大鼠肢体缺血再灌注后脊髓神经元凋亡相关蛋白的表达及其意义

①目的探讨大鼠肢体缺血再灌注(LIR)后脊髓神经元Bcl-2、Bax表达的变化及其意义。②方法复制实验性大鼠缺血再灌注模型,采用尼氏染色观察脊髓L2~L5节段的病理学改变,TUNEL法检测细胞凋亡情况,免疫组化检测凋亡相关因子Bcl-2、Bax表达的变化。③结果大鼠LIR后,脊髓前角神经元周围出现水肿裂隙,Bcl-2、Bax凋亡相关蛋白表达量明显上调,12小时达高峰,随后逐渐下降,Bcl-2/Bax的值在24小时最小,而细胞凋亡数量最多,Bcl-2/Bax的值与凋亡数呈负相关。④结论LIR后可导致脊髓前角神经元损伤,并出现细胞凋亡,其发生与Bcl-2、Bax凋亡相关蛋白的表达有关。     

兔脊髓缺血再灌注脂质过氧化和细胞凋亡变化及川芎嗪对其的影响

目的:探讨川芎嗪(TMP)对兔脊髓血再灌注(IR)脂质过氧化及细胞凋亡的影响。方法:参照Zivin法建立脊髓IR模型,将兔随机分为假手术组、模型组和TMP处理组。检测脊髓组织超氧化物歧化酶(SOD)活性丙二醛(MDA)水平,分析脊髓神经细胞凋亡指数和凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax表达水平,评价再灌注后24h,48h后肢运动神经功能。结果:TMP可明显提高脊髓SOD活性,降低MDA水平,可通过上调Bcl-2,下调Bax的表达,抑制缺血再灌注所致的脊髓神经细胞凋亡;改善缺血再灌注动物的后肢运动神经功能。结论:TMP对脊髓IR有保护作用,其作用与减少神经细胞脂质过氧化损伤和抑制神经细胞凋亡有关。     

银杏叶提取物对兔脊髓缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨银杏叶提取物对兔脊髓缺血再灌注(ischemiareperfusion,IR)损伤的保护作用及其机制。方法:27只新西兰大白兔随机分为假手术组、模型组和银杏叶提取物治疗组,每组9只。建立兔脊髓IR模型。对脊髓IR前及IR后24、48h实验兔后肢运动功能进行评分,检测缺血脊髓组织中超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量,并检测缺血脊髓组织神经细胞的凋亡指数及Bcl2、Bax蛋白的表达水平。结果:银杏叶提取物可明显改善脊髓IR后实验兔的后肢运动功能;提高脊髓组织中SOD的活性,降低MDA的水平;通过上调Bcl2及下调Bax蛋白的表达,抑制IR所致的脊髓神经细胞的凋亡。结论:银杏叶提取物对脊髓IR损伤有一定的保护作用,其机制可能与减轻脊髓神经细胞脂质过氧化损伤和抑制神经细胞的凋亡有关。     

肢体缺血再灌注致兔肺组织损伤及葛根素的干预作用

目的观察肢体缺血再灌注致兔肺组织损伤时抗氧化系统的变化,细胞凋亡数、Bc l-2和Bax蛋白表达,及葛根素的干预作用。方法健康家兔60只,随机分3组:A组(n=20)为假手术组,B组(n=20)为缺血再灌注组;C组(n=20)为葛根素治疗组。实验结束时,取肺组织测定超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、黄嘌呤氧化酶(XOD)活性和丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量,同时计算肺系数及进行肺病理学检查,应用原位缺口末端标记技术(TUNEL)和免疫组织化学方法,观察肢体缺血4h再灌注4h肺脏细胞凋亡数及Bc l-2和Bax蛋白的表达。结果肢体缺血4h再灌注后4h肺组织SOD、GSH-PX活性和NO含量显著下降,XOD活性和MDA含量明显增高,肺系数升高,肺组织病变明显。葛根素的干预治疗可明显缓解上述变化。假手术对照组肺脏见极少量凋亡细胞,缺血再灌注组、葛根素治疗组肺脏均可见大量凋亡细胞,但葛根素治疗组凋亡细胞数比缺血再灌注组明显减少。假手术对照组肺脏组织Bc l-2呈阳性表达,基本未见Bax蛋白表达,其余2组可见大量肺脏组织出现Bc l-2和Bax蛋白阳性表达,但葛根素治疗组肺脏的Bax蛋白阳性表达明显较缺血再灌注组减少。结论家兔肢体缺血再灌注后,肺抗氧化功能下降、肺脏细胞凋亡增多及Bc l-2、Bax蛋白表达上调,葛根素的干预治疗对这种肺损伤有明显的保护作用。     

