CDKN2／p16基因在四种原发恶性肿瘤中存在状态的研究

目的：研究CDKN2/16基因缺失和蛋白丢失在非小细胞肺癌，食管癌、胃癌、乳腺癌4种原发恶性肿瘤中的作用。方法：采用免疫组织化学和多重PCR技术对68例（非小细胞肺癌31例，食管癌15例，胃癌13例，乳腺癌9例）原发肿瘤组织标本进行CDKN2/p16基因第一，第二外显子纯合缺失和p16蛋白表达丢失分析研究，结果：第一或（和）第二外显子总缺失率为13．2％（9／68），蛋白丢失率为44％（30／68），不同肿瘤组织标本的p16基因缺失率和蛋白丢失率差别很大。结论：CDKN2/[16基因是重要的多肿瘤抑制基因，在不同肿瘤组织中其失活方式不完全相同。     

肺癌纤维支气管镜刷落细胞中p16基因外显子2丢失的研究

目的：探讨p16基因外显子2丢失与原发性肺癌发生发展之间的相关性，以及纤维支气管镜刷落细胞中检测p16基因外显子2丢失代替手术标本检测的可行性。方法：在纤维支气管毛刷脱落细胞中采用PCR－电泳－紫外成像条带密度扫描法，以β－actin基因为内对照，检测及分析病理证实的原发性肺癌患者病灶侧与其相对正常侧p16基因外显子2丢失的情况。结果：p16基因外显子2丢失率在肺癌患者相对正常侧毛刷脱落细胞中0（0／19），在病灶侧毛刷脱落细胞中35．5％（11／31），两者比较有统计学显著差异（P＜0．01）。小细胞肺癌（SCLC）标本中丢失率为0（0／7），非小细胞肺癌（NSCLC）标本中丢失率为50％（11／22），两者比较有统计学显著差异（P＜0．05）。结论：p16基因外显子2丢失可能与NSCLC的发生发展相关。纤维支气管镜直视下病灶处毛刷脱落细胞检测p16基因外显子2丢失率可代替手术标本以协助术前诊断与治疗。     

甲状腺癌组织端粒酶激活与p16基因失活的关系

目的探讨甲状腺癌细胞增殖、分化与端粒酶激活及抑癌基因p16失活（缺失突变）之间可能存在的关系。方法应用TRAP、多重PCR、免疫组化法检测42例甲状腺癌与16例癌旁组织端粒酶活性、P16基因外显子2缺失、P16蛋白表达。结果甲状腺癌组端粒酶活性90．48％,高于癌旁组织（P〈0．01）;甲状腺癌p16基因外显子2纯合缺失率28．57％,相应癌旁组未检出（P〈0．01）;甲状腺癌P16蛋白表达缺失率40．48％,高于癌旁组（P〈0．05）;甲状腺癌P16蛋白表达缺失率高于p16基因外显子2缺失率。结论端粒酶激活与p16基因失活以及P16蛋白表达下调可能是甲状腺癌变过程中的重要分子事件,甲状腺癌中p16基因失活可能是端粒酶激活的一种途径。     

CDKN2/p16基因在四种原发恶性肿瘤中存在状态的研究

目的 :研究CDKN2 /p16基因缺失和蛋白丢失在非小细胞肺癌、食管癌、胃癌、乳腺癌 4种原发恶性肿瘤中的作用。方法 :采用免疫组织化学法和多重PCR技术对 68例 (非小细胞肺癌 3 1例 ,食管癌 15例 ,胃癌 13例 ,乳腺癌 9例 )原发肿瘤组织标本进行CDKN2 /p16基因第一、第二外显子纯合缺失和p16蛋白表达丢失分析研究。结果 :第一或 (和 )第二外显子总缺失率为 13 .2 % ( 9/68) ,蛋白丢失率为 44% ( 3 0 /68) ,不同肿瘤组织标本的p16基因缺失率和蛋白丢失率差别很大。结论 :CDKN2 /p16基因是重要的多肿瘤抑制基因 ,在不同肿瘤组织中其失活方式不完全相同。     

