顺铂诱导颊癌细胞凋亡及凋亡分子(Apo-1)表达的实验研究

目的:研究细胞毒类化疗药——顺铂诱导人颊癌细胞凋亡发生的规律以及凋亡分子Apo-1的表达。探讨口腔癌化疗的细胞凋亡机制。方法:以建株人颊癌细胞系BcaCD885为对象,采用光镜、电镜以及流式细胞术等手段观察顺铂诱导颊癌细胞凋亡的形态特征及规律,同时检测顺铂对颊癌细胞Apo-1表达的影响。结果:顺铂作用后的颊癌细胞出现典型的凋亡细胞形态学特征;顺铂诱导颊癌细胞凋亡呈现时间及剂量依赖性效应关系;顺铂能上调颊癌细胞Apo-1的表达。结论:细胞凋亡可能是顺铂杀灭颊癌细胞的重要机制,Apo-1在顺铂诱导颊癌细胞凋亡中可能起着关键性调节作用     

顺铂诱导Tca8113细胞凋亡及周期特异性

目的探化疗药物顺铂（ＣＤＤＰ）对口腔鳞癌细胞凋亡及细胞周期特异性的诱导作用。方法选用人舌鳞状细胞癌细胞系Ｔｃａ８１１３为研究对象,应用倒置显微镜、荧光显微镜、透射电镜、流式细胞仪等方法进行观察。结果ＣＤＤＰ作用Ｔｃａ８１１３细胞后,细胞增殖变慢,增殖指数下降,细胞变小,变圆,失去贴壁性,从附着处脱落。ＤＮＡ染色后荧光显微镜下观察,细胞核呈现橙红色,半月形,不规则块状等凋亡形态变化。透射电镜观察,细     

化疗药诱导颊癌细胞凋亡的原位组织学研究

目的 :探讨化疗药诱导颊癌细胞凋亡及其相关机制。方法 :选择临床行术前化疗患者的颊癌组织进行原位DNA末端标记 (TUNEL法 )显示凋亡细胞以及免疫组化SP法检测Fas蛋白的表达。结果 :凋亡细胞及凋亡小体散在分布于颊癌组织中 ,化疗后颊癌凋亡细胞发生率增加 ,凋亡指数 (AI)均值为 0 .91,明显高于化疗前AI( 0 .38) (P <0 .0 1) ;与化疗前相比 ,化疗后颊癌细胞Fas表达强度增加 (P <0 .0 1)。结论 :细胞凋亡途径可能是化疗药杀灭颊癌细胞的重要机制 ,Fas系统在化疗药诱导颊癌细胞凋亡发生中发挥关键性作用。由此 ,应用凋亡诱导分子FasL有可能成为一种新的抗癌方法。     

热诱导颊癌细胞凋亡与Bcl-xL蛋白表达的关系

目的：探讨热诱导颊BcaCD885细胞凋亡与Bcl-xL蛋白表达变化的关系。方法：43℃40min水浴加温诱导BcaCD885细胞产生死亡。采用流式细胞仪（FCM）及抗体检测技术分别测定细胞凋亡率及Bcl-xL蛋白表达量，观测诱导颊癌细胞凋亡过程中Bcl-xL蛋白表达的动态变化，探讨二者间的关系。结果：凋亡组内Bcl-xL蛋白表达量明显低于对照组（P＜0．05），凋亡率与Bcl-xL蛋白表达水平存在负相关关系（r=-0.89，P＜0．05）。结论：Bcl-xL在热诱导BcaCD885细胞凋亡的调控中起重要作用。     

高温诱导颊癌细胞凋亡的相关机理研究

目的：探讨热诱导BcaCD885细胞凋亡的分子机理。方法：水浴加温诱导BcaCD88产生调亡。通过FCM－DNA、FCM－抗体检测技术,观测热诱导颊癌细胞凋亡过程中bcl-2及bax基因蛋白表达的动态变.:地亡率与bcl-2蛋白表达水平存在负相关关系,与bax蛋白表达存在正相关关系。结论：高温作为一种外来刺激信号通过下调bcl-2基因的表达、上调bax基因的表达、上调bax基因的表达,诱导BcaCD885细胞凋亡的发生。     

