自噬在糖尿病心肌病发生中的作用

高血糖和胰岛素抵抗或缺乏是糖尿病的特征,糖尿病伴随着能量代谢紊乱,而成人心脏收缩和舒张所需的能量主要由线粒体产生,糖尿病心肌病的心肌细胞线粒体受损,伴随着心肌细胞肥大、纤维化和凋亡,自噬尤其是具有高度特异性的线粒体自噬通过清除异常线粒体,在控制线粒体功能中起关键作用。尽管目前线粒体自噬在糖尿病心肌病进展中的作用尚未明确,但其在不同类型糖尿病心肌中的效果不同。因此,了解线粒体自噬在糖尿病心肌中的作用对于糖尿病心肌病预后、糖尿病住院患者临床管理以及潜在治疗方案均有重要意义。     

自噬在阿霉素诱导扩张性心肌病中的作用

细胞自噬是一种利用溶酶体对自身组成成分进行降解,将产生的有用物质予以回收利用的高度保守的细胞分解过程。在各类细胞体系中存在着低水平的自噬行为,促进细胞的生长发育,然而自噬活动不足或过度时则可诱发疾病或加重病变。阿霉素是蒽环类抗肿瘤药物,是多种肿瘤治疗的一线药物,但其心脏毒性限制了它的应用,其机制尚不清楚。有文献报道自噬活动在阿霉素诱导的心肌病中发挥重要作用,本文就细胞自噬在阿霉素诱导的扩张性心肌病中的研究进展做一综述。     

lncRNA MEG3调控mTOR介导的自噬在糖尿病心肌病中的作用

目的 探究lncRNA MEG3调控mTOR介导的自噬在糖尿病心肌病(diabetic cardiomyopathy,DCM)中的作用。方法构建C57BL/6 DCM小鼠模型,设置正常组和DCM组,心脏超声和Masson染色检测小鼠左心房功能结构变化。实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测lncRNA MEG3在小鼠心肌组织中的表达水平,Western blot法检测p62、LC3-Ⅱ、Beclin1、p-mTOR、mTOR表达量。分离C57BL/6小鼠乳鼠心肌细胞,高糖诱导心肌细胞损伤。转染si-NC、si-MEG3后高糖处理,设置为正常组、高糖组、高糖+si-NC组、高糖+si-MEG3组,RT-qPCR检测lncRNA MEG3在心肌细胞的表达水平,Western blot法检测p62、LC3-Ⅱ、Beclin1、p-mTOR、mTOR、p-ERK、ERK表达量。CCK-8、LDH、ROS、GSH-Px试剂盒检测心肌细胞损伤。结果 DCM小鼠心功能出现异常。与正常组比较,DCM组小鼠心肌细胞p62表达显著升高,LC3-Ⅱ和Beclin1表达显著降低,p-mTOR表达升高。细胞实验中,高糖诱导的心肌细胞比正常组p62表达显著升高,LC3-Ⅱ和Beclin1表达显著降低,p-mTOR和p-ERK表达升高;细胞活力和GSH-Px活性降低,LDH和ROS活性显著升高。下调lncRNA MEG3后,高糖+si-MEG3组逆转了高糖+si-NC组自噬相关蛋白以及细胞损伤指标的变化。结论 下调lncRNA MEG3抑制了ERK/mTOR信号通路的激活,高糖诱导的心肌细胞自噬得以恢复,且糖尿病心肌损伤被缓解。     