非小细胞肺癌p16基因缺失的研究

目的：分析我国非小细胞肺癌(NSCLC)患者肿瘤组织中p16基因缺失的情况．探讨该基因在肺癌发生中的作用。方法：采用逆转录-聚合酶链反应．对31例手术切除的NSCLC标本中p16基因外显子1和外显子2的缺失进行检测。结果：31例NSCLC中．有26例发生了p16基因的缺失．缺失率达83．9%；p16基因缺失以杂合性缺失为主；p16基因缺失与NSCLC组织学类型，分化程度，有无淋巴结转移以及临床分期无关；NSCIC Ⅰ，Ⅱ期病例即有较为显著的p16基因的缺失。结论：抑癌基因p16在NSCLC发生发展中起主要作用。p16基因缺失可能是NSCLC发生的早期始动环节．检测相关标本中p16基因缺失对肺癌的早期诊断有重要意义。     

非小细胞肺癌的早期诊断——CT与p53、p16、DNA对比研究

目的研究非小细胞肺癌(NSCLC)的CT征象与p53、p16基因蛋白异常表达及癌细胞核DNA含量之间的关系.方法应用免疫组化SABC法对52例经手术病理证实的NSCLC石蜡包埋标本,检测p53、p16基因蛋白表达;在此基础上,应用流式细胞术(FCM)测定了其中39例细胞核DNA含量并与相应的CT征象对照,分析P53、p16基因蛋白表达及DNA含量(DNA指数,DI)与CT表现之间的内在联系.结果①正常肺组织、癌旁肺组织和肺癌组织中,p53基因蛋白阳性表达率逐渐增高,p16基因蛋白阳性表达率逐渐降低.随着肿瘤分化程度的降低,p53基因蛋白阳性表达率逐渐增高,p16基因蛋白阳性表达率逐渐降低(P＜0.05).TNM分期中,I、Ⅱ期NSCLCp53基因蛋白阳性表达率低于Ⅲ期和Ⅳ期;而p16蛋白阳性表达率明显高于Ⅲ期和Ⅳ期(P＜0.05).②NSCLC的DI值明显高于癌旁肺组织和正常肺组织;NSCLC的细胞分化程度越差,TNM分期越高,异倍体率(AT%)越高,SPF值也越大.③CT显示NSCLC最大直径＞3cm及有淋巴结肿大组p53基因蛋白阳性表达率、p16基因蛋白阴性表达及DI值、SPF值均高于直径≤3cm组及无淋巴结肿大组;肿块轮廓出现深分叶征、棘状突起征,边缘出现短毛刺征组p53基因蛋白阳性表达率高,p16基因蛋白阳性表达率低,同时具有较高的DI.结论CT征象与p53、p16、DNA等分子生物学指标对比观察,有助于提高肺癌的早期诊断水平,指导临床制定合理的综合治疗方案.     

原发性肝细胞癌中p16和cyclinD1蛋白表达及p16突变研究

目的：研究p16和cyclinD1蛋白表达及p16基因第2外显子突变与原发性肝细胞癌（HCC）发生的关系。方法：利用SP免疫组织化学方法与多聚酶链反应－单链构象多态性（PCR－SSCP）分析技术分别检测44例HCC及癌旁肝组织p16和cyclinD1蛋白表达和12例新鲜手术肝癌组织的p16基因突变。结果：HCC中p16蛋白阳性率和阳性信号强度明显低于癌旁肝组织（P＜0．01）,而cyclinD1蛋白阳性率和阳性信号强度明显高于癌旁肝组织,12例新鲜HCC标本中p16基因第2 子突变率为16．7％（2／12）,癌旁组织未发现p16基因第2外显子突变;有p16基因突变的HCCp16蛋白表达呈阴性。结论：P16蛋白失活或／和缺乏可能是肝细胞增殖失控的重要因素之一;HCC存在P16基因第2外显子突变,但不是频发事件;在HCC形成过程中,P16基因异常与cyclinD1过度表达可能存在协同作用。     