Survivin基因在顺铂诱导Tca8113舌鳞癌细胞凋亡中的作用

目的体外观察顺铂（DDP）诱导Tca8113舌鳞癌细胞株凋亡的作用, 同时检测在此过程中凋亡蛋白抑制因子Survivin mRNA表达和蛋白表达的变化。方法将人Tca8113舌鳞癌细胞株进行传代培养,MTT法检测顺铂不同浓度和不同时间对Tca8113舌鳞癌细胞生长的抑制作用,通过RT- PCR检测凋亡过程中Survivin基因mRNA的表达,免疫细胞化学观察Survivin基因的蛋白表达,以及流式细胞术观察顺铂诱导各组Tca8113细胞的凋亡率。结果顺铂可明显抑制Tca8113舌鳞癌细胞的增殖, 其增殖抑制率呈浓度和时间依赖性,细胞凋亡率也呈同样的趋势,最高可达34.1%。1.0 μg/mL DDP处理Tca8113舌鳞癌细胞,Survivin mRNA和蛋白表达水平随时间的增加而降低,在24h达到最低,随后又升高。结论抗凋亡蛋白Survivin在Tca8113舌鳞癌细胞高表达,顺铂可有效诱导Tca8113舌鳞癌细胞凋亡, Survivin mRNA表达在化疗早期随作用时间的延长而降低,Survivin基因的抑制在顺铂诱导的Tca8113舌鳞癌细胞的细胞凋亡中起着重要的作用。     

顺铂诱导的自噬在口腔鳞癌Tca83细胞中的作用

目的:探讨顺铂诱导的自噬在口腔鳞癌Tca83细胞中的作用。方法:利用顺铂作用于口腔鳞癌Tca83细胞,不同时间后MTT法检测细胞生存率的变化,激光共聚焦显微镜观察细胞胞浆中自噬体的形成情况,Annexin V-FITC流式细胞术检测细胞凋亡率的变化。结果:顺铂作用于Tca83细胞2h即可出现明显的自噬性变化。细胞凋亡率随顺铂作用时间的延长而逐渐增加。结论:顺铂可以诱导口腔鳞癌Tca83细胞发生自噬,过度激活的自噬作为细胞的一种死亡程序,可以与凋亡一起促进细胞死亡。     

高温诱导BcaCD885颊癌细胞凋亡及检测

目的　探讨热诱导 Bca CD885颊癌细胞凋亡的动力学改变及热杀伤肿瘤细胞的机理。方法　水浴加温诱导Bca CD885细胞产生凋亡。通过细胞形态观察、原位末端标记、DNA电泳及流式细胞术 DNA测定 ,从形态学、生物化学、分子生物学以及细胞学水平确定凋亡细胞特征。结果　Bca CD885细胞经 43°C40 min加热 ,呈现细胞凋亡形态改变 ,TUNEL标记见明显的凋亡小体 ,DNA电泳呈现有一定间隔的梯状条带。同时细胞周期发生了明显的特异性改变 :G0 / G1 期百分比增加 ,S期百分比下降 ,G2 / M期百分比在加热后 3 h时也发生了明显的下降。 45°C 40 min加热则出现明显的坏死改变。结论　高温杀伤 Bca CD885细胞存在细胞坏死和细胞凋亡两种方式 ,治癌温度是通过诱导细胞凋亡发挥作用。高温诱导 Bca CD885细胞的凋亡具细胞周期特异性     