高糖环境下法舒地尔调控自噬对原代心肌细胞凋亡的作用

目的 探讨高糖环境下,法舒地尔对原代心肌细胞凋亡的作用及自噬在其中的作用。方法 分离培养原代心肌细胞,使用不同葡萄糖浓度培养基培养细胞,并使用法舒地尔及3-MA干预。检测细胞凋亡,测定Bcl-2、Bax、MYPT-1、p-MYPT1、LC3、P62等蛋白的表达,并检测ROCK1和ROCK2的mRNA表达量。结果 高糖环境下,原代心肌细胞凋亡比例升高,Bcl-2表达下降、Bax表达增多,ROCK1、ROCK2 mRNA表达增加,p-MYPT1/MYPT1比值降低;法舒地尔可抑制高糖环境下原代心肌细胞凋亡比例,Bcl-2升高、Bax水平降低,ROCK1、ROCK2 mRNA表达减少、p-MYPT1/MYPT1比值降低。高糖环境下不可溶性P62表达增多;法舒地尔干预后,不可溶性P62蛋白表达减少、可溶性P62蛋白表达增多、同时LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值增大。在法舒地尔干预基础上应用自噬流抑制剂3-甲基腺嘌呤,可见到细胞凋亡比例升高、Bcl-2下降及Bax水平的升高、不可溶性P62表达增多(P<0.05)。结论 高糖环境下,法舒地尔通过活化自噬流抑制原代心肌细胞凋亡。     

NETosis调控心肌细胞自噬促进小鼠急性心肌梗死的作用机制研究

目的 探究小鼠急性心肌梗死(acute myocardial infarction, AMI)与中性粒细胞外陷阱相关死亡(neutrophil extracellular traps-osis, NETosis)调控心肌细胞自噬的相关性。方法 C57BL/6小鼠通过冠状动脉左前降支结扎法构建小鼠AMI模型。小鼠原代心肌细胞通过氧糖剥夺(oxygen glucose deprivation, OGD)处理构建心肌细胞损伤体外模型。PMA(NETosis诱导剂)/DNasⅠ(NETosis抑制剂)处理中性粒细胞,取上清液处理OGD诱导的心肌细胞,雷帕霉素(rapamycin, Rap)处理OGD诱导的心肌细胞。TTC染色检测心肌梗死面积;酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunoadsordent assay, ELISA)检测血清cTnI水平;TUNEL染色检测细胞凋亡;ELISA检测中性粒细胞上清液中NETosis标志物水平,Western blot法检测相关蛋白表达水平。结果 TTC染色显示,与假手术组比较,模型组小鼠的心肌梗死面积显著增加,血清中cTnI水平显著升高...     

慢性缺氧诱导小鼠心肌细胞自噬及其机制

目的 观察慢性缺氧对小鼠心肌细胞自噬水平的影响,并初步探讨AMPKα2敲除对该过程的作用.方法 采用野生型与AMPKα2-/-雄性C57小鼠均分为野生型常氧组、野生型缺氧组、敲除型常氧组和敲除型缺氧组(n=10).常氧组于空气环境中饲养,缺氧组于10％ O2的低氧舱内饲养.4周后野生型小鼠取静脉血标本,测红细胞及血红蛋白水平;取心脏标本用Western blot检测AMPKα2及自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值与p62的变化,用免疫荧光染色法检测心肌冰冻切片LC3变化.敲除型小鼠取心脏标本用Western blot检测心肌组织LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值变化.结果 ①野生型小鼠中,与常氧组比较,缺氧组红细胞与血红蛋白水平显著增加[红细胞:(9.33 ±0.15)×1012/L vs(12.78±0.66)×1012/L,P ＜0.05;血红蛋白:(135 ±3)g/L vs (192 ±4)g/L,P＜0.05];②野生型小鼠中,与常氧组相比,缺氧组心肌组织LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著增加[(0.49 ±0.29) vs(1.70 ±0.24),P＜0.05];p62表达明显降低[(1.32±0.57) vs (0.71 ±0.19),P＜0.05];免疫荧光结果显示,缺氧组心肌组织LC3荧光较常氧组增多;③在常氧条件下,与野生型小鼠比较,AMPKα2-/-小鼠心肌组织LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值降低,但差异无统计学意义[(0.78 ±0.08) vs (0.73 ±0.34),P＞0.05];在缺氧条件下,与野生型小鼠比较,AMPKα2-/-小鼠心肌组织LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著降低[(2.08±0.72) vs (1.01 ±0.21),P＜0.05];④野生型小鼠中,与常氧组比较,缺氧组AMPKα2蛋白表达水平并无显著增加[(1.14±0.13) vs(1.25±0.19),P＞0.05].结论 慢性缺氧可能通过AMPKα2依赖的途径增强心肌细胞自噬,该自噬可能是心肌细胞对慢性缺氧的适应机制.     