大鼠肢体缺血再灌注脑组织Bax的表达变化及谷氨酸受体拮抗剂对其影响

①目的 探讨肢体缺血再灌注所致脑损伤的可能机制及谷氨酸受体拮抗剂对其影响。②方法 采用常规方法复制大鼠肢体缺血再灌损伤模型。Wistar大鼠随机分成4组，即正常对照(control)组、缺血4小时组(Ⅰ组)、缺血4小时再灌4小时组(IR组)、缺血4小时再灌4小时 MK801组(IR MK801组)。分别测定各组脑组织中MDA含量，免疫组化观察各组脑组织Bax表达的变化。③结果 MK801降低脑组织MDA含量，抑制Bax表达，同时减轻脑组织水肿及神经元受损。④结论 MK801可减轻肢体缺血再灌注所致脑损伤，其机制可能与Bax在肢体缺血再灌注所致脑损伤中作用有关。     

热休克预处理对脊髓缺血再灌注损伤的保护作用

目的 研究热休克预处理对兔脊髓缺血再灌注损伤的保护作用及相关机制。方法 将新西兰白兔66只随机分为3组：①假手术组(sham-operation，s组)6只；②缺血再灌注组(ischemia／reperfusion，I／R组)30只；③热休克预处理组(heat shock precondit，ioning，HP组)30只。缺血再灌注后8h，16h，24h，48h，72h从I／R组和HP组随机抽取6只兔，检测后肢运动功能，并取脊髓组织行免疫组化染色观察热休克蛋白70(heat shock protein 70，HSP70)的表达，TUNEL染色观察神经元凋亡情况。脊髓匀浆液检测超氧化物歧化酶(SOD)活力及脂质过氧化物丙二醛(MDA)的含量。结果 各个时间点上，HP组的运动功能评分优于I／R组；免疫组化染色，HP组阳性率远高于I／R组；TUNEL染色，HP组阳性率低于I／R组；SOD的活力HP组高于I／R组，MDA含量HP组低于I／R组。结论 热休克预处理后可能产生了大量HSP，并提高了SOD活力，通过抑制神经元周亡，减少自由基对脂质膜的破坏等途径对脊髓缺血再灌注损伤产生保护作用。     

大鼠肢体缺血/再灌注后NO/ET-1平衡与脑组织氧化损伤关系的研究

目的:研究一氧化氮(NO)和内皮素-1(ET-1)在大鼠肢体缺血/再灌注(L I/R)后脑氧化损伤中的作用,探讨NO/ET-1平衡关系的变化对脑损伤的影响。方法:在大鼠L I/R损伤模型上,观察血浆NO,ET-1,MDA,XOD,SOD,LDH,CK及脑组织tNOS,iNOS,cNOS,NO,ET-1,MDA,XOD,M PO,SOD,W/D的变化。结果:L I/R后血浆LDH,CK,MDA,XOD和脑组织MDA,XOD,M PO,W/D较对照组升高,自由基清除酶SOD活性下降,在再灌注4h脑组织损伤最为严重。再灌后,脑组织tNOS和iNOS活性升高,而cNOS活性降低,血浆及脑组织中NO,ET-1增加,NO/ET-1比值降低,在再灌注4h降低最为明显。结论:大鼠L I/R后脑损伤的发生可能与机体自由基产生增多,清除酶活性下降以及NO/ET-1失平衡有关。     

