PBMC中miR-125b(0.84±0.23、0.42±0.09和1.53±0.28 vs 6.12±1.83)及miR-145(0.68±0.17、0.35±0.06和1.12±0.20 vs 2.15±0.64)表达水平均明显低于对照组(P<0.01),且高活动组PBMC中miR-125b(0.42±0.09 vs 1.53±0.28)及miR-145(0.35±0.06 vs1.12±0.20)表达水平明显低于低活动组(P<0.01)。SLE患者治疗后miR-125b(2.60±0.71 vs 0.84±0.23)及miR-145(1.96±0.58 vs 0.68±0.17)表达水平明显高于治疗前(P<0.01),SLE患者治疗后抗dsDNA抗体(96.24±17.20 vs 272.36±64.35)水平明显低于治疗前(P<0.01)。ROC曲线分析显示,miR-125b、miR-145及抗dsDNA抗体三项联合诊断SLE的AUC(95%CI)为0.928(0.871～0.986),其敏感度(90.4%)和特异度(85.0%)较好。相关分析显示,SLE患者miR-125b、miR-145与抗dsDNA抗体、IgG、SLEDAI评分均呈负相关(P<0.05),miR-125b与miR-145呈明显正相关(r=0.805,P<0.05)。结论 miR-125b及miR-145水平在SLE患者PBMC中明显降低,且与SLE病情活动相关,联合抗dsDNA抗体检测对SLE诊断具有一定价值。     

初发性类风湿关节炎患者外周血中Tfh细胞及其相关细胞因子的临床意义

滤泡辅助性T细胞(T follicular helper cells,Tfh细胞)是近年来新发现的,真正意义上辅助B细胞功能的T细胞亚群,其辅助B细胞活化、增殖、分化和分泌免疫球蛋白[1].在类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)中,B细胞分泌大量高亲和力抗体可诱发炎性反应,致关节损伤[2].本实验拟通过对RA患者外周血Tfh细胞表型及相关细胞因子的检测,探讨其与初发性RA发病的关系.     

类风湿关节炎患者外周血淋巴细胞的凋亡及其意义

目的研究类风湿关节炎(RA)患者外周血淋巴细胞的凋亡及其意义。方法采用流式细胞术和激光共聚焦显微镜,检测35例RA患者和30例健康志愿者的外周血淋巴细胞抵抗凋亡的能力,包括分析新鲜分离和培养的淋巴细胞凋亡率及其与临床病情严重度的相关性。结果两组间新鲜分离的淋巴细胞凋亡率差异无统计学意义[(2.63±1.47)%比(3.53±2.04)%,P>0.05]。活化淋巴细胞检测的结果显示,RA组的凋亡率明显低于对照组[(12.08±6.06)%比(18.66±7.27)%,P<0.05],并与DAS28评分呈负相关(r=-0.617,P=0.008)。结论RA患者活化的外周血淋巴细胞出现凋亡缺陷,并与RA病情活动度相关。提示这些细胞募集到组织损害和自身免疫炎性反应进程异常的部位并对炎性反应进程的发展和维持起重要作用。