自噬在海马损伤后齿状回神经发生调控中的作用

目的探讨成年大鼠单侧海马CA1区毁损后,海马齿状回（DG）神经发生新生细胞存活与自噬的关系。方法建立海人酸（KA）损毁单侧海马的模型,用5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）于毁损后3d标记增殖的细胞,免疫组织化学检测BrdU阳性细胞,采用体视学的计数方法计算DG的BrdU阳性细胞总数。用自噬特异性抗原微管相关蛋白轻链3（LC-3）与BrdU双标的方法检测这些新生细胞的减少是否有自噬的参与。结果假毁损组DG区可见少量的BrdU阳性细胞;与假毁损组比较,实验组在海马毁损后DG区BrdU阳性细胞明显增加,差异有统计学意义（P〈0.05）,在BrdU给药后第1天最多,随着时间的推移逐渐减少,各组之间差异有统计学意义（P〈0.05）;各时间点均未见BrdU和LC-3双标细胞。结论成年大鼠海马毁损可增强DG的神经发生,新生细胞随着时间的推移逐渐减少,而自噬性程序性细胞死亡在新生细胞减少的调控中可能不占主导作用。     

葡萄糖浓度对乳鼠心肌细胞自噬的影响

目的观察葡萄糖浓度对乳鼠心肌细胞自噬的影响。方法建立体外培养乳鼠心肌细胞模型,随机分成对照组（5．5mmol／L）,高糖组（25mmol／L）,对照＋雷帕霉素组（100nmol／L）,高糖＋雷帕霉素组（100nmol／L）。分别测定各组心肌细胞面积;用RT-PCR检测心肌肥大标记基因[心房利钠肽（ANP）、β-肌球蛋白重链（13-MHC）]表达情况;运用Western印迹检测自噬标记性蛋白微管相关蛋白3（LC-3）的表达。结果（1）高糖组心肌细胞肥大相关指标较对照组升高,高糖组LC-3的表达较对照组减低,差异均有统计学意义（P〈0．05）。（2）高糖＋雷帕霉素组心肌细胞肥大相关指标较对照＋雷帕霉素组升高,高糖＋雷帕霉素组LC-3较对照＋雷帕霉素组减低,但差异均无统计学意义。（3）高糖＋雷帕霉素组心肌细胞肥大相关指标较高糖组减低,高糖＋雷帕霉素组LC-3表达较高糖组升高,差异均有统计学意义。结论（1）培养基中葡萄糖浓度升高可导致心肌细胞肥大,同时合并有心肌细胞自噬水平的下降。（2）在高糖培养基中加入雷帕霉素可升高心肌细胞的自噬水平,同时抑制高糖导致心肌细胞肥大效果。（3）培养基中葡萄糖浓度升高导致心肌细胞肥大的效果可能与心肌细胞自噬水平的改变相关。（4）结合本实验的研究结果,自噬在糖尿病性心肌病方面可能起一定作用。     

自噬在心血管疾病中的作用研究

心血管疾病是一种严重危害人类健康的心脏和血管疾病,它的发病机制复杂,目前对其的研究主要集中在炎症反应、免疫机制、细胞凋亡等方面。自噬是生物进化中被优先保留下来的一种维持细胞稳态的生理机制,是真核细胞中高度保守的代谢过程,它与细胞的生长、发育、衰老、疾病均有重要作用。有研究发现,自噬与心血管疾病的发生发展密切相关,尤其在不同环境下对血管的作用。本文就自噬在心血管疾病中具体作用机制做一综述。     