p16与非小细胞肺癌临床病理的关系及5-Aza-CdR对肺癌A549细胞中p16表达的影响

目的 探讨抑癌基因p16在非小细胞肺癌（non-small cell lungcancer,NSCLC）组织中的表达与临床病理参数间的联系,进一步研究DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-Aza-2′-deoxycytidine,5-Aza-CdR）在人肺癌A549细胞中对p16 表达的影响。方法 采用免疫组化SP法检测76例NSCLC组织及其癌旁正常组织中p16 蛋白的表达情况,并分析不同病理参数癌组织中p16蛋白表达的差异;采用MSP法检测不同浓度（0~16 μmol/L）5-Aza-CdR处理后的A549细胞中P16基因启动子区DNA的甲基化状态,并采用Western blot 法检测5-Aza-CdR对A549细胞中p16 表达的影响。结果 76例NSCLC组织中,32例（42.11%）p16 蛋白表达阳性,低于癌旁正常组织（59例,77.63%）中阳性表达（P<0.05）;不同病理组织分级、肿瘤分化程度、临床TNM分期及有无淋巴结转移的NSCLC组织中p16 的阳性表达率差异有统计学意义（P<0.05）;在A549细胞中p16蛋白表达和非甲基化产物均呈低表达状态,5-Aza-CdR作用后,p16蛋白和其非甲基化产物表达均上调,且随着5-Aza-CdR浓度的升高呈增多趋势。结论 p16 在鳞癌、低分化、有淋巴结转移及Ⅲ~Ⅳ期NSCLC组织中低表达,提示其失活可能与NSCLC的进一步进展有关,5-Aza-CdR可诱导A549细胞中p16蛋白和非甲基化产物表达增加。     

p16与p53基因表达在非小细胞肺癌早期诊断及预后判断中的临床意义

目的:观察非小细胞肺癌组织中p16、p53基因表达的特点,探讨其在非小细胞肺癌早期诊断及预后判断中的作用。方法:应用免疫组化(SP)法,检测38例肺癌患者肿瘤组织、癌旁组织及正常组织中p16、p53基因的表达,并进行对比分析。结果:p16、p53基因表达与肺癌的组织学类型无关,与肿瘤的分化程度相关。肿瘤分化程度越高,p16蛋白表达率越高,丢失率越低,而p53蛋白表达率越低。差异有统计学意义(P<0.05)。p16与p53蛋白表达呈负相关。结论:p16、p53蛋白表达在肺癌的发生、发展中起着重要作用,p16可作为早期诊断癌变的指标,p53可作为判断肺癌预后的重要指标。     

胸水p16基因纯合性缺失的检测及临床应用价值

目的探讨胸水p16基因纯合性缺失的检测及其在临床上的应用价值。方法选取该院2010年12月—2014年6月收治的伴有胸水的肺癌患者176例,随机分为对照组和PCR组各88例,对照组应用胸水脱落细胞学检测,PCR组应用PCR技术检测纯合性缺失,比较阳性率。结果对照组88例肺癌所致癌性胸水患者的标本中有52例出现胸水脱落细胞血阳性结果,其阳性率为59.09%;PCR组88例肺癌所致癌性胸水患者的标本中没有出现一例p16基因第一外显子纯合性缺失,但是有35例p16基因第二外显子纯合性缺失,其阳性率为39.77%。阳性对照组优于PCR组,经统计学处理差异有统计学意义（P〈0.05）。结论将p16基因作为肺癌治疗的靶基因具有可行性,同时胸水p16基因纯合性缺失的检测方法不仅方便,而且准确率高,可以作为癌症检测和预后的重要辅助手段,为广大的肺癌患者带来福音,值得临床推广。     

p16基因甲基化及蛋白表达在非小细胞肺癌发病中的研究

目的 探讨p16基因甲基化及蛋白在人非小细胞肺癌组织中的表达情况。方法 应用甲基化特异性PCR法(MS-PCR)及免疫组化SP法检测45例非小细胞肺癌组织, 21例肺良性疾病组织中p16基因甲基化及蛋白的表达情况。结果 肺良性疾病中p16基因甲基化阳性率低于癌组织,差异有显著性(P＝0.001),p16基因甲基化与非小细胞肺癌细胞分化程度及淋巴结转移情况有明显的相关性(P<0. 05);肺良性疾病中p16蛋白阳性率高于癌组织,差异有显著性(P＝0.007); p16蛋白表达与非小细胞肺癌临床分期、细胞分化程度及淋巴结转移情况有明显的相关性(P<0. 05)。p16甲基化和p16蛋白表达缺失存在相关性(P＝0.004)。结论 p16基因甲基化及蛋白的表达情况与非小细胞肺癌的发生、发展有关。     