脊髓缺血再灌注损伤延迟性瘫痪自由基和超氧化物歧化酶动态变化

目的:动态观察新西兰兔脊髓缺血再灌注损伤延迟性瘫痪时脊髓组织超氧歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的变化,探讨其临床意义。方法:20只新西兰白兔随机分为两组:假手术对照组(sham组)和缺血再灌注26min组(IR组)。两组参照并改进Zivin方法建立兔脊髓腰骶段缺血再灌注延迟性瘫痪模型,比较两组不同动物不同时间点后肢运动功能及静脉血中丙二醛(MDA)、超氧歧化酶(SOD)活性。结果:对照组中MDA、SOD没有明显变化,动物均完全康复。IR组在再灌注缺血前、再灌注2h、8h、16h、24h中,SOD含量逐渐降低,至再灌注24h最低;再灌注72h、168h后SOD逐渐恢复到缺血再灌注前水平;MDA在再灌注缺血前、再灌注2h、8h、16h、24h中,含量逐渐增高,至再灌注24h达最高;再灌注72h、168h后MDA逐渐恢复至缺血再灌注前水平。SOD与MDA的含量变化明显负相关。IR组的后肢运动功能评分在再灌注2h、8h和16h与sham组无明显差异,至再灌注24h、72h和168h后明显低于对照组,出现延迟性瘫痪,平均发生时间为19.6h。结论:自由基介导的脂质过氧化反应在脊髓缺血再灌注损伤延迟性瘫痪中具有重要作用。     

骨骼肌缺血预适应对肢体缺血再灌注后心肌的远端保护作用

目的探讨发生在下肢骨骼肌的缺血预适应对肢体缺血再灌注(LIR)后心肌的作用。方法Wistar大鼠24只随机分为对照组(C)、缺血再灌注组(I/R)和缺血预适应组(IPC I/R)。测定心肌组织XO、SOD和MDA含量;检测血浆CK、CK-MB及心肌组织MPO水平;检测心肌组织Bcl-2、Bax蛋白表达情况;光镜下观察心肌组织的形态学变化。结果LIR后心肌组织SOD活性降低,MDA、XO含量增加(P<0.01或P<0.05),心肌组织MPO及血浆CK、CK-MB水平均较C组明显升高(P<0.01)。Bcl-2和Bax蛋白表达增多,但Bcl-2/Bax比值降低。镜下可见心肌细胞水肿等组织损伤的征象;在IPC I/R组,心肌组织SOD的减少和MDA、XO及MPO含量的增加受到一定程度抑制,血浆CK、CK-MB水平有所下降(P<0.01),Bcl-2表达增强而Bax表达减少,Bcl-2/Bax比值升高(P<0.01)。光镜下心肌组织的形态学表现也有所改善。结论大鼠骨骼肌缺血预适应可能通过抗氧化、抑制炎性反应和细胞凋亡等途径发挥对肢体缺血再灌注后心肌的远端保护效应。     

重复高压氧预处理对大鼠脊髓缺血再灌注损伤时糖调节蛋白78表达的影响

目的探讨重复高压氧预处理对大鼠脊髓缺血再灌注损伤保护中糖调节蛋白78(GRP78)表达的影响。方法雄性SD大鼠36只,体重250～300g,采用随机数字表法,将其随机分为3组(n=12)假手术组(S组)、脊髓缺血再灌注组(I/R组)和重复高压氧预处理(HOP组)。HOP组采用高压氧预处理[1000ml/L O2,2.5 atmosphere absolute(ATA),1h/d,5天],最后一次处理后24h,I/R组和HOP组采用Zivin法制备脊髓缺血再灌注模型(缺血15min,再灌注1h),24、48、72h后分别评价后肢运动功能,然后处死大鼠,取L5～7节段脊髓组织,测定GRP78的mRNA及其蛋白表达水平,光镜下观察病理学结果。结果与S组比较,I/R组和HOP组后肢运动功能和脊髓前角正常运动神经元计数降低,脊髓组织GRP78 mRNA及蛋白表达水平上调(P<0.05);与I/R组比较,HOP组后肢运动功能和脊髓前角正常运动神经元计数升高,脊髓组织GRP78 mRNA及蛋白表达水平上调(P<0.05)。HOP组脊髓组织病理学损伤程度轻于I/R组。结论重复高压氧预处理可上调大鼠脊髓缺血再灌注时GRP78表达,从而减轻大鼠脊髓缺血再灌注损伤。     