自噬在肺纤维化中的作用机制

自噬是一个高度保守的细胞降解和循环过程,是维持细胞器和细胞蛋白质合成、降解和再循环之间稳态平衡的重要因素。自噬是一种细胞保护机制,其功能障碍涉及许多疾病,包括特发性肺纤维化,但目前其发病机制尚不明确。肺纤维化早期以反复微损伤导致纤维化环境,后期因成纤维细胞大量增殖、细胞外基质沉积导致肺结构及功能破坏,从而发展为不可逆的肺纤维化。在肺纤维化中,自噬不足可导致成纤维细胞活化、肌成纤维细胞分化和细胞外基质沉积,这对于肺纤维化研究有重要意义。因此,未来深入探讨自噬在肺纤维化中的发生发展机制,可为肺纤维化的诊断和治疗提供新思路。     

联合培养中心肌细胞诱导结状神经节神经元的迁移及P物质的表达

目的：探测联合培养中心肌细胞对迷走神经结状神经节神经元的迁移和P物质表达的影响作用。方法：建立Wistar大鼠结状神经节与心肌细胞联合培养的模型,用倒置相差显微镜观察结状神经节与心肌细胞培养不同时间的活细胞生长状况。联合培养72、96h,用Holmes还原银染色法观察神经元的迁移,用免疫组织化学法观察P物质的表达。结果：联合培养72、96h,与单纯培养的结状神经节组织块相比,结状神经节与心肌细胞联合培养的标本中神经元迁出的数目明显增多（P＜0.05）。结状神经节与心肌细胞联合培养96h,探测到了P物质免疫反应阳性神经元和神经纤维。而在单纯结状神经节组织块培养72、96h以及结状神经节与心肌细胞联合培养72h的标本中,均没有探测到P物质的表达。结论：联合培养中心肌细胞可诱导神经元的迁移和神经递质P物质的表达。神经元在形态学上的发育成熟可能需要72h就可以完成,而在联合培养中神经递质合成的发育成熟则需要96h。神经元在形态学上的发育成熟并不能代表神经递质合成的发育就已经完成。这一结果对于进一步研究心肌细胞的选择性神经支配以及神经与心肌的相互作用开辟了一条新的研究途径。     

交感神经节与心肌细胞联合培养中神经元的迁移

目的：探测交感神经节与心肌细胞联合培养中神经元迁移以及迁出的神经元与心肌细胞之问的关系。方法：用倒置相差显微镜定期观察神经纤维和心肌细胞的生长;终止培养后,用Holmes还原银染色法观察神经纤维的生长情况和单个神经元的迁移、生长情况及其与心肌细胞之间的关系。结果：在相同的培养条件下,联合培养中的某些区域可见由交感神经节组织块迁出许多单个神经元,散在于单层分散的心肌细胞之间,为双极或单极神经元,并发出突起加入邻近的神经纤维网或终止于心肌细胞表面;由单纯培养的交感神经节中生长出的神经纤维弯曲较多,并相互交织成网状,在神经纤维网之间偶尔可见由交感神经节组织块中迁出的神经元,亦为双极或多极神经元,其突起加入邻近的神经纤维网,迁出的神经元的数量较联合培养中由交感神经节组织块迁出的神经元少。结论：在体外联合培养中,单层分散的心肌细胞对交感神经节中神经元的迁移具有诱导作用。     

重症急性胰腺炎与心肌细胞凋亡

重症急性胰腺炎时可明显导致心肌损害,心肌细胞凋亡也会明显增加,其程度随着心肌损害程度的加重而加重,同时随着重症急性胰腺炎病程的延长而逐渐加重。本文主要综述了心肌细胞凋亡的调控基因,占有非常重要地位是Bcl-2基因家族,其中Bcl-2基因和Bax是一对功能完全相反的重要的细胞凋亡调节基因,参与了抑制或诱导细胞凋亡。两者的比例调节着细胞凋亡的发生,决定着细胞是存活还是凋亡;重症急性胰腺炎导致心肌细胞调亡的可能机制以及重症急性胰腺炎时诱导心肌细胞凋亡的治疗。当细胞凋亡为细胞死亡的主要方式时,通过积极有效的药物干预,有可能逆转过度凋亡所致的病理变化,减少细胞凋亡,促进细胞再生。故进一步研究重症急性胰腺炎细胞凋亡基因调控以及细胞凋亡基因信号传导途径,必将为全面了解急性胰腺炎和胰心综合症的发病机制提供科学依据,为研究有关治疗药物的作用机制开辟崭新的前景。     