三种抑癌基因产物在NSCLC表达的临床与病理研究

为探讨ｐ５３、ｎｍ２３,ｐ１６基因产物在肺癌表达的临床意义,采用链霉抗生素蛋白－过氧化物酶（ｓ－ｐ）快速免疫组化法检测了６４例ＮＳＣＬＣ（非小细胞型肺癌）患者肺癌组织及配对淋巴结组织三种基因产物的表达。结果显示：肺癌组织ｐ５３表达阳性率达７６．５６％（４９／６４）,ｎｍ２３蛋白阳性为６０．９４％（３９／６４）,ｐ１６蛋白缺失率４８．４％（３１／６４）。５１．５６％呈阳性表达,阳性表达中很可能存在突     

85例非小细胞肺癌中p53基因异常的预后价值

目的：探讨ｐ５３蛋白表达和基因突变在非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）中的预后价值。方法：利用免疫组化方法检测８５例ＮＳＣＬＣ的ｐ５３蛋白表达，聚合酶链式反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）方法检测３１例肺腺癌ｐ５３基因５、６、７、８外显子突变，研究结果进行单因素生存分析。结果：本组ＮＳＣＬＣ病人的平均年龄为５５．６±８．４岁（中位数５５岁），随访时间的中位数为４７个月，３年、５年总体生存率分别为６６％和６１％。ｐ５３蛋白表达与预后无关（χ２＝１．００，Ｐ＝０．８），而ｐ５３基因突变组病人的生存率显著低于无ｐ５３基因突变组（χ２＝４．８１，Ｐ＝０．０３）。同时，ｐ５３蛋白表达与ＰＣＲ－ＳＣＰ检测的ｐ５３基因突变的一致率仅为５２％。结论：在ＮＳＣＬＣ中ｐ５３蛋白表达和基因突变可能有不同的预后意义，ｐ５３基因突变可作为肺腺癌的辅助预后指标。     

非小细胞肺癌p16基因突变与表达的研究

pl6蛋白最初是从各种肿瘤病毒转化的细胞中鉴定出的一种CDK4相关蛋白l’］。p］6基因被发现后,已有一些文献『‘－’］对其在肺癌中出现的基因缺失和突变进行了报道,但关于原发性肺癌中p16基因的突变和表达与患者的病理及临床资料相结合的研究目前还少见报道。本文采用?..     

p53基因在肺癌患者中的突变

目的　探讨肺癌组织中p5 3基因蛋白表达和肺癌患者血白细胞p5 3基因突变及其相互关系。方法　应用免疫组织化学S -P法检测肺癌组织中p5 3基因蛋白表达及聚合酶链反应 -单链构象多态性分析 (PCR -SSCP)检测其中肺癌患者血白细胞p5 3基因突变。结果　p5 3基因蛋白在 5 1例肺癌组织中的阳性表达率为 5 9% ,其中p5 3蛋白在鳞癌、腺鳞癌和腺癌的表达差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,但有淋巴结转移者 ( 77% )显著高于无淋巴结转移者 ( 4 5 % ,P <0 0 5 ) ,p5 3蛋白在肺癌癌旁正常肺组织及白细胞中均为阴性 ;5 1例肺癌患者中 2 8例血白细胞DNA均未见p5 3基因突变。结论　p5 3基因在肺癌患者血白细胞DNA未见突变 ,p5 3基因蛋白阳性的肺癌患者更易发生淋巴结转移     

HPV16、HPV18感染及p53蛋白过度表达与肺癌的相关性研究

为研究人乳头瘤病毒１６和１８型（ＨＰＶ１６和ＨＰＶ１８）感染及ｐ５３基因突变与肺癌的关系，应用经病理学证实的肺癌活组织，行聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测癌组织中的ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１８；并用ＬＳＡＢ免疫组化法检测相应蜡块标本中ｐ５３蛋白的过度表达。在４８例肺癌组织标本中未检出ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１８；ｐ５３蛋白表达呈阳性，阳性率为５４．２％（２６／４８），其中鳞癌６６．７％（１８／２７），腺癌５７．１（４／７），小细胞癌３３．３％（１／３），大细胞癌３３．３％（２／６），类癌２０．０％（１／５）。提示肺癌的发生可能与ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１８感染无关，而与ｐ５３基因突变有关，尤以与鳞癌和腺癌关系密切     