微量元素铜对顺铂介导的口腔癌细胞的影响

目的：研究铜离子对顺铂（cisplatin，DDP）介导的口腔癌细胞化疗反应的影响，为肿瘤临床化疗开辟新的治疗方案。方法：以DDP为例．用MTT法观察口腔癌细胞Tca8113、Acc-2、Acc-3用不同浓度的醋酸铜处理48h的细胞生存率，用流式细胞术分析醋酸铜对DDP介导的细胞凋亡和细胞周期的影响。结果：MTT结果显示醋酸铜浓度在20～400μmol／L时对3种口腔癌细胞的生存率抑制显著。25μmol／L的醋酸铜联合DDP处理细胞增强了DDP对细胞的抑制作用；流式细胞术结果显示25μmol／L醋酸铜能加强7．5μmol／LDDP引起的肿瘤细胞凋亡，抑制细胞向S期移动；降低25μmol／L DDP引起的细胞凋亡，促进细胞向S期移动。结论：铜离子增强了小剂量DDP对肿瘤细胞的抑制．并影响DDP诱导的细胞凋亡和其细胞周期。     

颊粘膜鳞癌细胞凋亡与临床病理特征及预后的关系

目的:研究颊粘膜鳞癌细胞凋亡发生情况,并分析其与临床病理特征及预后的关系。方法:采用末端脱氧核苷酰转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测凋亡细胞,计算凋亡指数。结果:本组34例颊癌标本均有凋亡细胞发生,凋亡指数范围为0.12～0.92,均值0.38,凋亡指数与病理学分级之间有关(P<0.01),而与临床分期及颈淋巴结转移无统计学意义(P>0.05);生存率单因素分析未能揭示凋亡指数高低影响颊癌预后(P>0.05)。结论:颊癌细胞凋亡的发生与分化恶性程度有关,但凋亡指数不能作为颊癌的预后指标     

尼妥珠单抗联合顺铂对人舌鳞状细胞癌细胞株CAL-27的抑制作用

目的 研究尼妥珠单抗(h-R3)联合顺铂(DDP)对人舌鳞状细胞癌(以下简称舌鳞癌)细胞株CAL-27的生长抑制作用.方法 常规培养CAL-27细胞,以5×104/ml的细胞密度种植细胞,实验分为对照组、h-R3组、DDP组及h-R3联合DDP用药组共4组.CCK-8法检测h-R3及h-R3联合DDP组在不同时间对CAL-27细胞的生长抑制情况;分别于24、48及72 h对各组进行摄片并收集细胞培养上清,酶联免疫吸附法(ELISA)检测h-R3组及h-R3联合DDP组在不同时间对CAL-27细胞分泌表皮生长因子(EGF)及血管内皮细胞生长因子(VEGF)含量的影响,同时采用细胞凋亡-Hoechst染色试剂盒检测CAL-27加入不同药物后的凋亡情况.结果 h-R3和DDP单药对CAL-27细胞生长均有抑制作用且呈时间和剂量依赖性,两药单独作用72 h后,对CAL-27细胞的最大抑制率分别为(26.91±7.08)％和(89.18±4.73)％.两药联用对CAL-27细胞增殖的最大抑制率为(93.26±1.03)％,联合用药可提高细胞增殖抑制率,呈相加作用;h-R3及h-R3联合DDP组不同时间凋亡率与对照组比较差异有统计学意义(P＜ 0.01),随着作用时间增加细胞凋亡率亦呈升高趋势;h-R3及h-R3联合DDP组不同时间CAL-27细胞分泌EGF与VEGF含量与对照组比较均显著降低(P＜0.01),而且联合用药与单药比较,EGF和VEGF含量也显著降低(P＜0.05).结论 h-R3在体外与DDP联用可以提高对CAL-27细胞增殖抑制及凋亡作用,同时对CAL-27细胞分泌EGF与VEGF具有抑制作用.     