饥饿诱导胶质瘤细胞自噬发生及Beclin-1表达的变化

目的 探讨饥饿诱导大鼠胶质瘤细胞C6自噬的发生及自噬相关蛋白Beclin-1的变化。方法 在培养大鼠胶质瘤细胞C6至对数生长期后,以无氨基酸培养液EBSS(Earle’s balanced salt)代替DMEM培养液培养细胞,培养1、3、6、12、18 h后收集细胞,采用蛋白质印迹分析和免疫荧光检测特异性标记自噬的微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC-3)以及自噬相关蛋白Beclin-1,采用透射电镜观察自噬体。结果 饥饿处理1 h后胶质瘤细胞C6中LC-3表达开始增加,并随着饥饿时间延长而逐渐增加,12 h达到高峰后开始下降;免疫荧光下可见点状自噬体;透射电镜下观察到自噬体的形成。饥饿处理1 h后胶质瘤细胞C6中Beclin-1表达开始升高,3 h达到高峰后逐渐下降;免疫荧光下观察到Beclin-1表达增高。结论 饥饿可以诱导胶质瘤细胞C6发生自噬,Beclin-1与饥饿诱导的胶质瘤细胞C6的自噬相关,为进一步研究Beclin-1在胶质瘤细胞自噬中的作用机制打下基础。     

肥厚型心肌病酒精消融前后心功能改变研究

目的观察酒精消融前后肥厚型心肌病患者心功能的变化情况。方法选取肥厚型心肌病患者48例,随机分为两组,分别采用药物治疗和酒精消融治疗,观察患者心功能的变化情况和不良反应。结果实验组经酒精治疗后,心功能明显改善,Ⅱ＋Ⅲ级患者的构成比为95.83%,高于对照组的83.33%（P〈0.05）,射血分数改善（LVEF）也高于对照组。结论化学性消融对于肥厚型心肌病的治疗效果确切。     

症状期酒精性心肌病患者心脏结构和功能的超声评价

目的 应用超声心动图评价症状期酒精性心肌病(ACM)患者心脏结构及功能状态、戒酒及药物治疗效果.方法 选取34例症状期ACM患者为观察组及34例查体正常者为对照组,行超声心动图检查,测量心脏结构及功能参数;观察组行戒酒及药物治疗,并对其中12例于治疗后随诊复查超声,比较治疗前后心脏结构功能的变化.结果 与对照组比较,观...     

柯萨奇B3病毒抗体与心肌细胞结合的发病作用

目的 研究柯萨奇B3病毒单克隆抗体（CVB3－mAb0与心肌细胞结合,以探讨CVB3－mAb对心肌细胞的致病作用。方法 采用细胞副合技术制备CVB3-mAb,并应用各细胞株分泌的mAb与人、牛、大鼠心肌细胞进行免疫组化分析,比较各株分泌的CVB3－mAb与不同种动物心肌细胞间结合的差异。结果 利用细胞融合技术制备出26种CVB3-mAb。其部分CVB3－mAb可与心肌细胞膜或心肌细胞内的肌原纤维结合,呈棕黄色环状重叠或横纹,CVB3－mAb 2A4,2D4,1G6,1H9,1H10,1H11与人、牛、大鼠心肌细胞均呈阳性反应;CVB3－mAb 2A2仅与人的心肌细胞结合;CVB3－mAb 2B2,2H4,1C10,1G4与人及大鼠心肌细胞结合;CVB3－mAb 2A3与牛和大鼠心肌细胞结合;CVB3－mAb 2G12仅与大鼠心肌细胞结合;CVB3-mAb 1E8仅与牛的心肌细胞结合,且CVB3－mAb 2D4与人心肌的结合为心肌细胞膜,而与牛及大鼠心肌的结合为心肌细胞内的肌原纤维。结论 各CVB3－mAb与不同动物心肌细胞间的结合及结合形式不同;且同一动物的心肌细胞与CVB3－mAb结合有差异。部分柯萨奇B3病毒抗体与动物心肌细胞结合,可引起心肌炎。     