白藜芦醇对兔动脉粥样硬化肢体缺血再灌注损伤的影响

目的:探讨白藜芦醇对兔动脉粥样硬化肢体缺血再灌注损伤的影响,评价其对兔肢体缺血再灌注损伤的保护作用。方法:新西兰白兔12只,高脂饮食后随机分为假手术组,缺血再灌注损伤组,白藜芦醇治疗组。缺血再灌注损伤组微血管夹夹闭股动脉5 h后恢复血流,白藜芦醇治疗组予10 mg/(kg.d)剂量治疗。观察不同组间血清磷酸肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH),血清和后肢肌肉中丙二醛(MDA),超氧化物歧化酶(SOD)的差别。结果:与缺血再灌注损伤组相比,白藜芦醇治疗组术后第7天、第14天CK、LDH降低,SOD升高(P<0.05)。术后第7天MDA较缺血再灌注损伤组降低(P<0.05)。结论:白藜芦醇能改善兔后肢缺血再灌注损伤后的部分血清学指标,减轻缺血再灌注时肌细胞损伤的程度。     

Effect of Electroacupuncture at Acupoints of the Governor Vessel on Aquaporin-4 in Rat with Experimental Spinal Cord Injury

This study is to investigate the effects of electroacupuncture at acupoints of the Governor Vessel（GV） on aquaporin-4 （AQP-4） expression and on functions of the hind limbs in the rat of spinal cord injury. The functions of the hind limbs were detected with BBB scale on the ld, 3d, 7d and 21d after the spinal cord injury, respectively, and AQP-4 expression in the spinal cord was determined with immunohistochemical method and analyzed quantitatively with image analyzer. The results indicated that on the ld after the spinal cord injury, increased AQP-4 expression can be seen significantly in both the gray matter and the white matter of the injured spinal cord, and it reached the peaks on the 3d after the spinal cord injury in both the electroacupuncture group and the spinal cord injury group. However, AQP-4 express was significantly decreased in the electroacupuncture group as compared with that in the control group on 7d, 14d and 21d （P〈0.05 or P〈0.01）. The decrease of AQP-4 expression almost went with the improvement of the neurological function, which suggested that electroacupuncture at the acupoints of the Governor Vessel can inhibit edema of the spinal cord to alleviate the secondary spinal cord injury by means of decreasing the AQP-4 expression after the spinal cord injury, so as to protect the residual normal spinal cord tissues and promote the rebuilding of nervous tissues.     

胞二磷胆碱预处理对大鼠脊髓缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨胞二磷胆碱对脊髓缺血再灌注损伤的影响及其作用机制.方法 雄性SD大鼠72只,体质量(230±20)g,按随机数字表法分为3组(n=24):假手术组,缺血再灌注损伤组(IR组)和胞二磷胆碱预先给药组(citi组),各组按灌注后12、24、48、72 h分成4个亚组(n=6).各组均采用改良Zivin法建立脊髓...     

参麦注射液对家兔急性脊髓损伤的保护作用

目的：探讨参麦注射液在家兔急性脊髓损伤中的抗氧化作用。方法：通过建立家兔急性脊髓损伤模型,测定参麦注射液对急性脊髓损伤后血浆和脊髓组织SOD活力与MDA、CAT含量的影响。结果：与对照组相比,使用参麦注射液后,在脊髓急性损伤8h脊髓组织和血浆SOD活力明显增加（P〈0.05）,血浆MDA含量明显降低（P〈0.05）。结论：参麦注射液在家兔脊髓损伤模型中,有抗自由基损伤和减轻脂质过氧化的作用。     