高温诱导颊癌细胞凋亡的相关机理研究

目的 :探讨热诱导BcaCD885细胞凋亡的分子机理。方法 :水浴加温诱导BcaCD885产生凋亡。通过FCM DNA、FCM 抗体检测技术 ,观测热诱导颊癌细胞凋亡过程中bcl- 2及bax基因蛋白表达的动态变化。结果 :凋亡率与bcl- 2蛋白表达水平存在负相关关系 ,与bax蛋白表达水平存在正相关关系。结论 :高温作为一种外来刺激信号通过下调bcl 2基因的表达、上调bax基因的表达、上调bax基因的表达 ,诱导BcaCD885细胞凋亡的发生     

浅蓝菌素诱导口腔鳞状细胞癌细胞凋亡的实验研究

目的 :观察浅蓝菌素诱导口腔鳞状细胞癌细胞凋亡作用 ,探讨浅蓝菌素抗癌的可能性。方法 :TCA 83细胞经浅蓝菌素 (10 μg/ml)处理 2 4h后 ,提取基因组DNA ,行DNA凝胶电泳。舌癌新鲜组织经浅蓝菌素(10 μg/ml)处理 2 4h后 ,行原位细胞凋亡染色 (TUNEL)。 结果 :DNA凝胶电泳得到典型的梯状DNA电泳图 ,TUNEL分析显示 ,浅蓝菌素处理组癌细胞凋亡率明显高于未经浅蓝菌素处理的癌细胞凋亡率 (P <0 .0 0 0 1) ,浅蓝菌素诱导高分化鳞状细胞癌凋亡的作用更强。结论 :浅蓝菌素可直接诱导口腔鳞状细胞癌细胞发生凋亡 ,为脂肪酸合酶抑制剂的临床应用提供了直接的参考。     

顺铂化疗对口腔颌面部鳞癌细胞基因表达谱的影响

目的 探讨口腔颌面部鳞癌对顺铂的应答规律，以阐明肿瘤耐药的作用机制，指导临床化疗。方法 收集(8例)4对临床标本，根据其是否接受过顺铂化疗，分为2组，采用Affymetrix HG—U95Av2寡核苷酸芯片对其基因表达谱进行聚类分析。结果 应用Genespring软件同时对标本和基因进行聚类，发现根据标本是否接受过顺铂化疗及化疗效果可正确聚类，而且利用基因聚类的结果，筛选出关系最密切的50条基因，其表达情况能够正确预测标本是否接受过顺铂化疗。结论 顺铂化疗可改变一组基因在口腔鳞癌的表达，可以通过该组基因的表达谱对标本进行正确聚类．而且这种改变可能与口腔鳞癌顺铂化疗效果相关。     

高温诱导颊癌细胞凋亡过程中Bax基因表达的动态变化

目的：探讨Ｂax基因在热诱导ＢcaCD885细胞凋亡过程中的作用。方法：水浴加温诱导ＢcaCD885细胞产生凋亡,通过ＦＣＭ－ＤＮＡ－抗体检测及ＲＴ－ＰＣＲ技术,观测热诱导颊癌细胞凋亡过程 Ｂax基因蛋白及mRNA表达的动态变化。结果：凋亡率与Ｂax蛋白表达水平存在正相关关系;加热后,细胞ＢaxmRNA相对量明显升高。结论：高温作为一种外来刺激信号通过上调Ｂax基因的表达,诱导ＢcaCD885细胞凋亡的发生。     