卡托普利对实验性2型糖尿病心肌病大鼠模型心脏保护作用研究

目的 研究卡托普利对实验性2型糖尿病心肌病(T2DC)模型动物心脏保护作用和可能机制.方法 以高糖脂饲料负荷30 mg/kg剂量链脲佐菌素一次性腹腔注射建立T2DC大鼠模型,观察卡托普利45 mg/kg灌胃给药6周对模型动物血糖和血脂水平,心脏功能和结构变化,心肌脂肪酸含量以及心肌组织过氧化物增殖体激活受体α(PPAR α)和葡萄糖转运体4(GLUT4)基因表达等指标的影响.结果 与T2DC大鼠模型比较,卡托普利给药后,左心室收缩压、左心室最大收缩速率、左心室最大舒张速率的绝对值和心输出量分别显著增加15％、77％、52％和54％(P＜0.05或P＜0.01);室间隔厚度降低40％(P＜0.001);血浆糖化血红蛋白和心肌组织游离脂肪酸含量分别降低31％和24％(P＜0.01,P＜0.05);心肌组织PPARα基因表达显著降低(P＜0.05),GLUT4基因表达显著增加(P＜0.05).结论 卡托普利可以显著改善T2DC模型动物心脏功能、抑制心室重构,其作用机制可能同调节与能量代谢相关基因表达、减轻心脏内脂肪积聚有关.     

前列腺素E1注射液对缺血陛心肌病患者心功能的影响

目的观察在常规标准药物治疗基础上联合应用前列腺素E1注射液对缺血性心肌病患者心脏功能的影响。方法选择缺血性心肌病心功能Ⅱ～Ⅳ级患者132例,随机分为两组。常规标准药物治疗组68例（对照组）。在常规标准药物基础上联合应用前列腺素E1治疗64例（治疗组）,两周后观察患者临床症状、心脏功能及血液流变学的变化。结果（1）两组显效率和总有效率分别为52．94＆（36／68）和92．65％（63／68）明显高于对照组的40．63％（26／64）和84．38％（54／64）,差异有统计学意义（P〈0．01）。治疗后,治疗组和对照组心脏功能各指标有明显的改善（P〈0．05）。结论在常规标准药物治疗基础上联合应用前列腺素E1注射液治疗缺血性心肌病,能迅速改善心脏功能,改善血液流变性,消除临床症状,可广泛用于治疗缺血性心肌病心功能不全患者。     

美托洛尔治疗肥厚型心肌病心功能变化的临床研究

目的评估美托洛尔治疗肥厚型心肌病（HCM）心脏功能的变化情况并探讨有效的超声心动图检查方法。方法选取首次确诊为肥厚型心肌病的患者31例,口服美托洛尔治疗6个月,采用二维和多普勒超声心动图对治疗前后心脏功能变化进行评估,分别测量以下指标：左心房前后径（LAd）、左心房收缩末容积（LAV）;二尖瓣口舒张早期及晚期血流峰值速度（E、A）,E/A值,E峰减速时间（EDT）;二尖瓣环收缩期运动速度（Sm）、舒张早期和舒张晚期运动速度（Em,Am）、Em/Am、E/Em,数据进行统计学分析。结果美托洛尔治疗6个月后HCM患者临床症状明显改善;治疗前HCM患者LAd、LAV明显增大,EDT延长,Em、Em/Am明显下降,E/Em增加,治疗后上述指标明显改善。结论美托洛尔治疗HCM能明显改善患者心功能和临床症状,组织多普勒超声是有效、敏感评估心脏功能的方法 ,研究结果具有重要临床意义。