P16蛋白在肺癌中的表达及其临床意义

目的探讨抑癌基因ｐ１６与肺癌预后的关系。方法应用ＳＰ免疫组织化学方法对７６例肺癌标本中ＣＤＫＮ２抑癌基因Ｐ１６蛋白表达进行了研究。结果７６例肺癌标本中Ｐ１６蛋白表达阳性率为４５％（３４／７６）。其中鳞癌的阳性率为５２％（２３／４４）,腺癌为２９％（７／２４）,二者比较差异有显著意义（Ｐ＜０．０５）。Ｐ１６蛋白表达与肺癌的病理分级及预后呈显著相关性（Ｐ＜０．０５）。结论ｐ１６基因对肺癌的发生发展有着重要意义。     

肺癌组织中p16基因表达的意义

目的:了解p16基因蛋白在人肺癌组织中的表达情况.方法:应用免疫组化SP法检测69例肺癌及癌旁正常肺组织,21例肺良性疾病肺癌组织中p16基因蛋白的表达.结果:肺良性疾病及癌周正常肺组织p16蛋白阳性率分别为100%和91.3%,高于肺癌组织中的39.1%,差异显著(P＜0.05);p16蛋白表达与肺癌病理类型、临床分期及淋巴结转移有明显的相关性(P＜0.05);与组织学分级无关.结论:p16基因蛋白的表达情况与肺癌的发生、发展有关.     

p185~(neu)和p21~(ras)在肺癌组织中表达及相互关系

目的　检测 c- erb B- 2基因产物 p185 neu和 ras基因产物 p2 1ras在肺癌组织的表达情况 ,以揭示 c- erb B- 2和 ras基因在肺癌形成中的作用及其相互关系 .方法　运用免疫组织化学 SABC法检测 5 5例原发性肺癌组织中 2种基因产物 .结果　 10例小细胞肺癌组织均无 p185 neu和 p2 1ras的阳性表达 .2 8例肺鳞癌中 p185 neu和 p2 1ras阳性表达率分别是 46 %(13/ 2 8)和 5 4% (15 / 2 8) .16例肺腺癌中 p185 neu阳性表达率为 5 6 % (9/ 16 ) ,p2 1ras阳性表达率为 6 2 % (10 / 16 ) .肺鳞癌和肺腺癌中 2种蛋白的阳性表达率均无显著性差异 (P>0 .0 5 ) .p185 neu阳性表达与淋巴结转移具有明显相关性 (r=0 .36 ,P<0 .0 5 ) ,与其他临床病理因素无关 ;p2 1ras阳性表达与淋巴结转移、肿瘤大小等临床病理因素无关 .p185 neu和 p2 1ras在肺癌组织中的表达水平呈正相关 (r=0 .5 2 ,P <0 .0 1) .结论　c- erb B- 2和 ras基因的改变与非小细胞肺癌 (NSCL C)的发生有关 ,这 2种基因在 NSCL C的形成和发展中具有协同作用 .同时 ,检测 p185 neu和 p2 1ras还有助于评估肺癌患者的预后     

原发性膀胱移行细胞癌P16基因缺失研究

目的 :探讨原发性膀胱移行细胞癌中P16基因缺失及P16蛋白的表达。方法 :应用PCR和免疫组化方法对 38例膀胱移行细胞癌标本P16基因缺失和P16蛋白的表达进行分析。结果 :原发性膀胱移行细胞癌P16基因缺失率为 18.42 % ,缺失率明显低于培养的膀胱癌细胞系 ;P16蛋白的阳性表达率为 5 2 .6 3%。结论 :肿瘤细胞自原体转入培养环境的适应阶段P16基因缺失可能有助于肿瘤细胞的增殖 ,在膀胱肿瘤的发生中起重要作用。