舌鳞状细胞癌顺铂耐药细胞系细胞周期蛋白D1RNA干扰的体外研究

目的 用人工合成的耐药相关基因细胞周期蛋白D1（cyclin D1）的小分子干扰RNA（siRNA）处理人舌鳞癌顺铂耐药细胞系（Tca8113-CDDP），探讨对靶基因转录调控的作用效果以及剂量和时间效应关系，为耐药性逆转提供实验依据。方法 CY^3荧光素标记阳性对照基因甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）siRNA，分别于转染后4、24、48、72h在激光共聚焦显微镜下观察瞬时转染率，优化转染条件。用SYBR绿色荧光染料法、实时定量PCR技术分析目的基因mRNA的表达情况，同时采用蛋白印迹（Western blot）检测目的基因蛋白水平的表达。四甲基偶氮唑盐法检测cyclin D1 siRNA处理后细胞对顺铂敏感性的影响。结果 优化转染条件后，Tca8113-CDDP细胞中CY^3的GAPDH siRNA转染率达90％以上。转染cyclin D1 siRNA后24、48hmRNA表达的抑制率为81．6％、80．7％，72h最为明显，为94．3％。在低于100nmol／L浓度下，RNA干扰抑制与剂量大小有关；当剂量进一步加大时，抑制效应则维持在“平台期”。转染24、48和72h后，cyclin D1蛋白的表达也明显下降。siRNA干扰组和对照组细胞在顺铂作用后细胞生长抑制率分别为58．4％、34．8％。结论 化学合成的cyclin D1 siRNA在体外实验中，对Tca8113-CDDP细胞中目的基因的沉默提高了细胞对顺铂敏感性，并呈现剂量和时间依赖效应。     

临时冠单体诱导颊黏膜上皮细胞凋亡的动物实验研究

目的:研究4种临时冠桥材料戴用后的单体释出对颊黏膜上皮细胞的凋亡行为的影响.方法:选用4种临时冠桥材料(丙烯酸自凝树脂、丙烯酸热凝树脂、DMG-TEMP树脂、松风SWIFT-TEMP树脂) 对犬的右侧后牙进行临时冠修复,在牙备前、戴冠时、戴冠1周、2周、1个月5个时间点,收集临时冠对应区域的颊黏膜上皮细胞,并应用流式细胞仪检测其凋亡情况.结果:自凝塑料及热凝塑料组的颊黏膜上皮细胞的凋亡率大小排序为戴冠1周>戴冠2周>戴冠1个月>牙备前、戴冠时,差异有统计学意义(P < 0.01).DMG-TEMP树脂及松风SWIFT-TEMP树脂组的颊黏膜上皮细胞凋亡率在戴冠前后均维持较低水平,差异无统计学意义(P >0.05).颊黏膜上皮细胞的凋亡率与自凝塑料及热凝塑料中的残余单体释出量呈正相关(P < 0.01).结论:自凝塑料冠及热凝塑料冠在戴冠早期均有明显的残余单体释出,并加速诱导了颊黏膜上皮细胞的凋亡.     

TSA诱导人粘液表皮样癌细胞MEC-1凋亡机制的初步研究

目的探讨曲古抑菌素A(TSA)对人粘液表皮样癌细胞(MEC-1)的体外生物学作用及其作用机制。方法应用不同浓度的TSA作用于人粘液表皮样癌细胞MEC-1细胞后,观察TSA对MEC-1细胞生长状态的影响;通过噻唑蓝(MTT)比色法检测TSA对MEC-1细胞增殖变化的作用,应用原位末端标记法(TUNEL)、流式细胞术检测经Annexin V-FITC/PI双染后MEC-1细胞的早期凋亡作用。结果TSA可显著地抑制MEC-1细胞的生长,并且具有时间和剂量依赖性,通过倒置显微镜可明显观察到细胞的形态学改变;通过TUNEL法、流式细胞仪检测显示TSA可以诱导MEC-1细胞凋亡。结论TSA对人粘液表皮样癌细胞MEC-1具有显著的体外生长抑制,其主要作用是诱导细胞凋亡。     

口腔鳞癌细胞EGFR的表达与顺铂敏感性关系的研究

目的:探讨口腔鳞癌细胞中EGFR表达水平与顺铂敏感性之间的关系.方法:设计并制备针对EGFR基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),转染口腔鳞癌CAL-27细胞株,采用RT-PCR法检测EGFR mRNA的表达水平,Western印迹法测定EGFR蛋白的表达.使用四甲基偶氮唑盐(M...