缺血后处理上调内源性抗氧化物酶活性诱导兔脊髓保护效应

目的 观察缺血后处理是否通过增加再灌注期间内源性抗氧化物酶的活性以减轻兔脊髓缺血-再灌注损伤.方法 雄性新西兰大白兔78只随机分为3组:假手术组(Sham组,n=18):操作同I/R组,但不阻闭腹主动脉;缺血.再灌注组(I/R组,n=30):阻闭腹主动脉20 min后再灌注;缺血后处理组(PostC组,n=30):阻闭腹主动脉20 min,再灌注即刻行30 s再灌注/30 s缺血,3个循环,其他同I/R组.在再灌注的30 min、1、3、6、24和48 h分别取材,采用分光光度法行脊髓抗氧化物酶活性及丙二醛(MDA)含虽测定(各时间点n=5,Sham组n=3).再灌注6、24和48 h在取材前分别行后肢运动功能评分.结果 ①再灌注6、24和48 h时PostC组后肢运动功能评分显著高于I/R组(均P<0.05).②PostC组脊髓组织中超氧化物歧化酶(SOD)及过氧化氢酶(CAT)活性在再灌注早期(30 min～6 h)显著高于I/R组(均P<0.05).PostC组各时间点脊髓组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)活性与I/R组相比,差异无统计学意义.③PostC组脊髓组织MDA含量在再灌注24 h和48 h明显低于I/R组(P<0.01).结论 缺血后处理可通过上调脊髓SOD及CAT活性,减轻脊髓缺血再灌注损伤,产生保护效应.     

兔脊髓缺血再灌注损伤后线粒体凋亡途径的变化及灯盏细辛预处理的干预作用

目的：探讨兔脊髓缺血再灌注损伤后线粒体凋亡途径机制及灯盏细辛（Herba Erigerontis Breviscapi）注射液预处理的干预作用。 方法：日本大耳白兔60只随机分为假手术组、缺血组、再灌注组（1、6、24、48 h）和灯盏细辛组（1、6、24、48 h）。采用腹主动脉阻断法复制兔脊髓缺血再灌注损伤模型,缺血组缺血50 min,再灌注组缺血50 min后分别再灌注1、6、24、48 h。灯盏细辛组在缺血前30 min应用灯盏细辛9 mg/kg。用流式细胞仪检测细胞凋亡率,用酶联免疫吸附测定法检测脊髓神经细胞细胞质及血清的半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶9（caspase-9）和凋亡诱导因子（apoptosis-inducing factor,AIF）的含量。 结果：与假手术组和缺血组比较,再灌注组脊髓细胞凋亡率和细胞质中AIF和caspase-9含量增加,血清AIF和caspase-9含量于再灌注1 h和6 h下降,但于24 h和48 h升高。与缺血再灌注组比较,灯盏细辛可以降低脊髓细胞的凋亡率及血清和脊髓神经细胞细胞质中AIF与caspase-9的含量。 结论：脊髓缺血再灌注后神经细胞的凋亡与线粒体途径有关,灯盏细辛可通过此途径抑制脊髓神经细胞凋亡。     

COX-2抑制剂塞来昔布对大鼠脊髓损伤的保护作用

目的 观察选择性环氧化酶一2抑制剂塞来昔布（celecoxib）对大鼠脊髓损伤的保护作用。方法 48只SD大鼠，随机分为单纯损伤组及治疗组。采用改良Allen’s打击法制作脊髓损伤动物模型，分别在伤后12、24、72h测定脊髓标本的丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）含量。用苏木精-伊红染色观察损伤脊髓组织病理变化，原位末端标记法（TUNEL）标记凋亡细胞。同时采用Tarlov评分和斜板实验观察脊髓神经功能恢复情况，比较各组之间的差异。结果 治疗组较单纯损伤组神经功能明显改善（P〈0．05）。治疗组各时间点MDA含量较单纯损伤组明显降低（P〈0．05），SOD含量明显升高（P〈0．05），病理形态改变较轻且凋亡细胞少（P〈0．05）。结论 COX-2抑制剂塞来昔布可减少神经细胞凋亡，对继发性脊髓损伤起到保护作用。     

白藜芦醇对大鼠脊髓损伤的保护作用

目的：建立Allens脊髓模型,探讨白藜芦醇（Res）对大鼠脊髓损伤（SCI）的保护效果.方法：将24只SD大鼠随机分为假手术组（A组）,脊髓打击损伤组（B组）,Res组（C组）,每组8只.A,B组根据自制改良的Allens装置制备脊髓急性打击损伤动物模型.脊髓打击损伤后即刻腹腔注射Res100mg/kg,观察并检测3组大鼠SCI后24,48,72h3个不同时间点后肢运动功能评分变化及脊髓组织病理学、超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量改变.结果：术后A组大鼠功能完全恢复.B组和C组大鼠后肢运动功能24,48,72h3个时间点均有所改善.但24h时差异明显（P〈0.05）;48,72h时差异更为显著（P〈0.01）.A组神经组织结构完好,神经元轮廓清楚,核仁清晰可见,胞质均匀深染.脊髓打击损伤后72hB组神经组织多灶性出血并出现广泛的神经元坏死,尼氏体溶解消失,核固缩变小.C组神经组织结构损伤轻微,细胞轻度肿胀,胞质均匀.术后A组脊髓组织SOD活性升高,而MDA含量则处于较低水平.B组SOD活性明显降低,MDA含量明显升高,与A组相比较差异显著（P〈0.01）.C组与B组相比较,SOD活性明显升高,MDA含量明显降低,差异具有统计学意义（P〈0.01）.结论：Res能明显促使SCI后的功能恢复,对SCI具有一定的保护作用.     

依达拉奉对大鼠肾脏缺血再灌注损伤保护作用的研究

目的研究依达拉奉对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用及探讨其相关机制,为预防肾脏缺血再灌注损伤用药提供实验依据。方法雄性SD大鼠36只,随机分为A组（对照组）、B组（缺血再灌注组）、C组（依达拉奉组）。测定SOD活性和MDA含量,观察肾组织Bcl-2、Bax的表达;测定血肌酐和尿素氮浓度。结果 （1）与A组比较,B组、C组SOD活性明显下降,MDA含量明显升高。与B组比较,C组SOD活性明显升高,MDA含量明显降低。（2）与A组比较,B组、C组Bax表达明显增加,Bcl-2表达增加,Bcl-2/Bax比值降低。与B组比较,C组Bcl-2表达增加,Bax表达减弱,Bcl-2/Bax比值增高。（3）与A组比较,B组和C组Cr、BUN浓度升高,与B组比较,C组Cr、BUN浓度降低。结论 （1）依达拉奉能够改善大鼠肾脏缺血再灌注后的肾功能,减轻损伤;（2）其机制可能是通过调控Bcl-2/Bax介导的细胞凋亡而实现。     

海水浸泡对兔脊髓损伤Bcl-2和Bax基因表达的影响

目的通过建立海水浸泡兔脊髓损伤模型,观察脊髓损伤后脊髓神经细胞凋亡相关基因表达情况,明确海水浸泡对脊髓损伤的影响。方法采用改良Allen’s打击器造兔脊髓损伤模型,根据随机数字表,将60只大耳白兔随机分为两组,实验组:海水浸泡组(切除椎板并造脊髓损伤模型,海水浸泡60 min,n=30),对照组:单纯损伤组(切除椎板并造脊髓损伤模型,但不浸泡,n=30)。根据处理后1 h、6 h、12 h、24 h、48 h五个时间点分为5组,每时间点6只,在各时间点处死动物取伤段脊髓,光镜下观察伤段脊髓组织病理形态,并进行免疫组织化学染色检测Bcl-2、Bax的表达水平。结果两组伤后均出现创伤性脊髓水肿的病理改变,但水肿高峰出现不一致,且最终组织结果破坏实验组重于对照组。免疫组织化学检测,Bcl-2和Bax在两组各时间点均有阳性表达,Bcl-2表达强度实验组低于对照组,Bax表达强度在损伤6 h后强于对照组,之前则弱于对照组。结论海水浸泡延迟了脊髓创伤性水肿,但最终的损害更重,具有促进神经细胞凋亡发生的作用。